הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

פרוטוקול לרכוש את Tenocyte ניוונית של בני אדם

6.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57634

⸱

9 ביוני 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Surgery, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine, 2Department of Pathology, Kyung Hee University Hospital at Gangdong, Kyung Hee University School of Medicine, 3Department of Physiology, CHA University School of Medicine, 4Department of Rehabilitation, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

השתמש במבחנה של tenocytes ניוונית חיוני כאשר החוקר את היעילות של טיפול חדשניים על tendinopathy. עם זאת, רוב המחקרים להשתמש רק את המודל החייתי או של tenocyte בריא. אנו מציעים הפרוטוקול. הבא כדי לבודד tenocytes ניוונית אנושי במהלך הניתוח.

תקציר

Tendinopathy, מצב כואב שמתפתח בתגובה ניוון בגיד, נמצאת בעלייה בעולם המפותח בשל הגדלת פעילות גופנית, תוחלת חיים ארוכה יותר. למרות השכיחות הגוברת שלה, המשמש כבסיס בפתוגנזה עדיין נשאר לא ברור, הטיפול הוא בדרך כלל סימפטומטי. לאחרונה, אפשרויות טיפוליות רבות, לרבות גורמי גדילה, תאי גזע, ריפוי גנטי, נחקרו בתקווה לשיפור את הפוטנציה הריפוי של הגיד ניוונית. עם זאת, הרוב המכריע של מחקרים אלו נערכו רק על מודלים בעלי חיים או tenocytes אדם בריא. למרות מחקרים באמצעות tenocytes פתולוגית, לפי מיטב ידיעתנו אין כרגע שום פרוטוקול המתאר כיצד ניתן להשיג את האדם tenocytes ניוונית. מטרת מחקר זה היא לתאר את פרוטוקול תקני לרכישת tenocytes ניוונית אנושי. בתחילה, הרקמה גיד היה נקצרו מחולה עם epicondylitis לרוחב במהלך הניתוח. אז נלקחו דגימות ביופסיה פושט carpi radialis הקצר הגיד המתאימים לשינויים מבניים ציין בזמנו של הניתוח. כל הגידים שנקטפו נראה משעמם, אפור, לעזאזל, בצקי, אשר הפך את אותם ויזואלית שונה מזו הבריאים. Tenocytes היו תרבותי ומשמשים לניסויים. בינתיים, מחצית הרקמות שנקטפו נותחו בהיסטולוגיה, זה הוצג כי הם חלקו את אותן תכונות מפתח של tendinopathy (angiofibroblastic דיספלזיה או היפרפלזיה). ניתוח משני מאת immunocytochemistry אישר כי התאים בתרבית היו tenocytes עם רוב התאים שיש כתמי חיובי המוהוק, tenomodulin חלבונים. האיכויות של הטבע ניוונית של tenocytes ואז נקבעו על-ידי השוואת התאים הפקד בריא שימוש assay התפשטות או לרביעיית-PCR. Tenocyte ניוונית מוצג שיעור גבוה יותר של התפשטות דפוסים דומים של ביטוי גנים של tendinopathy שתאמו את הדוחות הקודמים. בסך הכל, פרוטוקול חדש זה עשוי לספק כלי שימושי עבור מחקרים עתידיים של tendinopathy.

מבוא

Tendinopathy היא כרונית מצב של ניוון שרירים ושלד שמתפתח בחלקים שונים של הגוף. לאחרונה, מספר המקרים של tendinopathy גדל באופן משמעותי בעולם המפותח בשל גידול ההשתתפות ספורט ופנאי תוחלת החיים מוגברת1,2. הגורם tendinopathy נחשבת multifactorial, גורמים אלה כוללים איסכמיה, פציעות רדיקלים חופשיים של חמצן, חוסר איזון בין מצר את כלי הדם, מרחיב כלי דם innervations, מיקרו פנימי-דמעות, ושינויים נוירו-תקנה3 ,4,5,6,7,8. רוב הטיפולים עבור tendinopathy רק להקל על הסימפטומים שלה. יתר על כן, טיפולים ללא התחדשות רקמות דורשים זמן רב לשיקום ולהשיג לתגובה מוגבלת של הגידים פצוע, שהטילו אתגר קליני עבור רופאים9.

