הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אין ויוו Microdialysis שיטת איסוף גדול חלבונים חוץ-תאית נוזל בין-תאי המוח עם משקל מולקולרי גבוה ניתוק רגשים

14.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57869

⸱

26 בספטמבר 2018

1Department of Neuropathology, Graduate School of Medicine, University of Tokyo

במאמר זה

סיכום

Microdialysis in vivo אפשרה אוסף של מולקולות נוכח נוזל בין-תאי המוח (הקרן) מבעלי ער, להתנהג בחופשיות. על מנת לנתח מולקולות גדולות יחסית של הקרן הלאומית למדע, המאמר הנוכחי מתמקד במיוחד בפרוטוקול microdialysis באמצעות רגשים עם משקל מולקולרי גבוה לחתוך את הממברנות.

תקציר

In vivo microdialysis היא טכניקה חזקה כדי לאסוף את הקרן מבעלי ער, מתנהג באופן חופשי המבוסס על עיקרון דיאליזה. בעוד microdialysis היא שיטה ותיקה המודד מולקולות קטנות יחסית, כולל חומצות אמינו או נוירוטרנסמיטורים, לאחרונה שהשתמשו בה להעריך גם את הדינמיקה של מולקולות גדולות יותר של הקרן באמצעות רגשים עם משקל מולקולרי גבוה לחתוך ממברנות. בעת שימוש כזה הגששים, microdialysis יש לפעול במצב שכיבות למשוך כדי למנוע לחץ שהצטברו בתוך הגששים. מאמר זה מספק צעד אחר צעד פרוטוקולים כולל ניתוח stereotaxic וכיצד להגדיר קווים microdialysis לאסוף חלבונים מן הקרן. במהלך microdialysis, סמים יכול להינתן או מערכתית או על ידי אינפוזיה ישירה לתוך הקרן. Microdialysis הפוכה היא טכניקה להחדיר ישירות תרכובות לתוך הקרן. הכללת תרופות במאגר זלוף microdialysis מאפשר להם מפוזרת לתוך הקרן באמצעות הגששים תוך איסוף בו זמנית הקרן. על ידי מדידת חלבון טאו כדוגמה, המחבר מציג כמה רמות שלה השתנו בעת פעילות. עצבית מגרה על-ידי microdialysis ההפוך של picrotoxin. היתרונות והמגבלות של microdialysis מתוארים יחד עם הבקשה המורחבת על ידי שילוב של שיטות אחרות ויוו .

מבוא

הקרן כוללת 15-20% נפח המוח הכולל, מציע microenvironment קריטי עבור אותות, ולהזמנת המצע פסולת סיווג1. לכן, היכולת של איסוף הקרן מבעלי חיים יספקו יותר השלכות על תהליכים ביולוגיים שונים, כמו גם מנגנון המחלה. Microdialysis in vivo הוא אחד מהשיטות הדגימה לכמת חוץ-תאי המולקולות של הקרן מ ער, בחופשיות חיות ו ובכך משמשת כלי שימושי2,בשדה מחקר מדעי המוח3. בשיטה זו, microdialysis הגששים עם ממברנות semipermeable מוכנס במוח, perfused עם מאגר זלוף קצב זרימה איטית יחסית (0.1-5 µL/min). במהלך זה זלוף, חוץ-תאי המולקולות של הקרן פסיבי לפזר לתוך המכשיר על פי מעבר הצבע ריכוז ולאסוף כמו dialysate. למרות מאמר זה מתמקד בשיטת מדגם הקרן במוח, העיקרון והן השיטה ניתן להחיל לאיברים אחרים על-ידי שינוי המתאים במידת הצורך.

Microdialysis הועסק לראשונה בשנות ה-60 המוקדמות, ומאז ואז היא בשימוש נרחב כדי לאסוף את מולקולות קטנות כולל חומצות אמינו או עצביים במוח. עם זאת, לאחרונה הזמינות המסחרית של הגששים microdialysis עם משקל גבוה-מולקולרי לחתוך ממברנות (kDa-3 100 מד א) האריך היישום שלה יחסית גדול יותר חלבונים ב- ISF כמו גם4,5,6 ,7. המחקרים באמצעות רגשים אלו הוביל הממצא הזה חלבונים כגון טאו או α-synuclein זה זמן נחשבו בלעדי cytoplasmic נוכחות גם הן מבחינה פיזיולוגית ב- ISF-4,-5,-8.

