הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

פלטפורמה Microphysiologic שומן אנושי: דחוקה שומן לבן

6.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57909

⸱

15 באוגוסט 2018

 ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, Louisiana State University Health Sciences Center, 2Department of Surgery, Louisiana State University Health Sciences Center

במאמר זה

סיכום

שומן לבן (וואט) יש ליקויים קריטי הדגמים תרבות הראשי הנוכחי שלה, הפרעה מטבולית מחקרים ופיתוח תרופתי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר מערכת microphysiological אדיפוז מאת וואט sandwiching בין גליונות של תאי סטרומה. מבנה זה מספק פלטפורמה יציבה וניתנת להתאמה לתרבות וואט העיקרי.

תקציר

שומן לבן (וואט) ממלא תפקיד חשוב בוויסות משקל ובריאות כל יום. עדיין, ישנם מגבלות משמעותיות דגמי התרבות העיקריים הזמינים, אשר כולם נכשלו בנאמנות לסכם את microenvironment אדיפוז או להרחיב את הכדאיות וואט מעבר שבועיים. העדר מודל אמין תרבות ראשי פוגעת קשות במחקר וואט חילוף החומרים, פיתוח תרופות. למטרה זו אנו מסויימת סטנדרטים של NIH של מערכת microphysiologic לפתח פלטפורמה חדשנית לתרבות העיקרי וואט בשם 'ימ מ' (דחוקה שומן לבן). לנו להתגבר על ציפה טבעית של adipocytes על ידי sandwiching טחון אשכולות וואט בין גליונות של שומן-derived תאי סטרומה. את המבנה הזה, הם דוגמאות וואט קיימא מעל שמונה שבועות בתרבות. הימ מ מקיים את ECM ללא פגע, מתא לתא אנשי לחצים פיזיים של ויוו תנאים וואט; בנוסף, הימ מ מתחזקת פרופיל תעתיק עמיד, רגישות איתות כימי אקסוגני, תפקוד הרקמות שלם. הימ מ מייצג שיטה פשוטה, לשחזור ויעיל של תרבות אדיפוז העיקרי. פוטנציאל זה פלטפורמה ישים בקנה מידה נרחב לחקר וואט פיזיולוגיה, פתופיזיולוגיה, חילוף החומרים ופיתוח תרופות.

מבוא

רקמת שומן הוא האיבר הראשי של השמנת יתר, אשר נושאת הוצאות רפואיות שנתיות ישיר בין 147 מיליארד דולר ל- 210 מיליארד דולר ארה ב1. ההצטברות של רקמת שומן תורם גם גורמים נוספים המובילים למוות כגון מחלות לב, מסוכרת מסוג II, סוגים מסוימים של סרטן2. In vitro לקשרי תרבות מודלים הם חיוניים עבור מחקרים מטבולית, פיתוח תרופות, אבל המחקר הנוכחי, דגמי רקמת שומן יש ליקויים עיקריים. Adipocytes עדין, קליל, סופני הבדיל תאים לא דוגלים תא תרבות פלסטיק, ותרבותית ולכן לא יכול להיות בשיטות תרבות תא קונבנציונלי. מאז שנות השבעים, מספר שיטות השתמשו בתיבה נסיונות כדי להתגבר על מחסומים אלה, לרבות השימוש coverslips זכוכית דקה, התקרה תרבות, תרבות השעיה ו מטריצה חוץ-תאית3,4,5, 6 , 7. עם זאת, שיטות אלה סומנו על ידי מוות של תאים dedifferentiation, הם משמשים בדרך כלל לא יותר מאשר תקופת לימודים שבועיים. יתר על כן, מודלים אלה אל תנסה לסכם את microenvironment אדיפוז מקורי כפי שהם לא לשמור על ECM ללא פגע את, לתמוך האינטראקציות בין adipocytes לבין סטרומה תאים, ולא התאים כוחות כויץ להפעיל אחד על השני ב ויוו וואט.

