הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

במבחנה הבידול של העכבר גורם גרנולוציט-מקרופאג-המושבה-מגרה (GM-CSF)-הפקת תאי T Helper (THGM)

6.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58087

⸱

10 בספטמבר 2018

 ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 2Immunology Programme, Life Sciences Institute, National University of Singapore, 3Cancer Science Institute of Singapore, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול להבדיל מאתר granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing T helper (THGM) תאים מתאי CD4 + T נאיביים, כולל בידוד תאי CD4 + T נאיבי, הבידול של THGM, ו- ניתוח של תאים THGM. בשיטה זו ניתן ליישם לימודי ההוראה ותפקוד תאי THGM.

תקציר

הגורם גרנולוציט-מקרופאג-המושבה-מגרה (GM-CSF)-ייצור תא T מסייע (THGM) היא תת-קבוצה תא מסייע T שזוהה בעיקר מפריש GM-CSF מבלי לייצר אינטרפרון (IFN) וγ או אינטרלוקין (IL)-17, נמצא לשחק תפקיד חיוני neuroinflammation אוטואימונית. שיטה של בידוד של תמים CD4 + T תאים מתא בודד השעיה של splenocytes ויצירת תא THGM מתאי CD4 + T נאיביים יהיה טכניקה שימושית במחקר של חסינות T תאית ומחלות אוטואימוניות. כאן נתאר שיטת מבדיל בין בעכבר נאיבי CD4 + T תאים לתאי THGM קידום על ידי IL-7. התוצאה של הבידול הוערכה על ידי הניתוח של הביטוי ציטוקינים באמצעות טכניקות שונות, כולל ציטוקין תאיים מכתים משולב עם cytometry זרימה, כמותיים בזמן אמת תגובת שרשרת פולימראזית (PCR), ו מבחני מקושרים-אנזים immunosorbent (אליסה). כ-55% של התאים באמצעות פרוטוקול בידול THGM כפי שמתואר כאן, הביע GM-CSF עם ביטוי מינימלי של IFNα או IL-17. הביטוי העיקרי של GM-CSF על-ידי תאי THGM אושר עוד יותר על ידי הניתוח של הביטוי של GM-CSF, IFNα ו- IL-17 ברמות ה-mRNA וגם חלבון. לכן, בשיטה זו ניתן להשתמש כדי להבדיל תמים CD4 + T תאים THGM תאי במבחנה, אשר יהיה שימושי במחקר של ביולוגיה של התא THGM.

מבוא

תאי CD4 + T helper (TH) הם מרכיבים חיוניים של המערכת החיסונית, יש תפקיד מכריע ההגנה מארח נגד חיידקים פתוגנים, מעקב סרטן, מחלת חיסון עצמי1,2,3. בעת הפעלת קולטן (TCR) תא T, תאי CD4 + T נאיבי יכול להיות מובחן TH1, TH2, TH 17, כתוצאה מתקנות או תאי T (Treg) תחת ההשפעה של ציטוקינים שונים milieus2,4, 5. לאחרונה, ערכה חדשה של תאי TH , המייצרת בעיקר GM-CSF, היה מזוהה, בשם THGM6. הבידול בתאי THGM מונעת על ידי IL-7 באמצעות הפעלת אות מתמר activator של שעתוק 5 (STAT5). תאים אלה אקספרס כמות גדולה של GM-CSF תוך ביטוי נמוך של אחרים TH-תא החתימה ציטוקינים כגון IFNγ ו- IL-176. GM-CSF נמצאה לשחק תפקיד קריטי בהתפתחות של CD4 + T תאית neuroinflammation7,8. בהשוואה ל IFNγ - או איל-17-לבטא autoreactive T תאים, GM-CSF-הבעת ' T תאים שהועברו אל פראי-סוג עכברים (WT) גרם של תחילת המחלה מוקדם יותר וחומרת המחלה גבוהה יותר. בנוסף, תאי T Csf2- / - נכשלה לזירוז ניסיוני אוטואימוניות דלקת המוח וחוט השדרה (EAE) לאחר להיות הועבר adoptively לנמענים WT, ואילו תאי T IFNγ או איל-17A שמר את היכולת לתווך EAE7. יתר על כן, מצור של GM-CSF באמצעות נוגדנים נטרול יושבחו חומרת המחלה EAE8. יתר על כן, מחסור של STAT5 בתאי T בעכברים הביא דור THGM מופחתת ו, לכן, ב התנגדות של העכברים EAE פיתוח6. ממצאים אלו מדגישים את החשיבות של תאי T GM-CSF-הבעת 'H neuroinflammatory חיסון למחלה. לפיכך, קביעת שיטה להבדיל בין תאי T GM-CSF-הבעת 'H מתאי CD4 + T נאיביים יהיה חשוב בחקר בפתוגנזה של neuroinflammation אוטואימונית ותגובות החיסון T תאית. עם זאת, פרוטוקול זה ביעילות מייצר תאי THGM מ מאתר תמים ש-cd4 + לא הוכח.