אחד הקשיים בעזרת microdialysis הגששים גדול לחתוך ממברנות (בדרך כלל מעל 1,000 kDa) היא כי הם רגישים יותר אולטראפילטרציה אובדן נוזלים עקב הלחץ הפנימי שמצטבר את הגששים. הגששים Microdialysis המשמש כאן יש מבנה ייחודי כדי להימנע מבעיה זו. הלחץ לא יבנה בשל מבנה זה, ובכך microdialysis עם הגששים אלה צריך להיות מופעל במצב "push-pull" באמצעות מזרק משאבה כדי perfuse את הגששים (= דחיפה), משאבה סחרור/רולר כדי לאסוף את מגיע dialysate מהשפך בדיקה (= משיכה) 9 (למרות שצריך לדחוף ולמשוך משאבות, בעקבות לחץ ביטול חורים פתח ב הגששים, המערכת טכנית רק מונעת על ידי משיכה המשאבה). מאמר זה מתחיל עם הניתוח stereotaxic של השרשה בצינורית מדריך, מאמר זה מתאר כיצד להגדיר קווים microdialysis כדי לאסוף הקרן באמצעות microdialysis הגששים עם 1,000 kDa ניתוק ממברנות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקרים שנעשו בבעלי חיים כל היו נבדקו ואושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה בוגר בית הספר לרפואה של אוניברסיטת טוקיו.

1. מראש הליך כירורגי

  1. לפני תחילת הניתוח, למחוק את הכל עם 70% אתנול כדי לשמור על תנאים סטריליים. תמיכה תרמי באמצעות כרית החימום מומלץ.
  2. עזים ומתנגד העכברים בזריקה בקרום הבטן של קלוראל-הידרייט (400 מ"ג/ק"ג). לאשר ההרדמה על-ידי ביצוע קמצוץ הבוהן. מומלץ להשתמש meloxicam SR אינדוקציה, הבופרנורפין עם החלמתם ההצעה לפחות 24 שעות.
  3. לגלח את השיער עם בטלוויזיה כירורגי. לתקן את עכבר עכבר, חולדה neonatal מתאם באמצעות מלחציים האף וברים של האוזן.
    הערה: חיוני כדי לוודא את הראש העכבר מאובטחת בשלב זה, לא זזה side-by-side.
  4. הוטרינר משחה למרוח את העיניים כדי למנוע יובש תחת הרדמה.