בהיעדר שיטת תרבות אדיפוז העיקרי תקן הזהב, מחקר אדיפוז הסתמכה בעיקר על הבדיל טרום adipocytes (diffAds). DiffAds הם multilocular, חסיד, ועל פעילות סמויה. לעומת זאת, ראשי adipocytes לבן הן unilocular, nonadherent, להדגים מטבוליזם נמוך יחסית. הכישלון של המודלים הנוכחיים של אדיפוז התרבות רוצה להתרכז הפיזיולוגיה של רקמת שומן בוגרת בריאה הוא כנראה גורם מרכזי בהיעדרו של תרופות שאושרו על-ידי ה-FDA שכוונו ישירות adipocytes. למעשה, חוסר הפיזיולוגיות במבחנה איברים מודלים היא בעיה רצינית על פני רוב האיברים ומחלות.

בנייר העמדה שלו מכריזים על הקמתה של תכנית Microphysiological מערכות (MPS) שלה, במכון הלאומי של בריאות (NIH) דיווחו כי שיעור ההצלחה 2013 על פני כל ניסויים קליניים בבני התרופות רק 18% עבור שלב II ו 50% עבור שלב III ניסויים קליניים8. התוכנית MPS מיועד לפנות ישירות היא חוסר מונוקולטורה במבחנה על הפיזיולוגיה האנושית מודל. NIH מגדירה MPSs מערכות התרבות המורכב ראשית אנושי או בתאי גזע multicellular מבנים תלת-ממד זה מסכם את הדברים תפקוד איברים. בניגוד רדיוקציוניסטי מודלים של תרבויות הומוגניות, מונצחים תא, MPSs צריך באופן מדויק תאים תאים, סמים-תא, -תרופתיים ו עוגב תרופתיים אינטראקציות9. שלא כמו שיטות התרבות העיקרי לטווח קצר, תקנים NIH להכתיב MPS קיימות מעל 4 שבועות ב תרבות8. ניתן למצוא פרטים נוספים על התוכנית MPS של NIH RFAs (#RFA-TR-18-001)10.

פיתחנו פשוטה, רומן, יכולת הסתגלות, חברי הפרלמנט אדיפוז זול כינה "דחוקה שומן לבן" (ימ מ)11. לנו להתגבר על ציפה טבעית של adipocytes על ידי "sandwiching" טחון העיקרי רקמת שומן בין גליונות של שומן-derived סטרומה תאים (ADSCs) (איור 1). הבונה 3D שנוצר recapitulates הקשר תא-תא, microenvironment של אדיפוז מקורי על-ידי תחימת adipocytes בוגרת עם אוכלוסיה תא תמיכה adipocyte טבעי. הימ מ אומתה על ידי הפגנת 8 שבועות הכדאיות, תגובה ל אקסוגניים איתות, הפרשת adipokine ו- engraftment לתוך במודל חיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הפעילויות בוצעו המותרים של פרוטוקולים #8759, #9189, כפי שאושרו על-ידי Office IRB של LSUHSC-NO. כל בעלי החיים העבודה בוצעה ב ההקפדה פרוטוקול 3285 # שאושרו על-ידי המשרד IACUC ב LSUHSC-. לא-

1. זריעה של Sandwiching תא גליונות

הערה: ראה איור 1.

  1. ADSCs זרע אצל כ 80% confluency ב צלחות תרביות רקמה (6 ס"מ או ובכן 6 צלחות). עבור כל טוב של הימ מ הרצוי, זרע 1 תרביות רקמה קונבנציונלי טוב וכל 1 בגודל המתאים בצלחת פלסטיק מצופה poly(N-isopropylacrylamide (pNIPAAm) תרביות רקמה.
    הערה: בהתאם לכך, צלחת 6-טוב של הימ מ ידרוש זריעה תאים בצלחת תקן 6-ובכן תרביות רקמה (שכבת הבסיס) וצלחת אחת 6-טוב pNIPAAm-מצופה תרביות רקמה (השכבה העליונה). צלחות מצופה pNIPAAm ניתן לקנות מסחרית או יוצרו במעבדה12,13,14.
  2. לשמור על ADSCs-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 של Dulbecco ששינה נשר בינוני (DMEM) בתוספת 10% FBS ו- 1 x פניצילין/סטרפטומיצין. לשנות מדיה כל יומיים.
  3. לאפשר תאים מתמזגים עד שהם הופכים 100% confluent ולקחת על דפוס מפוספס (כ 6-8 ימים).
    הערה: תאים אלה יצטרכו לתפקד כמו סדין תא שלם בודד על מנת לייצב את רקמת שומן קליל. לתאים דיו confluent קטע על זריעת עם וואט.

