הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מיקרוסקופ אור גיליונות פלורסצנטיות לחקר הלב מאתר

8.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57769

⸱

15 בספטמבר 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Bioengineering, University of California Los Angeles, 2Department of Bioengineering, University of Texas at Arlington, 3School of Optical and Electronic Information, Huazhong University of Science and Technology, 4Department of Biomedical Engineering, OSHU

במאמר זה

סיכום

מחקר זה משתמש בטכניקה מיקרוסקופ (LSFM) אור גיליונות פלורסצנטיות דו-צדדית תאורה בשילוב עם קרחת אופטי ללמוד את הלב מאתר.

תקציר

מיקרוסקופ אור גיליונות פלורסצנטיות כבר בשימוש נרחב עבור ייבוא תמונות מהירה עם רזולוציה צירית גבוהה מ מיקרומטר לקנה המידה מילימטר. טכניקות אור גיליונות מסורתיות לערב את השימוש קרן תאורה יחיד orthogonally מכוונת דגימת רקמה. תמונות של דוגמאות גדולות המיוצרים באמצעות קרן תאורה יחיד מכילות פסים או חפצים, סובלים ברזולוציה מופחתת עקב פיזור קליטת האור על ידי הרקמה. מחקר זה משתמש קרן תאורה דו-צדדית, צלילות מפושטת אופטי פינוי טכניקה ללב מאתר. שיטות אלה מאפשר הדמיה עמוק יותר על-ידי הסרת שומנים מהלב ומפיקים תחום רחב של הדמיה, גדול מ- 10 x 10 x 10 מ מ3. כתוצאה מכך, אסטרטגיה זו מאפשרת לנו לכמת את הממדים חדרית, לעקוב אחר שושלת היוחסין לב לשפה את התפוצה המרחבית של חלבונים ספציפיים הלב ושל יון-ערוצים מכל אחרי לידה כדי העכבר למבוגרים לבבות עם חדות מספקת ו רזולוציה.

מבוא

מיקרוסקופ אור גיליונות פלורסצנטיות הייתה הטכניקה פותחה לראשונה בשנת 1903 ומשמש היום כשיטה ללמוד ביטוי גנים וגם לייצר מודלים תלת-ממדי או 4-D של רקמות דגימות1,2,3. שיטה הדמיה זו משתמשת סדין דק של אור כדי להאיר מטוס בודד של מדגם כך רק את המטוס הוא נלכד על ידי הגלאי. המדגם יכול להיות עבר לכיוון-צירית ללכוד כל שכבה, מקטע אחד בכל פעם, ועיבוד דגם תלת-ממדי לאחר עיבוד שלאחר של תמונות רכשה4. עם זאת, עקב ספיגת פיזור של פוטונים, LSFM הוגבלה על דוגמאות או מיקרונים אחדים עבה או שטיחות שקוף1.

המגבלות של LSFM הובילו מחקרים מקיפים של אורגניזמים בעלי רקמות שקופים אופטים, כגון דג זברה. מחקרים שכללו פיתוח לב ובידול נערכות לעיתים קרובות על דג זברה מאז ישנם גנים שנשמרת בין בני האדם לבין דג זברה5,6. למרות מחקרים אלו הובילו ההתקדמות במחקר הלב הקשורים6,cardiomyopathies7, יש עדיין צורך לערוך מחקר דומה על אורגניזמים ברמה גבוהה יותר כגון יונקים.

יונקים ברקמת הלב מהווה אתגר עקב עובי האטימות של הרקמה, קליטתם עקב המוגלובין כדוריות דם אדומות, וכן את פיזור המתרחשת עקב תאורה חד צדדית של הדגימה תחת LSFM מסורתיים שיטות1 , 8. כדי לפצות על מגבלות אלה, הצענו להשתמש תאורה דו-צדדית, גרסה מפושטת של טכניקה בבהירות9 בשילוב עם מקדם שבירה התאמת פתרון (חישוקים). לכן, מערכת זו מאפשרת ההדמיה של מדגם זה גדול מ- 10 x 10 x 10 מ מ3 תוך שמירה על רזולוציה באיכות טובה צירית, לרוחב מטוסים8.

