הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

העשרה ללא תווית נויטרופילים של הפרשת נגזר המטופל דרכי הנשימה באמצעות לולאה סגורה אינרציאלית מיקרופלואידיקה

5.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57673

⸱

7 ביוני 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Research Laboratory of Electronics, Massachusetts Institute of Technology, 2Department of Electrical Engineering and Computer Science, Massachusetts Institute of Technology, 3Department of Medicine, University of Pittsburgh, 4Department of Biological Engineering, Massachusetts Institute of Technology, 5Vascular Medicine Institute, University of Pittsburgh

במאמר זה

סיכום

במחקר זה, נדגים שיטה ללא תווית נויטרופילים ההפרדה מן הפרשות דרכי הנשימה קליניים באמצעות לולאה סגורה הפעולה של ספירלה מיקרופלואידיקה אינרציאלית. השיטה המוצעת ירחיב את מבחני קליניים במבחנה למחלות בדרכי הנשימה שונים.

תקציר

הפרשות דרכי הנשימה מכילים מספר רב של תאים הקשורים החיסון, למשל, נויטרופילים, מאקרופאגים לימפוציטים, אשר יכול לשמש כמשאב מרכזי כדי להעריך את מגוון של מחלות, הן במחקר והן למטרות קליניות. עם זאת, בשל אופיו הטרוגנית, צמיגה של ריר החולה, אין כרגע אין שיטה דיסוציאציה אמין זה אינו גורם נזק תאים חיסוניים מארח בהפרשה החולה את דרכי הנשימה. במחקר זה, אנו מציגים את שיטת הכנה לדוגמה המשתמשת מיקרופלואידיקה אינרציאלית להערכת המערכת החיסונית של החולה. בין המאפיינים fluidic הטרוגנית של הדגימות קליני, השיטה המוצעת משחזרת יותר מ 95% של נויטרופילים מ והמדגמים הפרשת דרכי הנשימה הם מדולל 1,000-fold עם מיליליטר של תמיסת מלח נקיים. על ידי צואה הנחל פלט מרוכז למאגר דגימה ראשונית, ריכוז גבוה, שחזור, הטוהר של תאים חיסוניים הינם מסופקים; recirculation נחשב פשרה בניהול משפחתי יחיד המבוססת על המזרק פעולת מיקרופלואידיקה אינרציאלית. הפעולה לולאה סגורה של ספירלה מיקרופלואידיקה מספק לויקוציטים ללא הפרעה פיזית או כימית, כפי שמגלה את phorbol פעילים-12 13-אצטט (PMA)-induced elastase שחרורו של נויטרופילים ממוינים.

מבוא

מאז תאים כמוסות ב כמות גדולה של ריר ב הפרשות דרכי הנשימה, יש כבר הפריע את ההערכה תפקודית של לויקוציטים מאת assay במבחנה . Dithiothreitol (DTT) הוא המאגר פירוק הנפוץ ביותר ועד מביצועם homogenize ברוק עבור ניתוח cytological וזיהוי של המגשרים תוך מתן נסבל הכדאיות של תאים בודדים1,2. עם זאת, DTT יכול להתערב עם משטח מכורך אנטיגנים של דרכי הנשימה נויטרופילים, והתוצאה היא שיבוש תפקוד נויטרופילים כגון elastase myeloperoxidase (MPO) עדכוני2,3. לכן, נערכו מחקרים מעטים של דרכי הנשימה האנושית תפקוד נויטרופילים עם דם היקפיים נויטרופילים, אשר עשויים לגלות מאפיינים פיזיולוגיים של ריאתי4. בינתיים, מיקרופלואידיקה אינרציאלית עשה התקדמות לבודד תאים שונים biomatrices החולה5,6. האיזון בין כוחות מעלית אינרציאלית וגרור דין יישור החלקיק/התא על פי גודלם, אשר מאפשר הפרדה חלקיק ללא תווית7. הקבוצה שלנו הציג בעבר שיטת הכנה מדגם מחזורי גידול תאים8,9, פתוגנים בדם8, תאים הבולם תרבות10,11, 12, ואת אורך חייהם לויקוציטים (PMNs) של דם13,14.