2. הכנת הימ מ אספקה

  1. הכינו 10 מ"ל במספר aliquots מאוזן מלח פתרון (HBSS של האנק x 1); להכין מספיק עבור המספר הרצוי של צלחות עם נפח מיותר.
  2. להכין את המנגנון. קפיץ הימ מ זריעה. לבנות על הבוכנה באמצעות פשוטה פלסטיק אקרילי, המורכב גבעול מצורף דיסק עגול. להבטיח כי זה מתאים במסגרת היקף הבארות תרביות רקמה (קוטר: < 6 ס מ על צלחת 6 ס מ, < 3.5 ס"מ לצלחת. ובכן 6; מסה משוער: 6.7 g עבור מנה 6 ס מ, g 5.1 לצלחת 6-טוב).
    1. להכין בוכנות נוספת כדי לוודא כי ההליך יפעל בצורה חלקה במקרה שיש בעיה עם כל הבוכנה בודדים.
    2. לעטוף את הקלטת למעבדה סביב שפת הדיסק הבוכנה, לפחות 2 x, כדי למנוע דליפה של ג'לטין פתרון.
    3. תרסיס ארון אבטחה (BSC) עם 70% EtOH. לרסס את מתלה צינור חרוטי 15 מ"ל פנימה BSC עם צינורות חרוט ריקה, uncapped 15 mL; צינורות יסייע להבטיח הצבת בוכנות ג'לטין.
    4. תרסיס כל קלטת עטוף הבוכנה ביסודיות עם 70% EtOH והמקום לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל על המדף. תרסיס דיסקיות מתכת (משוער מסה 6.3 g) ומניחים אותם על המדף יחד עם זוג מלקחיים מכור; הדיסקיות תוסיף משקל בוכנות במהלך הסתערות זריעה.
    5. לסגור את סאש BSC והפעל UV אור להקל על ייבוש, סטריליזציה.
      הערה: באופן אידיאלי, לנהל את שלב 24 שעןת לפני זריעה הימ מ. לחלופין, לנהל את התהליך ביום של רקמות אוסף/ימ מ זריעה; עם זאת, במקרה זה, יאפשר 15-45 דקות עבור UV ייבוש/עיקור.

3. הכנת בוכנות ג'לטין – יישום גליונות העליון

  1. מחממים באמבט מים כדי 75 מעלות צלזיוס.
  2. הכינו את הפתרון ג'לטין על-ידי הוספת 0.75 גר' אבקת ג'לטין 10 מ"ל מלאי של 1 x HBSS. תחת ברדס fume להוסיף 100 µL של NaOH M 1 כדי לאזן את ה-pH של התמיסה.
    1. להוסיף המים הרותחים את המניות 10 מ"ל ומנערים נמרצות כל 5 דקות עד האבקה מתמסמס פתרון. במטרה לפזר אבקת הג'לטין מיד לאחר הוספת לאמבט מים מחוממות.
    2. להפעיל את המצלצל BSC, לכבות את האור האולטרה סגול, להעלות את השמשה. לרסס את השטח BSC ולהכין המסנן אספקה (5 מ ל זכוכית-lock מזרקים ו- 0.2 µm סביבונים). להכין מסננים מרובים לאמץ ביעילות כמויות מספיקות של ג'לטין כדי להחיל על בוכנות.
  3. הפתרון ג'לטין מגיעה עקביות הומוגנית, לסנן את הפתרון ואת להחילו בוכנות. לטעון את המזרק עם ג'לטין. חלות הג'לטין בוכנות פלסטיק דרך המסנן מזרק (~2.5 mL לצלחת 6-ובכן, ~4.5 mL עבור מנה 6 ס מ) ולאפשר לגבש (~ 20 דקות).
  4. לאחר שהג'לטין מוצק, לפתוח את הקלטת מקצה בוכנות. עם מלקחיים מכור, להסיר את הג'לטין הקצה החיצוני של הבוכנה (קרי, קצות העלה מניסקוס). לוודא שהג'לטין שנותרו במרכז של הבוכנה לחלוטין ברמה כדי למקסם את הקשר עם סדין ADSC.
  5. ברגע ג'לטין עודף מוסר, בעדינות להחיל את הג'לטין בוכנות הלוחות מצופים pNIPAAm ADSC. להשתמש את דיסקיות מתכת שמכבידים על הבוכנה. לא להטות את הסדינים תא תוך יישום של בוכנות.
  6. להשאיר את בוכנות הסדינים תא עבור 1.5 שעות בטמפרטורת החדר. דגירה צלחות/בוכנות באמבט קרח מים עבור 1.5 h כדי להשלים את הדיסוציאציה של הגיליון תאים מפני השטח מצופים pNIPAAm צלחת.
    1. זהירות מכלי המקננת באמבט קרח; אל תאפשר את אמבטיית קרח לזהם התקשורת בתא בתקופת הדגירה.
    2. לאחר השלמת דגירה, לנקות התחתון של הלוחות מצופים pNIPAAm כדי להסיר מים שאינו סטרילי.