מערכת זו היה מכויל תחילה באמצעות חרוזים פלורסנט מסודרים תצורות שונות בתוך הצנרת זכוכית. לאחר מכן, המערכת שימשה תמונה אחרי לידה ומבוגרים מאתר לבבות. ראשית, בלב העכבר אחרי לידה צולמה ב 7 ימים (P7) כדי לחשוף את חלל חדרית, את עוביו של הקיר חדרית המבנים שסתום, הנוכחות של trabeculation. שנית, נערך מחקר כדי לזהות תאים להתמיין cardiomyocytes באמצעות העכבר אחרי לידה לב ב- 1 יום (P1) עם התווית על-ידי Cre cardiomyocytes, חלבון פלואורסצנטי צהוב (YFP). לבסוף, עכברים בוגרים בגיל 7.5 חודשים היו עם תמונה כדי לבחון את נוכחותם של כליות אשלגן מדולרי החיצוני ערוצים (ROMK) לאחר טיפול גנטי8.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים הקשורים בבעלי החיים אושרו על ידי המוסדיים סקירה ועדות (IACUC) ב אוניברסיטת קליפורניה, לוס אנג'לס, קליפורניה.

1. התקנת מערכת הדמיה

הערה: ראה איור 1 באיור 2.

  1. לאחזר לייזר (CW) רציף wave עם אורכי גל 3: 405 ננומטר, 473 ננומטר, 532 ננומטר. מניחים 2 מראות (M1 ו- M2) 150 מ מ לגזרים וליישר אותן עם המטוסים המראה שלהם-45° על הקורה.
    הערה: שלב זה מתבצע כדי לנתב מחדש את הלייזר מן ההגדרה תאורה דו-צדדית. קרן וכתוצאה מכך יהיו באותו כיוון כמו הקרן הראשוני.
  2. להעביר את הקרן עד קוטר 25 מ מ איריס הסרעפת/הקדמוניות (PH), מסנן דחיסות נייטרלית בקוטר 50 מ מ (אבחון) עם טווח צפיפות אופטית של 0 - 4.0, במותחן קרן (מושלם), חתך 30 מ מ (S) עם הרוחב של ~ 0 - 6 מ מ, ומראה (M3) , כל מה ממוקם 150 מ מ אחד מהשני. במקום המראה עם המטוס המראה שלה בגיל 45° על הקורה.
  3. עוברים את הקרן דרך מפצל קרן 50: 50 הציב 150 מ מ M3. להציב מראה (M6) 150 מ מ המפצל קרן, ליישר אותה כך המטוס המראה שלה הוא ב- 45 מעלות על הקורה הנפלט בכיוון קדימה. השתמש קרן משתקף להקים בצד אחד של גליון אור כפול-תאורה.
  4. להציב מראה (M4) 150 מ מ המפצל קרן, ליישר אותה כך המטוס המראה שלה הוא ב- 45 מעלות על הקורה זה היה הנפלטים בזווית של 90° ' מ המפצל קרן. להציב מראה השני (M5) 150 מ מ M4, ליישר אותה כך המטוס המראה שלה הוא ב- 45 מעלות על הקורה שמשתקף M6. השתמש קרן הנפלטים M5 כדי ליצור את הצד השני של הגיליון אור כפול-תאורה.
  5. להגדיר את מערכת תאורה דו-צדדית באופן סימטרי (ראה איור 1). מקום אחד עדשה גלילית (CL1) [קוטר (ד) = 1; אורך המוקד (נ) = 50 מ"מ] 150 מ מ בקו אחד עם קרן הנפלטים M5 בצד אחד ואת עוד עדשה גלילית זהים (CL2) 150 מ מ בקו אחד עם קרן הנפלטים M6 בצד השני של setu כפול-תאורה עמ' למקם 2 מראות (M7, M8) כל קו עם עדשות גלילי במרחקים של 50 מ מ כדי לשקף את הקרן ב- 90 °.
  6. טופס של כפיל אכרומטי מזוג עדשות. מקם את העדשה הראשונה, L1 (d = 1; f = 100 מ מ), 100 מ מ M7, העדשה השניה, L2 (d = 1; f = 60 מ"מ), 160 מ מ L1. חזור על שזה בצד השני של כפול-התאורה עם עדשות זהה (L3, L4) להציב את המרחק אותו M8.
  7. המקום שיקוף, M9 ו- M10, 60 מ מ עדשות L2 ו- L4, בהתאמה, ובהתאם את הקרן. להציב מטרות תאורה, OL1 ו- OL2 (d = 2; f = 150 מ מ), 150 מ מ M9 M10 ו בקנה אחד עם הקרן. קרן הנפלטים מן המטרות טפסים הגיליון אור הדמיה הדגימות.
  8. להשתמש במדפסת תלת-ממד כדי להדפיס את בעל מדגם styrene טבעי בוטאדיאן (ABS). להטביע חתיכת כיסוי זכוכית [מקדם שבירה (RI) = 1.4745] בכל צד של החדר, הניצב על הקורה תאורה, כדי למזער את השבירה mismatching תשואה. אחיד במקום התא בין הקורות הנפלטים העדשות אובייקטיבי.
  9. התקנת מיקרוסקופ סטריאו עם הספרה 1 X הגדלה אובייקטיבית, מצלמה מדעי משלימים תחמוצת מתכת מוליכים למחצה (sCMOS) בניצב ההארה מטוס (ראה איור 2).