2. stereotaxic לניתוח ההשתלה בצינורית מדריך

  1. הגדר את העכבר ואת מתאם עכברוש neonatal על המנגנון stereotaxic. לעשות חתך sagittally על העור על פני הגולגולת באמצעות אזמל.　נגב את הדם ואת רקמת חיבור על הגולגולת באמצעות מקלון צמר גפן לח.
  2. לקבוע את הקואורדינטה עבור אזור המוח עניין באמצעות המוח אטלס. לפני תחילת המדידות, ודא את קו האמצע הוא ישר המקדחה שניתן יהיה להעביר A-P של להישאר על התפר קו האמצע כל הזמן.
    הערה: מאמר זה משתמש הקואורדינטה (A / p: -3.1 מ. מ., M/l:-2.5 מ מ, יח/v:-1.2 מ מ, 12 מעלות) כדי להתמקד ההיפוקמפוס האחורי.
  3. הגולגולת רמה A-P
    1. צרף תרגיל על תחמן של מסגרת stereotaxic. הנמך את התרגיל עד בעדינות שייגע למדא והקלטה של קואורדינטות הגחון שלו. חזור על הליך זה עבור bregma.
      הערה: כאשר הגולגולת היא החלקה, המידה האנכית של bregma שווה לזה של למדא. אם לא, שנה את הגובה של האף קלאמפ בהתאם. אחרי הגולגולת מקבל החלקה, לתעד את הקואורדינטה הקדמי/אחוריים, לרוחב של bregma.
  4. רמת הגולגולת משמאל לימין
    1. להעביר את התרגיל bregma הקואורדינטה (A / p: -3.1 מ. מ., M/l: +2.0 מ מ), להוריד את התרגיל בגולגולת ולהקליט את האנכית. לאחר מכן חזור על הליך זה עבור הקואורדינטה (A / p: -3.1 מ. מ., M/l:-2.0 מ מ).
      הערה: אם הגולגולת הוא ומחבל אנכי של שתי נקודות קו מקביל מן האמצע שהמדידות שווה. אם לא, שנה את הגובה של פסי האוזן.
  5. לקדוח חור burr בקפידה-הקואורדינטה היעד (A / p: -3.1 מ. מ., M/l:-2.5 מ מ) כדי להשתיל בצינורית מדריך. אם הקוטר של חור burr אינו גדול מספיק עבור ההשתלה בצינורית מדריך, נקדח חור נוסף החופפים עם החלק הראשון. נקדח חור נוסף על עצם הקודקוד הימני (בצד contralateral) ולהוסיף בורג העצם, אשר מסייע לאבטח שיניים מלט ב 1.10 (ראה איור 1B).
  6. לחתוך חתיכה נעילה סיבובית מן הצד האחורי של מכסה של שפופרת צנטרפוגה 1.5 mL על ידי סכין גילוח ולעשות 'כתר '. הכתר הזה משמש כדי למנוע מלט שיניים מריחה על העור. למקם אותו על הגולגולת כך נקבים שנעשו בשלב 2.5 להישאר בתוך המעגל (ראה איור 1).
  7. כוונן אסיפה stereotaxic על ידי הצבת בצינורית מדריך על זרוע קצרה יותר של מתאם stereotaxic ' להדק אותו באמצעות אגוז cap. הגדר את הזרוע יותר של מתאם stereotaxic המלחציים אלקטרודה. לצרף אותו על manipulator של המנגנון stereotaxic (ראה איור 1 א').
  8. לסובב את מכלול stereotax D-V על הזרוע מניפולטור ב- 12 מעלות (ראה איור 1B). להעביר את הצינורית מדריך החור burr ב 1.6. הכנס את הצינורית מדריך לאט לתוך המוח על ידי הורדתו מאת 1.2 מ מ.
    הערה: הזווית של המכשיר הוא ספציפי בהיפוקמפוס; אזורים אחרים עשויים לדרוש בכלל זוויות אחרות או אין זווית. התייעץ עם אטלס של המוח עבור קואורדינטות מדויקות. לייבש את פני השטח של הגולגולת, כי אם לא הבטון לא ידבק מלט כובע יכול להפוך יצאה ממקומה
  9. הוסף את הבטון שיניים בתוך הכתר כדי כיסוי מלא בשני מתכת חלק את הצינורית מדריך, הבורג עצם מספיק כדי להבטיח להם. החל מלט שיניים נוספים אם יש חלק של הגולגולת חשוף.
  10. המתן עד מלט שיניים. זה יבש לחלוטין (~ 12-20 דקות). הסר את מתאם stereotaxic המלחציים אלקטרודה. להסיר את האגוז קאפ, להחליף את מתאם stereotaxic בדיקה דמה והדקו האגוז cap.
  11. שחרר את לחצן העכבר של המנגנון stereotaxic, בית העכבר לבד לכלוב נפרד.
    הערה: העכבר אסור להשאיר ללא השגחה עד זה שהכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. בדוק את העכבר מדי יום עד היום של microdialysis. העכבר מקבל NSAIDs כגון carprofen אם נראה שזה כואב. מחכה שבועיים הכרחי ללימודי שינה העכבר habituates הסביבה החדשה10, אך סוגים אחרים של מחקרים עשוי לדרוש תקופות התאוששות קצר יותר (למשל, 1-2 ימים).

