מאמר שיטה

הערכה מקיפה של היעילות והבטיחות של משלוח סמים, ממוקדות השליה באמצעות שלוש שיטות משלימות

DOI:

10.3791/58219

⸱

10 בספטמבר 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences, 2College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, 3Key Laboratory of Chemical Engineering Process and Technology for High-efficiency Conversion, College of Chemistry and Material Sciences, Heilongjiang University, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Wayne State University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

נתאר מערכת אשר מנצל שלוש שיטות כדי להעריך את הבטיחות והיעילות של תרופות ממוקדות השליה: ויוו הדמיה כדי לפקח nanoparticle הצטברות, אולטרסאונד בתדירות גבוהה כדי לעקוב אחר ההתפתחות העוברית של היפרדות , ו- HPLC לכמת משלוח סמים לרקמות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אין טיפולים יעילים כיום קיימים סיבוכים הקשורים השליה הריון, לפתח אסטרטגיות למסירה יישוב של סמים טבור תוך מזעור תופעות לוואי עוברית אימהי נותר מאתגר. ננו-חלקיק יישוב נושאות מספקים הזדמנויות חדשות לטיפול בהפרעות היפרדות. לאחרונה להדגים כי פפטיד איגוד סינתטי היפרדות כונדרויטין סולפט A (plCSA-BP) יכול לשמש כדי להנחות חלקיקים כדי לספק סמים השליה. ב פרוטוקול זה, נתאר בפירוט מערכת להערכת היעילות של משלוח סמים השליה על ידי BP-plCSA מעסיקה שלוש שיטות נפרד בשילוב: ויוו הדמיה סאונד בתדירות גבוהה (HFUS), ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC). שימוש ב- vivo חלקיקים הדמיה, plCSA BP-מונחה היו דמיינו ב מאחד לשני של בעלי חיים, בעוד HFUS ו- HPLC הדגימו כי plCSA-BP-מצומדת חלקיקים ביעילות, במיוחד נמסר מטוטרקסט השליה. לפיכך, שילוב של שיטות אלה יכול לשמש ככלי יעיל מסירת תרופות השליה יישוב ופיתוח אסטרטגיות טיפול חדש עבור מספר סיבוכים בהריון.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סיבוכים הריון בתיווך השליה, כולל רעלת היריון, אובדן הריון, היפרדות שליה, גיל ההיריון קטנים (מועצת התלמידים), הן נפוצות והפניות ניכר תחלואה עוברית, אימהית, התמותה1,2, 3, ומעט מאוד תרופות הוכחו להיות יעיל בטיפול הריון והפרעות4,5. פיתוח אסטרטגיות עבור משלוח סמים השליה במיקוד סלקטיבי יותר ובטוח יותר במהלך ההריון נותר מאתגר בטיפול התרופה המודרנית.

בשנים האחרונות, מספר דיווחים התמקדו יישוב מסירת תרופות uteroplacental רקמות על ידי ציפוי חלקיקים עם פפטידים או נוגדנים ככלים ממוקדות השליה. אלה כוללים נוגדן6 קולטן (EGFR) גורם הגדילה באפידרמיס-נגד, הגידול-יונת פפטידים (CGKRK ו- iRGD)7, פפטידים, ממוקדות השליה8, פפטידים, ממוקדות להערכת היפרדות9 ונוגדנים נגד אוקסיטוצין קולטן10.

. הנה, נדגים כי פפטיד איגוד סינתטי היפרדות כונדרויטין סולפט A (plCSA-BP) יכול לשמש את משלוח ממוקד של חלקיקים, מטענים הסמים שלהם השליה11... PlCSA-BP-מודרכת ' חלקיקים הם משלים uteroplacental שדווחו מיקוד שיטות משום שהם יעד trophoblast היפרדות.