2. הדמיה מערכת כיול

  1. אחזר חרוזי פוליסטירן פלורסנט שאינן μm 0.53 בקוטר.
  2. הכן את הדגימה פלורסנט חרוז על ידי דילול הפתרון חרוז בפתרון תואמות מקדם שבירה (חישוקים) עם agarose הצבעה נמוך-להמיס 1% כדי 1:150, 000. חותכים פיסת זכוכית בורוסיליקט אבובים עם הקוטר הפנימי של 12 מ"מ וקוטר החיצונית של 18 מ מ לאורך של 30 מ מ.
    הערה: לאורך צינור זכוכית בורוסיליקט משמש כדי להתאים את מקדם שבירה (1.47).
  3. לערבב את הדגימה חרוז מדולל עם 1% agarose, pipette הפתרון חרוז/agarose אל הצנרת בורוסיליקט. אפשר את agarose לגבש בטמפרטורת החדר (23 ° C).
  4. למלא את התא ABS (מתוך שלב 1.7) פתרון גליצרול 99.5%. מקם את צינורות זכוכית בורוסיליקט המכיל את החרוזים בתוך החדר. מקום תא ABS מערכת ההדמייה כך שיהיה במרכז קרן גאוסיאנית שנוצרו על ידי מערכת תאורה כפולה.
  5. לצרף שלב translational ממונע תלת-ממדי לאורך צינור זכוכית בורוסיליקט כדי לקבוע את התנועה והכיוון של המדגם בתוך תא ABS (ראה תוספת איור 1).
  6. לרכוש תמונות באמצעות מצלמת ה-sCMOS בקצב של 30 מסגרות לשנייה (fps). באמצעות הבקר מוטוריים, הזז את הדגימה 1 מ מ בכיוון לרוחב, לרכוש תמונות על כל תוספת 1 מ מ באמצעות מצלמת ה-sCMOS. המשך עד המדגם כולו עם תמונה.
  7. ערימת תמונות נרכשות באמצעות תוכנת ויזואליזציה (ראה טבלה של חומרים). למדוד את הפונקציה הליין (PSF) של המערכת באמצעות הדימויים חרוז. השתמש הזה PSF deconvolution במהלך עיבוד בשלבים מאוחר יותר התמונה.

