מאמר שיטה

קביעת spectrophotometric תוכן Phycobiliprotein Cyanobacterium Synechocystis

DOI:

10.3791/58076

⸱

11 בספטמבר 2018

 ,  ,  , 
1Department of Adaptive Biotechnologies, Global Change Research Institute, Czech Academy of Sciences, 2Department of Plant Physiology, Faculty of Science, Masaryk University, 3Laboratory of Intracellular Regulation, Institute of Plant Physiology, Russian Academy of Sciences

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לקבוע באופן כמותי phycobiliprotein בתוכן cyanobacterium Synechocystis באמצעות שיטת spectrophotometric. ההליך החילוץ היה הוחלו בהצלחה גם זנים אחרים כחוליות ואצות; עם זאת, בשל הבדלים ב ספקטרום בליעה פיגמנט, יש צורך לבחון את המשוואות spectrophotometric עבור כל זן בנפרד.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זהו פרוטוקול פשוט מצפני כמותית phycobiliprotein בתוכן מודל cyanobacterium Synechocystis. Phycobiliproteins הם המרכיבים החשובים ביותר של phycobilisomes, מחושיהם קציר-אור גדול של כחוליות מספר האצות taxa. Phycobilisomes של Synechocystis להכיל שתי phycobiliproteins: phycocyanin ו- allophycocyanin. פרוטוקול זה מתאר פשוט, יעיל, שיטה אמינה מצפני כמותיים הן phycocyanin והן allophycocyanin ב cyanobacterium מודל זה. אנחנו לעומת מספר שיטות החילוץ phycobiliprotein, spectrophotometric כמת. ההליך החילוץ כפי שמתואר פרוטוקול זה הוחל גם בהצלחה על זנים כחוליות אחרים כגון Cyanothece sp., Synechococcuselongatus, ספירולינה sp., Arthrospira sp., Nostoc sp., כמו גם באשר אדומיות Porphyridium cruentum. עם זאת, המקדמים הכחדה של phycobiliproteins ספציפית של taxa שונים יכולים להיות שונים, ולכן, מומלץ כדי לאמת את שיטת כמת spectrophotometric עבור כל מאמץ יחיד בנפרד. הפרוטוקול דורש מעט זמן, ניתן לבצע במעבדה כל סטנדרט מדעי החיים שכן היא דורשת ציוד סטנדרטי בלבד.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

fPhycobiliproteins הם פיגמנטים מסיסים במים-חלבון מתחמי המייצגות רכיבים עיקריים של מחושיהם קציר-אור ב כחוליות prokaryotic (Cyanophyta), taxa מספר האיקריוטים (Glaucophyta, Rhodophyta , ו Cryptophyta)1. הם מתרחשים בעיקר בתור מתחמי סופרא מולקולרית בשם phycobilisomes, הם בדרך כלל מחוברים אל פני השטח של הממברנות פוטוסינתטיים בצד סטרומה, למעט Cryptophyta, איפה phycobiliproteins מותאמים תילקואיד לומן2. ארבעה סוגים של phycobiliproteins זוהו עד עדכנית: allophycocyanin את הליבה, וקו היקפיים phycocyanin, phycoerythrin ו- phycoerythrocyanin1. כמו מתחמי קציר-האור הראשי, phycobilisomes מייצגים את אחד הגורמים מכריע של פרודוקטיביות תרבויות מסת האצות, כחוליות. זה הוכח, שחיתוך phycobilisomes הזה יכול לשפר ביומסה הצטברות תחת אור חזק3. מצד שני, תחת irradiance צנוע או נמוך, העיגול אנטנה הביא שיעורי צמיחה ו-3,הפחתת הצטברות ביומסה4. Phycobiliproteins מסחרית משמשים צבעני מזון, תרופות, תוספי מזון, בתעשיית הקוסמטיקה, וכן קרינה פלואורסצנטית רגשים עם יישומים cytometry זרימה, immunoassays פלורסנט ו קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ5.

