שמר האפייה קינטיקה גידול אקספוננציאלי בתרבות אצווה כדי לנתח את חילוף החומרים הנשימה ואת Fermentative

שמר האפייה צמיחה שימש כלי חשוב כדי לזהות עשרות מנגנונים פיזיולוגיים ומולקולרית. צמיחה נמדד בעיקר על ידי שלוש שיטות: טורי דילולים בדיקות ספוט, המושבה יוצרי יחידת ספירה של עקומות גדילה. שיטות אלה ניתן להשתמש לבד או בשילוב עם מגוון רחב של סובסטרטים, תנאים סביבתיים, מוטציות, כימיקלים לחקור תגובות ספציפיות או פנוטיפים.

נשימה מיטוכונדריאלי היא תהליך ביולוגי שבו קינטיקה גידול יושם בהצלחה על גילוי מנגנוני לא ידוע. במקרה זה, תוספת של צמיחה מדיה עם פחמן בהתססה של מקורות כגון גליצרול, לקטאט או אתנול (אשר הם מטבוליזם באופן בלעדי על ידי נשימה מיטוכונדריאלי), כמו המקור פחמן ואנרגיה הבלעדי מאפשר להעריך הצמיחה בדרכי הנשימה, וזה חשוב. לזהות לפליטת זרחון חמצוני פעילות¹. מצד שני, זה מסובך להשתמש גידול קינטית מודלים כשיטה עבור פיענוח המנגנון מאחורי תסיסה.

המחקר של תסיסה ונשימה מיטוכונדריאלי חיונית כדי להבהיר את המנגנונים המולקולריים מאחורי פנוטיפים מסוימים כגון קרבטרי, ורבורג אפקטים^2,3. האפקט קרבטרי מאופיין על ידי גידול של שטף glycolytic, דיכוי של הנשימה מיטוכונדריאלי, ואת הקמתה של תסיסה כנתיב העיקרי ליצירת ATP בנוכחות ריכוזים גבוהים של בהתססה של פחמימות (> ^4,0.8 מ מ)⁵. ורבורג הוא אנלוגי סמויה על אפקט קרבטרי, כאשר ההבדל בכך בתרבית של תאים, המוצר העיקרי של תסיסה הוא לקטט⁶. אכן, ורבורג מוצגת על ידי מגוון של תאים סרטניים, מפעילה ספיגת הגלוקוז וצריכת אפילו בנוכחות חמצן⁷. ובכך, ללמוד את הבסיס המולקולרי של המתג של נשימה כדי תסיסה האפקט קרבטרי יש גם השלכות ביוטכנולוגי (לייצור אתנול) וגם השפעות אפשריות בחקר הסרטן.