4. עיבוד שומן לבן

  1. בעת איסוף רקמת שומן אנושי של חדר הניתוח, לשמור על כל דוגמאות במיכל סטרילי זה על הקרח עד ימ מ זה כדי להיות נזרע. הוסף מדיה תחזוקה סטרילי, כגון באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS), רקמת שומן מיכל ליציבות רקמות.
  2. להוסיף תא קר תרבות בינוניים עד 1.5 מ ל צינורות microcentrifuge עבור כל מנה/טוב להיות נזרע (µL 100 תמורת צלחת 6-ובכן, µL 200 עבור מנה 6 ס מ).
  3. מינצ ובינות לרקמה.
    1. מקטעי רקמת שומן מוצק, לעשות כדלקמן.
      1. לשטוף מגזרים רחבים של רקמת שומן 3 x ב- PBS סטרילי ולהסיר כמה שיותר PBS ככל האפשר.
      2. גס מינצ רקמות עם מלקחיים, גילוח סטרילי, להסיר כמה שיותר להערכת fascia ככל האפשר (ראה דיון מפורט יותר).
      3. דק מינצ שומן עם גילוח עד טחון הרקמה לוקח על וסמיך, עקביות.
        הערה: באופן אידיאלי רקמות יופיעו הומוגני עם אין מקטעים בודדים גלוי של וואט למרות שזה לא תמיד אפשרי.
    2. תהליך lipoaspirate כדלקמן.
      1. תחת BSC, קלטת גזה סטרילית מעל החלק העליון של גביע, ולמקם את הספל הזה גביע גדול יותר כדי לאסוף את כל נוזל עודף.
      2. באמצעות פיפטה סרולוגית 25 מ ל, לצייר כמה שיותר lipoaspirate כנדרש ולהחיל אותו על פני השטח של גזה סטרילית. חלות PBS ישירות על המשטח הזה לשטוף lipoaspirated שומן וכדי להסיר את עודף דם ושיירי השומנים.
      3. להשתמש מלקחיים כדי לשחזר את רקמת סחוט, להעביר אותו mincing משטח סטרילי, מינצ את lipoaspirate.
  4. להשתמש בסכין גילוח סטרילי לחתוך את הקצה דיסטלי של p1000 טיפים פיפטה על העברת רקמות טחון; הדבר יצמצם את מאמץ גזירה שיכול להוביל adipocyte פירוק. לאחר שהגעת עקביות הרקמה הנכונה היא להעביר האחסון הרצוי של רקמות טחון כל שפופרת 1.5 mL (µL 300 – 400 לצלחת 6-ובכן, 500-600 µL עבור מנה 6 ס מ). מערבבים טחון וואט ומדיה בקצרה בתוך הצינורות.
  5. קח את לוחות ADSC הבסיס, decant/וביופסיה של התקשורת. החלף את המדיה התערובת וואט/מדיה מהצינור כל 1.5 מ.
    1. בעדינות להסיר את הג'לטין בוכנות הלוחות מצופים pNIPAAm ולהחיל אותם לתערובת וואט על לוחות הבסיס ADSC. לבחון את טפט של הלוחות מצופים pNIPAAm תחת מיקרוסקופ כדי לאשר ניתוק הסלולר.
  6. הגדר גוש חום כ 37-40 ° C תחת BSC. עם בוכנות עדיין במקום, להעביר את הצלחות המשטח, הרחוב חום. להוסיף 2-3 מ"ל של מדיה תרבות ומחוממת דגירה התאים וכדי להקל על הג'לטין נמס.
  7. לאחר ~ 30 דקות, להסיר בעדינות את בוכנות מהמשטח צלחת. להחליף את המכסים של הלוחות תרביות רקמה הבסיס ולהעביר אל חממה תרבות התא. לאחר שהג'לטין יש נוזלי לגמרי ב 37 מעלות צלזיוס, תשאף ולהחליף מדיה התרבות תאים.
  8. לשמור על הימ מ- 37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 ללא פנול אדום בינוני M199 עם אינסולין מיקרומטר 7, 30 מיקרומטר דקסאמתאזון, 1 x פניצילין/סטרפטומיצין. לשמור על 2 מ ל מדיה עבור לוחות 6-ובכן, mL 3 מנות 6 ס מ. לשנות מדיה כל יומיים.