פרוטוקול זה מתמקד הקביעה כמותית של phycobiliproteins, cyanobacterium דגם Synechocystis. כחוליות הן המוקדם oxygenic פוטוסינתטיים autotrophs; הם יוצרים הביוספרה של כדור הארץ במשך יותר מ- 2.4 מיליארד שנה6. הם לשחק תפקיד מכריע הביוגיאוכימיים הכללית של חנקן, פחמן, חמצן ורכיבים אחרים. בין כחוליות, זן חד־תאיות Synechocystis השיגה תפקיד ייחודי מאז זה היה cyanobacterium הראשון עם הגנום כולו רציף7,8, זה מודולרי באופן טבעי על ידי ה-DNA אקסוגני9, ו היא מבצעת צמיחה יציבה ומהירה יחסית10,11. ב- Synechocystis, הרכיב אנטנה הליבה, allophycocyanin, קשורה עם החלבונים ממברנלי אינטגרלי, והוא phycocyanin המצורף ממוקם בפריפריה תילקואיד ממברנה.

מספר שיטות החילוץ phycobiliprotein, כימות מושווים בתוך פרוטוקול זה. ההליך הסופי החילוץ הוחלה בהצלחה אל Synechocystis, כמו גם זנים אחרים של כחוליות, כולל Cyanothece sp., Synechococcuselongatus, ספירולינה sp., Arthrospira sp., ו Nostoc sp., והוא הוחל גם בהצלחה על אדומיות Porphyridium cruentum. לכן, השיטה פותחה ב פרוטוקול זה יכול להיחשב כשיטה אוניברסלי לחילוץ phycobiliprotein. אף-על-פי חלק מהשיטות החילוץ שנבדקו, גרמו תשואות גבוהות של חלבון הכולל, הכאן תיאר נוהל חילוץ בתנאי phycobiliprotein הגבוהה ביותר התשואות יחד עם התוכן הנמוך של כלורופיל משקע ב phycobiliprotein חלץ. הפחתת את התוכן של כלורופיל היה חיוני phycocyanin הנכון של כימות spectrophotometric allophycocyanin.

ספקטרום בליעה phycobiliprotein יכול להשתנות באופן משמעותי בין אצות כחוליות מינים12,13,14,15,16,17 שונים ואפילו בין זנים שונים של סוג כחוליות יחיד18. לכן, אורכי גל מסוים ואת מקדמי קליטה משמש לקביעת phycocyanin ו- allophycocyanin ב Synechocystis אינם חלים באופן כללי על זנים אחרים. בנוסף, Synechocystis אינו מכיל phycoerythrin ו- phycoerythrocyanin שניתן למצוא בין כמה אחרים אצות כחוליות. לצורך קביעת phycobiliproteins ב זנים שאינם Synechocystis, מומלץ להעריך את המשוואות spectrophotometric עבור כל זן בנפרד.

למרות הפרוטוקול מכיל שני צעדים ארוכים יותר (בין לילה ליופיליזציה של כדורי הסלולר והפקת חלבונים שעה), הזמן העבודה הכוללת עבור כימות phycobiliproteins הוא לא יותר מ 2 שעות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. כחוליות טיפוח

  1. לטפח Synechocystis תאים Erlenmeyer מבחנות או בכל10,photobioreactors19 במאגר BG11 בינוני20 כדי לשמור על pH של < 10 (למשל, באמצעות HEPES 17 מ"מ10).
    הערה: טיפוח סטנדרטי התנאים מחייבים טמפרטורה מבוקרת (בדרך כלל, 30 מעלות צלזיוס, טמפרטורה אופטימלית הוא 35 ° C)21, תאורה (בדרך כלל, אור לבן בעוצמה עד 800 µmol [פוטונים] / [m2·s])21, ו- CO אספקת 2 (ב- photobioreactor שטוחים 400-mL, הגידול קולח CO2 ריכוז הוא 1,700 ppm)21.
  2. כדי לקבוע את צפיפות תרבות, למדוד את הצפיפות האופטית תרבות spectrophotometrically-730 nm (OD730) באמצעות cuvette של נתיב האור של 1 ס מ. לחלופין, לספור את התאים במיקרוסקופ באמצעות hemocytometer או תא אוטומטיות מונה.