שיטה לא פולשנית, הדמיה ויוו שימש כדי לפקח על ביטוי גנים ספציפיים השליה עכברים12, וגם indocyanine גרין (ICG) כבר בשימוש נרחב כדי לעקוב אחר חלקיקים באמצעות קרינה פלואורסצנטית הדמיה מערכות13, 14,15. לפיכך, אנו לווריד מוזרק חלקיקים plCSA-BP-מצומדת עמוסה ICG (plCSA-INPs) כדי להמחיש את ההתפלגות plCSA-INP בעכברים בהריון עם imager-ידי קרינה פלואורסצנטית. לאחר מכן אנחנו מוזרק לווריד מטוטרקסט (MTX)-נטענת plCSA-NPs עכברים בהריון. אולטרסאונד בתדירות גבוהה (HFUS), אחרת לא פולשנית, בזמן אמת הדמיה כלי16,17 השתמשו כדי לעקוב אחר התפתחות העובר, היפרדות בעכברים. לבסוף, השתמשנו ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) לכמת MTX ההפצה מאחד לשני, העוברים.

ב פרוטוקול זה, נתאר בפירוט במערכת שלוש-שיטה המשמשת כדי להעריך את היעילות של תרופות ממוקדות השליה nanocarriers plCSA-BP-מודרכת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל עכבר ניסויים בקפדנות אחרי פרוטוקולים (SIAT-IRB-160520-YYS-FXJ-A0232) אושרה על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה של שנג'ן מוסדות של טכנולוגיה מתקדמת, האקדמיה הסינית למדעים.

1. סינתזה של היפרדות כונדרויטין סולפט, ממוקדות A השומנים-פולימר חלקיקים

  1. לסנתז טעון MTX ICG חלקיקים השומנים-פולימר (MNPs ו- INPs בהתאמה) ו- plCSA-BP-מצומדת חלקיקים (plCSA-MNPs ו- plCSA-INPs) כפי שמתואר פירוט במקום18.

2. in vivo הדמיה קרינה פלואורסצנטית

  1. הכנה של עכברים בהריון
    1. מקום CD-1 נקבה עכברים (8-12 שבועות) עם זכר מפרה של המתח אותו בכלוב אחד (זכר: נקבה = 1:2) אחר הצהריים. ואבדוק הנרתיק מחבר הבאות בבוקר. אם פקק הנרתיק הוא ציין, להגדיר את העכבר כמו יום עובריים 0.5 (E0.5).
    2. הבית בהריון עכברים לבד בחדר הפתוגן חינם בעלי חיים עם אור/10 h 14 h כהה מחזור ומספקים גישה חופשית מזון ומים עד E14.5.
  2. חלקיקים תוך ורידיות
    1. לפני ההליך, לעקר חלקיקים על-ידי סינון דרך מסנן מזרק 0.22 μm. שוקלים את העכבר בהריון-E11.5 כדי לקבוע את כמות ונפח של הזרקת nanoparticle.
      הערה: אמצעי האחסון הזרקת ננו-חלקיק צריך להיות פחות מ 1% (משקל/נפח) של משקל הגוף של העכבר בהריון. לדוגמה, האחסון הזרקת ננו-חלקיק צריך להיות פחות מ- 0.25 מ ל עכבר 25 גרם.
    2. להתרחב את הווריד הזנב, לחמם את הזנב למשך 5-10 דקות עם כרית חימום.
    3. לפני זריקה, וארוקן את INPs או plCSA-INPs לתוך מזרק אינסולין 28 גרם.
    4. להעביר את העכבר בהריון מכשיר אחזקות ומרסן את העכבר תוך מתן אפשרות גישה לוריד הזנב. לנקות את הזנב עם ספוגית אלכוהול. לאחר מכן להוסיף את המזרק לווריד הזנב. לאט לאט להחדיר את INPs או plCSA-INPs (5 מ"ג/ק"ג ICG המקביל) גם הלחץ מעל 5-10 s.
      הערה: להפסיק הזרקת שלפוחית המופיע על הזנב כי התוצאה מציין כי אינה המחט בווריד. לא צריך להיות משותף מזרקים בין עכבר כדי למזער העברת מחלות זיהום צולב.
    5. רשום את הזמן הזרקה. בינתיים, להחיל לחץ עדין על ההזרקה עד התחנות דימום, אשר בדרך כלל לוקח s 30-60.
  3. דימות in vivo
    1. 30 דקות לאחר ההזרקה תמונה העכברים בהריון באמצעות פלורסצנטיות ויוו מערכת הדמיה.
    2. עזים ומתנגד עכברים בהריון עם שיעור זרימת החמצן של 1.0 L/min ואיזופלוריין-2-4% ב חדר המשויך של יחידת הרדמה ואמת הרדמה מלאה על ידי איטי ונשימה רגיל. לאחר מכן, להעביר אותם לתוך החדר הדמיה. הצב העכברים בהריון anesthetized לחדר ההדמיה, שמירה על בעלי החיים במצב פרקדן.
    3. הצב קונוס האף מעל הפה והאף כדי לאפשר שאיפת 1-2% איזופלוריין עם שיעור זרימת החמצן של 1.0 L/דקה כדי לשמור על הרדמה.
    4. בחר פרמטרים 2D-זריחה, צילום תמונה את האותות פלורסצנטיות ICG. הגדר את החשיפה אוטומטית על אורכי הגל של עירור/פליטה כדי 710/820 nm.
    5. בסוף ההליך הדמיה, לבטל את זרם איזופלוריין כדי לעצור את ההרדמה, ולחזור בקפידה העכברים בהריון לכלובים.
    6. 48 שעות לאחר ההזרקה ננו-חלקיק, עזים ומתנגד עכברים בהריון עם isofluorane ולאחר מכן להקריב את הסכר על ידי נקע בצוואר הרחם. לאסוף את העוברים ואת מאחד לשני באמצעות מלקחיים Graefe, Graefe רקמות מלקחיים, ולאחר לנתח מספריים.
    7. מקם את מאחד לשני ואת העוברים לתוך תא הדמיה, ואת התמונה באמצעות השיטה המתוארת בשלב 2.3.4.