כאן, אנחנו מציגים את פרוטוקול להכין את התאים החיסוניים מ הפרשות דרכי הנשימה של המטופל באמצעות לולאה סגורה מיקרופלואידיקה אינרציאלית במורד הזרם במבחנה assay, כגון וזמינותו elastase נויטרופילים (NE). שיטה זו מספקת גם ריכוז גבוה וגם התאוששות, במיוחד כשמדובר חפיפה משמעותי בכיוון לרוחב של התא/החלקיק שממנו התא/החלקיקים-של-הריבית הוא יוסר, אשר בדרך כלל נצפית בדגימות קליניות. על ידי צואה החומה הפנימית (IW)-ממוקד חלקיקים גדולים או תאים בחזרה אל הצינור מדגם קלט, חלקיק או תא-של-עניין תרכיזים במאגר המקורי, בעוד הרקע נוזלים עם אגרגטים mucin קטנים עוברים דרך המאגר פסולת. למרות המאפיינים fluidic הטרוגנית של דגימות קליניות, השיטה המוצעת משחזרת בעקביות מעל 95% של נויטרופילים מדגימות הפרשת דרכי הנשימה זה הם מדולל 1,000-fold עם פתרון נקי מלוחים (~ 1 מ"ל). לעומת זאת, שיטת פירוק מציג מגוון רחב של PMNs השחזור המחירים בהתאם לבעיה מדגם. הפרוטוקול המוצע לוכדת לויקוציטים באופן ללא תווית עם אין הפרעה פיזית או כימית, אשר מספק את האפשרות לקצור תאים עדין קלינית מאתגר ביומטריה עם נהלים פולשנית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

האוסף מדגם אושרה על ידי אוניברסיטת פיטסבורג מוסדיים ועדת הבדיקה (IRB # PRO16060443, PRO10110387). כל הניסויים מתבצעים תחת אבטחה ארון עם ציוד מגן אישי מתאים.

1. התקן פבריקציה נוספת, הדפס אבן רכה

הערה:15,טכניקות הדפס אבן רכה רגיל16 שימשו כדי ליצור את microchannel polydimethylsiloxane (PDMS).

  1. מערבבים למבשר PDMS ב- 10:1 יחס של הסוכן הבסיס של ריפוי.
  2. למזוג 30 גרם של התערובת קודמן PDMS על העובש אלומיניום במכונה-מיקרו (ראו איור 1 מידות), 20 גרם תערובת מבשר PDMS על 100 מ מ פטרי.
    הערה: הפטרי משמש כדי להפוך את הסרט עבה של PDMS (~ 3 מ מ) עבור השכבה התומכת. השכבה התומכת של PDMS מספק מאפייני השטח הפיזי אחיד ברחבי מיקרופלואידיקה. לחלופין, ניתן להשתמש PDMS דקה בסרט בשקופית זכוכית. העובש מאסטר עם ממדים ערוץ מסוים היה מתוכנן, מפוברק על ידי מיקרו-כרסום בגיליון אלומיניום. הערוץ ספירלה השתמשו במחקר זה היה microchannel לופ 8 ספירלה עם כניסה אחת, שני שקעים, עם רדיוס הגדלת 8 מ"מ עד 24 מ"מ להפרדה יעילה מבוסס בגודל.
  3. למקם את העובש, הפטרי desiccator ואקום כדי דגה עד אין בועות גלויים על פני השטח, בדרך כלל 5-10 דקות לשימוש desiccator הבית-ואקום.
  4. לשחרר את הואקום ולמקם כייר ו הפטרי בתנור 90 מעלות לשעה.
    הערה: פלטה או כלי חימום אחרים יכול לשמש במקום תנור.
  5. להסיר את התבנית הפטרי מן התנור ומאפשרים לה להתקרר בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות.
  6. בזהירות לגזור את קווי המתאר, ניקוב החורים גישה נוזלים על המכשיר באמצעות כבטלן 2 מ מ.
    הערה: הגודל של האגרוף יכול להשתנות בהתאם לגודל של המדריך tubing או נוזלים.
  7. דבקים קלטת לצד ערוץ של המכשיר, סרט עבה של PDMS, לקלף בזהירות עם מלקחיים כדי להסיר אבק.
  8. פנקו את הערוץ צידי ההתקן ואת PDMS רגיל עם פלזמה אוויר ואת הקשר עם השכבה התומכת מוכן של PDMS רגיל (איור 1 א').
  9. מקם את השבב בשקופית זכוכית 50 מ מ x 70 מ מ ומניחים אותו בתנור 70 מעלות צלזיוס במשך לפחות 30 דקות לשפר את הכוח מליטה.