Cerevisiae ס הצמיחה עשויה להיות כלי מתאים כדי לחקור את ההשפעות קרבטרי, ורבורג. הרעיון זה מבוסס על העובדה כי בשלב מעריכי שמרים, משעולים המרכזי שימוש להפקת ATP הם נשימה מיטוכונדריאלי, תסיסה, המהווה מרכיב חיוני כדי לקיים את הצמיחה. למשל, הצמיחה של cerevisiae בצורה אינטימית קשורה הפונקציה של מסלולים ליצירת ATP. במולקולות cerevisiae ס, מ- ATP מייצרת כ 18 מיטוכונדריאלי נשימה לכל מולקולת גלוקוז, ואילו תסיסה יחולל רק 2 מולקולות ATP, ומכאן הוא צפוי כי קצב הגידול יש קישורים הדוקים עם משעולים חילוף החומרים הפקת ATP⁸. בהקשר זה, כאשר המסלול העיקרי ליצירת ATP תסיסה, השמרים מפצה על ייצור ATP נמוכה על-ידי הגברת קצב ספיגת הגלוקוז. להפך, צריכת הסוכר על ידי תאי שמרים להשתמש נשימה מיטוכונדריאלי כמקור ATP העיקרי הוא נמוך. אפשרות זו מציינת כי חשוב עבור השמרים ל הגיוני פחמימות זמינות לפני קביעת איך ייווצר ATP. לכן, זמינות גלוקוז ממלא תפקיד חשוב ב הבורר בין תסיסה ונשימה מיטוכונדריאלי ב cerevisiae ס. בנוכחות כמויות גבוהות של גלוקוז, מעדיף השמרים תסיסה כמו הנתיב המרכזי ליצירת ATP. מעניין, השמרים הוא החימוץ, קצב הגידול הספציפי נשמר מקסימום שלה. מצד שני, תחת רמות נמוכות של גלוקוז, cerevisiae ס מייצרת ATP באמצעות נשימה מיטוכונדריאלי, שמירה על שיעורי הצמיחה נמוכה. ובכך, וריאציה בריכוז של גלוקוז ושימוש של מקורות פחמן אחרים לגרום שינויים בהעדפות של השמרים בין צמיחה fermentative, מערכת הנשימה. מאת לוקח בחשבון את העובדה הזו עם המשוואה גידול אקספוננציאלי, הוא יכול להשיג את המשמעות הביולוגית של קינטי פרמטרים כגון הכפלת זמן (Dt) ושיעור צמיחה ספציפיים (ממוצע). לדוגמה, ערכים נמוכים יותר ממוצע נמצאו כאשר השמרים משתמש נשימה מיטוכונדריאלי כנתיב העיקרי. להפך, בתנאים טובה תסיסה, נמצאו ערכים ממוצע גבוהים יותר. מתודולוגיה זו עשוי לשמש כדי למדוד את המנגנונים סביר של כל כימיקלים המשפיעים על תסיסה ונשימה מיטוכונדריאלי ב cerevisiae ס.

מטרת מאמר זה היא להציע שיטה המבוססת על צמיחה קינטיקה לסינון את ההשפעות של תרכובת/חומר נתון על נשימה מיטוכונדריאלי או תסיסה.

1. תרבות המדיה והכנות Inoculum

1. להכין 100 מ של 2% תמצית-peptone-dextrose (YPD) שמרים בינוני נוזלי (להוסיף תמצית 1 גר' שמרים, 2 גר' קזאין peptone, ו- 2 גר' גלוקוז ל 100 מ של מים מזוקקים). לוותר על 3 מ"ל של המדיה לתוך צינורות חרוט sterilizable 15 mL. אוטוקלב התקשורת למשך 15 דקות ב 121 מעלות צלזיוס ו 1.5 psi.
   הערה: המדיה ניתן לאחסן עד לחודש ב 4 – 8 ° c
2. לחסן צינור חרוטי מלא עם 3 מ ל מרק YPD 2% סטרילי מגניב עם μL 250 תאים cerevisiae ס המשומרים גליצרול ב-20 ° C. דגירה בין לילה שייקר מסלולית ב 30 ° C עם עצבנות-200 סל ד.
3. פס צלחת פטרי (60 x 15 מ מ²) מלא עם אגר YPD 2% סטרילי (להוסיף 10 גרם של שמרים לחלץ, 20 גר' קזאין peptone, 20 גר' גלוקוז, ו- 20 גרם של אגר בקטריולוגית 1,000 מ של מים מזוקקים) עם תאי גדל בצינור חרוט באמצעות לולאה סטרילי. דגירה הפטרי ב 30 ° C עד מושבות המבודד מראים צמיחה.
4. להכין את inoculum מראש על-ידי מזריקים מושבה מבודד יחיד לתוך צינור חרוטי מלא עם 10 מ ל מרק YPD 2% סטרילי מגניב, דגירה אותו בן לילה ב 30 ° C עם עצבנות רציפה ב 200 סל ד.