היכולת של אפשרויות הטיפול הנוכחי יחד עם חוסר היכולת של הגיד ניווניות self-heal יש חוקרים עופרת להתעניין לחקור אסטרטגיות טיפול אלטרנטיבי. לאחרונה, מחקרים חדשים דיווחו על תוצאות מבטיחות רבות לשיפור יעילות הריפוי של הגידים tendinopathy באמצעות גורמי גדילה, תאי הגזע מבוסס טיפול וג'ין טיפול10,11,12.

באמצעות ביקורת ספרות, מצאנו כי המחקרים מעורב ניתן לחלק לשתי קטגוריות מבוסס על חומרים ניתוח שלהם: חיה דגמים כמו חולדה, עכבר או ארנב; לדוגמניות אנושיות. לגבי המודל בעלי חיים, כיום ישנם שתי שיטות פופולרי כדי להפיק tendinopathy: אינדוקציה כימי של פציעה או מכונות העמסת המודל. עם זאת, כל דגם בעלי חיים היה מוגבל מתרבה tendinopathy האנושית מורכבת פתולוגיה13,14.

רוב המסמכים באמצעות דגימות האנושי נותחו בהיסטולוגיה או ביצע את במבחנה הניסוי המבוסס על tenocyte אנושי בריא ולא ניוון tenocyte15,16,17,18 , 19 , 20 , 21. רק על כמה מסמכים דיווחו כי הם השתמשו tenocyte ניוונית של האדם, אך הם לא מתארים בפרוטרוט את פרוטוקול המשמש כדי לקבל את tenocyte ניוונית מ האנושי22,23. בהקשר זה יצוין כי תוצאות מוצלחות מן המודל בעלי חיים או את הרקמות/tenocyte בריא מאי לא בהכרח לנבא את היעילות האנושית או מינון אפקטיבי כי ניוון בגיד הוא תהליך מסובך והוא בפתוגנזה עדיין לא לגמרי מובן.

באופן קולקטיבי, זה הכרחי לתאר את הפרוטוקול הסטנדרטי להשגת את tenocyte ניוונית של רקמה אנושית מבלי לגרום תופעות לוואי על התורם. מאמר זה מתאר פרוטוקול על איך לרכוש את tenocyte ניוונית אנושי. כדי לאמת את הפרוטוקול, נותחו בהיסטולוגיה הרקמות שנקטפו. לאחר מכן, לתא בתרבית אושר כמו tenocyte ניוונית באמצעות immunocytochemistry (ICC), של כמותיים בזמן אמת-תגובת שרשרת פולימראזית (PCR לרביעיית) ואת וזמינותו של הכדאיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הפרוטוקול נערך בהתאם הצהרת הלסינקי, הפרוטוקול שאושר על ידי ועדת הבדיקה המוסדית במרכז הרפואי Bundang צ'ה.