3. הכנת הדוגמא

  1. לנתח לבבות עכבר פראי סוג P1, זוגית משפחתית ולא משפחתית הטרוזיגוטיים sarcolipin-Cre knockin עם העכבר הגן Rosa26-YFP (SlnCre / +; R26YFP כתב / +)-P7.
    הערה: המתת חסד בוצעה באמצעות פנטוברביטל בטכניקה המתוארת על ידי רובינס. et al. 10. הקרע בוצעה על פי בטכניקה המתוארת על ידי ה הלאומי ללב, ריאות, ודם המכון (NHLBI)10,11.
  2. לבצע חומר כימי ניקוי של לבבות מאתר כפי שתואר על ידי קווין סונג. et al. 12.
    הערה: השלבים הבאים יש לבצעו בשכונה fume מאז הכימיקלים בשימוש רעילים.
    1. לשטוף את הלבבות 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS) 3 x 10 דקות. לאחר השטיפה, למקם את הלבבות בפתרון paraformaldehyde 4%, דגירה הדוגמיות הללו ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
    2. מקם את הדגימות פתרון 4% אקרילאמיד המכילה 0.5% w/v של 2, 2'-Azobis dihydrochloride. לאפשר את הדוגמאות כדי דגירה ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. לאחר לילה הדגירה, להסיר את הדגימות, דגירה אותם ב 37 מעלות צלזיוס במשך 2-3 h.
    3. לשטוף את הדגימות עם PBS ולאחר מכן למקם אותם בפתרון של 8% w/v dodecyl נתרן גופרתי, חומצה בורית w/v 1.25%. דגירה בדגימות ב 37 ° C עד הם טהורים. זה יכול לארוך מספר שעות תלוי בעובי של המדגם. לאחר ניקוי, להסיר את הדגימות ומניחים 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח ליום 1.
    4. להכין עם מקדם שבירה התאמת פתרון עם 40 גר' nonionic צפיפות בינונית הדרגתי (ראה טבלה של חומרים) ב- 30 מ ל ז 0.02 נקודות פוספט מאגר (PB), אזיד הנתרן Tween-20, ו- 0.01% 0.1%. להביא את הפתרון pH של 7.5 עם נתרן הידרוקסידי.
  3. מקם את הדגימה שנוקה חישוקים עם מדד השבירה agarose 1.46-1.48 ו 1%. הכנס את הדגימה לתוך צינורות זכוכית בורוסיליקט ולאפשר את agarose לגבש בטמפרטורת החדר (23 ° C).
  4. לצרף שלב translational ממונע תלת-ממדי לאורך צינור זכוכית בורוסיליקט כדי לשלוט על תנועת והודפס הכיוון של המדגם בתוך תלת-ממד ABS קאמרית (ראה תוספת איור 1).

4. דימות הלב למבוגרים

  1. להזריק 8.7 x 10 וירוסים12 של סוג וירוס adeno-הקשורים וקטור 9 (AAV9) המכילה יזם ספציפיות הלב טרופונין T (cTnT), חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) באמצעי אחסון 100-μL לתוך וריד הזנב עכבר 2-חודש פראי סוג (C57BL/6).
    הערה: AAV9 פותחה על פי בטכניקה המתוארת על ידי יואן. et al. 13. זה גורם GFP לאגד הערוץ כליות אשלגן מדולרי החיצוני (ROMK) בהפקת AAV9-cTnT-ROMK-GFP (ראה טבלה של חומרים).
  2. לנתח את הלבבות העכבר למבוגרים-7.5 חודשים של גיל על פי בטכניקה המתוארת על ידי NHLBI11. הכינו את הדגימות באמצעות צעדים 3.1-3.3.
  3. להתחבר הבקר מנוע מנוע במפעיל. לצרף במפעיל לאורך צינור זכוכית בורוסיליקט כדי לשלוט על תנועת והודפס הכיוון של המדגם בתוך תלת-ממד ABS קאמרית.
  4. מקם את הדגימה כך זה במרכז קרן גאוסיאנית שנוצרו על ידי מערכת תאורה כפולה. לרכוש תמונות באמצעות מצלמת ה-sCMOS בקצב של 100 fps.
  5. באמצעות הבקר מוטוריים, להעביר את הדגימה 1 מ"מ לכיוון צירית, לרכוש תמונות על כל תוספת קבועה של 1 מ מ עם המצלמה sCMOS. המשך עד המדגם כולו עם תמונה.
    הערה: המערכת נשלטת על ידי תוכנת בקרת מכשיר מפותחות מותאם אישית.
  6. ערימת תמונות נרכשות באמצעות תוכנת ויזואליזציה (ראה טבלה של חומרים). לפתח תמונות תלת-ממד באמצעות אוספי תמונות אלה, תוכנת ויזואליזציה14. Deconvolve את PSF מהשלב 2.6 עם אוסף תמונות רכשה. הגדר ערך פיקסל עוצמת סף כדי לבחון את קווי המתאר של הלב ולהוסיף צבע מדומה תמונות בהתבסס על זה עוצמת גווני אפור.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בטכניקה המתוארת כאן להשתמש קרן דו-צדדית תאורה בשילוב של ניקוי אופטי של דגימות רקמות הלב העכבר כדי להשיג עמוק יותר לעומק הדמיה הדימות נפח גדול יותר עם רזולוציה מספקת הדמיה (איור 1). כדי לכייל את המערכת, חרוזים פלורסנט הונחו בתוך הצנרת זכוכית ובתוך מערכת הדמיה. החרוזים ואז היו עם תמונה, דמיינו במישור x-y, y-z המטוס, ולהפיץ במישור x-z, כדי להשיג את הנקודה פונקציה (PSF) עבור מערכת8. כיול המערכת המיוצר רזולוציה בכיוון לרוחב של ≈ dלרוחב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מערכת LSFM ואת בטכניקה המתוארת כאן מנצל קרן דו-צדדית תאורה בשילוב עם קרחת אופטי תמונת הלב העכבר אחרי לידה ומבוגרים שלבי התפתחותה. קרן תאורה יחיד מסורתי סובל הפוטונים פיזור וקליטה דרך רקמות עבה יותר, גדול יותר דגימות1,3. הקורות דו-צדדית לספק תאורה אפילו יותר של המדגם, ובכך למזער את ההשפעה של פיזור וממצאים אחרים כי הם לעיתים לראות בתמונות המיוצר על ידי תאורה צדדית. טכניקה זו גם מגביר את גודל המדגם זה יכול לדימות על-ידי התאמת המיקום של קורות גאוסיאנית כפול