2. והכו אותי הפרשת מהאוסף חולים מונשמים

הערה: הפרשות והכו אותי ניתן להשיג חולים מונשמים במהלך טיפול דרכי הנשימה שגרתית נורמלי באמצעות פרוטוקול שונה בשיטות המקובלות כדי להכיל את המטופל מאוורר סטנדרטי, למבוגרים. הדגימות היו בטל מזוהה, נשלח מיד לעיבוד.

  1. אם השאיפה והכו אותי מותווה, להשתמש צנתר כדי לחלץ הפרשות דרכי הנשימה.
  2. לקדם הקטטר בקפידה במחצית הדרך לתוך הצינור אנדוטרכאליות, להחדיר מ ל תמיסת 0.9% סטרילי של מזרק שמולאו מראש 10 מ"ל.
  3. הצנתר הוא מתקדם באופן מלא, או התנגדות מתקיים, וארוקן את ההפרשות ולאסוף לתוך מיכל איסוף sputum סטרילי.
  4. לאסוף 10 מ"ל של הפרשות והכו אותי במיכל סטרילי sputum ומניחים אותו על קרח. לשלוח דוגמאות מיד לעיבוד.

3. הכנת הדוגמא הפרשת והכו אותי

הערה: כל ניסויים חייב להתבצע תחת אבטחה ארון עם ציוד מגן אישי מתאים.

  1. לפזר 1 מ"ל של דרכי הנשימה דגימות הפרשת ב 9 מ ל תמיסת באגירה פוספט (PBS) בעזרת מזרק פלסטיק 10 מ"ל (עבור דילול 10 x). השתמש פיפטה בוטה כדי homogenize את הדגימה ריר.
  2. מסננים את diluent עם מסננת תא ניילון 40 µm כדי להסיר נתחים גדולים או קרישי דם, אשר יכולים לחסום את החור גישה מיקרופלואידיקה או הערוץ. הנח את הדגימה על הקרח לאחר עיבוד.
  3. לפזר את diluent של כל דגימה באמצעות אמצעי אחסון 100 x מאגר PBS, וכתוצאה מכך 1,000 x ההשעיה מדולל. מקם את הדגימה על הקרח במהלך המבצע כולו דיסוציאציה.

4. הגדרת הניסוי

הערה: כל ניסויים חייב להתבצע תחת אבטחה ארון עם ציוד מגן אישי מתאים.

  1. להרכיב את השבב PDMS עם המדריך נוזלים כדי להחיל זרימה אחידה לכל אחד microchannels את ארבעת ספירלה (איור 1B).
    הערה: בארבעה ערוצי שימשו כדי להגדיל את התפוקה על-ידי parallelization, כמו גם אופטימיזציה של צפיפות ונפח תא של המתלה וכתוצאה מכך. המדריך נוזל הוא מתוכנן ועשה עם stereolithography סוג מדפסת תלת-ממד עם שרף ברורה. הים והנמל עודפים של המדריך נוזלים להשתמש במחברי סכינים סטריליים נקבה, כדי להקל על חיבור ואיטום יציב במהלך המבצע.
  2. להתחבר מחבר סכינים סטריליים זכר 1/16 אינץ לים בקיר הפנימי (IW), יציאת לשקע הקיר החיצוני (איי) של המדריך נוזלים וחבר של צינורות סיליקון ההשעיה הדגימה.
  3. להוסיף טיפים בוטה על שני קצוות כניסת ועודפים להגיע התחתון של המאגר מדגם.
  4. לחבר את משאבת סחרור לאורך צינור כניסת.
  5. למקם את הקצה של כניסת אבובים, IW עודפים אבובים בתוך המאגר מדגם ולמקם סוף לאורך צינור עודפים OW במאגר פסולת (איור 1C, יח).
  6. מקם את הצינור 50 מ של PBS מסונן ללא סידן ומגנזיום ליד המאגר מדגם.
  7. התחל שאיבה בספיקה נמוכה (~ 1 mL/min) לשפר את המכשיר.
    הערה: כאשר בועות נלכדים בערוץ, לדחוף העליון של התעלה עם פינצטה יציבות ולחסל את בועות האוויר. כאשר המכשיר באופן מלא מלא בופר, לשנות את הצינור PBS להכין את הצינור מדגם של הפרשת דרכי הנשימה.
  8. כאשר המדגם מניחים בתוך המאגר הדגימה, להחליף את משאבת סחרור ולהגדיר קצב הזרימה ב- 4 מ ל/דקה (איור 1C, יח).
  9. כאשר אמצעי האחסון מדגם מגיע האחסון המיועדת (~ 1 מ"ל), להפסיק את פעולת ונתק לאורך צינור סיליקון.
    הערה: השיטה המוצעת הוא יעיל יותר בהפחתת נפח גדול של diluent (> 50 מ ל) לאמצעי אחסון צינור מיקרו-צנטריפוגה (~ 1 מ"ל) (איור 2).