כאן אנו מציגים שיטה מבדיל בין תאי THGM מאתר מתאי CD4 + T נאיביים. פרוטוקול זה מתאר את כל התהליך, כולל החילוץ של הטחול מהעכבר, ההכנה של השעיה מתא בודד, הבחירה חיובי CD4, תא לפעיל על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיון (FACS) לתא TH בידול וניתוח. התאים helper T הבדיל מנותחים על-ידי ציטוקינים תאיים מכתים משולב עם cytometry זרימה כדי לקבוע את הביטוי ציטוקין ברמה תא יחיד, מאת-אמת ה-PCR כמותי כדי לקבוע את הביטוי ציטוקין ברמת mRNA, ו מאת אליסה כדי להעריך את הביטוי ציטוקין ברמת חלבון. בשיטה זו ניתן להחיל מחקרים של ביולוגיה של התא THGM בתנאים שונים, כגון EAE, איפה GM-CSF ממלא תפקיד חשוב בפתוגנזה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל העכברים המשמשים פרוטוקול זה היו על רקע גנטי C57BL/6, תחת תנאים מסוימים ללא הפתוגן באוניברסיטה הלאומית של סינגפור. כל הניסויים בוצעו באמצעות פרוטוקולים אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים שימוש הוועדה באוניברסיטה הלאומית של סינגפור.

1. מגיב והכנת חומרים

  1. הכנת 500 מ"ל תמיסת באגירה פוספט (PBS) המכיל 2% סרום שור עוברית (FBS) וחומצה ethylenediaminetetraacetic 1 מ מ (EDTA).
    הערה: לשמור על המאגר על קרח לאורך כל התהליך לקבלת תוצאות אופטימליות.
  2. להכין 50 מ של המדיה RPMI מלאה המכילה פניצילין-סטרפטומיצין RPMI 1640, 10% FBS ו- 1%. השתמש המדיה RPMI מלאה המכילה 50 מיקרומטר β-mercaptoethanol עבור הבידול תא THGM. הוסף את β-mercaptoethanol בשכונה fume.
  3. הכן 7.5 mL של תערובת נוגדן anti-CD3e על ידי דילול מניות anti-CD3e מרוכז μg/mL 3 ב- PBS. מעיל 48-ובכן הצלחות על-ידי הוספת μL 150 של תערובת נוגדן מכל קידוח, דגירה את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במשך לפחות שעה, או ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  4. לעקר את זוג מלקחיים ומספריים ולשמור אותם 70% אתנול בין והניתוחים.