3. HFUS הערכה של התפתחות עוברית

  1. מודלים בעלי חיים
    1. להשיג ולהכין העכברים בהריון כפי שמתואר בשלב 2.1.
    2. השתמש HFUS כדי התמונה עכברים בהריון-E 6.5 (פרוטוקולים 3.2 ו- 3.3.3). ראשית, לאשר הריון דמיין עוברי ביום E6.5 ולאחר מכן להקצות באופן אקראי העכברים בהריון לשלוש קבוצות: MNP קבוצה, plCSA-MNP, וקבוצת באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS).
    3. להזריק PBS, MNPs או plCSA-MNPs (1 מ"ג/ק"ג MTX שוות ערך) לתוך הוורידים הזנב של העכברים בהריון בכל יום החל מ- E6.5 כפי שמתואר בשלב 2.2.
  2. הכנה הדמיה
    1. 24 שעות לאחר ההזרקה של חלקיקים, תמונה העכברים בהריון באמצעות HFUS את מערכת הדמיה.
    2. עזים ומתנגד העכברים בהריון כפי שמתואר בשלב 2.3.2. הפעל את הפקדים טמפרטורה משולב של פלטפורמת הדמיה ומחממים את הפלטפורמה כדי 37-42 ° C. לאבטח העכברים בהריון במצב פרקדן על פלטפורמה באמצעות הקלטת.
    3. המקום קונוס האף מחובר יחידת הרדמה מעל החוטם. חלות 2% איזופלוריין עם שיעור זרימת החמצן של 1.0 L/דקה כדי לשמור על יציבות הרדמה.
    4. מבחינה כימית להסיר שיער בבטן באמצעות קרם depilatory. למחוק את הקרם שיורית ביסודיות עם גזה ספוגי מים ולאחר מכן מעיל הבטן עם הגיטרה האקוסטית צימוד ג'ל.
  3. הליך הדמיה
    1. מקום 40 מגה-הרץ מתמר זרוע מכנית.
    2. להתאים את מיקום מתמר להשיג תמונות האורך של העובר ואת השליה אזור את עניין ממוקם באזור מוקד.
    3. B-מצב הדמיה וניתוח
      הערה: ראה סרט 1.
      1. לחץ על הלחצן B-מצב והורד המתמר מעל הבטן, עד העובר ואת השליה לתצוגה. לחץ על סריקה/הקפאת כדי החניך/הפסק הדמיה, הקש Cine לאחסן כדי לאחסן את הלולאה cine והקש מסגרת לאחסן לאחסון תמונות מסגרת.
      2. לחץ על לחצן אמצעי כדי לנתח את שק הריון אורך (אלף), crown עוברי עכוז אורך (CRL), קוטר biparietal. קוראים לו אהרון (. דאוני), היקף בטן (AC), היפרדות קוטר (PD) ועובי היפרדות (PT).
    4. PW-דופלר הדמיה וניתוח
      הערה: ראה סרט 1.
      1. באמצעות אותו לסרוק ההקרנה, לחץ על לחצן PW , מקם את תיבת אחסון הדגימה במרכז בעורק הטבור, והקש סריקה/הקפאת ליזום הדמיה. לחץ על Cine לאחסן לאסוף תמונות בעורק הטבור.
      2. לחץ על לחצן אמצעי כדי לחשב את מהירות שיא בעורק הטבור (UA).
    5. צבע דופלר במצב הדמיה וניתוח
      1. באמצעות אותו לסרוק ההקרנה, לחץ על לחצן צבע , להתאים את מיקום מתמר כדי להשיג כמה תמונות של הלב העוברי. לחץ על סריקה/הקפאת ליזום Cine לאחסן לאסוף תמונות של הדמיה.
      2. לחץ על לחצן אמצעי לחישוב קצב הלב העוברי (HR).