5. הימ מ קציר

  1. הכנת collagenase (collagenase 0.5 מ"ג/מ"ל, 500 ננומטר אדנוזין, ב- PBS) aliquots 15 mL חרוט צינורות (נפח של 10 מ ל). להקפיא את הצינורות ואחסן אותם ב-20 ° C.
  2. תשאף בכל אמצעי התרבות תאים, לשטוף 1 x עם PBS, ואז האחות PBS. תכינו את aliquots collagenase על ידי מפשיר אותם בתוך אמבט מים 37 º C.
    הערה: באופן אידיאלי, הפתרון collagenase יגיעו 37 ° C; מיד לאחר מכן, להוסיף רקמה.
  3. להוסיף כל רקמות מהצלחת הימ מ aliquots בודדים. הקציר הימ מ באמצעות דבקנית תא סטרילי, להעביר אותו aliquots collagenase עם טיפ פיפטה ניתוק p1000. להוסיף רקמה ישירות 15 מ"ל הצינורות חרוט המכיל collagenase פתרון.
    1. לחלופין, דגירה התערובת רקמות/collagenase צינור חרוטי 50 מ; פני השטח גדל עוד יותר יקל על עיכול אנזימטי.
  4. מניחים צינורות מדגם שייקר מסלולית incubated בזווית של 45°. דגירה-200 סל ד, ב 37 מעלות צלזיוס למשך 30-60 דקות.
  5. המקום מיקרומטר 250 רשת שינוי מסנן לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל חדש לאוסף. יוצקים את הפתרון adipocyte מתעכל דרך המסנן.
    הערה: זה יאפשר כל התאים לעבור תוך סינון סיבי רקמת.
  6. לאפשר זרימה דרך לשבת 5 דקות בטמפרטורת החדר, כדי לאפשר את שלב ההפרדה.
    הערה: adipocytes יצוף לחלק העליון של הפתרון תוך תאי סטרומה אדיפוז (השיקופיים) שתפתור לשלבים נמוכים יותר. צנטריפוגה למשך 5 דקות ב 500 x g יכול למקסם גם למחקר או הקציר שמסביב ADSCs ב בגדר.
  7. באמצעות טיפ פיפטה ניתוק p1000, להעביר את adipocytes (השכבה צף בחלק העליון של פתרון collagenase) צינור אוסף 1.5 mL microcentrifuge. לוקח ~ 250 µL במועד, פיפטה באיטיות לאורך הקצה של הצינור כדי לאסוף את adipocytes.
    1. לסובב את הצינור לאט תוך איסוף של adipocytes על מנת למקסם את ההתאוששות של תאים הקפדה הפנימי. שמור ציור יותר תאים עד הצינור microcentrifuge 1.5 mL יהיה עמוס.
  8. להסיר עודפי נוזלים adipocytes מבודדים באמצעות מזרק מצורף מחט (~ 21 G). להטביע את המחט מתחת לשכבת adipocyte צף. להתסיס את המחט לזמן קצר כדי לסלק תאים הקפדה על מוט המחט ולאחר מכן המתן adipocytes משתחררים ממקומם לצוף למעלה.
  9. לאט לאט לצייר את הנוזל העודף, נזהר למנוע הסרה לא מכוונות של adipocytes. להשתמש microcentrifuge צינור טקסי לבודד בעקביות מדגם כרכים (, למשל- 0.1 מ"ל עבור כל דגימה).
  10. השתמש בתאים מבודדים על מיצוי DNA/RNA, וזמינותו ספיגת הגלוקוז, וזמינותו lipolysis, וכו '

