מאמר שיטה

חילוץ מהיר, בטוח, ופשוט ידנית המיטה חומצת גרעין איתור וירוס בדגימות דם מלא

DOI:

10.3791/58001

⸱

30 ביוני 2018

 ,  , 
1Virus Research & Development Laboratory, Statens Serum Institut, 2Infectious Disease Research Unit, University of Southern Denmark

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להפקת חומצות גרעין וירוס מהירה מהדם כל וירוס-לא פעיל. החילוץ מתבצע ישירות על צינורות איסוף דם ואינו דורש שום ציוד או חשמל. השיטה אינה תלויה למתקני המעבדה וניתן להשתמש בהם בכל מקום (למשל, בבתי-חולים שדה).

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

האבחון מהיר של זיהום חיוני עבור ניהול התפרצות, הסיכון הבלימה, הטיפול בחולה. אנחנו בעבר הראו שיטה מהירה המיטה איון של וירוס האבולה במהלך לקיחת דמים לבדיקות בטוח חומצת גרעין (NA) על-ידי הוספת מאגר פירוק מסחריות/איגוד ישירות לתוך צינורות איסוף דם ואקום. באמצעות גישה זו המיטה איון, פיתחנו פשוטה, מהירה ובטוחה המיטה נה החילוץ שיטת הגילוי עוקבות של וירוס בדם כל פירוק/איגוד להשבית-מאגר. החילוץ נה מתבצע ישירות על צינורות איסוף דם, דורש ציוד או חשמל.

לאחר הדם נאסף לתוך המאגר פירוק/איגוד, התוכן מעורבבים. בהטלת הצינורית ביד, ולא התערובת מודגרת למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. חלקיקים מגנטיים זכוכית (MGPs) מתווספים הצינור, התוכן ומערבבים על ידי flipping הצינור אוסף בעבודת יד. MGPs ואז נאספים בצד הצינור איסוף הדם באמצעות מחזיק מגנטי או מגנט, גומייה. MGPs נשטפים שלוש פעמים, אחרי התוספת של מאגר • תנאי ישירות לתוך הצינור אוסף, NAs מוכנות לבדיקות נה, כגון qPCR או לולאה איזותרמי הגברה (מנורה), ללא הסרת MGPs של התגובה. שיטת החילוץ נה אינה תלויה כלשהו למתקני המעבדה, ניתן בקלות להשתמש בכל מקום (למשל, בבתי חולים שדה ובתי החולים בידוד במחלקות). כאשר שיטה זו החילוץ נה משולב עם המנורה, מכשיר נייד, ניתן לקבל אבחון בתוך 40 דקות של אוסף דם.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במצבים התפרצות וירוס, כאשר בחולים מרותקים במחלקות בידוד חולים או כאשר נדרשת אבחנה מהירה, מדויקת, פשוטה ובטוחה בשלב של טיפול מולקולרית אבחון הכרחי הסגר לחולה הטיפול ואת הסיכון. שני האחרונים ויראלי התפרצויות, של וירוס האבולה (EBOV) במערב אפריקה (2013) והוירוס Zika בדרום אמריקה (2015), הגדילו את עניין משופרת בשלב של טיפול מולקולרית בדיקות אבחון, כגון שעתוק במהופך בתיווך לולאה איזותרמי הגברה (RT-המנורה)1,2 ו- recombinase פולימראז הגברה (RPA)3,4. RT-המנורה והן RPA הן בדיקות מולקולריות מהירה, רגיש, ספציפי שניתן לבצע על ההכנות דוגמה מפושטת. . הוירוס Zika RT-המנורה יש כבר בשילוב עם וזמינותו זרימה לרוחב (LFA), אשר יכול לזהות וירוס Zika בדגימות דם מלא שאינם מטוהרים בתוך 30 דקות1; עם זאת, עבור EBOV, אשר מסווגים חיידק קבוצה 4 סיכון והוא מדבק מאוד, הדגימות צריך להתנהל תחת אבטחה ברמה 4 תנאים (BSL-4) ו לא פעיל לפני כל הפרוצדורות האבחוניות בטוח שניתן לבצע.