4. hplc, קורס ניתוח

  1. הכנת הרקמה
    1. להזריק העכברים בהריון עם מנה אחת של MNPs או plCSA-MNPs (המקביל MTX 1 מ"ג/ק"ג)-ההריון (למשל., E14.5) כפי שמתואר בשלב 3.1.3.
    2. לאחר 24 שעות, עזים ומתנגד העכברים על ידי זריקה בקרום הבטן של avertin על המשקל גוף μg/240 (g). ודא אין תגובה קמצוץ רגל כדי לוודא כי העכברים הם מורדם לחלוטין.
    3. תרסיס לאזור החזה עם 75% אתנול. לבצע זלוף הלב (לחתוך את אטריה נכון, perfuse דרך החדר השמאלי) כאמור המתוארת בעלון פירוט19,,20 , 50 מ ל תמיסת 0.9% קר כקרח 10 דקות להסיר חלקיקים לא מאוגד.
    4. המתת חסד הסכר. לבצע ניתוח קיסרי כדי לאסוף את העוברים ואת מאחד לשני באמצעות מלקחיים Graefe, לנתח את המספריים, וחדים Graefe רקמות, ולאחסן את הרקמות ב-80 מעלות צלזיוס לפני ניתוח.
    5. להכין את הפתרון המגון (10% חומצה על-כלורית) ולשמור על קרח. לאסוף כ- 200 מ ג של רקמות, ולהוסיף 500 μL של פתרון המגון כל דגימה. Homogenize את הדגימות באמצעות מהמגן במלוא המהירות עבור 30 s, חזור על הליך זה פעמיים.
    6. Centrifuge את הדגימות-14,000 g × עבור 20 דקות ב 4 º C. לסנן את תגובת שיקוע (כ-300 μL) דרך מסנן מזרק μm 0.45, להעביר את הנוזל שהתקבל המבחנה HPLC. מניחים צלוחיות מדגם במגש תעשיה להזרקה.
  2. הכנת תקנים
    1. להכין את הפתרון הבא לשלב ניידים: 40 מ מ אשלגן פוספט dibasic (pH 4.5), acetonitrile (88:12, וי/v). לסנן את הפתרון דרך מסנן מזרק 0.45 μm גודל הנקבוביות והעבר את הנוזל שהתקבל לבקבוק נקי של מאגר HPLC.
      הערה: להתאים את ה-pH עם חומצה זרחתית 0.1 M. השתמש רטט קולי למשך 15 דקות כדי דגה השלב ניידים בכל פעם מוקדמת לשימוש.
    2. שוקלת 10 מ ג של MTX לתוך שפופרת צנטרפוגה 1.5 mL. להוסיף 1 מ"ל של 1 מ' נתרן הידרוקסידי.
    3. מערבולת במהירות גבוהה עד MTX מתמוסס לחלוטין.
      הערה: זהו המניות העיקרי והוא ניתן לאחסן ב-20 מעלות צלזיוס למשך מספר חודשים.
    4. כדי ליצור את המניה MTX המשני (500 μg/mL), לדלל 50 μL של המניה הראשי ב μL 950 השלב ניידים.
      הערה: לאחסן בקירור עד השימוש והכן טריים מדי יום. חשוב להשתמש השלב ניידים עבור הכנת תקנים כדי להימנע פסגות הנובע ערבוב פתרונות שונים לאחר הזרקה מדגם.
    5. לבצע נוספים דילולים כדי ליצור את הסטנדרטים (טבלה 1). לאחסן את הסטנדרטים בקרח והכן טריים מדי יום. הפעל את הסטנדרטים בסדרה עם הדגימות ניסיוני.
מספרריכוז סופי (μg/mL)ΜL סטנדרטי, 500 μg/mLPhase(μL) נייד
10.51999
212998
32.55995
41020980
52550950
650100900
7100200800