2. תרבות ומדיה עקומות גדילה ב- Microplate

1. הכינו 10 מ ל מרק YPD 1% (להוסיף תמצית 0.1 גר' שמרים, 0.2 גר' peptone, ו- 0.1 גר' גלוקוז 10 מ של מים מזוקקים), 10 מ ל מרק YPD 2% (להוסיף תמצית 0.1 גר' שמרים, 0.2 גר' peptone, ו- 0.2 גר' גלוקוז 10 מ של מים מזוקקים) , ו- 10 מ ל 10% YPD מרק (להוסיף תמצית 0.1 גר' שמרים, 0.2 גר' peptone, ו 1 גר' גלוקוז 10 מ של מים מזוקקים). אוטוקלב אלה מדיומים צמיחה למשך 15 דקות ב 121 מעלות צלזיוס ו 1.5 psi.
   הערה: המדיה תרבות משמש פקד של צמיחה fermentative.
2. להכין 10 מ ל 2% שמרים תמצית-peptone-אתנול (לסוג) מרק 10 מ ל 2% שמרים תמצית-peptone-גליצרול (YPG) מרק. 2% לסוג: להוסיף 0.1 גר' שמרים לחלץ, 0.2 גר' peptone, ו- 0.2 מ"ל אתנול ל 10 מ ל מים מזוקקים. 2% YPG: להוסיף תמצית 0.1 גר' שמרים, 0.2 גר' peptone, ו- 0.2 מ"ל של גליצרול 10 מ של מים מזוקקים. אוטוקלב אלה מדיומים צמיחה למשך 15 דקות ב 121 מעלות צלזיוס ו 1.5 psi.
   הערה: גליצרול ואתנול הם מקורות פחמן בהתססה של זה הן מטבוליזם באופן בלעדי על ידי נשימה מיטוכונדריאלי. מסיבה זו, הם משמשים כפקדי גידול בדרכי הנשימה. בשלב זה, ניתן לשנות את סוג ואת ריכוז פחמן מקור של תרבות המדיה כדי לבחון את ההשפעה על פנוטיפ צמיחה באמצעות שמרים תמצית-peptone (YP) מרק (10 גרם של תמצית שמרים וכ 20 גר' קזאין peptone ב 1,000 מ ל מים מזוקקים) כבסיס. כדי לבדוק את ההשפעות של מזינים אחרים מלבד פחמן, סינתטי מלא בינוני (SC) הוא בתוספת לפי מטרת הניסוי. הבסיס SC בינוני הוא 1.8 גרם שמרים חנקן הבסיס ללא חומצות אמינו, 5 g של אמוניום סולפט [(NH₄)₂אז₄], 1.4 גרם מונוסודיום פוספט (NaH₂PO₄), 2 גר' הנשירה לערבב 1,000 מ ל מים מזוקקים. תוספת התקשורת עם מקור פחמן, חנקן נוספים מקור בבית הריכוזים הדרוש.
3. להוסיף μL 145 מתאימים תרבות התקשורת על עיצוב ניסיוני כל טוב של microplate סטרילי (10 x 10-טוב) עם מכסה, לחסן אותם עם μL 5 של inoculum מראש.
   הערה: אם המטרה היא למסך את השפעת חומרים/תרכובות על חילוף החומרים האנרגטי של השמרים, החומר/המתחם צריך להוסיף במהלך שלב זה. בנוסף, כל סוג של microplate עם מכסה צריך להיות שימושי.
4. דגירה את הצלחת רב טוב בקורא microplate ב 30 ° C עם עצבנות מתמדת על סל ד 200 עבור 48 ה מדד הצפיפות האופטית (OD)-600 nm כל 30 או 60 דקות.
   הערה: אם הקורא microplate אין אפשרות דגירה של microplate, זה עשוי להיות מודגרות ב שייקר מסלולית-באותם התנאים בין כל מדידה של OD.