שיטות איון פשוטה EBOV, כגון התוספת של פירוק מאגרי מדגם2,3,4,5, שימשו במהלך ההתפרצות; עם זאת, שיטות אלה דורשים טיפול בתנאים BSL-4 עם ציוד מעבדה, כגון ארונות אבטחה BSL-3, צנטריפוגות, חימום בלוקים, פיפטות, לכל הפחות. ציוד זה קיים בדרך כלל לא במחלקות בידוד או בבתי-חולים שדה. כדי להתגבר על האתגר הזה, נעשים ניסיונות לבצע אבחון מזוודות3ולאחר מספר מכשירים ניידים, מכונות כבר מפותחת [למשל, מכשיר נייד להפקת חומצות גרעין (NA)]6. עם זאת, עדיין דוגמאות EBOV-חיובית עליך ניתן להשבית התקנים אלה שניתן יהיה להשתמש בהם.

אנחנו דיווחו בעבר כי שיטה איון וירוס המיטה מהירה עבור EBOV7, וירוס Vaccinia, וירוס אבעבועות הפרות8 על ידי תוספת של מאגר פירוק מסחריות/איגוד אל צינורות איסוף דם ואקום רגיל, המאפשר הישיר העברה של דם מן המטופל לתוך מאגר השתקה של כרומוזום7. איון זה ישירה ומיידית בתוך מערכת סגורה מבטלת את הצורך טיפול בדגימות משתמש בכל בלימה קפדני, כגון תנאי BSL-47, הדגימות ניתן לטפל בתנאים רגילים BSL-2. שיטה זו איון היא תואמים מספר מערכות חילוץ נה, כמו רובוטים ערכות טיהור יד7; עם זאת, שיטות אלה דורשים ציוד מעבדה, כגון רובוטים, בדיקות חשמל, אשר אינם תמיד נוכח הגדרות שדה או בתוך בית החולים בידוד במחלקות.

בדו ח זה, אנו מתארים פשוטה, מהירה ובטוחה ידנית נה החילוץ שיטת זיהוי מולקולרי עוקבות של נגיף בדם כל פירוק/איגוד להשבית-מאגר. שיטת החילוץ נה אינו דורש שום ציוד שאינו בעל מגנט/מגנטי. אין צנטריפוגות, חימום בלוקים או חשמל יש צורך החילוץ נה. לפיכך, שיטה זו אינה תלויה למתקני המעבדה, ניתן בקלות להשתמש בכל מקום (למשל, בבתי-חולים שדה, במחלקות בידוד בבית החולים, או עם הגדרות משאבים נמוכה). שיטת החילוץ NA היא מהירה ופשוטה, והוא יכול לשמש ישירות בבדיקות נה במורד הזרם, כגון qPCR, RT-qPCR, מנורה או RT-המנורה. כאשר שיטה זו החילוץ נה משולב עם המנורה, מונחה הסוללה איזותרמי מכשיר נייד, ניתן לקבל אבחנה המיטה בתוך 40 דקות של אוסף דם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ועדת אתיקה במחקר ביו-רפואי, בירת אזור נתן הסכמה מדעת, כל השיטות המתוארות כאן מ'מניעת מסקירה על ידי מערכת הוועדה האתית, על פי החוק הדני על פרויקטי פיתוח וזמינותו.

1. הכנה שפופרות ואקום אוסף דם וירוס איון והפקת נה מהירה

התראה: המאגר המשמש עבור פרוטוקול זה מכיל guanidinium thiocyanate (GITC) של חומרים פעילי שטח ללא יונית, שהינם חומרים מגרים. לקחת אמצעי בטיחות מעבדה המתאים ברדס זרימה ושימוש ללבוש כפפות בעת טיפול זה. הימנע כל העור, קשר עין. אם המאגר ישפך, השטח מזוהמים חייב לא להיות נקיים ישירות עם כלורמין או נתרן תת-כלורי (המרכיבים הפעילים ב "אקונומיקה") כי תערובת זו עלול להוביל להיווצרות של ציאניד רעיל ראשית, נגב המאגר שנשפך עם רקמת סופג. בשלב הבא, לנקות את השטח עם אתנול 70% ולאחר מכן עם מים, ולהשתמש בסופו של דבר, כלורמין או נתרן תת-כלורי.