טבלה 1. להתכונן של עיקול רגיל MTX. הריכוז הסופי של כל פתרון MTX נמצא במרחק של 0.5-100 μg/mL.

  1. מכשור HPLC ו מבצע פרמטרים
    הערה: דגימות נותחו על מערכת HPLC מצויד עם משאבה הממס, גלאי spectrophotometric UV (313 ננומטר), ועמודה סי18 (250 × 4-6 מ מ, גודל החלקיקים μm 5).
    1. הפעל את degasser HPLC כדי להוציא אוויר מהמערכת. הפעל את הזרימה, equilibrating את העמודה עם השלב ניידים למשך 30 דקות להפחית את הרעש בסיסית.
    2. לקבוע את הטמפרטורה של העמודה עד 25 ° C, להזריק 20 כרכים מדגם μL בספיקה של 1 מ"ל לדקה ולחץ את שיטת הפעלת להתחיל את הניתוח.
    3. בעת שלשול הושלמו, לשנות באופן ידני את שלב נייד כדי acetonitrile HPLC-כיתה. הפעל למשך כ 15 דקות להגן על המערכת.
      הערה: כשל לבצע שלב זה לאחר הזמן רץ המומלצת יכולה לגרום נזק לעמודה.
    4. עבור ניתוח כמותי, לחשב את האזורים תחת הפסגות MTX סטנדרטי של הריבית באמצעות תוכנת המערכת HPLC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב יד זה, plCSA-BP-מצומדת חלקיקים טעונים עם MTX (plCSA-MNPs) או ICG (plCSA-INPs) היו מוזרק לווריד עכברים בהריון. דימות in vivo חשף אותות חזקים ICG באזור הרחם 30 דקות לאחר ההזרקה plCSA-INP. INPs היו בעיקר מקומי באזור הכבד, הטחול (איור 1 א'). -48 שעות לאחר ההזרקה plCSA-INP, עכברים בהריון הוקרבו, חשיפת ICG אותות רק ב השליה, ואילו עם אותות לא היו לזיהוי העובר (איור 1B).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב יד זה, אנחנו חלוקה לרמות מערכת 3-שיטה לקביעת אם plCSA-BP-מודרכת ' חלקיקים הם כלי יעיל עבור מיקוד משלוח סמים השליה. השימוש ויוו הדמיה לעקוב אחר האות האינפרא-אדום ICG פלורסנט אישר יחודיות מיקוד היפרדות של שימוש plCSA-BP. HFUS, HPLC, הפגנו כי חלקיקים plCSA-BP-מצומדת יכול ביעילות לספק MTX רק תאי השליה, אל העובר.

ב ויוו פלורסצנטיות הדמיה ניסויים, הגילאים עכברים בהריון הריונית חשובים. השליה מתחילה להיווצר סביב E9.521. בנוסף, בהתחשב לרזולוציה של הצלם, ה- ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