1. ניוונית גיד הקציר רקמות מן המטופל

  1. לאבחן epicondylitis לרוחב על-ידי לקיחת היסטוריה רפואית באמצעות ממצאי בדיקה גופנית: רגישות מעל המקור tendinous קרוב העלי הרוחבית; כאב עורר התנגד סיומת של מפרק כף היד.
  2. השתמש לקריטריוני ההכללה הבאה: מעל גיל 18; היסטוריה של epicondylitis לרוחב במשך לפחות שישה חודשים; עקשניים לטיפול פעיל לפרקים; לפחות שלושה חודשים חלפו מאז הזרקה של סטרואידים, פלזמה עשיר טסיות או בוטולינום טוקסין
  3. אל תכלול את הדברים הבאים: נשים בהריון; למטופלים עם היסטוריה של מחלות בעמוד השדרה הצווארי, המרפק דלקת פרקים, מחלת והראומטולוגיים, ניתוח סביב המרפק, תסמונת מלכוד עצב; חולים מסרב תרום רקמות.
  4. טכניקה כירורגית
    הערה: ראה איור 124.
    1. לאחר הרדמה כללית על-ידי איזופלוריין צנרור אנדוטרכאליות, לשים את היד על השולחן, עורקים. הסוכן betadine להחיל על כל הזרוע, מאסו עם גיליון כירורגי אספטי.
    2. לחשוף את המרפק לרוחב דרך חתך 3-5 ס מ עם מס 15 באזמל כירורגי להב רק anteromedial העלי הרוחבית, מקורב לרמה של המפרק.
    3. מבחינה חזותית לזהות את פושט carpi radialis הארוך (ECRL) ואת ממשק aponeurosis פושט ולעשות חתך פיצול 2 – 3 מ מ לעומק בין aponeurosis ECRL, פושט עם להב באזמל כירורגי מס 15-הממשק שזוהה.
    4. לחלץ את ECRL anteriorly, אשר תביא פושט פיפטות carpi radialis הארוך הקצר (ECRB) מקורו מתחת לתצוגה ישירה.
    5. חזותית לזהות את רקמות ניוונית פיפטות מאת צבעו אפרפר משעמם האופיינית ורקמות בדרך כלל בצקי ומתפורר.
    6. לאחר זיהוי, בזהירות נכרות כל רקמות ניוונית בחדות באמצעות אזמל כירורגי מס 15 ומיני-להבים.
    7. להטביע את הרקמה resected (כ- 1 ס מ3) לתוך פוספט buffered תמיסת מלח (PBS) מיד ולהסיר כל הרקמה שמסביב חוץ רקמות גיד בזהירות לתוך בערך 10 מ"ל של PBS ככל האפשר.
    8. במקרים עם גרמי המולדים בעצם המוח-העלי הרוחבית, הסר המולדים בעצם המוח באמצעות rongeur של, להחליק את זה עם rasp. לעשות חורים לקדוח מרובים (בקוטר 1.6 מ מ, כ 6-8 חורים) ב המפרקתי הנמוך anterolateral כדי לשפר את אספקת הדם. פעולה זו היא אופציונלית.
    9. לסגור את הפצע שכבה אחרי שכבה באמצעות חומר תפרים נספגים.
  5. Tenocyte בקרה בריאים
    1. להשיג tenocytes בריא של הגיד הנותרים של הגיד שריר הירך-אוטומטי או אוטומטי-צלחית במהלך שחזור צולבת קדמית, ולהשתמש בו בתור לפקד על הניסוי הבא25.
      הערה: מספר דגימות המשמשות במחקר זה היו שלושה בכל קבוצה.