  1. כדי להכין את שפופרות ואקום של איסוף הדם, להזריק 1.6 מ של המאגר פירוק מסחריים ספציפיים לתוך שפופרת ואקום EDTA מ"ל 4 מאת ניקב את המכסה של הצינור באמצעות מחט 25 G x 1 ומזרק 3 מ.
    הערה: אינם מסירים את המכסה של שפופרת הואקום. שואב האבק חייבת להישמר.
  2. אחסן את שפופרות ואקום המכיל מאגר בטמפרטורת החדר עד השימוש.
    הערה: הצינורות יציבים לפחות שנה אחת לאחר ההכנה שלהם.

2. הכנה של מאגרי לחילוץ נה

  1. כדי להכין את מאגרי לחילוץ נה, במקום 1.8 שני mL, mL 4.5 שני, וצינורות 3.6 mL אחד בארון תקשורת.
  2. להוסיף, באמצעות pipetting, 960 µL של חלקיקים מגנטיים זכוכית (MGPs) צינור נקי mL 1.8 ו תווית עם MGPs. Resuspend את המתלים MGP לחלוטין לפני pipetting זה.
    הערה: MGPs נוטים לאסוף במהירות בתחתית הצינורית.
  3. להוסיף, על-ידי pipetting, 4 מ של שטיפת מאגר אני אל צינור נקי 4.5 מ ל, באותיות WB-1.
    התראה: לשטוף מאגר I מכילה guanidinium כלוריד, וזה מגרה. לקחת אמצעי בטיחות מעבדה המתאים ברדס זרימה ושימוש ללבוש כפפות בעת טיפול זה. הימנע כל העור, קשר עין.
  4. להוסיף, על-ידי pipetting, mL 1.5 שטיפת המאגר השני אל צינור נקי mL 3.6, באותיות WB-2.
  5. להוסיף, על-ידי pipetting, 3 מ של שטיפת מאגר השלישי כדי צינור נקי 4.5 מ עם מדבקה. כמו WB-3.
  6. להוסיף, מאת pipetting, µL 100 • תנאי המאגר כדי צינור נקי mL 1.8 עם מדבקה. כמו EB.
  7. לאחסן המאגרים aliquoted בטמפרטורת החדר עד השימוש.
    הערה: הצינורות יציבים עבור חודש אחד לפחות לאחר ההכנה שלהם.

3. איסוף דם מחולים עם סימנים ותסמינים להידבקות בווירוס

התראה: לקחת אמצעי בטיחות מעבדה המתאימה בעת איסוף דם מן המטופל. ללבוש כפפות ומשקפיים. אם החולה בבידוד, אנא עקוב אחר הליכי אבטחה רמה 4.

  1. כדי לאסוף תוך ורידי דם מן המטופל, השתמש מחט פרפר עם סיומת small-bore צינורות, שפופרת ואקום אוסף דם המכיל מאגר פירוק/איגוד. לנוח היד של המטופל בעמדה כלפי מטה ומקם את הצינור אוסף נמוך יותר מאשר המחט פרפר. את המחט פרפר לווריד של המטופל ולצרף את אוסף דם בצינור הסיומת small-bore.
    הערה: פעולה זו תמנע זרימה חזרה.
  2. אחרי האוסף דם, מערבבים את התוכן של הצינור על ידי flipping הצינור 5 - 10 פעמים.
    הערה: בשל הוואקום שנותרו בצינור אוסף דם המכיל mL 1.6 פירוק/איגוד המאגר, היקף המדגם שנאספו באופן אוטומטי יהיה מ ל 1.6.
  3. לחטא החיצוני של הצינור באמצעות אתנול 70%.
  4. דגירה של הצינורות עבור 20 דקות בטמפרטורת החדר.
    הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול פה, ניתן לאחסן את צינורות איסוף דם מלאה ב-20 ° C, 5 ° C, 25 ° C או 37 ° C בחודש לפחות 17.
  5. ממשיכים ישירות השיטה פשוטה של מיצוי נה.