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הכדאיות של הימ מ הוערך בתחילה על ידי טורי brightfield הדמיה של אשכולות וואט בודדים (n = 12) כ 7.6 בשבועות. אשכולות נשארו מאובטחת במקום על טפט לאורך כל הזמן הזה. שינויים מורפולוגיים קלה נצפו עם adipocytes בודדים עיקום מעט או הסטה עמדות. עם זאת, adipocytes גם להפוך multilocular לאורך זמן, ומעידה על חוסר dedifferentiation, ולא עשה שהם מייצגים את כל סימנים גלויים של מוות של תאים כמו blebbing הסלולר, פירוק או פיצול (איור 2). Adipocyte זהותו של אשכולות אושר לימ בת ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מפרט את השימוש ADSCs כדי סנדוויץ האנושי שומן לבן; שורות תאים ADSC האנושי ניתן לבודד באמצעות פרוטוקולים ומבוססת15. עם זאת, המערכת ניתן להתאים לדרישות המחקר תגובותיהם (כגון שימוש 3T3L-1 תאים כריך העכבר וואט). תהליך זה כרוך הטיפול העיקרי רקמה אנושית. צריך להיות מועסק סטנדרט זהירות; לטפל ברקמות אנושיות כמו BSL-2 פתוגנים (למשל, HIV, HepC). מטפלים רק רקמות ישירות מתחת BSC. ללבוש בהתאם עיקרון השוויון הפוליטי כפי שמכתיבה תקני בטיחות מוסדית – כפפות כפול מומלץ מאוד. כראוי לחטא כל ציוד, ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

המחברים רוצה להכיר את התמיכה המוסדי שמספק LSU למדעי הבריאות מרכז, אשר מימנה את הפרויקט.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
10x HBSSThermofisher14185052
ג'לטיןסיגמא-אולדריץ'G9391
קולגנאזסיגמא-אולדריץ'C5138
אדנוזיןסיגמא-אולדריץ'A9251
DMEMThermofisher11995065
M199 מדיהThermofisher11043023פנול ללא אדום 
250 ומיקרו; m מסנן רשתפירס87791
0.2 ומיקרו; m מסנן מזרקCelltreat229747
5 מ"ל מזרקי Luer-Lok מנקי
הם פשוט מוסיפים משקל קל לגב התקעים כדי להבטיח מגע אחיד בין התאים לג'לטין, תוך שהם קלים למלאי ולעיקור. משקל משוער: 6.3 גרם 
nameCompanyCatalog NumberComments
Heated Equipment
Incubated Orbital ShakerVWR10020-988יש לכוון דגימות בזווית של 45 מעלות כדי להקל על עיכול קולגנאז
בלוק חוםהגדר ל-37-40 מעלות; C והוצב מתחת לאמבטיית מים של ארון בטיחות ביולוגית
מוגדרת ל-~75 ° C
NameCompanyCatalog Number>Comments
Specialized plastics
Upcell כלים 6 ס"מ של 6-multiwellNunc174902  או 174901אלו הם כלים מצופים pNIPAAm הזמינים מסחרית שניתן להשתמש בהם כדי לגדל את היריעה העליונה של ADSCs. לחלופין, ניתן לייצר צלחות מצופות pNIPAAm במעבדה. קוטר: < 6 ס"מ לצלחת 6 ס"מ, < 3.5 ס"מ לצלחת 6 בארות; מסה משוערת: 6.7 גרם לצלחת 6 ס"מ, 5.1 גרם לצלחת 6 בארות
בוכנה מפלסטיקניתן לעצב כך שיתאימו לפלסטיק מצופה pNIPAAm הרצוי (צלחות מרובות, צלחות פטרי). הם מורכבים מגבעול פשוט המחובר לדיסק עגול. ניתן לייצר אותם במעבדה או על ידי כל מתקן שיכול לעצב פלסטיק אקרילי
מתכת BD 309646 אלו הם מנקי מתכת פשוטים וניתן לקנות אותם בכל חנות לחומרי בניין.מכשיר