2. הכנת מאתר Splenocytes

  1. המתת חסד העכבר (של בן 6-8 שבועות) באמצעות אישור כמוסד CO2 חנק או נקע בצוואר הרחם. לרסס את העכבר עם 70% אתנול והר זה על בלוק פוליסטירן על גבו. העבר את העכבר בטיחות ביולוגית בארון כדי להמשיך השלבים הבאים.
  2. להחזיק העור באמצעות זוג מלקחיים, לחתוך את העור מתחת כלוב הצלעות בצד שמאל כ 4 ס מ, בעזרת זוג מספריים. פתח את השק הצפק. לחשוף את הטחול ולהשתמש מלקחיים סטרילי כדי לחלץ את הטחול.
  3. מניחים מסננת תא 70 μm על שפופרת 50 מ ל, טרום רטוב זה עם 2 מ של המאגר. מניחים את טחולים על מסננת התא (2-3 טחולים עבור תא אחד מסננת), macerate אותם באמצעות סוף פומפה מזרק 5 מ.
  4. יש לשטוף את מסננת ואת התחתית מספר פעמים עם 1-2 מ ל תא בידוד מאגר עד כל התאים הם סמוקים לתוך הצינור. למחוק את מסננת תא, centrifuge את התאים ב x 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. למחוק את תגובת שיקוע.
  5. Resuspend בגדר תא עם 5 מ של קרים (4 ° C) אמוניום כלוריד-אשלגן (ACK) lysing מאגר (NH 150 מ מ4קלרנית, KHCO 10 מ מ3, 0.1 מ מ נה2EDTA; pH 7.2-7.4) ומערבבים אותם בעדינות על 2 דק להוסיף 10 מ של מדיה RPMI מלאה כדי לנטרל את ג'ק מאגר, מיד centrifuge את התאים ב x 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. למחוק את תגובת שיקוע לאחר צנטריפוגה.

3. בידוד של CD4 + T תאים באמצעות גרגרי CD4 מגנטי ועמודה ההפרדה תא

  1. Resuspend בגדר תא ב 5 מ של תא בידוד מאגר. לסנן את המתלים התא באמצעות מסנן הכנה להפרדות צבע (30 μm) לתוך צינור 15-mL החדש כדי להסיר את כל הלכלוך.
  2. לקחת 10 μL של התליה תא ולעשות לדילול 10 x על-ידי הוספת μL 90 המאגר. קח 10 μL של התליה תא מדולל, ערבב את זה עם 10 μL של trypan blue לספירת תאים. לספור התאים hemocytometer כדי לקבוע את התשואה של התאים קיימא.
  3. Centrifuge התאים ב x 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C וזורקים את תגובת שיקוע.
  4. Resuspend תאי μL 90 מאגר לכל 107 תאים. להוסיף 10 μL של גרגרי CD4 מגנטי לכל 107 תאים. דגירה התאים למשך 15 דקות ב 4 º C. לקבלת תוצאות מיטביות, מערבבים התליה תא בעדינות כל 5 דקות בזמן הדגירה.
  5. בעוד התאים הם המקננת, במקום עמודה ההפרדה על הדוכן מגנטי. טרום רטוב את העמודה עם 2 מ של המאגר.
  6. בסוף הדגירה תא/חרוז, לשטוף את התאים עם 5 מ של המאגר, centrifuge אותם ב 350 x גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. למחוק את תגובת שיקוע.
  7. Resuspend תאי 1 מ"ל של המאגר, לטעון את הדגימה לתוך העמודה ההפרדה תא, תני לזה לזרום דרך. להשתמש שפופרת צנטרפוגה 15-mL כדי לאסוף את השבר תאי CD4. להוסיף 1 מ"ל של מאגר לשטוף המאגר לפני זה יבש. חזור על השלב כביסה 2 x.
  8. הסר את העמודה ההפרדה תא הדוכן מגנטי ומניחים אותו על שפופרת צנטרפוגה 15 mL החדש. להוסיף 2 מ"ל תא בידוד מאגר העמודה ההפרדה תא ולהחיל על הבוכנה בחוזקה כדי לאלץ את התאים מחוץ העמודה.
  9. Centrifuge את השבר ב x 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C כדי להשיג תאי CD4 +. למחוק את תגובת שיקוע.