4. פשוטה נה החילוץ של הדם כולו

  1. לטהר נה מהדם פירוק/איגוד להשבית מאגר שנאספו, לערבב התוכן של הצינור על ידי flipping הוואקום צינור ביד x 5-10.
  2. הסר את המכסה של הצינור בקפידה, לשחרר את המכסה.
  3. שופכים את aliquot מוכן של MGPs (1 מ"ל) ישירות לתוך הצינור איסוף דם.
  4. במקום מכסה חדש מהצינור אוסף דם בשימוש על הצינור המכיל את הדגימה.
  5. מניחים אצבע על המכסה כדי להבטיח כי הצינור סגורה בחוזקה ומערבבים את התוכן של הצינור על ידי flipping הצינור אוסף דם ביד 5 - 10 פעמים.
  6. הכנס את הצינור מחזיק מגנטי ולשמור אצבע על המכסה כדי להבטיח שהצינור נסגר בחוזקה.
  7. להעיף את מחזיק מגנטי עם הצינור כמה פעמים ביד כדי לוודא כי כל MGPs נאספים בצד של הצינור עם המגנט.
    הערה: מחזיק מגנטי יכול להיות מוחלף עם מגנט מוארך, גומייה.
  8. הסר את המכסה של הצינור ולמחוק את התוכן של הצינור באמצעות פיפטה חד פעמיות או פשוט על-ידי יציקת התוכן לתוך צינור אוסף 50 מ.
    הערה: להימנע אירוסולים מהצינור אוסף 50 מ על-ידי סגירת הצינור עם מכסה.
  9. שופכים את aliquot מוכן של WB-1 (4 מ ל) ישירות לתוך הצינור אוסף דם.
  10. מקם את המכסה על המרקע ומניחים אצבע על המכסה כדי להבטיח שהצינור נסגר בחוזקה.
  11. הסר את הצינור מחזיק מגנטי, לשמור את המכסה הידק בבטחה עם האצבע.
    הערה: אם באמצעות מגנט גומייה, פשוט להסיר את הגומייה מגנט מהצינור.
  12. Resuspend את MGPs על ידי flipping הצינור אוסף דם ביד 5 - 10 פעמים.
  13. חזור על שלבים 4.6-4.8.
  14. שופכים את aliquot מוכן של WB-2 (1.5 מ"ל) ישירות לתוך הצינור אוסף דם.
  15. מקם את המכסה על המרקע ולהסיר את הצינור ממחזיק מגנטי.
    הערה: אם באמצעות מגנט גומייה, פשוט להסיר את הגומייה מגנט מהצינור.
  16. מניחים אצבע על המכסה כדי להבטיח שהצינור נסגר בחוזקה.
  17. Resuspend את MGPs על ידי flipping הצינור אוסף דם למשך כמה שניות בעבודת יד.
  18. חזור על שלב 4.6-4.8.
  19. שופכים את aliquot מוכן של WB-3 (3 מ"ל) ישירות לתוך הצינור אוסף דם.
  20. מקם את המכסה על המרקע ולהסיר את הצינור ממחזיק מגנטי.
    הערה: אם באמצעות מגנט גומייה, פשוט להסיר את הגומייה מגנט מהצינור.
  21. מניחים אצבע על המכסה כדי להבטיח שהצינור נסגר בחוזקה.
  22. Resuspend את MGPs על ידי flipping הצינור אוסף דם ביד 5 - 10 פעמים.
  23. חזור על שלבים 4.6-4.8.
  24. שופכים את aliquot מוכן של EB (100 µL) ישירות לתוך הצינור אוסף דם.
  25. מקם את המכסה על המרקע ולהסיר את הצינור ממחזיק מגנטי.
    הערה: אם באמצעות מגנט גומייה, פשוט להסיר את הגומייה מגנט מהצינור.
  26. Resuspend את MGPs ב EB על-ידי הקשה הצינור אוסף דם 5 - 10 פעמים עם האצבע.
    הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן, ואת הצינורות שניתן לאחסן ב-20 ° C.
  27. העברה droplet אחד (5-8 µL) של MGPs resuspended המיקס במורד הזרם של התגובה הגברה נה באמצעות פיפטה חד פעמיות של 1.5 mL (הגברה נה במורד הזרם בכל אבחון assay כגון מנורה/RT-מנורה או מבחני qPCR/RT-qPCR יכול לשמש).
    הערה: NAs לדבוק MGPs, כדי להיות בטוח לשימוש MGPs את התגובה הגברה נה במורד הזרם. מערבבים את המתלים MGP לפני השימוש. לאחר ערבוב, תאסוף MGPs בחלק התחתון של הצינור.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול המובאת כאן פשוט ויעיל, ניתן להחיל באופן כללי על כל assay מולקולרית שיש לבצע על דגימות דם מלא זיהומיות לא פעיל עם המאגר פירוק/איגוד. שזרימת הדם איון ו נה החילוץ מוצג באיור 1, לרבות הכנת דם אוסף שפופרות ואקום7 (איור 1 א'), אוסף דם7 (איור 1B), החילוץ NA ( 1C דמויות - 1 H), וניתוח במורד הזרם NA (