3. עקומות גדילה מזועזעת מבחנות חרוט

1. להוסיף 4.8 מ של התקשורת תרבות מתאימים מבחנות חרוט 20 מ"ל של החיטוי. לחסן כל הבקבוק עם 200 μL של התרבות inoculum טרום-OD_600nm ~ 2 במרק YPD 2% מגניב, סטרילי. דגירה אותם ב 30 ° C עם עצבנות מתמדת-250 סל"ד במשך 24 שעות ביממה.
   הערה: אם תקופת הדגירה הוא גבוה יותר מאשר 24 שעות ביממה, להוסיף 12 מ של התקשורת תרבות מתאימים מבחנות חרוט 50 מ ל, תא לחץ. לחסן אותם עם 500 μL של inoculum מראש. חשוב גם לקחת בחשבון פקדי צמיחה fermentative (מדיה YP עם 1%, 2% או 10% גלוקוז) ופקדי צמיחה הנשימה (YP מדיה עם 2% גליצרול או אתנול).
2. קח 100 μL של התרבות הבקבוק חרוט מזועזעת למהול אותו ב- 900 μL של מים מזוקקים ב cuvette ספקטרופוטומטרים 1 מ"ל ו לערבב בעדינות על ידי pipetting. למדוד את יתר על 600 nm באמצעות ספקטרופוטומטרים כל שעתיים. כדי לקבל את יתר אמיתית, הכפל את התוצאה ב-10.

4. עיבוד נתונים וחישוב פרמטרים קינטי

1. צור קובץ פרוייקט חדש בתוכנה סטטיסטית החבילה. בסעיף של "טבלה חדשה, גרף", בחר באפשרות "XY" .
   1. בחר באפשרות: "התחל עם טבלת נתונים ריק" במדור "נתונים לדוגמה" .
   2. בחר את סוג הגרף "נקודות, קו מחבר" . להשאיר את הסעיף "X" נבחר בקטע של "Subcolumns משכפל או ערכי שגיאה" ובחרו ב- "Y" סעיף האפשרות: "הזן ערכים שכפל (10) לצד subcolumns, עלילה Mean ו SD שגיאה". לחץ על לחצן צור.
      הערה: עיצוב הטבלה יש עמודה אחת X ו Y מספר עמודות, ולכל אחד יש subcolumns 10 שבחרת בעבר.
2. כתיבה הזמן-OD אשר נלקחו מידות בעמודה X (למשל, 0, 30, 60, 90 דקות או 0, 1, 1.5, 2 h). בעמודות Y, לכתוב את הערכים OD המתקבל התרבויות.
3. לזהות את שלב הגידול המעריכי להפוך הנתונים של עמודת Y לוגריתמים. לחץ על לחצן 'נתח' , בחר את הניתוח "להמיר" , בחר ערכי Y באמצעות Y = Log(Y). ללכת "גלריה של תוצאות", בחר "להמיר" טבלת נתונים, לחץ על לחצן 'נתח' , ובחרו את הניתוח "רגרסיה לינארית" . לא לכלול את הערכים OD אחרי התנהגות ליניארי. כדי לא לכלול ערכים, בחר אותם בטבלה נתונים והקלד "Ctrl + E.
   הערה: חשוב לא לכלול את הערכים אחרי השלב מעריכי מאז המשוואה הגידול האקספוננציאלי משתלב היטב שלב מעריכית.
4. 'גלריית טבלאות נתונים', בחר את טבלת הנתונים "נתונים 1". לחץ על לחצן 'נתח' ובחרו את ניתוח "רגרסיה לא ליניארית (עקומת התאמה)" בין הניתוחים"XY".
5. בחר ערכות הנתונים כדי לנתח, ולחץ על הלחצן "אישור" . בכרטיסיה "מתאים" בחר בסעיף "משוואה מעריכית" ובחר "צמיחה אקספוננציאלית משוואה" (, כאשר X הוא ריכוז תא, X₀ הוא התא ריכוז בזמן אפס, μ הוא שיעור צמיחה ספציפיים ו- t הוא הזמן). להשתמש את "שיטת הריבועים הפחותים מתאים" כשיטה התאמה ולהשאיר שלא נבחרו בסעיף interpolate. לחץ על הלחצן "אישור" .
   הערה: הכרטיסיה עם התוצאות בכושר לא לינארית היא "גלריה של תוצאות". התוכנה מחשבת ההכפלה (Dt) וזמן ספציפי שיעור הצמיחה (μ). התוכנה מציגה μ כמו K בכרטיסיה ' תוצאות '.
6. פתח קובץ פרוייקט חדש, ובחר במקטע "טבלה חדשה, גרף" , הבחירה עמודה. בחר את האפשרות "התחל עם טבלת נתונים ריק" , בחר את התרשים הרצוי. לבחור מגרש הממוצע עם SD. בחר לחצן "צור" .
7. העתק את μ או ערכים Dt מהכרטיסיה תוצאות בכושר לא לינארית כי הוא "גלריה של תוצאות" ולהדביק אותם בעמודה. לבסוף, בחר בלחצן ' 'נתח' ' ובחרו ' הניתוח הרצוי בסעיף "טור ניתוחים" כדי להשוות את הפרמטרים קינטי של התנאים nutrimental שונים.
   הערה: הפרמטרים קינטי המתקבל הפקדים צמיחה fermentative (מדיה YP עם 1%, 2% או 10% גלוקוז) ומסייע צמיחה הנשימה פקדים (YP מדיה עם 2% גליצרול או אתנול) להקים את הסף של fermentative ו מיטוכונדריאלי הנשימה בהתאמה. השוואת קינטי את הפרמטרים מצב תזונתי, חומר/מתחם לבדיקה עם הגידול בדרכי הנשימה, fermentative לסייע בזיהוי להשפעה אפשרית על חילוף החומרים בדרכי הנשימה או fermentative.