מקורות

  1. Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical costs of obesity: An instrumental variables approach. Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).
  2. Pi-Sunyer, X. The Medical Risks of Obesity. Postgraduate Medicine. 121 (6), 21-33 (2009).
  3. Smith, U. Morphologic studies of human subcutaneous adipose tissue in vitro. Anatomical Record. 169 (1), 97-104 (1971).
  4. Sugihara, H., Yonemitsu, N., Miyabara, S., Yun, K. Primary cultures of unilocular fat cells: characteristics of growth in vitro and changes in differentiation properties. Differentiation. 31 (1), 42-49 (1986).
  5. Sugihara, H., Yonemitsu, N., Toda, S., Miyabara, S., Funatsumaru, S., Matsumoto, T. Unilocular fat cells in three-dimensional collagen gel matrix culture. The Journal of Lipid Research. 29, 691-697 (1988).
  6. Hazen, S. A., Rowe, W. A., Lynch, C. J. Monolayer cell culture of freshly isolated adipocytes using extracellular basement membrane components. The Journal of Lipid Research. 36, 868-875 (1995).
  7. Fried, S. K., Kral, J. G. Sex differences in regional distribution of fat cell size and lipoprotein lipase activity in morbidly obese patients. International Journal of Obesity. 11 (2), 129-140 (1987).
  8. Sutherland, M. L., Fabre, K. M., Tagle, D. A. The National Institutes of Health. Microphysiological Systems Program focuses on a critical challenge in the drug discovery pipeline. Stem Cell Research and Therapy. 4, (2013).
  9. Wikswo, J. P. The relevance and potential roles of microphysiological systems in biology and medicine. Experimental Biology and Medicine. 239 (9), 1061-1072 (2014).
  10. National Institutes of Health. NIH-CASIS Coordinated Microphysiological Systems Program for Translational Research in Space (#RFA-TR-18-001). , Available from: https://grants.nih.gov/grants/guide/rfa-files/RFA-TR-18-001.html (2017).
  11. Lau, F. H., Vogel, K., Luckett, J. P., Hunt, M., Meyer, A., Rogers, C. L., Tessler, O., Dupin, C. L., St Hilaire, H., Islam, K. N., Frazier, T., Gimble, J. M., Scahill, S. Sandwiched White Adipose Tissue: A Microphysiological System of Primary Human Adipose Tissue. Tissue Engineering Part C: Methods. 24 (3), (2018).
  12. Ebara, M., Hoffman, J. M., Stayton, P. S., Hoffman, A. S. Surface modification of microfluidic channels by UV-mediated graft polymerization of non-fouling and 'smart' polymers. Radiation Physics and Chemistry. 76, 1409-1413 (2007).
  13. Lin, J. B., Isenberg, B. C., Shen, Y., Schorsch, K., Sazonova, O. V., Wong, J. Y. Thermo-responsive poly(N-isopropylacrylamide) grafted onto microtextured poly(dimethylsiloxane) for aligned cell sheet engineering. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 99, 108-115 (2012).
  14. Turner, W. S., Sandhu, N., McCloskey, K. E. Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets. Journal of Visualized Experiments. (92), e51044(2014).
  15. Bunnell, B., Flaat, M., Gagliardi, C., Patel, B., Ripoll, C. Adipose-derived stem cells: Isolation, expansion and differentiation. Methods. 45 (2), 115-120 (2008).
  16. Akiyama, Y., Kikuchi, A., Yamato, M., Okano, T. Ultrathin poly(N-isopropylacrylamide) grafted layer on polystyrene surfaces for cell adhesion/detachment control. Langmuir. 20 (13), 5506-5511 (2004).
  17. Fried, S. K., Russell, C. D., Grauso, N. L., Brolin, R. E. Lipoprotein lipase regulation by insulin and glucocorticoid in subcutaneous and omental adipose tissues of obese women and men. Journal of Clinical Investigation. 92 (5), 2191-2198 (1993).
  18. Keipert, S., Jastroch, M. Brite/beige fat and UCP1 - is it thermogenesis? Biochimica et Biophysica Acta. 1837 (7), 1075-1082 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

PNIPAAm
פלטפורמה Microphysiologic שומן אנושי: דחוקה שומן לבן
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.