2. דוגמאות הכנה

  1. לעבוד תחת בקרינה נמוכה כדי למנוע השפלה phycobiliprotein.
  2. קציר 3 x 1 מ"ל של תרבות השעיה על צינורות מנעול כספת. השתמש triplicates עבור הערכת שגיאות טכניות במדידה. כדי לבצע דגימה תרבות בתנאים סטריליים, לקצור את התאים בשכונה למינריות ובצע את נוהלי עבודה ובטיחות נאותה.
  3. Centrifuge התאים ב x 15,000 g בטמפרטורת מעבדה עבור 5 דק. לשים לב הרוטור צנטריפוגה מאוזנת כראוי. לאחר צנטריפוגה, למחוק את supernatants. הקפד שלא להפריע בגדר.
  4. לשים את הדגימות במקפיא. לאחסון לטווח ארוך, שומרים את הדגימות ב-80 מעלות צלזיוס. הדבר נחוץ למנוע השפלה phycobiliprotein. לאחסון לטווח קצר, מספיקה-20 ° C.
  5. שזה יבש והקפיא את הדגימות בן לילה. עבור תהליך להקפיא ייבוש נאותה, לשמור על הטמפרטורה על ההקפאה-מייבש מעבה מתחת C º 60 ואת הלחץ בתא ההקפאה-מייבש סביב 1 hPa.
  6. לאחר סיום מחזור להקפיא ייבוש, סגור את הצינור בהקדם האפשרי כדי למנוע את התחדשות של מים מן האוויר.

3. תא המגון ופיגמנטים החילוץ

  1. להוסיף ארבע חתיכות של חרוזי זכוכית (בקוטר של 2 מ מ) כל שפופרת מדגם וסגור את הצינורות.
    הערה: כאשר המכסה של הצינור מנעול כספת המשמש המגון הוא רזה מדי, הדבר עלול לפגום במהלך המגון; לכן, רק מנעול כספת צינורות בשלמותם חזק מומלץ עבור פרוטוקול זה.
  2. Homogenize את הדגימות עם חרוזי זכוכית 15 s על מהמגן בטמפרטורה מעבדה.
    הערה: מדגם כראוי homogenized משתרע על פני השטח הפנימי כל הצינורות מנעול כספת.
  3. להוסיף 1 מ"ל של מאגר PBS (pH 7.4), precooled עד 4 ° C, כדי הדגימות כדי לחלץ phycobiliproteins.
    הערה: מהשלב הזה על, שומרים את הדגימות על קרח כדי למנוע ההשפלה של החלבונים שחולצו. . זה חיוני
  4. מערבבים את הדגימות עם PBS עבור 5 s ב- מהמגן בטמפרטורת מעבדה.
    הערה: לאחר ערבוב, הדגימות הן ירקרק.
  5. לאחר ערבוב, שומרים את הדגימות על קרח במשך 60 דק המכסה את אמבטיית קרח עם מכסה כדי למנוע השפלה פיגמנטים.
  6. לאחר 60 דקות של phycobiliprotein החילוץ, centrifuge את הדגימות-x 15,000 g ב- 4 מעלות צלזיוס במשך 5 דק. שים לב לאזן כראוי בין הרוטור צנטריפוגה.
    הערה: לאחר צנטריפוגה, תגובת שיקוע יש צבע כחול ציאן.

4. Phycobiliprotein כמת

  1. לפני המדידה spectrophotometric, לכייל את ספקטרופוטומטרים לקו הבסיס באמצעות המאגר PBS ריקים.
  2. ברגע ספקטרופוטומטרים מכויל, למחוק את החינוכית של אחד cuvette ספקטרופוטומטרים ו pipette את תגובת שיקוע עם שחולצו phycobiliproteins במקום עם המאגר שהושלכו.
  3. לכמת את ריכוז phycobiliprotein spectrophotometrically, באמצעות חריץ ברוחב של 0.5 ננומטר.
    1. למדוד את ספיגת של phycocyanobilins phycocyanin ואת allophycocyanin נגד המאגר PBS ריק-615 nm (615) ו 652 nm (652), בהתאמה, ולמדוד את ספיגת של ההריסות הסלולר ב 720 nm (720).
    2. לחשב את הריכוז של phycocyanin, allophycocyanin על פי המשוואות (1) ו- (2) של בנט, Bogorad12:
      figure-protocol-1
      figure-protocol-2
      הערה: על615652,720 . זה צריך להתאים לטווח ספיגת ליניארי ספקטרופוטומטרים במידת הצורך, לדלל את הדגימה עם מאגר PBS.
  4. חישוב מחדש של ריכוז פיגמנט הדגימות המקורי. ריכוז פיגמנט במדגם מקבילה ישירות עם התוצאות של משוואות (1) ו- (2) 1 מ"ל של תרבות 1 מ"ל של המאגר החילוץ משמשים לניתוח. במקרה של שימוש באמצעי אחסון שונים של כחוליות דגימות ו/או מאגר PBS, יש לחשב את ריכוז פיגמנט הסופי לפי משוואה (3):
    figure-protocol-3(3)
    הערה: במקרה של תוכן phycobiliprotein תהליך לפי משקל יבש תא, ריכוז פיגמנט הסופי יש לחשב לפי משוואה (4)figure-protocol-4 (4)