4. טיהור של תאי T CD4 + נאיבי (CD4+CD25–CD44הלאוCD62Lשלום) על ידי בידול THGM ומיון תא לפעיל על-ידי קרינה פלואורסצנטית

  1. Resuspend שהושג CD4 + תא בגדר ב 500 µL של המאגר. מערבבים את התאים עם תערובת נוגדנים מצומדת פלורסנט המכילה CD4-PerCp (2.8 µg/mL), CD44-APC (2.4 µg/mL), CD25-PE (2 µg/mL), ו- CD62L-FITC (10 µg/mL) (טבלה 1). דגירה התאים על קרח למשך 20-30 דקות, ולהגן עליהם מפני אור.
    הערה: ריכוזי הנוגדנים אופטימציה בעבר במעבדה. המספר של נוגדנים הרשומים הוא עבור תאים של 1 – 2 עכברים.
  2. לאחר הדגירה, לשטוף את התאים עם 5 מ של המאגר, centrifuge את התאים ב x 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C.
  3. למחוק את תגובת שיקוע, resuspend תאי µL 500 המאגר. לסנן את התאים שוב באמצעות רשת ניילון.
  4. העברה התליה תא צינור FACS למיון התא. Precoat הצינורות FACS אוסף עם 500 µL של המאגר.
  5. להשיג CD4+CD25–CD44הלאוCD62Lשלום האוכלוסייה (של תמים CD4+ T תאים) על-ידי מיון FACS. שער-CD4+CD25– הראשונה ולאחר מכן בחר CD44הלאוCD62Lשלום תאים של אוכלוסייה זו.
  6. לאסוף נאיבי CD4+ T תא שברים לתוך שפופרת צנטרפוגה 15-mL החדש. Centrifuge התאים ב x 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C וזורקים את תגובת שיקוע.
  7. Resuspend תאי CD4 + T נאיביים-ריכוז של 106 תאים למ"ל בתקשורת RPMI מלאה המכילה 50 מיקרומטר β-mercaptoethanol.
  8. האחות נוגדנים anti-CD3e משמש precoating בצלחת 48-. טוב. זרע 0.25 מיליון תאים (250 µL) כל היטב עם איל-7 (2 ng/mL), אנטי-CD28 (1 µg/mL), אנטי-IFNγ (10 µg/mL) (טבלה 1).
    הערה: ריכוזי ציטוקין נוגדנים אופטימציה בעבר במעבדה על הבחנה תא THGM.
  9. תקופת דגירה התאים ב 37 ° C עם 5% CO2 של 3 ימים. אל תשנה את המדיום בתקופת הדגירה.