2. היסטולוגיה

  1. חנות כמחצית הרקמה שנקטפו בפורמלין נייטרלי במאגר 10% הוד fume כימי או שווה ערך.
  2. להטביע את הרקמה בבלוק פרפין (4 – 5 מ"ל), סעיף זה בסעיפים 4-5 מיקרומטר coronally.
  3. כתם מקטעים של גיד ניוונית עם Hematoxylin ו Eosin כתם (H & E), הכתם Alcian כחולה ב- pH של 2.5 ובקרה. לבצע H & E מכתים במכונה אוטומטית כתם כדלקמן.
    1. Deparaffinize באמצעות קסילן (3 פעמים, 5 דקות, בהתאמה).
    2. מימה של כהלים מדורגת למים (100% אלכוהול, 4 דקות 100% אלכוהול, 3 דקות; 95% אלכוהול, 2 דקות; 70% אלכוהול, 1 דקות; מים, 2 דקות).
    3. כתם ב Hematoxylin עבור 5 דק לשטוף היטב במים למשך 2 דקות.
    4. להבדיל ב 1% אלכוהול חומצה (1% HCl ב-70% אלכוהול) עבור 3 ס' לשטוף היטב במים למשך 3 דקות.
    5. לנטרל HCl בטבילת של אמוניה 0.5% 10 s, ולאחריה שטיפה במים 3 דקות.
    6. כתם ב Eosion במשך 5 דקות.
    7. מייבשים דרך כהלים (80% אלכוהול, 30 s; 95% אלכוהול, 1 דקות; 100% אלכוהול 1 דקות, 100% אלכוהול 2 דקות).
    8. ברור של קסילן (3 פעמים, 2 דקות, 2 דקות ו- 3 דקות, בהתאמה).
    9. הר עם מגלשת כיסוי.
  4. לבצע immunohistochemitry (IHC) באמצעות ערכת בונד פולימר לחדד זיהוי על-פי הוראות היצרן עם שינויים מזעריים.
    1. לאחר deparaffinization באמצעות קסילן, לבצע הליך אחזור אנטיגן באמצעות בונד Epitope אחזור פתרון במשך 30 דקות ב- 100 מעלות צלזיוס. הפתרון אחזור Epitope בונד מכיל מאגר ציטראט המבוסס על חומרים פעילי שטח (1 ליטר, pH 5.9 – 6.1).
    2. להרוות אנדוגני peroxidases על ידי המקננת הרקמה עם מימן על-חמצני במשך 5 דקות.
    3. דגירה הסעיפים למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר (21-22 מעלות צלזיוס) עם ראשי נוגדנים נגד כלי הדם צמיחה אנדותל (VEGF) (1:200), tenomodulin (1:200) או מוהוק (1:200).
    4. לבצע נוגדנים משניים תיוג עם חזרת נטולת ביוטין פולימריים peroxidase-מקשר נוגדן תרכיב מערכת.
      1. שימוש משני ארנב אנטי עכבר IgG בנסיוב בבעלי חיים 10% (v/v) בתמיסה 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one saline/0.09% באגירה טריס למקם העכבר נוגדנים.
      2. השתמש פולימר אנטי-ארנב פולי-HRP-אג ' (< µg 25/mL) המכיל 10% (v/v) בסרום בעלי חיים בבאגירה טריס saline/0.09% כדי להתאים לשפה ארנב נוגדנים.
      3. השתמש 3, 3'-Diaminobenzidine מימה tetrahydrochloride בפתרון מייצב להמחיש המתחם דרך התמיסה חום.
      4. Counterstain עם < hematoxylin 0.1% (כחול) כדי להמחיש את גרעין התא.
  5. לצפות בשקופיות מוכתם H & E, Alcian כחול כתמי ולאחר IHC VEGF, tenomodulin של מוהוק במיקרוסקופ אור ולקבל תמונות מיקרוסקופיות נציג של כל שקופית תחת מתח גבוה אחד שדה (400 X).

3. Tenocyte תרבות

  1. הכנת הרקמה
    1. הכינו את הדגימה גיד על-ידי הסרת כל הרקמה שמסביב ביסודיות עם מיקרו-מספריים וחדים.
    2. לשטוף עם PBS, מינצ לחתיכות קטנות (על 1 מ מ3 או פחות).
    3. מעכלים רקמת עבור 1 h ב- 30 מ ששינה הנשר של Dulbecco בינוני (DMEM) בתוספת 30 מ"ג/מ"ל Collagenase II ב 37 º C.
    4. עוברים תאים דרך מסננת תא 100 מיקרומטר.
    5. לבטל את Collagenase השני על-ידי הוספת 1 מ"ל של נסיוב שור עוברית (FBS).
    6. צנטריפוגה ב g x 196 במשך 5 דקות.
  2. תרבית תאים
    1. זרע 3 x 105 תאים לתוך תבשיל 100 מ מ, תרבות עם DMEM בתוספת 10% FBS ו 1% פתרון אנטיביוטיקה-Antimycotic-37 מעלות צלזיוס ב חממה2 CO 5% במשך שבוע.
    2. לשנות את המדיום תרבות כל שלושה ימים עד 80% הנהרות מתרחשת. תרבות בקרה בריאים והן דגימות תאים ניוונית עד המעבר ארבע ולהשתמש לניסוי.

