אנו מתארים את השימוש השתלת תא גזע hematopoietic (HSCT) כדי להעריך את פוטנציאל ממאיר של תאים מהונדסים גנטית hematopoietic. HSCT שימושית לצורך הערכת שונים תאים ממאירים hematopoietic ויוו , כמו גם יצירת קבוצה גדולה של עכברים עם תסמונות myelodysplastic (MDS) או לוקמיה להעריך טיפולים חדשניים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
השימוש השתלת תא גזע Hematopoietic להעריך את מקורם של התסמונת המיאלודיספלסטית
במאמר זה
סיכום
תקציר
תסמונות Myelodysplastic (MDS) הם קבוצה מגוונת של תא גזע hematopoietic הפרעות המוגדרות על-ידי hematopoiesis לא יעילה, cytopenias דם היקפיים, דיספלסיה, נטייה לשינוי כדי לוקמיה חריפה. העכברים הטרנסגניים NUP98-HOXD13 (NHD13) מסכם את הדברים MDS האנושי במונחים של דם היקפיים cytopenias דיספלזיה, טרנספורמציה כדי לוקמיה חריפה. אנחנו בעבר הראו כי MDS יכול להיות מועבר מן עכבר מהונדסים עם MDS פראי-סוג הנמענים על-ידי משתילים MDS תאים במח העצם nucleated (BMNC). יותר מבין בבירור את התא MDS ממוצא, פותחו גישות להשתיל ספציפי, immunophenotypically מוגדרת hematopoietic קבוצות משנה. במאמר זה, אנו מתארים את תהליך בידוד משתילים אוכלוסיות ספציפיות של גזע hematopoietic, ובתאים. בעקבות ההשתלה, נתאר גישות כדי להעריך את היעילות של השתלת ויכולת ההתמדה של התאים MDS התורם.
מבוא
תסמונות Myelodysplastic (MDS) מייצגים קבוצה מגוונת של הפרעות במחזור הדם המשובטים מאופיין hematopoiesis לא יעילה, ראיות מורפולוגיות של דיספלסיה, נטייה לשינוי לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML)1,2 3, ,4. Hematopoiesis לא יעיל מזוהה כמספר מעצר ההבשלה במח העצם, ותוצאות דם היקפיים cytopenias למרות במקרי מח עצם1,3. השכיחות של MDS הוערך בדרכים שונות כמו 2-12 מקרים לכל 100,000 אנשים מדי שנה בארצות הברית, השכיחות של MDS עולה עם הגיל, שהופך את תנאי חשוב להבין לאור הזדקנות האוכלוסייה בארה ב
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
בעלי חיים בהליכים המתוארים במאמר זה אושרו על-ידי המכון הלאומי לסרטן ב Bethesda חיה אכפת והוועדה שימוש ולאחר לציית למדיניות הנכלל מדיניות שירות בריאות הציבור על טיפול אנושי, שימוש של חיות מעבדה, חוק צער בעלי חיים, המדריך עבור טיפול והשתמש של חיות מעבדה.
1. תא הכנה
- מח עצם האיסוף nucleated תא (BMNC)
- השתמש רק סטרילי חומרים. לחטא כלי שמיש מחדש באמצעות של תא לחץ אדים. לרכוש את מחטי מזרקים, וואר פלסטיק במיכלים סטריליים לשימוש יחיד. ביצוע מניפולציות כל חיה ותא Class II, סוג A2 הקבינט בטיחות ביולוגית.
- להכין BMNCs ב mL 14 סיבוב התחתית התחתונה המכיל 3 מ"ל של HF2 (של האנק מאוזנת תמיסת מלח בתוספת 2% סרום שור עוברית). ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אנו מראים דמויות נציג עבור התוצאות של מספר ניסויים. איור 1 מראה של cytometry זרימה נציג מיון הניסוי. במהלך התמיינות hematopoietic נורמלי, כמו התאים להיות מחויבים שושלת hematopoietic ספציפיים, הם רוכשים מגדיר-שושלת היוחסין סמני פני שטח התא, לאבד את פוטנציאל התחדשות עצמית. לכן, בעכברים פראי-סוג, התחדשות עצמית בתאי גזע מוגבל BMNC היוחסין-שלילי. בניסוי זה, אנחנו מיון BMNC ממח העצם NHD13 לתאי שושלת היוחסין-חיובית חיובי וגבוה שושלת היוחסין-שלילי, נמוכה. דייב תאים ו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
למרות MDS הפרעה בתאי גזע hematopoietic המשובטים, MDS "גזע", או תאים ייזום, לא עוד היה שאפיינו. אנחנו הפגינו בעבר כי MDS ניתן שיפותחו לעכברים WT באמצעות מח העצם של עכברים NHD13 מאת HSCT, המאופיין האנמיה, לויקופניה, נויטרופניה, ראיות מורפולוגיות של דיספלזיה15. בנוסף, מבחני איכלוס תחרותי מזוהה יתרון צמיחה של תאים ממח העצם NHD13 MDS. ממצאים אלה יחדיו, לרמוז קיומו של גזע MDS או תא ייזום. ניסויים נוספים נמצאים כעת בעיצומו, מכוון זיקוק immunophenotypic את המאפיינים של MDS ייזום תא15
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין לנו לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מגזר תוכנית המחקר של המכון הלאומי לסרטן, מכון הבריאות הלאומי (מענק המספרים זיא SC 010378 ו לפנה ס 010983).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צינור תחתון עגול 14 מ"ל | פלקון | 352057 | |
| תמיסת המלח המאוזנת של האנק | לונזה | 10-527F | |
| נוגדן אנטי-CD45.2 Southern | Biotech | 1800-15 | LOT # A077-T044O |
| 3 מ"ל מזרק | מונו-ג'קט | 8881513934 | |
| מחט 27-G BD | 305109 | ||
| מחט 20-G | BD | ||
| 305176 קוקטייל שושלת | Miltenyi | 130-090-858 | LOT # 5170418221 |
| נוגדנים נגד ביוטין | Miltenyi | 130-113-288 | LOT # |
| 5171109046 1 מ"ל מזרק | Excelint | 26027 | מנורת חימום מזרק אינסולין |
| Thermo Fisher Scientific | E70001901 | ||
| מכונת FACS | Cytec | FACScan | 2 לייזרים, 5 גלאי צבע |
| מכשיר מיון FACS | בקמן קולטר | MOFLO ASTRIOS | 5 לייזרים, 23 פרמטרים, 6 מיון אוכלוסייה בו זמנית |
| Propidium Iodide | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Gamma Irradiator | הטוב ביותר Theratronics | Gammacell 40 | |
| צינור איסוף דם | RAM Scientific | 76011 | |
| נמען עכברים | צ'ארלס ריבר | B6-LY5.1 / Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 עכברים | n/a | C57Bl / 6, CD45.2 | מושבה מתוחזקת בצינור |
| תחתון עגול NIH 5 מ"ל | Falcon | 352058 |
מקורות
- Corey, S. J., et al. Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases. Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).
- Garcia-Manero, G. Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification an....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