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדו ח זה, אנו מתארים פשוטה, מהירה ובטוחה ידנית המיטה נה החילוץ שיטת זיהוי מולקולרי במורד הזרם של נגיף בדם כל פירוק/איגוד להשבית-מאגר. שיטת החילוץ נה שתואר פותחה כדי להתבצע ישירות על דגימות דם נאסף הדם ואקום צינורות אוסף המכיל את פירוק/איגוד מאגר (טבלה של חומרים)7. מאגר ספציפי חלבונית EBOV7 , הוא המרכיב הקריטי בשיטה. אחרי האוסף דם, אנו ממליצים המקננת הצינור לפחות 20 דקות7 על מנת להבטיח של איון מוחלט של המדגם. איון EBOV המיטה מבטלת את ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים Susanne מרגריטה לופס רסמוסן וג'נסן Kolbjørn Solvej לסיוע טכני שלהם ועל לטיפול הדגימות קליניים. פרויקט זה הוא חלק. האיחוד EbolaMoDRAD, אשר קיבלה מימון חדשני רפואה היוזמה 2 Joint Undertaking תחת גרנט הסכם N ° 115843. זה Joint Undertaking מקבל תמיכה המחקר של האיחוד האירופי אופק 2020, ותוכנית חדשנות EFPIA.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צינורות Vacutainer K2 EDTA (4 מ"ל)Becton Dickinson368861
Plus איסוף דםBecton Dickinson362725
23G x 1 מחטBecton Dickinson300800
LUER LOK מזרק (3 מ"ל)Becton Dickinson309658
מחט פרפר עם צינורות הארכה עם קדח קטןJø rgen Kruuse A/S121714
1% VirkonNomeco A/S849265
MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I - מאגר ליזה/מחייב - מילוימחדש Roche Diagnostics A/S03246752001
MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation KitRoche Diagnostics A/S3038505001
Nunc™ צינורות קריוגניים של בנקאות ביולוגית ותרבית תאים (1,8 מ"ל)Thermo Fisher Scientific375418
Nunc™ צינורות קריוגניים של בנקאות ביולוגית ותרבית תאים (3,6 מ"ל)Thermo Fisher Scientific379189
Nunc™ צינורות קריוגניים של ביו-בנקאות ותרבית תאים (4,5 מ"ל)Thermo Fisher Scientific
™-5 מגנטThermo Fisher Scientific12303D
העברת פיפטה (3.5 מ"ל)Sarstedt86.1171.010
Thermo Scientific™ Samco™ פיפטות העברת קצה עדין (1.5 מ"ל)Thermo Fisher Scientific231
Thermo Scientific™ נונק ומסחר; 50 מ"ל צינורות צנטריפוגה פוליפרופילן סטריליים חרוטייםתרמו פישר סיינטיפיק339652
379146-DynaMag