עקומות גדילה יכול לשמש preliminarily להפלות בין פנוטיפים הנשימה ו fermentative ב ס cerevisiae השמרים. לכן, ביצענו תרבויות אצווה של cerevisiae ס (BY4742) עם ריכוזי גלוקוז שונים דווח כי כדי לגרום לצמיחה fermentative: 1%, 2% ו- 10% (w/v)9. תרבויות מציג הפנוטיפ fermentative שלב פיגור קטן ויש שלב מעריכית עם שיעור צמיחה גבוה (איור 1). אתנול, גליצרול ו לקטט הן מקורות פחמן יכול להיות מטבוליזם רק דרך נשימה; לפיכך, אנו לבצע תרביות של השמרים באמצעות אותם מקורות פחמן. תרבויות להשיג אנרגיה בעיקר על ידי זרחון חמצוני הראה עוד שלב ההשהיה וקצב איטי של צמיחה במהלך שלב מעריכית (איור 2).

ניתוח של עקומות גדילה מספקת מידע איכותי בלבד; לפיכך, חשוב לחשב את הפרמטרים קינטי להשיג מידע כמותי. נוכל לחשב את Dt ואת μ באמצעות המשוואה הגידול המעריכי (איור 3). קבענו סף עבור ערכים צמיחה הנשימה ב Dt ≥11.5 μ ו h ≤0.059 קמ. הסף לצמיחה fermentative הוגדר ב Dt ≤6.5 μ ו h ≥0.149 / h (איור 3).