5. לזרום Cytometry ניתוח

הערה: כדי להשוות בין השיטות דיסוציאציה (מיקרופלואידיקה ופירוק), cytometry זרימה עם immunofluorescence שימש.

  1. הוספת fluorescein isothiocyanate (FITC) - נוגדנים חד שבטיים העכבר מצומדת האנטי-האדם CD66b, allophycocyanin (APC) - מצומדת העכבר נגד CD45 נוגדנים חד שבטיים המתלים הראשונית (שלב 3.3), וכתוצאה מכך המתלים (שלב 4.9) (200 µL של כל נוגדן) ביחס של 1:25 וי/v.
  2. דגירה בדגימות ב 4 ° C בחושך למשך 30 דקות.
  3. לנתח את שתי דוגמאות על cytometer זרימה כדי לכמת את PMNs.
    הערה: האוכלוסיה היא חיובית כפולה FITC-APC, CD66b חיובי, CD45 חיובי נחשבה לאבן נויטרופילים. שחזור מחושב על ידי היחס בין המספרים בתא סכום של הקלט, וכתוצאה מכך ההשעיה.

6. ניתוח שחרור NE

הערה: כדי להשוות את הפונקציונליות של מבודד נויטרופילים בשיטה מיקרופלואידיקה והמסה, ערכת NE assay שימש.

  1. להוסיף PMA (המסופק בערכה assay) כל השעיה וכתוצאה מכך (שהושג בשלב 4.9) כדי ריכוז סופי של 50 ננומטר.
  2. דגירה בדגימות ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעתיים.
  3. Centrifuge את המתלים ב g x 300 למשך 10 דקות.
  4. להעביר 10 µL של כל תגובת שיקוע צלחת 96-ובכן (המסופק בערכה assay).
    הערה: microplate 96-ובכן עם תחתית שטוחה, פוליסטירן שחור יכול לשמש גם כן.
  5. להוסיף 90 µL assay מדולל מאגר (המסופק בערכה assay) כל טוב.
  6. להוסיף 10 µL של המצע elastase (2Rh110 Z-Ala-Ala-Ala-Ala, המסופק בערכה assay).
  7. תקופת דגירה של 1.5 h ב- 37 מעלות צלזיוס.
  8. לקרוא את הצלחת 96-ובכן באמצעות של fluorometer-גל עירור של 485 ננומטר, אורך גל של פליטה של 525 ננומטר.
    הערה: הרמה של NE חולקה על ידי הרוזן נויטרופיל מניתוח cytometry זרימה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השגנו המתלים החיסון-תא שקוף עם שני DTT mucolysis ו מיקרופלואידיקה דיסוציאציה (איור 3 א). מיקרופלואידיקה דיסוציאציה שנאספו 4.40 x 105 PMNs בממוצע (2.1 x 104 5.60 x 105 PMNs, n = 6) מדגימות את דרכי הנשימה הפרשת מדולל 1,000-fold (הנפח הכולל של 50 מ"ל) ב 1 מ"ל של השעיה נקי. בהשוואה את diluent הראשוני, 94.0% PMNs (CD66b+/CD45+) התגלו ב אמצעי אחסון קטן, באופן עקבי על פני 6 דוגמאות קליניות. עם זאת, שיטת mucolysi...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ב מיקרופלואידיקה אינרציאלית, חלקיק ותאים לשפה במיקום לרוחב מסוים במיקרו-ערוץ מבוסס על שלהם גודל5,18,19,20. בשל ההשפעה המשולבת של הדיקן גררו כוח וכוח הרמה אינרציאלית microchannel מעוקל, חלקיקים גדולים או נויטרופילים (> 10 מיקרומטר) ממוקמים בתוך הערוץ של חלקיקים קטנים, ריר, אגרגטים פסולת קטנים יותר 6 מיקרומטר ממוקמות בחוץ התעלה במהירות זרימה מסוימים תנאים10,