4. Immunocytochemistry (ICC)

  1. להעביר 200 µL של תאים בתרבית (2 x 105 תאים) הבארות שמונה של שקופית קאמרית ולגדול התאים למפגש עם התוספת של מדיה חדשה עבור יום אחד.
  2. לשטוף את התאים עם PBS ותקן עם 500 µL של 4% פורמלדהיד לכל טוב.
  3. דגירה של השקופיות עם 0.5% X-100 Triton ב- PBS 10 דקות עבור permeabilization של הממברנות.
  4. לחסום ב- PBS עם אלבומין פרה 1% ל- 0.05% TWEEN-20 המוהוק, tenomodulin, בהתאמה.
  5. דגירה בחושך עם העכבר מוהוק נגד נוגדנים חד שבטיים (דילול מטריים), נוגדן anti-tenomodulin עזים (דילול מטריים) ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  6. דגירה הנוגדנים משני (אלכסה 555-נגד עז (1:200) עבור tenomodulin; אלקסה 488-אנטי עכבר (1:200) עבור מוהוק) בחושך לשעה בטמפרטורת החדר.
  7. הר עם 0.5 µL מדיום הרכבה זריחה.
  8. לנתח באמצעות מיקרוסקופ קרינה פלואורסצנטית (400 X).

5. התפשטות Assay

  1. למדוד תא viabilities באמצעות tetrazolium מסיסים במים (wst, מרץ)-1.
    1. זרע תאים בריאים והן ניוונית לוחות טוב 96-צפיפות של 2 x 103 תאים לכל טוב של 24, 72 ו- 120 h.
    2. לאחר דגירה, להוסיף 10 µL של הפתרון WST-1 10% מכל קידוח.
    3. דגירה על עומדי 3 h ב- 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO2.
    4. מודדים את צפיפות אופטית-450 nm באמצעות קורא microplate. את הקרינה לפחות שלוש פעמים בכל הנקודות הזמן עבור כל דגימה.
  2. מדד הסלולר DNA סכום באמצעות וזמינותו BrdU.
    1. זרע שניהם בריאים, ניוון תאים לתוך 96 טוב צלחות על צפיפות של תאים3 עונה 2 פרק 10 לכל טוב של 24, 72 ו- 120 h.
    2. לאחר דגירה, להוסיף 10 µL של 10% BrdU פתרון טוב לכל.
    3. דגירה על עומדי 3 h ב- 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO2.
    4. להוסיף 100 µL טוב של הפתרון תיקון/Denaturing (60-70% אתנול, 0.1-0.5% נתרן הידרוקסידי) ולשמור את הצלחת בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
    5. הוסף µL 100/טוב מוכן 1 x זיהוי נוגדנים פתרון ולשמור הצלחת בטמפרטורת החדר 1 h.
    6. הסרת פתרון, לשטוף צלחת שלוש פעמים עם 1 x מאגר לשטוף.
    7. להוסיף µL 100/טוב מוכן 1 x מצומדת HRP נוגדנים משניים פתרון ולהשאיר את הצלחת בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
    8. הסר את לוחית פתרון ושטוף שלוש פעמים עם 1 x מאגר לשטוף.
    9. להוסיף 100 µL של 50% שוייץ המצע.
    10. תקופת דגירה של 30 דקות בטמפרטורת החדר.
    11. להוסיף 100 µL של להפסיק פתרון.
    12. מודדים את צפיפות אופטית-450 nm באמצעות קורא microplate.
      הערה: לקחת קריאות לפחות שלוש פעמים על כל נקודות זמן עבור כל דגימה.