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

המחברים רוצה להביע את תודתי תאו נגוין, אטסשי נאקאנו מ- UCLA למתן את הדגימה עכברים לתמונה. מחקר זה נתמך על ידי מענקים NIH HL118650 (ל Tzung ק Hsiai), HL083015 (ל Tzung ק Hsiai), HD069305 (כדי ש ג צ'י Tzung ק Hsiai.), HL111437 (ל Tzung ק Hsiai ו ש ג צ'י), HL129727 (ל Tzung ק Hsiai) ומערכת אוניברסיטת טקסס כוכבים מימון (כדי Juhyun לי).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
טכנולוגיות לייזר לייזר CWLMM-GBV1-PF3-00300-05עירור של פלואורופורים
מסנן צפיפות ניטרליתThorlabsNDC-50C-4Mשולט בכמות האור הנכנסת למערכת
מרחיב קרן אכרומטיThorlabsGBE05-Aמרחיב את אלומת האור
חריץ מכניThorlabsVA100Cשולט ברוחב הקרן
מפצל קרןThorlabsBS013צורות קרן תאורה כפולה
מיקרוסקופ סטריאו עם עדשת אובייקטיבית 1XאולימפוסMVX10משמש לתצפית על מדגם
ORCA-Flash4.0 LT מצלמת sCMOSHamamatsu PhotonicsC11440-42Uמשמש לצילום תמונות
אקרילוניטריל בוטאדיאן סטירן (ABS)StratasysuPrintחומר המשמש להדפסת תלת מימד מחזיק מדגם
חרוזי פוליסטירן פלואורסצנטייםSpherotech IncPP-05-10משמשים לכיול מערכת הדמיה
צינורות זכוכית בורוסיליקטCorningPyrex 7740צינורות להטמעת דגימה
גליצרולפישר סיינטיפיקBP229-4מילוי לתא דגימה
מלח חוצץ פוספטפישר סיינטיפיקBP39920תמיסת שטיפה ללבבות עכבר
ParaformaldehydeElectron Microscopy SciencesRT-15700תמיסת הדגירה הראשונה
AcrylamideWako ChemicalsAAL-107מעורבב עם 2,2'-Azobis dihydrochloride לתמיסת דגירה שנייה ללבבות עכברים
2,2'-Azobis dihydrochlorideWako ChemicalsVA-044מעורבב עם אקרילאמיד לתמיסת דגירה שנייה ללבבות
עכבריםנתרן דודציל סולפט Sigma Aldrich71725מעורבב עם חומצה בורית לתמיסת דגירה שלישית ללבבות עכברים
חומצה בוריתFischer ScientificA74-1מעורבב עם נתרן דודציל סולפט לתמיסת דגירה שלישית ללבבות עכברים
Sigma D2158 Sigma AldrichD2158מעורבב עם PB, Tween-20 ונתרן אזיד כתמיסת התאמת מקדם שבירה
Tween-20Sigma Aldrich11332465001מעורבב עם Sigma D2158, PB ונתרן אזיד כתמיסת התאמת מקדם שבירה
נתרן אזידSigma AldrichS2002מעורבב עם Sigma D2158, PB ו-Tween-20 כפתרון התאמת מקדם שבירה
וקטור וירוס הקשור לאדנו 9 עם מקדם טרופונין T ספציפי ללב המתויג עם GFPוקטור BiolabsVB2045מבטא GFP כאשר הוא קשור למפעיל
מנוע סרווThorlabsZ825Bמשמש לתנועת דגימה בכיוון צירי בתוך גיליון אור
בקר מנוע סרוו DC מוברש K-CubeThorlabsKDC101מתחבר למפעיל המנוע ושולט בתנועה של המפעיל
AmiraFEI תוכנהN/Aתוכנת הדמיה להפקת תמונות דו-ממדיות ותלת-ממדיות
ROMK DC