5. ניתוח של העכבר THGM התאים שנוצר במבחנה

  1. באמצעות מיקרוסקופ, בדוק את הבידול תא בתלת-ממד לאחר הבידול. לקצור את התאים, centrifuge אותם ב 350 x גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. לשטוף את התאים 2 x עם מדיה RPMI מלאה.
    הערה: תאים הם גדולה יותר תאי CD4 + T נאיביים.
  2. Resuspend תאי 1 מ"ל של מדיה RPMI מלאה. לקחת 10 μL של השעיה תא ולערבב היטב עם μL 10 של trypan כחול כדי לקבוע את המספר הנייד עם hemocytometer. לחלק תאים שיקויים שלושה לרסטימולציה, ניתוח.
    הערה: ציטוקין תאיים מכתים, אליסה מבחני לדרוש ≥0.5 מיליון תאים, ומחייב ניתוח qPCR ≥ 1 מיליון תאים.
  3. עבור ציטוקין תאיים מכתים, restimulate את התאים עם 13 12-פעילים phorbol-אצטט (PMA) (100 ng/mL), ionomycin (1 μg/mL) בנוכחות מעכב תחבורה חלבון (1 µL/mL) עבור 4-6 שעות.
    1. לקצור את התאים ואת תכתים אותם עם נוגדן anti-CD4 (PerCP-מצומדת, 0.2 מ"ג/מ"ל, דילול בטחונות; או מצומדת FITC, 0.5 מ"ג/מ"ל, דילול מטריים) למשך 30 דקות.
    2. לתקן את התאים μL 200 קיבוע מאגר למשך 20-60 דקות. לאחר הקיבעון, לשטוף את התאים 2 x 1 מ ל permeabilization מאגר.
    3. לבצע צביעת תאיים עם נוגדנים נגד GM-CSF (PE-מצומדת, 0.2 מ"ג/מ"ל, דילול מטריים), IL-17A (FITC-מצומדת, 0.5 מ"ג/מ"ל, דילול בטחונות; APC-conjugated, 0.2 מ"ג/מ"ל, דילול מטריים), IL-4 (APC-מצומדת, 0.2 מ"ג/מ"ל, דילול מטריים), ו- IFNγ (APC-מצומדת, 0.2 מ"ג/מ"ל, דילול בטחונות; PE-conjugated, 0.2 מ"ג/מ"ל, דילול מטריים) במשך 30 דקות בחושך.
  4. עבור ניתוח qPCR של ציטוקין בביטוי הגן על ידי תאים, להפעיל את התאים עם צלחת מכורך אנטי-CD3e (3 μg/mL) (precoating את הצלחת כפי שמתואר בשלב 1.3). ב-3 שעות לאחר הגירוי, לקצור את התאים כדי לבודד הכולל RNA באמצעות פנול RNA החילוץ ריאגנט להתכונן cDNA qPCR. צבעי יסוד ואת תוכנית המשמש את qPCR מוצגים לוחות 2 ו- 3, בהתאמה.
  5. לניתוח של הפרשת חלבונים ציטוקינים על ידי תאים, restimulate את התאים עם צלחת מכורך אנטי-CD3e (3 μg/mL) במשך 24 שעות ביממה (precoating את הצלחת כפי שמתואר בשלב 1.3). הקציר התרבות תא supernatant IL-17 ו- GM-CSF אליסה לקביעת ריכוזים שלהם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תאי CD4 + T נאיבי מבודד שני בן שבוע 8 זכר C57BL/6 עכברים חולקו לשלושה חלקים. חלק אחד של התאים היה הבדיל לתאי THGM בעקבות הפרוטוקול המתואר. בחלק אחר היה תרבותי בתנאי THGM בנוכחות נוגדן anti-IL-4 (10 µg/mL) כדי לבחון את השפעת המצור IL-4 הבידול של THGM. החלק האחרון היה תרבותי בתנאי בידול 17 TH(3 µg/mL anti-CD3e נגד µg/mL 1-CD28..., 10 ננוגרם למ"ל TGFβ, 30 ננוגרם למ"ל IL-6, 10 µg/mL anti-IFNγ, µg 10/mL אנטי-IL-4). אחרי 3 ימים של בידול, התאים היו קוצ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כאן אנחנו תיאר פרוטוקול בידול THGM במבחנה מתאי תמים CD4 + עכבר, ואחריו ניתוח של התאים הבדיל כדי לאמת את השיטה. ראוי לציין, הן הטחול ובלוטות הלימפה יכול לשמש עבור תמים CD4 + תא T טיהור ובידול THGM. הביטוי ציטוקין נקבעים על-ידי ציטוקינים תאיים מכתים בשילוב עם cytometry זרימה הראה כי כ-55% של התאים היו המושרה להיות GM-CSF-הבעת ' התאים בתנאי THGM (איור 1 א'). בהשוואה לתאי THבידול 17 בתנאי, התאים הבדיל בתנאי THGM הכלולים לרמת הרקע או...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי מענקים באוניברסיטה הלאומית לבריאות מערכת של סינגפור (T1-2014 Oct-12 ו T1-2015 Sep-10).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
RPMI 1640BiowestL0500-500
גדימומת בחוםFBS-HI-12A
פניצילין-סטרפטומיציןGibco15140122
10x PBSבסיס ראשוןBUF-2040-10מדולל ל-1x PBS במים סטריליים
EDTAבסיס ראשוןBUF-1053-100ml-pH8.0
10x מאגרACKBiolegend420301מדולל במים סטריליים
מסננת תאיםSPL מדעי החיים93070
CD4 מיקרו-חרוזיםMiltenyi Biotec130-049-201
2-MercaptoethanolSigmaM7522
עמודת LSMiltenyi Biotec130-042-401
מעמד מגנטיMiltenyi Biotec130-042-303
מזרק 1 מ"לTerumoSS+01T
צנטריפוגהאפנדורףאפנדורף 5810R
סוני SY3200סדרן תאים Sony Sony SY3200 ממיין תאים
Corning352054
24 באר צלחת תרבית תאיםGreiner Bio-One662160
נגד עכבר CD4 PerCP-eFluor 710eBioscience46-0041-82
PE מצומד נגד עכבר CD25 (IL-2Ra, p55)eBioscience12-0251-82
אנטי אדם/עכבר CD44 APCeBioscience17-0441-82
נגד עכבר CD62L FITCeBioscience11-0621-85
תא ספירה משופר נויבאוארMarienfeld640010
Hyclone Trypan Blue SolutionGE healthcare Life SciencesSV30084.01
מיקרוסקופניקון Nikon Elipse TS100
Purified  CD3e  נגד עכבר; נוגדןBiolegend100314
אוגר מטוהר נגד עכבר CD28BD Biosciences553295
חולדה מטוהרת  IFN&gamma נגד עכברים;  eBioscience16-7312-85
נוגדן IL-4 מטוהר נגד עכברBiolegend504102
עכבר רקומביננטי IL-7 חלבוןR& מערכת D407-ML
רקומביננטי אנושי TGF-betaR& D system240-B-010
PMAMerck Millipore19-144
IonomycinSigmaI0634
GolgiPlug מעכב הובלת חלבוןBD Biosciences51-2301KZ
קיבוע תוך תאי & סט מאגר פרמיביליזציהeBioscience88-8824-00
אנטי עכבר GM-CSF PEeBioscience12-7331-82
FITC נגד עכבר IL-17ABiolegend506908
APC נגד עכבר IFN-gammaBiolegend505810
GO Taq qPCR מאסטר מיקסPromegaA6002
עכבר GM-CSF ELISA Ready-SET-Go!invitrogen88-7334-88
עכבר IL-17A ללא יציאה ELISAinvitrogen88-7371-22
FBS 50 מ"ל צינור צנטריפוגה חרוטי גריינר ביו-וואן 210261 15 מ"ל צינור צנטריפוגה חרוטי גריינר ביו-וואן 188271 FACS