6. ניתוח סטטיסטי

  1. לאסוף ולנתח את הנתונים באמצעות SPSS.
  2. מתארים את הנתונים על-ידי זאת אומרת ± לשגיאה הסטנדרטית של ממוצע.
  3. השתמש מאן ויטני U במבחן.
  4. לקחת בחשבון הבדלים משמעותיים סטטיסטית בעת ערך p הוא פחות מ- 0.05 (p < 0.05).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ניתוחים היסטולוגית חשף כי הרקמה שנקטפו מן epicondylitis לרוחב היו המאפיינים גיד tendinopathic. סעיף H & E של גיד ניוונית tendinopathy חשף צרור קולגן לא מאורגן עם הפסד של קוטביות ומבנים בסדר ישר, חריפה ארוזה סיבים מקבילים. רמיזות של ניוון כגון cellularity גבוה יותר, גרעינים מוגדלת בלי צורת פלך טיפוסי היסטולוגית סימנים היו נפוצים בדגימות. בנוסף, צרורות הקולגן של הגיד מנוונת היו אאוזין חלשה יחסית מוכתמת H & E, אבל באופן חיובי היו מוכתמת כחול Alcian המציינת את החומר proteoglycans ו- g...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מספר מחקרים קודמים דיווחו על איך ליצור מודלים בעלי חיים tendinopathic כרונית, באמצעות הליכים שונים כגון collagenase או הזרקת kartogenin, הליכון ריצה26,עוד27. למרות מחקרים רבים הראו מבטיחים אפקטים טיפולית המבוססת על מודלים בבעלי חיים אלה, ניסויים באמצעות את tenocyte ניוונית האנושי יהיה מכריע בתחום tendinopathy כדי לשחזר את היעילות של הטיפול. במאמר זה, הקמנו פרוטוקול בהצלחה הקציר של התרבות האנושית tenocytes ניוונית באופן עקבי. שניהם שנקטפו רקמות גיד והראו tenocyte ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי מענק של קוריאה בריאות טכנולוגיית R & D פרויקט דרך קוריאה בריאות תעשיית פיתוח המכון (KHIDI), אשר מומן על ידי משרד הבריאות & רווחה, הרפובליקה של קוריאה (להעניק את המספר: HI16C1559).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אזמלKisanbioKS-Q0306-15מס' 15
מיני להבבונה374769
מדיום הנשר המותאם של דולבקו (DMEM)Gibco11995065
PBSGibco14190250
סרום בקר עוברי (FBS)Gibco16000044
50 מ"מ חומצה אסקורבית-2-פוספטתמיסהA5960
Gibco15240062
4% פורמלדהידBio-solutionBP031
Triton X-100 סיגמא-אולדריץ'X100-100 מ"ל
BSARdtechC0082
TWEEN 20סיגמא-אולדריץ'P9416-100 מ"ל
MKX (C-5)סנטה קרוז ביוטכנולוגיהsc-515878
טנומודולין (N-14)סנטה קרוז ביוטכנולוגיהsc-49325
הרכבה פלואורסצנטית בינוניתDAKOS3023
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)Thermo Fisher ScientificD1306
WST-1Dojindo Molecular TechnologiesCK04
BrdU ערכת בדיקת התפשטותתאים טכנולוגיית איתות תאים#6813
TRIzol ReagentInvitrogen15596018
iScript cDNA Synthesis Kit Bio-Rad170-8891
TaqMan Gene Expression MasterMix Applied Biosystems
Thermo Fisher Scientific
Thermo Fisher Scientific
Thermo Fisher Scientific
Thermo Fisher Scientific
TACR1Thermo Fisher ScientificHs00185530_m1
PTGS2Thermo Fisher ScientificHs00153133_m1
ACTBThermo Fisher ScientificHs99999903_m1
מסנני תאים (100 ומיקרו; m) קורנינג352360
צלחת תרבות 100 מ"מתרמו פישר מדעי8188207
8 בארות שקופיות תאתרמו פישר מדעי154534
96 היטב ברור שטוח תחתון פוליסטירן מטופל TC מיקרופלטותקורנינג3596
ניקון אקליפס 50i מיקרוסקופ קורא מיקרו-פלטות מקסימלי של Nikon
VERSA מולקולריים
CFX96 מערכת זיהוי PCR בזמן אמתפורמלין ביו-ראד
חוצץ ניטרלי, 10%סיגמא-אולדריץ'HT501128
פרפיניםLeica Biosystems3801340
אתנולJUNSEI CHEMICAL90303-2185
המטוקסיליןDAKOCS70030-2
EosinDAKOCS70130-2
כחול אלציאניDAKOAR16011-2
חומצת לימוןסיגמא-אולדריץ'251275
קסילןJUNSEI CHEMICAL25165-0430
פרוקסידאזות אנדוגניות DAKOS200380-2
קנדה בלזםJUNSEI CHEMICAL23255-1210
להב מיקרוטוםFEATHERA35
זכוכית שקופיותSUPERIOR1000612
כיסוי זכוכיתMarienfeld-Superior101050
VEGF סנטה קרוז ביוטכנולוגיהsc-7269
SPSS תוכנהIBMVer. 18.0
צנטריפוגה רב תכליתיתLABOGENE1248R
אנטיביוטית-אנטי-פטרייתית Sigma-Aldrich 4369016-GAPDH Hs02786624_g1-COL3A1 Hs00943809_m1-ACTA2 Hs00426835_g1-TAC1 Hs00243225_m1התקנים תמיסת ,