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים הגישו בקשה לרישום פטנט על טכנולוגיה המתוארים כאן.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי NIH/NIAID (R21AI119042) כמו גם תכנית NIH ממעט מדגם U24 assay (U24-AI118656).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מבשר PDMSDow corning184 SIL ELAST KIT 3.9 ק"גיחס של בסיס וחומר ריפוי
VWR תנור הסעת כבידה VWR414005-128PDMS מבשר לריפוי ב 90 מעלות.
צלחת פטרי 100 מ"מVWR89000-324ייצור PDMS שכבה תומכת
האריס אגרוף חד ליבתיסיגמא-אולדריץ'WHAWB100076קוטר 2 מ"מ או אחר בהתאם לגודל הצינור,
מכונת פלזמה אוויריתFemto Scienceמשטח חמודלמכשיר PDMS לבסיס התחתון.
מגלשת זכוכית בגודל 2 אינץ' x 3 אינץ'TED PELLA, INC.2195לתמיכה במכשיר PDMS
Masterflex סליל צינורות סיליקון מרפא פלטינה, L/S 14Cole-ParmerEW-96410-14צינורות למיקרופלואידיקה ומשאבה פריסטלטית
1/16 אינץ' מחבר לואר,מכשיר הרווארדPC2 72-1443מחבר למוביל נוזלים
50 מ"ל צינור פלקוןקורנינג21008-940איסוף והכנה
של דגימותתמיסת מלח עם חומצת פוספט, 1X ללא קורנינג סידן ומגנזיום45000-446 תמיסת חיץ לדילול הדגימה
קטטר יניקה סגור Halyard, מרפק, 14F/תעלה 4.67 מ"מHALYARD HEALTH22113קטטר יניקה להסרת קנה הנשימה
0.9% סטרילי תמיסת מלח רגילה, 10 מ"ל מזרק מלא מראשBD PosiFlushNHRIC: 8290-306547לאיסוף הפרדת קנה הנשימה מהמטופלים
SecurTainer™ מיכלי דגימה III, 20 מ"לSimport1176R36מזרק מיכל איסוף ליחה סטרילי (הפרשת דרכי הנשימה)
עם קצה Luer-Lok, 10 מ"לBDBD309604כדי להומוגניזציה של דגימת הריר ולהגיע לתחתית צינור הדגימה
BD  מחט מילוי קהה, עם BD Luer-Lok  טיפBDכדי להומוגניזציה של דגימת הריר ולהגיע לתחתית צינור הדגימה
40µ מסננת תאי ניילון M Falcon21008-949להסרת גושים גדולים או קרישי דם, שעלולים לחסום את חור הגישה למיקרופלואידיקה או את התעלה.
משאבה פריסטלטית (Masterflex L/S Digital Drive)Cole-ParmerHV-07522-30פעולת מיקרופלואידיקה
BD LSR II ציטומטר זרימהBD BioscienceLSR II ציטומטר זרימהכימות יחס התאוששות התאים
פלואורסצאין איזותיוציאנט (FITC) עכבר מצומד נוגדן חד שבטי CD66b אנטי אנושיBD Bioscience561927צביעה חיסונית של נויטרופילים לניתוח ציטומטר זרימה
אלופיקוציאנין (APC) מצומד עכבר אנטי אנושי CD45 נוגדן חד שבטיBD Bioscience561864צביעה חיסונית של נויטרופילים לניתוח ציטומטר זרימה
קורא צלחותThermo Fisher מדעיVarioskanקורא צלחות לבדיקת אלסטאז נויטרופילים, ex485/em525
ערכת בדיקת אלסטאז נויטרופיליםCayman Chemical600610הערכת פונקציונליות נויטרופילים
פלואורסברייט YG מיקרוספירות 10.0 ומיקרו; מPolyScience, Inc.18140-2חלקיקים פלואורסצנטיים לביטוי מסלול תאי דם לבנים במיקרופלואידיקה
טיפול פלזמה זכר