X.f. ב עורכים: ב"צ ממציאים על יישום הפטנטים PCT/CN2017/108646 נאספו על ידי האירוע מתקיים המכסה שיטת משלוח סמים ספציפיים השליה ואת היישום שלו בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. כל מחברים אחרים מצהירים כי יש להם אין אינטרסים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי הקרן מדעי הטבע הלאומית (81771617), את מדעי הטבע קרן של בפרובינצית גואנג-דונג (2016A030313178) הוענק x.f. ב; מענק מהקרן שנג'ן בסיסי מחקר (JCYJ20170413165233512) הוענק X.F; ו יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי הילד לבריאות & פיתוח אנושי של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R01HD088549 (התוכן מוטלת אך ורק על המחברים, ואינם מייצגים בהכרח הרשמי תצוגות של מכוני הבריאות הלאומיים) כדי N.N.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עכברי CD-1בייג'ינג ויטל ריבר201נקבה (8-12 שבועות)
מזרק אינסוליןBD328421להזרקה IV
אתנול מוחלטסינופארם10009218לסינתזה של ננו-חלקיקים
לציטין פולי סויהAvanti Polar Lipids441601לסינתזה של ננו-חלקיקים
DSPE-PEG-COOHAvanti Polar Lipids880125לסינתזה של ננו-חלקיקים
719897 PLGASigma-Aldrichלסינתזה של ננו-חלקיקים
מעבד אולטרסאונדSonicsVCX130לסינתזה של ננו-חלקיקים
Methotrexate (MTX)Sigma-AldrichV900324לסינתזה של ננו-חלקיקים
Indocyanine green (ICG)Sigma-Aldrich1340009for in vivo הדמיה
של מי מלח פוספט (PBS)HycloneSH30028.01
מכשיר ספקטרום IVISפרקין אלמרלהדמיה in vivo
ג'ל העברת אולטרסאונדגואנגגונגZC4252418להדמיית אולטרסאונד
IsofluraneLunan PharmaceuticalI0040לשמירה על ההרדמה
קרם אפילציהנאירTMG001להסרת
מתמר פרווה 40 מגה-הרץVisualSonicsMS550Sלהדמיית אולטרסאונד
מערכת הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוהVisualSonicsVevo2100להדמיית אולטרסאונד
AvertinSigma-AldrichT48402להרדמה
משאבת מזרקMindraySK-500IIIלזלוף לב
תמיסת מלח 0.9%MeilunbioMA0083לזלוף לב
1.5 מ"ל צינורות פוליפרופילןAXYGENMCT-150-C-80
& deg; מקפיא CThermo Fisher Scientific88600V
CentrigugeCenceH1650R
חומצה פרכלוריתSigma-Aldrich311421לזירוז חלבון
הומוגנייזרSCIENTZSCIENTZ-48להומוגניזציה
של מסנן מזרק רקמות (0.45 μ m)MilliporeSLHV033RS01
נתרן הידרוקסידסינופארםכימי 10019763לפתרון בקבוקוני MTX
HPLCמים670650620עבור HPLC
אשלגן פוספט דו-בסיסיסינופארםכימי 20032117עבור HPLC
אצטוניטרילJKכימי932537עבור HPLC
C18 עמודמים186003966למערכת HPLC
HPLC Shimadzuל-HPLC
כימי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rodger, M. A., et al. The Association of Factor V Leiden and Prothrombin Gene Mutation and Placenta-Mediated Pregnancy Complications: A Systematic Review and Meta-analysis of Prospective Cohort Studies. PLOS Medicine. 7 (6), e1000292(2010).
  2. Rodger, M. A., et al. Inherited thrombophilia and pregnancy complications revisited. Obstetrics & Gynecology. 112 (2 Pt 1), 320-324 (2008).
  3. Brenner, B., Aharon, A. Thrombophilia and adverse pregnancy outcome. Clinics in Perinatology. 34 (4), 527-541 (2007).
  4. Fisk, N. M., McKee, M., Atun, R. Relative and absolute addressability of global disease burden in maternal and perinatal health by investment in R&D. Tropical Medicine & International Health. 16 (6), 662-668 (2011).
  5. Fisk, N. M., Atun, R. Market failure and the poverty of new drugs in maternal health. PLOS Medicine. 5 (1), e22(2008).
  6. Kaitu'u-Lino, T. uJ., et al. Targeted nanoparticle delivery of doxorubicin into placental tissues to treat ectopic pregnancies. Endocrinology. 154 (2), 911-919 (2013).
  7. King, A., et al. Tumor-homing peptides as tools for targeted delivery of payloads to the placenta. Science Advances. 2 (5), e1600349(2016).
  8. Beards, F., Jones, L. E., Charnock, J., Forbes, K., Harris, L. K. Placental Homing Peptide-microRNA Inhibitor Conjugates for Targeted Enhancement of Intrinsic Placental Growth Signaling. Theranostics. 7 (11), 2940-2955 (2017).
  9. Cureton, N., et al. Selective Targeting of a Novel Vasodilator to the Uterine Vasculature to Treat Impaired Uteroplacental Perfusion in Pregnancy. Theranostics. 7 (15), 3715-3731 (2017).