מקורות

  1. Zhu, J., Paul, W. E. CD4 T cells: fates, functions, and faults. Blood. 112, 1557-1569 (2008).
  2. Kara, E. E., et al. Tailored immune responses: novel effector helper T cell subsets in protective immunity. PLoS Pathogens. 10, e1003905(2014).
  3. Bou Nasser Eddine, F., Ramia, E., Tosi, G., Forlani, G., Accolla, R. S. Tumor Immunology meets...Immunology: Modified cancer cells as professional APC for priming naive tumor-specific CD4+ T cells. Oncoimmunology. 6, e1356149(2017).
  4. Dong, C. TH17 cells in development: an updated view of their molecular identity and genetic programming. Nature Reviews. Immunology. 8, 337-348 (2008).
  5. Korn, T., Bettelli, E., Oukka, M., Kuchroo, V. K. IL-17 and Th17 Cells. Annual Review of Immunology. 27, 485-517 (2009).
  6. Sheng, W., et al. STAT5 programs a distinct subset of GM-CSF-producing T helper cells that is essential for autoimmune neuroinflammation. Cell Research. 24, 1387-1402 (2014).
  7. Codarri, L., et al. RORgammat drives production of the cytokine GM-CSF in helper T cells, which is essential for the effector phase of autoimmune neuroinflammation. Nature Immunology. 12, 560-567 (2011).
  8. El-Behi, M., et al. The encephalitogenicity of T(H)17 cells is dependent on IL-1- and IL-23-induced production of the cytokine GM-CSF. Nature Immunology. 12, 568-575 (2011).
  9. Ivanov, I. I., et al. The orphan nuclear receptor RORgammat directs the differentiation program of proinflammatory IL-17+ T helper cells. Cell. 126, 1121-1133 (2006).
  10. Zhang, J., et al. A novel subset of helper T cells promotes immune responses by secreting GM-CSF. Cell Death and Differentiation. 20, 1731-1741 (2013).
  11. Croxford, A. L., Spath, S., Becher, B. GM-CSF in Neuroinflammation: Licensing Myeloid Cells for Tissue Damage. Trends in Immunology. 36, 651-662 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

GM T HelperCD4 TGM CSFPCRELISA
במבחנה הבידול של העכבר גורם גרנולוציט-מקרופאג-המושבה-מגרה (GM-CSF)-הפקת תאי T Helper (THGM)
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.