5. קביעת המשקל היבש תא (אופציונלי)

  1. שוקלת שלושה צינורות מנעול כספת ריקה על יתרות האנליטי.
    התראה: זה קריטי כי הצינורות מנעול כספת יבשים. במקרה של אחסון הצינורות בסביבה רטובה, יבשה הצינורות במשך מספר שעות הקפאה מייבש לפני שקילה אותם. לתפעל את הצינורות בעדינות ורק עם אבקה ללא ידיים בכפפות כדי למנוע מגע בין החומר ובין האצבעות של החוקר. לשמור כל מחזיקי, צנטריפוגה נקי כדי למנוע את העברת חומר הצינורות.
  2. דוגמה 1 x 15 מ"ל של תרבות השעיה על צינור חרוטי 15-mL.
  3. Centrifuge המתלה התרבות ב- 15-mL חרוט הצינורות ב x 4,000 גרם בטמפרטורה מעבדה במשך 10 דקות איזון הרוטור צנטריפוגה עם שלושה נוספים 15-mL חרוט צינורות, המכיל כל 15 מ"ל של מים. לאחר צנטריפוגה, להתעלם מ 12 ל תגובת שיקוע.
  4. Resuspend בגדר, תגובת שיקוע הנותרים ולהעביר 3 x 1 מ"ל של התערובת שלושה צינורות מנעול כספת 1.5-mL עם פיפטה. במקרה קצת שאריות של בגדר נשארים בצינור חרוט 15-mL, להוסיף 1.5 מיליליטר מים יונים צינור חרוטי, מערבולת או טלטול צינור כדי resuspend הנותרים גלולה ולאחר להעביר 3 x 0.5 מ"ל של התערובת מנעול כספת 1.5-mL שלושה צינורות (כבר containi ng 3 x 1 מיליליטר בגדר) עם פיפטה.
    הערה: חלוקת בגדר מעל שלושה צינורות מנעול כספת 1.5-mL יאפשר את אומדן שגיאות טכניות של מדידת משקל יבש.
  5. Centrifuge התאים 1.5-mL צינורות מנעול כספת ב x 15,000 g בטמפרטורת מעבדה עבור 5 דק איזון הרוטור צנטריפוגה עם צינור מנעול כספת נוספים של 1.5-mL המכיל 1 מ ל מים. לאחר צנטריפוגה, למחוק את supernatants.
  6. שמת את הדגימות במקפיא. לאחסון לטווח ארוך, שומרים את הדגימות ב-80 מעלות צלזיוס; לאחסון לטווח קצר, מספיקה-20 ° C.
  7. שזה יבש והקפיא את הדגימות בן לילה. עבור תהליך להקפיא ייבוש נאותה, לשמור על הטמפרטורה על הקבל מייבש ההקפאה מתחת-90 ° C והלחץ בתא ההקפאה-מייבש סביב 1 hPa.
  8. לאחר ליופיליזציה, לסגור את הצינורות ולשקול את הדוגמאות על יתרות האנליטי.
    הערה: הערך משקל יבש יכול לשמש עבור נירמול של התוכן phycobiliprotein לכל תא משקל יבש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לצורך הבדיקות בשיטה הראשונית, Synechocystis היה מעובד כמו תרבויות אצווה Erlenmeyer המבחנות על מטרף BG11 טיפוח בינוני20 (בתוספת 17 מ"מ HEPES) 25 ° c, תחת אור לבן חם של עוצמות של 50 µmol (פוטונים) / (ז 2·s) עם 1% CO2 באטמוספרה culturing. במהלך הטיפוח, התרבויות היו נדגמים כדי מנעול כספת צינורות centrifuged (15,000 x g בטמפרטורת מעבדה במשך 5 דקות), תגובת שיקוע גורש ואני הדגימות היו מאוחסנים ב-80 מעלות צלזיוס או הקפוא כהכנה צעדים ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה, מהירה, לשחזור כימות של phycobiliprotein בתוכן מודל cyanobacterium Synechocystis. מספר שיטות תא המגון חלבון החילוץ, phycocyanin, allophycocyanin כמת מושווים, פרוטוקול הסופי מהווה שילוב של השלבים אופטימלית של כל נוהל בודדת. בתור נציג נתונים, התוכן של phycobiliproteins הייתה לכמת בתאים Synechocystis תחת הגדלת עוצמת האור. למרות הניתוח דורש זמן דומה וציוד מעבדה כמו חלק שיטות שפורסמו בעבר12,13,...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול אומצה מן הפרסום הקודם11. ט Č צ, ד בח י. נתמכו על-ידי משרד החינוך, נוער וספורט של הרפובליקה הצ'כית במסגרת התכנית הלאומית הקיימות אני (NPU אני), להעניק LO1415 מספר. ג'יי Č. גם נתמך על ידי GA CR, גרנט מספר 18-24397S. לגישת מכשירים ומתקנים אחרים נתמכה על ידי תשתיות מחקר הצ'כי ביולוגיה מערכתית C4SYS (פרויקט אין LM2015055). מ א ס נתמך על ידי מענק של קרן המדע הרוסי [מס 14-14-00904].