  10. Paul, J. W., et al. Drug delivery to the human and mouse uterus using immunoliposomes targeted to the oxytocin receptor. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (3), e281-e283 (2017).
  11. Zhang, B., et al. Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice. Theranostics. 8 (10), 2765-2781 (2018).
  12. Fan, X., et al. Noninvasive monitoring of placenta-specific transgene expression by bioluminescence imaging. PloS One. 6 (1), e16348(2011).
  13. Murata, M., Tahara, K., Takeuchi, H. Real-time in vivo imaging of surface-modified liposomes to evaluate their behavior after pulmonary administration. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 86 (1), 115-119 (2014).
  14. Ito, A., et al. New whole-body multimodality imaging of gastric cancer peritoneal metastasis combining fluorescence imaging with ICG-labeled antibody and MRI in mice. Gastric Cancer. 17 (3), 497-507 (2014).
  15. Mazza, M., et al. Liposome-Indocyanine Green Nanoprobes for Optical Labeling and Tracking of Human Mesenchymal Stem Cells Post-Transplantation In Vivo. Advanced Healthcare Materials. 6 (21), (2017).
  16. Greco, A., et al. High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice. PloS One. 8 (10), e77205(2013).
  17. Spurney, C. F., Leatherbury, L., Lo, C. W. High-frequency ultrasound database profiling growth, development, and cardiovascular function in C57BL/6J mouse fetuses. Journal of the American Society of Echocardiography. 17 (8), 893-900 (2004).
  18. Zhang, B., et al. Synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate A (plCSA) -targeting lipid-polymer nanoparticles. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
  19. Devraj, K., Guerit, S., Macas, J., Reiss, Y. An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers. Journal of Visualized Experiments. (132), (2018).
  20. Beeton, C., Chandy, K. G. Isolation of mononuclear cells from the central nervous system of rats with EAE. Journal of Visualized Experiments. (10), 527(2007).
  21. Watson, E. D., Cross, J. C. Development of structures and transport functions in the mouse placenta. Physiology. 20 (3), 180-193 (2005).
  22. Frangioni, J. V. In vivo near-infrared fluorescence imaging. Current Opinion in Chemical Biology. 7 (5), 626-634 (2003).
  23. Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kuhl, A. A., Drews, B. Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy. Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38(2014).
  24. Khankin, E. V., Hacker, M. R., Zelop, C. M., Karumanchi, S. A., Rana, S. Intravital high-frequency ultrasonography to evaluate cardiovascular and uteroplacental blood flow in mouse pregnancy. Pregnancy Hypertension. 2 (2), 84-92 (2012).
  25. Phoon, C. K. Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development. Pediatric Research. 60 (1), 14-21 (2006).
  26. Pallares, P., Gonzalez-Bulnes, A. Non-invasive ultrasonographic characterization of phenotypic changes during embryo development in non-anesthetized mice of different genotypes. Theriogenology. 70 (1), 44-52 (2008).
  27. Parvani, J. G., Gujrati, M. D., Mack, M. A., Schiemann, W. P., Lu, Z. -R. Silencing β3 integrin by targeted ECO/siRNA nanoparticles inhibits EMT and metastasis of triple-negative breast cancer. Cancer Research. 75 (11), 2316-2325 (2015).
  28. Zhang, B., et al. Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment. Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).
  29. Jenkins, D. E., et al. Bioluminescent imaging (BLI) to improve and refine traditional murine models of tumor growth and metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 20 (8), 733-744 (2003).
  30. Keelan, J. A., Leong, J. W., Ho, D., Iyer, K. S. Therapeutic and safety considerations of nanoparticle-mediated drug delivery in pregnancy. Nanomedicine. 10 (14), 2229-2247 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

In VivoHPLC14 5

מאמרים קשורים