כדי להוכיח את התועלת של כלי סינון זה עיצבנו 3 ניסויים, עם הראשון להערכת השפעת ריכוזים שונים רזברטרול (RSV) על תאים BY4742 cerevisiae ס עם מצב אנרגטי שונה (איור 4) ב מבחנות מזועזעת. הניסוי השני שמטרתו לזהות את השפעת ריכוזים שונים אמוניום סולפט (NH4+) על חילוף החומרים האנרגיה של cerevisiae ס BY4742 (איור 5) ב microplate. לבסוף, השלישי שמטרתם להמחיש כמה שינויים במקור פחמן משפיעים על הצמיחה fermentative לשניים שונים זנים cerevisiae ס (W303 ותעשייתיות WLP530 שימשו התסיסה הבירה) (איור 6). בניסוי באמצעות RSV, המצב האנרגטי תא שונתה על ידי משתנה ריכוז הגלוקוז. גלוקוז 10%, ריכוז RSV כל נבדק לא שינתה את השלב respiro-fermentative של השמרים אך להקטין את שלב הנשימה (במהלך משמרת diauxic, cerevisiae ס מטבוליזם של אתנול שהופק במהלך שלב מעריכי על ידי זרחון חמצוני). ערכי μ אישר כי בתנאים כל נבדק, cerevisiae ס הראו התנהגות fermentative, בניגוד שלה פנוטיפ כאשר גדל ב- 2% גליצרול (תנאי שימוש בפקד הנשימה) (איור 4a). כאשר התאים היו אנרגיה עם גלוקוז 1% בלבד, ערכי μ אישר כי ב 0.1 1, 10, 100 מיקרומטר RSV, התנהגות fermentative בשלב respiro-fermentative לא הושפע. עם זאת, נצפתה ירידה בשלב הנשימה במהלך משמרת diauxic. יתר על כן, על ריכוז של 1,000 מיקרומטר, RSV עכבות לחלוטין צמיחת תאים.

בניסוי השני, היו תאים בתוספת 10% גלוקוז, ריכוז נחשב מספיק כדי לגרום את אפקט קרבטרי cerevisiae ס. לפיכך, אנחנו יכולים לצפות באפקט קידמו את תוספת של ריכוזים שונים של NH4+ fermentative חילוף החומרים. ערכי Dt הציע את 0.13 0.66, 1.99% NH4+ טובה fermentative חילוף החומרים, זה יכול להיות שנצפו בעקומות גדילה ריכוזים אלה מורחב שלב מעריכית של התרבות. בכל זאת, מ"מ 3.31% NH4+, תוספת קבועה בערך Dt הראו כי ריכוז זה המניע של חילוף החומרים respiro-fermentative. פנוטיפ זה הראה שלב השהיה ממושכת עקומות גדילה, קצב צמיחה איטי בשלב מעריכית (איור 5).

בניסוי השלישי, תאים של שניים שונים זנים cerevisiae ס (W303 ו- WLP530) גדלו בריכוזים שונים של סוכרוז או גלקטוז כדי לבדוק אם ההשפעות של מקור פחמן על הערכים Dt תלויי-מתח. כפקד fermentative, שני זנים גדלו ב- 2% גלוקוז, חושבו הערכים Dt כדי לקבוע סף לצמיחה fermentative. Fermentative Dt ערכים עבור הזנים היו שונים, עם ≤3.25 h עבור זן W303 ו≤6.84 h עבור WLP530 המתח. לכן, חשוב להדגיש את הצורך אימות הסף Dt עבור זנים שונים בשימוש. יתר על כן, כאשר סוכרוז שימש כמקור פחמן, הפנוטיפ fermentative נצפתה על 2%-10% לשני הזנים. עם זאת, כאשר שימש גלקטוז, המתח W303 לא הופיע התנהגות fermentative בכל אחד הריכוזים נבדק, בעוד המתח WLP530 הראה הפנוטיפ fermentative ב 2% גלקטוז מעניין, המתח W303 גדלו כל הריכוזים של שני מקורות פחמן נבדק. למרות המתח WLP530 לא הראה צמיחה-הריכוז הנמוך ביותר של פחמן בשימוש (0.01%). זה עשוי להיות מכיוון WLP530 משמש בתעשיית הבירה ריכוזי הפחמן שאליו הוא נחשף הם בדרך כלל הרבה יותר גבוה (איור 6).

בסך הכל, הנתונים מכל אלה 3 ניסויים להוכיח כי עקומות גדילה ופרמטרים קינטי שימושיים האפליה ראשונית בדרכי הנשימה של fermentative צמיחה ב cerevisiae ס. כמו כן, חשוב להדגיש שזהו כלי רב-תכליתי עשוי לשמש בהיבטים שונים של מחקר חילוף החומרים אנרגיה.