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Synechocystis sp. PCC 6803Institut Pasteur, פריז, צרפת6803Cyanobacterium זן
Roti-CELL PBSCarl Roth GmbH + Co. KG, קרלסרוהה, גרמניה9143.1תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), pH 7.4
צינורות נעילה בטוחה של אפנדורף Eppendorf, Hamburk, גרמניה30120086צינורות נעילה בטוחה 1.5 מ"ל
VWR מערכת אחסון 80 מקומותVWR International, רדנור, פנסילבניה, ארה"ב30128-282מחזיק לצינורות נעילה בטוחה 
RAININ 100 ומיקרו; L -1000 ומיקרו; l מטלר-טולדו, קולומבוס, אוהיו, ארה"ב17014382פיפטה
GP-LTS-A-1000 ומיקרו; L-/F-768/8מטלר-טולדו, קולומבוס, אוהיו, ארה"ב30389272טיפים לפיפטה
Rotina 420RHettich, Kirchlengern, Germany4701צנטריפוגה מקוררת לצינורות נעילה בטוחה של 1.5 מ"ל וצינורות צנטריפוגה חרוטיים 15 מ"ל
LCexv 4010Liebherr, Bulle, Switzerland9005382197172מקרר ומקפיא -20  ° C
Revco ExF -86° C מקפיא זקוף בטמפרטורה נמוכה במיוחדThermo Fisher Scientific, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"בEXF24086V מקפיא -80  ° C
CoolSafeLaboGene, Lillerø d, דנמרק7.001.000.615מייבש בהקפאה 
UV-2600Shimadzu, קיוטו, יפןספקטרופוטומטרUV-2600
קובטות ספיגת הלמה, חצי מיקרוסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בZ600288 VIS/UV-VIS קובטות חצי מיקרו 0.75-1.5 מ"ל, טווח ספקטרלי 200-2500 ננומטר 
Silamat S6Ivoclar Vivadent, Schaan, ליכטנשטיין602286WUהומוגנייזר 
חרוזי זכוכית מוצקהסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בZ273627חרוזי זכוכית בקוטר 2  מ"מ
CPA225D-0CESartorius AG, Gö ttingen, גרמניהSECURA225D-1OBRמאזן אנליטי
C-פיקוציאנין מספירולינה sp. סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בP2172פיקוציאנין סטנדרטי
אלופיקוציאניןסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בA7472
ערכת חומצה ביצינצ'ונינית סטנדרטיתסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בBCA1, B9643ערכה מלאה לקביעת סך החלבונים
AlgaeTron פוטון סיסטם אינסטרומנטס בע"מ, Drá sov, צ'כיהAG 130-ECO תא טיפוח לצלוחיות E, עם אור ואווירה הניתנים לשליטה
PhotobioreactorPhoton System Instruments Ltd., Drá sov, צ'כיהFMT-150ציוד גידול לציאנובקטריה ואצות עם סביבה הניתנת לשליטה מלאה
צלומטר Nexcelom Bioscience, לורנס, מסצ'וסטס, ארה"באוטומטי M10מונה תאים
קורנינג 15 מ"ל צינורות צנטריפוגהסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בCLS430791 צינור צנטריפוגה 15 מ"ל לדיגום משקל יבש
Herasafe KSThermo Fisher Scientific, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב51024579קולט אדים זרימה למינארי
  A7472 