3. Microdialysis ההתקנה

  1. בדיקת איכות של הגששים: מילוי מזרק חד פעמיות 1 מ"ל עם מים מזוקקים לחבר אותו לשקע (יציאה קצרות יותר) של בדיקה באמצעות צינור byton. מכסה את חורי אוורור עם האצבעות, את הבוכנה מזרק בעדינות כדי לצקת מים על החללית. בדוק את המים מופיע מן הים בדיקה ויש אין נזילה על-פני קרום microdialysis.
    1. הפעלה של הגששים: להטביע את הממברנות של החללית אתנול (70-100%) לשתי שניות. לאחר מכן, להשרות מים מזוקקים לתוך המכשיר שוב עם מזרק שוב.
  2. הכנת מאגר זלוף: כדי למנוע הידבקות של מולקולות יעד דקים, להוסיף BSA על ידי דילול פתרון BSA 30% 4% עם נוזל מוחי שדרתי מלאכותי (1.3 מ'מ CaCl2, 1.2 מ מ MgSO4, 3 מ מ אשלגן כלורי, 0.4 מ מ ח'2PO4, 25 מ מ NaHCO3 , 122 מ מ NaCl, pH = 7.35), אשר תתאם אלקטרוליט ריכוז ב- CSF, מיד לפני השימוש. לסנן את המאגר זלוף דרך יחידת מסנן מזרק עם גודל הנקבוביות מיקרומטר 0.1.
    הערה: 4% BSA משפרת את שחזור שנשארת חלבונים אך קשות יכול להגביל את המסירה של תרכובות, במיוחד עבור תרכובות בעלות BSA-מחייבת גבוהה. זהו אחד היתרונות של שימוש ריכוז נמוך יותר של BSA (כגון 0.15%) מסוימים מופעים3. שימו לב: BSA יכול לצבור בקלות רבה כאשר נסער על ידי מערבולת או מערבבים בצלחת. אגרגטים אלה יכולים להיסתם הגששים או קרום נקבוביות. נקוט זהירות בעת הכנת פתרון BSA כדי להגביל את מצבור
  3. להכין שני קווים נפרדים עבור כניסת ו אאוטלט (ראה באיור 1C) וחבר שני הקווים עם מחט חיבור. ממלאים מזרק חד פעמיות mL 3 מלא זלוף מאגר וחבר אותו עם סיום כניסת הצנרת באמצעות מחט בלנט-end. למלא את הצנרור כולו עם מאגר זלוף על-ידי הפעלת המשאבה מזרק.
  4. לעצור את משאבת מזרק והחלף את המחט חיבור בין כניסת קו וקו עודפים בדיקה microdialysis מופעל משלב 3.3 (ראה איור 1C). לפני החלפת הזה, לשים כובע אגוז על החללית.
  5. לטעון את צינור רולר לאורך צינור עודפים על המשאבה רולר. התחל את משאבת מזרק ב- µL 10/דקה ואז המשאבה רולר בקצב הזרימה מעט איטי יותר (9.5-9.8 µL/דקה). הקפד להסיר את כל הבועות אוויר בתוך הצנרת כולה, העלולים להשפיע על ההתאוששות כאשר הם מזינים את המכשיר.
  6. עזים ומתנגד העכבר משלב 1.12 באותו אופן כמו שלב 1.2. שים את הקולר העכבר מסביב לצוואר. להסיר את הכובע אגוז לווין דמה, לאט להוסיף בדיקה microdialysis 3.4 דרך הצינורית מדריך והדקו האגוז cap.
  7. המקום עכבר בכלוב מחובר חינם-המעבר מערכת בעלת הקשר העכבר עם הצווארון. להמשיך לרוץ גם משאבת מזרק וגם משאבת רולר קצב זרימה שצוין בשלב 3.5 לפחות שעה.
    הערה: כדי להשיג אוסף הקרן מבעלי ער, מאמר זה משתמש מערכת חינם-המעבר, איפה הכלוב עצמו מגיב לתנועת של חיה כדי למנוע tubings פיתול. לחלופין, הזמינות מחברות שונות נוזלי סביבול יכול גם לשמש.
  8. עצור רולר לשאוב תחילה ולאחר מכן את משאבת מזרק. הגדר את קצב הזרימה הרצויה. הפעל המזרק משאבת 20% מהר יותר מאשר המשאבה רולר.
    הערה: למשל, אם אתה מפעיל ב- µL 1/דקה, להפעיל את משאבת מזרק 1.2 קצב הזרימה אופטימלית µL לדקה צריך להיות נחוש מדעית עבור כל מולקולה.
  9. איסוף דגימות הקרן: מקום חופשי סוף שקע אבובים על האספן שבר בקירור.
    הערה: נפח דגימה המתאים משתנה בהתאם מבחני המשמש לניתוח.
  10. לאחר סיום הניסוי, להסיר את המכשיר. (עזים ומתנגד העכבר לפי הצורך.)  להתמודד עם העכבר שחזור באותו האופן כמו שלב 2.11. לנתח את הקרן שנאספו על ידי שיטות כגון hplc, קורס או אליסה.
  11. כדי לשטוף את הצנרת כולה לאחר microdialysis, התחבר כניסת, tubings שקע שוב על-ידי החלפת המכשיר עם החיבור מחט לרוץ אקונומיקה מדוללת את הצנרת כולה ואת ואז לשטוף את זה עם מים. יבש ואחסן אותו לשימוש חוזר.
    הערה: סוגים אחרים של tubings מקובלים, אולם, BSA במאגר זלוף יכולים להיסתם דקים בקוטר קטן, ובכך tubings אלה נחשבים לשימוש יחיד. Tubings יכול להיות משוחק או סתומות לאחר מספר שימושים, אז ודא כי קצב הזרימה עקבי בכל פעם לפני השימוש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדי לעורר או לעכב פעילות. עצבית הפוכה microdialysis11,12,13, picrotoxin, אנטגוניסט GABAA או טטרודוטוקסין, שימשו חוסם ערוץ Na+ . הוכח, כי שחרור טאו הוא מגורה על ידי הגדלת פעילות. עצבית13,14. בקנה אחד עם אלו תצפיות הקודם, כאשר 50 מיקרומטר picrotoxin (PTX) היה מנוהל באמצעות microdialysis הפוכה (ראה דיון לפרטים נוספים) ב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