מקורות

  1. Hamid, Q., et al. Methods of sputum processing for cell counts, immunocytochemistry and in situ hybridisation. European Respiratory Journal. 20 (Supplement 37), 19S-23S (2002).
  2. van Overveld, F. J., et al. Effects of homogenization of induced sputum by dithiothreitol on polymorphonuclear cells. J Physiol Pharmacol. 56, Suppl 4. 143-154 (2005).
  3. Qiu, D., Tan, W. C. Dithiothreitol has a dose-response effect on cell surface antigen expression. J Allergy Clin Immunol. 103 (5 Pt 1), 873-876 (1999).
  4. Usher, L. R., et al. Induction of Neutrophil Apoptosis by the Pseudomonas aeruginosa Exotoxin Pyocyanin: A Potential Mechanism of Persistent Infection. The Journal of Immunology. 168 (4), 1861-1868 (2002).
  5. Di Carlo, D. Inertial microfluidics. Lab Chip. 9 (21), 3038-3046 (2009).
  6. Martel, J. M., Toner, M. Inertial focusing dynamics in spiral microchannels. Phys Fluids. 24 (3), 32001(2012).
  7. Zhang, J., et al. Fundamentals and applications of inertial microfluidics: a review. Lab Chip. 16 (1), 10-34 (2016).
  8. Hou, H. W., Bhattacharyya, R. P., Hung, D. T., Han, J. Direct detection and drug-resistance profiling of bacteremias using inertial microfluidics. Lab Chip. 15 (10), 2297-2307 (2015).
  9. Warkiani, M. E., et al. Ultra-fast, label-free isolation of circulating tumor cells from blood using spiral microfluidics. Nat Protoc. 11 (1), 134-148 (2016).
  10. Warkiani, M. E., Tay, A. K., Guan, G., Han, J. Membrane-less microfiltration using inertial microfluidics. Sci Rep. 5, 11018(2015).
  11. Warkiani, M. E., Wu, L., Tay, A. K., Han, J. Large-Volume Microfluidic Cell Sorting for Biomedical Applications. Annu Rev Biomed Eng. 17, 1-34 (2015).
  12. Kwon, T., et al. Microfluidic Cell Retention Device for Perfusion of Mammalian Suspension Culture. Sci Rep. 7 (1), 6703(2017).
  13. Wu, L., Guan, G., Hou, H. W., Bhagat, A. A., Han, J. Separation of leukocytes from blood using spiral channel with trapezoid cross-section. Anal Chem. 84 (21), 9324-9331 (2012).
  14. Guan, G., et al. Spiral microchannel with rectangular and trapezoidal cross-sections for size based particle separation. Sci Rep. 3, 1475(2013).
  15. Kotz, K., Cheng, X., Toner, M. PDMS Device Fabrication and Surface Modification. J Vis Exp. (8), e319(2007).
  16. Duffy, D. C., McDonald, J. C., Schueller, O. J. A., Whitesides, G. M. Rapid Prototyping of Microfluidic Systems in Poly(dimethylsiloxane). Analytical Chemistry. 70 (23), 4974-4984 (1998).
  17. Ryu, H., et al. Patient-Derived Airway Secretion Dissociation Technique To Isolate and Concentrate Immune Cells Using Closed-Loop Inertial Microfluidics. Anal Chem. 89 (10), 5549-5556 (2017).
  18. Mach, A. J., Di Carlo, D. Continuous scalable blood filtration device using inertial microfluidics. Biotechnol Bioeng. 107 (2), 302-311 (2010).
  19. Di Carlo, D., Irimia, D., Tompkins, R. G., Toner, M. Continuous inertial focusing, ordering, and separation of particles in microchannels. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (48), 18892-18897 (2007).
  20. Xiang, N., et al. Fundamentals of elasto-inertial particle focusing in curved microfluidic channels. Lab Chip. 16 (14), 2626-2635 (2016).
  21. Lotvall, J., et al. Asthma endotypes: a new approach to classification of disease entities within the asthma syndrome. J Allergy Clin Immunol. 127 (2), 355-360 (2011).
  22. Houston, N., et al. Sputum neutrophils in cystic fibrosis patients display a reduced respiratory burst. J Cyst Fibros. 12 (4), 352-362 (2013).
  23. Janoff, A., Scherer, J. Mediators of inflammation in leukocyte lysosomes. IX. Elastinolytic activity in granules of human polymorphonuclear leukocytes. J Exp Med. 128 (5), 1137-1155 (1968).
  24. Kawabata, K., Hagio, T., Matsuoka, S. The role of neutrophil elastase in acute lung injury. Eur J Pharmacol. 451 (1), 1-10 (2002).
  25. Rubin, B. K. Plastic Bronchitis. Clin Chest Med. 37 (3), 405-408 (2016).
  26. Kokot, K., Teschner, M., Schaefer, R. M., Heidland, A. Stimulation and inhibition of elastase release from human neutrophils dependent on the calcium messenger system. Miner Electrolyte Metab. 13 (2), 133-140 (1987).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

פעולה במעגל סגורמיקרו-תעלות ספירליותבידוד ללא סימוןהשבת תאיםגרייה באמצעות PMAשחרור אלסטזעיבוד דגימות קליניות
העשרה ללא תווית נויטרופילים של הפרשת נגזר המטופל דרכי הנשימה באמצעות לולאה סגורה אינרציאלית מיקרופלואידיקה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.