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mimuro, M., Kikuchi, H. Antenna Systems and Energy Transfer in Cyanophyta and Rhodophyta. Light-Harvesting Antennas in Photosynthesis. Green, B. R., Parson, W. W. , Springer. Dordrecht, The Netherlands. 281-306 (2003).
  2. Spear-bernstein, L., Miller, K. R. Unique location of the phycobiliprotein light-harvesting pigment in the Cryptophyceae. Journal of Phycology. 25 (3), 412-419 (1989).
  3. Kirst, H., Formighieri, C., Melis, A. Maximizing photosynthetic efficiency and culture productivity in cyanobacteria upon minimizing the phycobilisome light-harvesting antenna size. Biochimica et Biophysica Acta - Bioenergetics. 1837 (10), 1653-1664 (2014).
  4. Page, L. E., Liberton, M., Pakrasi, H. B. Reduction of photoautotrophic productivity in the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803 by phycobilisome antenna truncation. Applied and Environmental Microbiology. 78 (17), 6349-6351 (2012).
  5. Sonani, R. R. Recent advances in production, purification and applications of phycobiliproteins. World Journal of Biological Chemistry. 7 (1), 100(2016).
  6. Bryant, D. A. The Molecular Biology of Cyanobacteria. , Springer Netherlands. Dordrecht, The Netherlands. (1994).
  7. Kaneko, T., et al. Sequence analysis of the genome of the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC6803. I. Sequence features in the 1 Mb region from map positions 64% to 92% of the genome. DNA Research. 2, 191-198 (1995).
  8. Kaneko, T., et al. Sequence analysis of the genome of the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC6803. II. Sequence determination of the entire genome and assignment of potential protein-coding regions. DNA Research. 3, 109-136 (1996).
  9. Grigorieva, G., Shestakov, S. Transformation in the cyanobacterium Synechocystis sp 6803. FEMS Microbiology Letters. 13 (4), 367-370 (1982).
  10. Zavřel, T., Sinetova, M. A., Búzová, D., Literáková, P., Červený, J. Characterization of a model cyanobacterium Synechocystis sp: PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor. Engineering in Life Sciences. 15 (1), (2015).
  11. Zavřel, T., Očenášová, P., Červený, J. Phenotypic characterization of Synechocystis sp. PCC 6803 substrains reveals differences in sensitivity to abiotic stress. PLoS One. 12 (12), e0189130(2017).
  12. Bennett, A., Bogorad, L. Complementary chromatic adaption in a filamentous blue-green alga. The Journal of Cell Biology. 58, 419-435 (1973).
  13. Lüder, U. H., Knoetzel, J., Wiencke, C. Acclimation of photosynthesis and pigments to seasonally changing light conditions in the endemic antarctic red macroalga Palmaria decipiens. Polar Biology. 24 (8), 598-603 (2001).
  14. Evans, L. V. The effects of spectral composition and irradiance level on pigment levels in seaweeds. Experimental Phycology: A Laboratory Manual. Lobban, C. S., Chapman, D. J., Kremer, B. P. , Cambridge University Press. Cambridge, New York, New Rochelle, Melbourne, Sydney. 123-133 (1988).
  15. Sampath-Wiley, P., Neefus, C. D. An improved method for estimating R-phycoerythrin and R-phycocyanin contents from crude aqueous extracts of Porphyra (Bangiales, Rhodophyta). Journal of Applied Phycology. 19 (2), 123-129 (2007).
  16. Chung, Y. H., Park, Y. M., Moon, Y. J., Lee, E. M., Choi, J. S. Photokinesis of Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803. Journal of Photoscience. 11 (3), 89-94 (2004).
  17. Sun, L., et al. Phycobilisomes from Cyanobacteria. Handbook on Cyanobacteria: Biochemistry, Biotechnology and Applications. Gault, P. M., Marler, H. J. , Nova Science Publishers, Inc. New York, NY. 105-160 (2009).