Microdialysis עם משקל מולקולרי גבוה לחתוך ממברנות להפעלה על-ידי מצב מו-דו, וכך זה קריטי כי קצב הזרימה הוא מדויק וקבוע. אי-הדיוק את שיעורי זרימת יכול להיות הגורם של דור בועות אוויר, חוסר עקביות הריכוז לדוגמה. אם הזרם הוא לא עקבי, בדוק את כל חיבורי עבור דליפה. אם הבעיה עדיין נמשכת, ייתכן צורך להתחיל מחדש עם המחקרים החדשים וכל tubings.

הגששים Microdilaysis הם perfused באופן רציף על-ידי המאגר זלוף. לכן, אין מספיק זמן עבור מולקולות חוץ-תאית להגיע שיווי משקל מלא במאגר זלוף. כתוצאה מכך, ריכוז dialysa...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחבר אין לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי ' מענק הסיוע למחקר מדעי בתחומים חדשניים (חלבון להזדקנות המוח, דמנציה Control)(15H01552) MEXT, מענק הסיוע עבור צעירים מדענים (B) (16K 20969). המחבר תודה ד ר דוד מ הולצמן, ד ר ג'ון ר' Cirrito על עצות טכניות במהלך הפיתוח של שיטה זו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Univentor 820 MicrosamplerUniventor8303002מזרק אספן שברים מקורר
KDKDS-101
משאבת רולרEicom מיקרודיאליזהERP-10
Raturn מערכת עצמאיתBASiMD-1409מערכת נע חופשי
ערכת כלוב מינים כפוליםBASiCX-1600
בדיקת מיקרודיאליזה AtmosLM (אורך פיר 8 מ"מ, אורך ממברנה 2 מ"מ)Eicom microdialysisPEP-8-02אורך פיר לבדיקה, מדריך, בדיקה דומי ומתאם סטריאוטקסי צריכים להיות זהים.
מדריך מיקרודיאליזה (אורך פיר 8 מ"מ)Eicom מיקרודיאליזהPEG-8
בדיקת דמה מיקרודיאליזה (אורך פיר 8 מ"מ)Eicom מיקרודיאליזהPED-8
בורג עצםBASiMD-1310
סופר בונד C& B סטמלט שינייםSunmedical
סטריאוטקסי לבעלי חיים קטנים עם קונסולת תצוגה דיגיטליתKopfדגם 940מכשיר סטריאוטקסי
מתאם עכבר וחולדה יילודיםStoelting51625
מוטות אוזניים סטנדרטיים וטיפים גומי לעכבר StereotaxicStoelting51648
תמיסת אלבומין מסרום בקרסיגמאA7284-50ML30% תמיסת BSA
צינורות FEP (70 ס"מ)מיקרודיאליזה של EicomJF-10-70נפח פנימי = 0.5 ומיקרו;
צינורות טפלון L/cm (50 ס"מ)מיקרודיאליזה של EicomJT-10-50נפח פנימי = 0.08 ומיקרו; צינור L/cm
Bytonמיקרודיאליזה EicomJB-30
מתאם דקירה לואר אינטרמדיק 23GBD427565מחט קצה קהה
צינור רולרמיקרודיאליזה EicomRT-5Sנפח פנימי = 4 ומיקרו; L
אגוז כובעEicom מיקרודיאליזהAC-5
0.25 מ"ל צינור מיקרוצנטריפוגה עם מכסהQSP503-Qצינורות לאספן שברים
מתאם סטרוטקסי (אורך פיר 8 מ"מ)מיקרודיאליזהEicom PESG-8
מחט חיבורEicom מיקרודיאליזהRTJ
עכבר צווארון בעלי חייםBASiMD-1365
ערכת מיקרו-מנוע סיבובי במהירות גבוההFOREDOMK.1070מקדחה
PicrotoxinSigmaP1675
מברג לברגי
אזמל
צמר
קוצץ
משאבת מדעי מכשיר עצםגפן כירורגי