מקורות

  1. Ackermann, P. W., Renstrom, P. Tendinopathy in sport. Sports Health. 4 (3), 193-201 (2012).
  2. Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. Types and epidemiology of tendinopathy. Clinical Sports Medicine. 22 (4), 675-692 (2003).
  3. Lui, P. P., Chan, L. S., Fu, S. C., Chan, K. M. Expression of sensory neuropeptides in tendon is associated with failed healing and activity-related tendon pain in collagenase-induced tendon injury. American Journal of Sports Medicine. 38 (4), 757-764 (2010).
  4. Han, S. H., et al. Effects of corticosteroid on the expressions of neuropeptide and cytokine mRNA and on tenocyte viability in lateral epicondylitis. Journal of Inflammation (London). 9 (1), 40(2012).
  5. Uchio, Y., et al. Expression of neuropeptides and cytokines at the extensor carpi radialis brevis muscle origin. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 11 (6), 570-575 (2002).
  6. Lieber, R. L., Loren, G. J., Friden, J. In vivo measurement of human wrist extensor muscle sarcomere length changes. Journal of Neurophysiology. 71 (3), 874-881 (1994).
  7. Regan, W., Wold, L. E., Coonrad, R., Morrey, B. F. Microscopic histopathology of chronic refractory lateral epicondylitis. American Journal of Sports Medicine. 20 (6), 746-749 (1992).
  8. Sharma, P., Maffulli, N. Tendon injury and tendinopathy: healing and repair. Journal of Bone and Joint Surgery American volume. 87 (1), 187-202 (2005).
  9. Lui, P. P. Stem cell technology for tendon regeneration: current status, challenges, and future research directions. Stem Cells Cloning. 8, 163-174 (2015).
  10. Dahlgren, L. A., van der Meulen, M. C., Bertram, J. E., Starrak, G. S., Nixon, A. J. Insulin-like growth factor-I improves cellular and molecular aspects of healing in a collagenase-induced model of flexor tendinitis. Journal of Orthopedic Research. 20 (5), 910-919 (2002).
  11. Schnabel, L. V., et al. Mesenchymal stem cells and insulin-like growth factor-I gene-enhanced mesenchymal stem cells improve structural aspects of healing in equine flexor digitorum superficialis tendons. Journal of Orthopedic Research. 27 (10), 1392-1398 (2009).
  12. Durgam, S. S., Stewart, A. A., Sivaguru, M., Wagoner Johnson, A. J., Stewart, M. C. Tendon-derived progenitor cells improve healing of collagenase-induced flexor tendinitis. Journal of Orthopedic Research. 34 (12), 2162-2171 (2016).
  13. Titan, A., Andarawis-Puri, N. Tendinopathy: Investigating the Intersection of Clinical and Animal Research to Identify Progress and Hurdles in the Field. Journal of Bone and Joint Surgery Review. 4 (10), (2016).
  14. Dirks, R. C., Warden, S. J. Models for the study of tendinopathy. Journal of Musculoskeletal Neuronal Interaction. 11 (2), 141-149 (2011).
  15. de Mos, M., et al. Can platelet-rich plasma enhance tendon repair? A cell culture study. American Journal of Sports Medicine. 36 (6), 1171-1178 (2008).