איור 1: השפעת ריכוז גלוקוז שונים על פנוטיפ צמיחה cerevisiae ס . עקומות גדילה נבנו על ידי מדידת צפיפות אופטית על 600 nm כל 30 דקות במשך 48 שעות. כאשר תאים cerevisiae ס תסיסה, תרבויות הראה שלב השהיה קצרה בעלת קצב צמיחה מהיר במהלך שלב מעריכית. השלב respiro-fermentative יכול להיות בעקבות צמיחה ההאטה שלב (שלב הנשימה), שבו האתנול המיוצר על ידי התססה עובר מטבוליזם באמצעות מסלול זרחון חמצוני, ואז הגיע השלב נייח. הנתונים מוצגים כמו השגיאה הסטנדרטית זאת אומרת ±. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2: השפעת מקורות פחמן respirable על פנוטיפ צמיחה cerevisiae ס . עקומות גדילה נבנו על ידי מדידת צפיפות אופטית על 600 ננומטר בכל 30 דקות עבור ה 48 תאים של cerevisiae ס הראה השהיה ממושכת שלב בעלת קצב צמיחה איטי במהלך שלב מעריכית, בדרך כלל לא הראתה שינוי diauxic. הנתונים מוצגים כמו השגיאה הסטנדרטית זאת אומרת ±. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3: השפעת המקור פחמן, הריכוז שלו על פרמטרים קינטי cerevisiae ס . () Dt ערכים של cerevisiae ס BY4742 צמיחה תחת מקורות פחמן שונות; (b) ערכי μ צמיחת BY4742 cerevisiae ס תחת ריכוזים שונים של מקורות פחמן מגוונות. הנתונים מוצגים כמו הממוצע ± סטיית התקן. ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות ANOVA בכיוון אחד ואחריו המבחן של Dunnett (*p < 0.01 לעומת 2% גלוקוז). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 4: השפעת תוספי resveratrol על מצבי אנרגיה שונים תא. () צמיחה פנוטיפ וערכי μ באמצעות גלוקוז 10%; (b) צמיחה פנוטיפ μ וערכי בגלוקוזה 1%. נתונים עקומות גדילה מוצגים כמו השגיאה הסטנדרטית זאת אומרת ±, ערכי μ מוצגים כמו הממוצע ± סטיית התקן. ניתוחים סטטיסטיים עבור ערכי μ בוצעו באמצעות ANOVA בכיוון אחד ואחריו המבחן של Dunnett [*p < 0.01 vs. בקרת הנשימה עם 2% גליצרול (RC)]. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 5: השפעת תוספי אמוניום סולפט על חילוף החומרים של אנרגיה cerevisiae ס . עקומות גדילה נבנו על ידי מדידת צפיפות אופטית על 600 nm כל 30 דקות במשך 48 ה נתונים עקומות גדילה מוצגים כמו השגיאה הסטנדרטית זאת אומרת ±, ואת ערכי μ מוצגים כמו הממוצע ± סטיית התקן. ניתוחים סטטיסטיים עבור ערכים Dt בוצעו באמצעות ANOVA בכיוון אחד ואחריו המבחן של Dunnett [* p < 0.01 vs. בקרת הנשימה עם 2% גליצרול (RC)]. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 6: השפעת ריכוז גלקטוז וסוכרוז בחילוף החומרים fermentative של האפייה. () Dt ערכים עבור W303 זן ו- (b) Dt בערכי lab לזן תעשייתי של WLP530. הנתונים מוצגים כמו הממוצע ± סטיית התקן. ניתוחים סטטיסטיים עבור ערכים Dt בוצעו באמצעות ANOVA בכיוון אחד ואחריו המבחן של Dunnett [* p < 0.01 לעומת 2% גלוקוז (פקד fermentative)]. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

המחברים אין לחשוף.