מקורות

  1. Lei, Y., Han, H., Yuan, F., Javeed, A., Zhao, Y. The brain interstitial system: Anatomy, modeling, in vivo measurement, and applications. Progress in Neurobiology. 157, 230-246 (2017).
  2. Kushikata, T., Hirota, K. Neuropeptide microdialysis in free-moving animals. Methods in Molecular Biology. 789, 261-269 (2011).
  3. Cirrito, J. R., et al. In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life. The Journal of Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).
  4. Emmanouilidou, E., et al. Assessment of α-synuclein secretion in mouse and human brain parenchyma. PLoS One. 6 (7), 1-9 (2011).
  5. Yamada, K., et al. In vivo microdialysis reveals age-dependent decrease of brain interstitial fluid tau levels in P301S human tau transgenic mice. The Journal of Neuroscience. 31 (37), 13110-13117 (2011).
  6. Ulrich, J. D., et al. In vivo measurement of apolipoprotein E from the brain interstitial fluid using microdialysis. Molecular Neurodegeneration. 8 (1), 13(2013).
  7. Emmanouilidou, E., et al. GABA transmission via ATP-dependent K+ channels regulates α-synuclein secretion in mouse striatum. Brain. 139 (3), 871-890 (2016).
  8. Takeda, S., et al. Seed-competent high-molecular-weight tau species accumulates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease mouse model and human patients. Annals of Neurology. 80 (3), 355-367 (2016).
  9. Yamada, K. In vivo Microdialysis of brain interstitial fluid for the determination of extracellular tau levels. Methods in Molecular Biology. 1523, 285-296 (2017).
  10. Kang, J. -E., et al. Amyloid-β dynamics are regulated by orexin and the sleep-wake cycle. Science. 326 (November), 1005-1008 (2009).
  11. Cirrito, J. R., et al. Synaptic activity regulates interstitial fluid amyloid-beta levels in vivo. Neuron. 48 (6), 913-922 (2005).
  12. Bero, A. W., et al. Neuronal activity regulates the regional vulnerability to amyloid-β deposition. Nature Neuroscience. 14 (6), 750-756 (2011).
  13. Yamada, K., et al. Neuronal activity regulates extracellular tau in vivo. Journal of Experimental Medicine. 211 (3), 387-393 (2014).
  14. Pooler, A. M., Phillips, E. C., Lau, D. H. W., Noble, W., Hanger, D. P. Physiological release of endogenous tau is stimulated by neuronal activity. EMBO Reports. 14 (4), 389-394 (2013).
  15. Castellano, J. M., et al. Human apoE isoforms differentially regulate brain amyloid-β peptide clearance. Science Translational Medicine. 3 (89), 89ra57(2011).
  16. Yamada, K., et al. Analysis of in vivo turnover of tau in a mouse model of tauopathy. Molecular Neurodegeneration. 10 (1), 55(2015).
  17. Taylor, H., et al. Investigating local and long-range neuronal network dynamics by simultaneous optogenetics, reverse microdialysis and silicon probe recordings in vivo. Journal of Neuroscience Methods. 235, 83-91 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מצב דחיפה-משיכה (Push-pull)ניתוח סטריאוטקסיניתוח חלבון טאומיקרודיאליזה הפוכהעירוי פיקרוטוקסיןרישום EEGאופטוגנטיקה
אין ויוו Microdialysis שיטת איסוף גדול חלבונים חוץ-תאית נוזל בין-תאי המוח עם משקל מולקולרי גבוה ניתוק רגשים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.