מקורות

  1. Richardson, D. S., Lichtman, J. W. Clarifying tissue clearing. Cell. 162 (2), 246-257 (2015).
  2. Lee, J., et al. 4-Dimensional light-sheet microscopy to elucidate shear stress modulation of cardiac trabeculation. Journal of Clinical Investigation. 126 (5), 1679-1690 (2016).
  3. Huisken, J., Swoger, J., Del Bene, F., Wittbrodt, J., Stelzer, E. Optical sectioning deep inside live embryos by selective plane illumination microscopy. Science. 305 (5686), 1007-1009 (2004).
  4. Huisken, J., Stainier, D. Y. Selective plane illumination microscopy techniques in developmental biology. Development. 136 (12), 1963-1975 (2009).
  5. Bakkers, J. Zebrafish as a model to study cardiac development and human cardiac disease. Cardiovascular Research. 91 (2), 279-288 (2011).
  6. High, F. A., Epstein, J. A. The multifaceted role of Notch in cardiac development and disease. Nature Reviews Genetics. 9 (1), 49-61 (2008).
  7. Sachinidis, A. Cardiac specific differentiation of mouse embryonic stem cells. Cardiovascular Research. 58 (2), 278-291 (2003).
  8. Ding, Y., et al. Light-sheet fluorescence imaging to localize cardiac lineage and protein distribution. Scientific Reports. 7, 42209(2017).
  9. Tomer, R., Ye, L., Hsueh, B., Deisseroth, K. Advanced CLARITY for rapid and high-resolution imaging of intact tissues. Nature Protocols. 9 (7), 1682-1697 (2014).
  10. Robbins, N., Thompson, A., Mann, A., Blomkalns, A. L. Isolation and excision of murine aorta; a versatile technique in the study of cardiovascular disease. Journal of Visualized Experiments. (93), e52172(2014).
  11. National Heart, L., Blood Institute, Standard Operating Procedures (SOP's) for Duchenne Animal Models. , (2015).
  12. Sung, K., et al. Simplified three-dimensional tissue clearing and incorporation of colorimetric phenotyping. Scientific Reports. 6, 30736(2016).
  13. Yuan, Z., Qiao, C., Hu, P., Li, J., Xiao, X. A versatile adeno-associated virus vector producer cell line method for scalable vector production of different serotypes. Human Gene Therapy. 22 (5), 613-624 (2011).
  14. FEI, Amira User's Guide. , Konrad-Zuse-Zentrum fur Informationstechnik. Berlin. 59-138 (2017).
  15. Gao, L., et al. Noninvasive imaging of 3D dynamics in thickly fluorescent specimens beyond the diffraction limit. Cell. 151 (6), 1370-1385 (2012).
  16. Truong, T. V., Supatto, W., Koos, D. S., Choi, J. M., Fraser, S. E. Deep and fast live imaging with two-photon scanned light-sheet microscopy. Nature Methods. 8 (9), 757-760 (2011).
  17. Ding, Y., et al. Integrating light-sheet imaging with virtual reality to recapitulate developmental cardiac mechanics. JCI Insight. 2 (22), (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

CLARITYsCMOS
מיקרוסקופ אור גיליונות פלורסצנטיות לחקר הלב מאתר
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.