  18. Six, C., et al. Diversity and evolution of phycobilisomes in marine Synechococcus spp.: A comparative genomics study. Genome Biology. 8 (12), (2007).
  19. Sinetova, M. A., Červený, J., Zavřel, T., Nedbal, L. On the dynamics and constraints of batch culture growth of the cyanobacterium Cyanothece sp. ATCC 51142. Journal of Biotechnology. 162 (1), (2012).
  20. Stanier, R. Y., Kunisawa, R., Mandel, M., Cohen-Bazire, G. Purification and properties of unicellular blue-green algae (order Chroococcales). Bacteriological Reviews. 35 (2), 171-205 (1971).
  21. Zavřel, T., Sinetova, M. A., Búzová, D., Literáková, P., Červený, J. Characterization of a model cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor. Engineering in Life Sciences. 15 (1), 122-132 (2015).
  22. Hemlata, G., Fareha, B. Studies on Anabaena sp. nccu-9 with special reference to phycocyanin. Journal of Algal Biomass Utilization. 2 (1), 30-51 (2011).
  23. Rito-Palomares, M., Nuez, L., Amador, D. Practical application of aqueous two-phase systems for the development of a prototype process for c-phycocyanin recovery from Spirulina maxima. Journal of Chemical Technology & Biotechnology. 76 (12), 1273-1280 (2001).
  24. Zhang, H., et al. Selenium-Containing Allophycocyanin Purified from Selenium-Enriched Spirulina platensis Attenuates AAPH-Induced Oxidative Stress in Human Erythrocytes through Inhibition of ROS Generation. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (16), 8683-8690 (2011).
  25. Nedbal, L., Trtílek, M., Cervený, J., Komárek, O., Pakrasi, H. B. A photobioreactor system for precision cultivation of photoautotrophic microorganisms and for high-content analysis of suspension dynamics. Biotechnology and Bioengineering. 100 (5), 902-910 (2008).
  26. Zavřel, T., Knoop, H., Steuer, R., Jones, P. R., Červený, J., Trtílek, M. A quantitative evaluation of ethylene production in the recombinant cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 harboring the ethylene-forming enzyme by membrane inlet mass spectrometry. Bioresource Technology. 202, 142-151 (2016).
  27. Smith, P. K., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Analytical Biochemistry. 150 (1), 76-85 (1985).
  28. Lawrenz, E., Fedewa, E. J., Richardson, T. L. Extraction protocols for the quantification of phycobilins in aqueous phytoplankton extracts. Journal of Applied Phycology. 23 (5), 865-871 (2011).
  29. Lea-Smith, D. J., et al. Phycobilisome-Deficient Strains of Synechocystis sp. PCC 6803 Have Reduced Size and Require Carbon-Limiting Conditions to Exhibit Enhanced Productivity. Plant Physiology. 165 (2), 705-714 (2014).
  30. Seo, Y. C., et al. Stable isolation of phycocyanin from Spirulina platensis associated with high-pressure extraction process. International Journal of Molecular Sciences. 14 (1), 1778-1787 (2013).
  31. Touloupakis, E., Cicchi, B., Torzillo, G. A bioenergetic assessment of photosynthetic growth of Synechocystis sp. PCC 6803 in continuous cultures. Biotechnology for Biofuels. 8 (1), 133(2015).
  32. Touloupakis, E., Cicchi, B., Benavides, A. M. S., Torzillo, G. Effect of high pH on growth of Synechocystis sp. PCC 6803 cultures and their contamination by golden algae (Poterioochromonas sp.). Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (3), 1333-1341 (2016).
  33. Ishii, A., Hihara, Y. An AbrB-Like Transcriptional Regulator, Sll0822, Is Essential for the Activation of Nitrogen-Regulated Genes in Synechocystis sp. PCC 6803. Plant Physiology. 148 (1), 660-670 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PBS15000 G615652720Bennett Bogorad

מאמרים קשורים