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lee, D., Shin, Y., Chung, S., Hwang, K. S., Yoon, D. S., Lee, J. H. Simple and Highly Sensitive Molecular Diagnosis of Zika Virus by Lateral Flow Assays. Analytical Chemistry. 88, 12272-12278 (2016).
  2. Benzine, J. W., Brown, K. M., et al. Molecular Diagnostic Field Test for Point-of-Care Detection of Ebola Virus Directly from Blood. Journal of Infectious Diseases. 214 (Suppl 3), S234-S242 (2016).
  3. Faye, O., Faye, O., et al. Development and deployment of a rapid recombinase polymerase amplification Ebola virus detection assay in Guinea in 2015. Euro Surveillance. 20 (44), 10-18 (2015).
  4. Yang, M., Ke, Y., et al. Development and Evaluation of a Rapid and Sensitive EBOV-RPA Test for Rapid Diagnosis of Ebola Virus Disease. Scientific Reports. 6, (2016).
  5. Smither, S. J., Weller, S. A., et al. Buffer AVL alone does not inactivate Ebola virus in a representative clinical sample type. Journal of Clinical Microbiology. 53 (10), 3148-3154 (2015).
  6. Byrnes, S., Fan, A., et al. A Portable, Pressure Driven, Room Temperature Nucleic Acid Extraction and Storage System for Point of Care Molecular Diagnostics. Analytical Methods. 5 (13), 3177-3184 (2013).
  7. Rosenstierne, M. W., Karlberg, H., et al. Rapid bedside inactivation of Ebola virus for safe nucleic acid tests. Journal of Clinical Microbiology. 54 (10), 2521-2529 (2016).
  8. Vinner, L., Fomsgaard, A. Inactivation of orthopoxvirus for diagnostic PCR analysis. Journal of Virological Methods. 146, 401-404 (2007).
  9. Schmitz, H., Köhler, B., et al. Monitoring of clinical and laboratory data in two cases of imported Lassa fever. Microbes and Infection. 4 (1), 43-50 (2002).
  10. De La Vega, M. A., Caleo, G., et al. Ebola viral load at diagnosis associates with patient outcome and outbreak evolution. Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4421-4428 (2015).
  11. Hasanoglu, I., Guner, R., et al. Dynamics of viral load in Crimean Congo hemorrhagic fever. Journal of Medical Virology. 90 (4), 639-643 (2017).
  12. Biava, M., Colavita, F., et al. Evaluation of a rapid and sensitive RT-qPCR assay for the detection of Ebola Virus. Journal of Virological Methods. 252, 70-74 (2018).
  13. Fernández-Carballo, B. L., McBeth, C., et al. Continuous-flow, microfluidic, qRT-PCR system for RNA virus detection. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (1), 33-43 (2017).
  14. Weller, S. A., Bailey, D., et al. Evaluation of the Biofire FilmArray Biothreat E-test (v2.5) for rapid identification of Ebola virus disease in heat-treated blood samples obtained in Sierra Leone and United Kingdom. Journal of Clinical Microbiology. 54 (1), 114-119 (2015).
  15. Semper, A. E., Broadhurst, M. J., et al. Performance of the GeneXpert Ebola Assay for Diagnosis of Ebola Virus Disease in Sierra Leone: A Field Evaluation Study. PLoS Medicine. 13 (3), e1001980(2016).
  16. Biocartis. Instructions for Use: Idylla TM Ebola Virus Triage Test. , https://www.fda.gov/downloads/MedicalDevices/Safety/EmergencySituations/UCM503944.pdf (2016).
  17. MPLC. Total Nucleic Acid Isolation Kit. Safety data sheet version 1.7. , https://pim-eservices.roche.com/DownloadDocument/SDS/DE/en/03038505001 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

qPCRLAMP

מאמרים קשורים