  16. Scherb, M. B., Han, S. H., Courneya, J. P., Guyton, G. P., Schon, L. C. Effect of bupivacaine on cultured tenocytes. Orthopedics. 32 (1), 26(2009).
  17. Wong, M. W., et al. Effect of dexamethasone on cultured human tenocytes and its reversibility by platelet-derived growth factor. Journal of Bone and Joint Surgery American Volume. 85 (10), 1914-1920 (2003).
  18. Tempfer, H., et al. Effects of crystalline glucocorticoid triamcinolone acetonide on cultered human supraspinatus tendon cells. Acta Orthopaedics. 80 (3), 357-362 (2009).
  19. Menon, A., et al. New insights in extracellular matrix remodeling and collagen turnover related pathways in cultured human tenocytes after ciprofloxacin administration. Muscles Ligaments Tendons J. 3 (3), 122-131 (2013).
  20. Backman, L. J., Fong, G., Andersson, G., Scott, A., Danielson, P. Substance P is a mechanoresponsive, autocrine regulator of human tenocyte proliferation. PLoS One. 6 (11), 27209(2011).
  21. Backman, L. J., Eriksson, D. E., Danielson, P. Substance P reduces TNF-alpha-induced apoptosis in human tenocytes through NK-1 receptor stimulation. Britich Journal of Sports Medicine. 48 (19), 1414-1420 (2014).
  22. Rolf, C. G., Fu, B. S., Pau, A., Wang, W., Chan, B. Increased cell proliferation and associated expression of PDGFRbeta causing hypercellularity in patellar tendinosis. Rheumatology (Oxford). 40 (3), 256-261 (2001).
  23. Hoppe, S., et al. Tenocytes of chronic rotator cuff tendon tears can be stimulated by platelet-released growth factors. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 22 (3), 340-349 (2013).
  24. Schipper, O. N., Dunn, J. H., Ochiai, D. H., Donovan, J. S., Nirschl, R. P. Nirschl surgical technique for concomitant lateral and medial elbow tendinosis: a retrospective review of 53 elbows with a mean follow-up of 11.7 years. American Journal of Sports Medicine. 39 (5), 972-976 (2011).
  25. Cook, J. L., Feller, J. A., Bonar, S. F., Khan, K. M. Abnormal tenocyte morphology is more prevalent than collagen disruption in asymptomatic athletes' patellar tendons. Journal of Orthopedic Research. 22 (2), 334-338 (2004).
  26. Yuan, T., et al. Creating an Animal Model of Tendinopathy by Inducing Chondrogenic Differentiation with Kartogenin. PLoS One. 11 (2), 0148557(2016).
  27. Lui, P. P., Maffulli, N., Rolf, C., Smith, R. K. What are the validated animal models for tendinopathy. Scandinavian Journal of Medical Scientific Sports. 21 (1), 3-17 (2011).
  28. Wilhelm, A. Lateral epicondylitis review and current concepts. Journal of Hand Surgery American Volume. 34 (7), author reply 1359-1360 1359-1360 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

H EqRT PCRMohawkTenomodulin
פרוטוקול לרכוש את Tenocyte ניוונית של בני אדם
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.