הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תא תלת-ממדי מערכת תרבות עבור הלומדים הפלישה והערכת הרפוי בסרטן שלפוחית השתן

8.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58345

⸱

13 בספטמבר 2018

 ,  ,  , 
1Departments of Internal Medicine, Hematology/Oncology Division, Rogel Cancer Center, University of Michigan Medical Center, 2Department of Urology, Division of GU Oncology, Rogel Cancer Center, University of Michigan Medical Center, 3Departments of Surgery and Pathology, Perlmutter Cancer Center, NYU Langone Health

במאמר זה

סיכום

התהליכים השולטים הפלישה סרטן שלפוחית השתן מייצגים הזדמנויות סמן ופיתוח טיפולית. כאן אנו מציגים מודל הפלישה סרטן שלפוחית השתן אשר משלבת תרבות תלת-ממדי של גידול spheroids, הדמיה בצילום מואץ, מיקרוסקופיה קונפוקלית. טכניקה זו שימושית עבור הגדרת התכונות של תהליך פולשני, הקרנת סוכני טיפולית.

תקציר

סרטן שלפוחית השתן היא בעיה בריאותית משמעותית. ההערכה היא כי יותר מ 16,000 אנשים ימותו השנה בארצות הברית מסרטן שלפוחית השתן. בעוד 75% ממקרי סרטן שלפוחית השתן הם לא פולשנית, לא סביר גרורות, כ-25% ההתקדמות דוגמת גידול פולשני. עד חצי של החולים עם סרטן פולשני יפתחו relapse גרורתי קטלני. לפיכך, הבנת המנגנון של התקדמות פולשני בסרטן שלפוחית השתן היא קריטית לחזות תוצאות המטופל וכדי למנוע גרורות קטלניות. במאמר זה, נציג מודל הפלישה סרטן תלת מימדי המאפשר שילוב של תאים סרטניים ורכיבים סטרומה לחקות ויוו מצבים המתרחשים microenvironment הגידול שלפוחית השתן. מודל זה מספק הזדמנות לבחון את תהליך פולשני בזמן אמת באמצעות הדמיה בצילום מואץ, תחקור מסלולים מולקולריים המעורבים באמצעות קונאפוקלית immunofluorescent תרכובות הדמיה ומסך עם פוטנציאל הפלישה בלוק. בעוד פרוטוקול זה מתמקד סרטן שלפוחית השתן, סביר להניח כי ניתן להשתמש בשיטות אחרות כדי לבחון את הפלישה, תנועתיות בסוגי סרטן אחרים גם.

מבוא

הפלישה הוא שלב קריטי בהתקדמות סרטן, אשר נדרש עבור גרורות, והיא קשורה עם הישרדות נמוכה יותר, פרוגנוזה גרועה אצל חולים. ב סרטן שלפוחית השתן אנושי, הגידול הנפוץ ביותר בדרכי השתן הגורמת כ 165,000 מקרי מוות בשנה ברחבי העולם, שלב סרטן, הטיפול והפרוגנוזה אינם קשורים ישירות נוכחות או היעדרות של הפלישה1. כ- 75% מהמקרים של סרטן שלפוחית השתן מנוהלים שאינם שרירים פולשנית ואינם עם כריתה מקומית. לעומת זאת, סרטן פולשני שריר שלפוחית השתן (כ-25% מכלל המקרים) הם גידולים אגרסיביים עם שיעור גרורתי גבוה ומטופלים עם2,טיפול אגרסיבי multimodality3. לכן, הבנה מסלולים מולקולריים המפעילות הפלישה הוא חיוני כדי לאפיין טוב יותר את הסיכון של התקדמות פולשנית וכדי לפתח התערבויות טיפוליות אשר יכול למנוע התקדמות פולשני.

גידול פולשני התקדמות מתרחשת בסביבה מורכבת תלת-ממדיים (3-D), ושכוללת מגע תא הגידול עם תאים סרטניים אחרים, משתית, קרום המרתף של סוגים אחרים של תאים כולל תאים חיסוניים, fibroblasts, תאי שריר ואת כלי הדם תאי אנדותל. תמיכה חדיר (למשל, Transwell) מערכות assay מועסקים בדרך כלל quantitate סרטן התא הפלישה4, אבל מערכות אלה מוגבלים כי הם אינם מאפשרים פיקוח מיקרוסקופיים של תהליך הפלישה בזמן אמת, אחזור דוגמאות נוספות מכתים וניתוח המולקולרי של הוא מאתגר. התפתחות מערכת ספרואיד גידול שלפוחית השתן תלת-ממדי ללמוד הפלישה רצוי כי זה מאפשר שילוב של רכיבים המוגדרים microenvironmental עם הנוחות של מערכות במבחנה .

ב פרוטוקול זה, אנו מתארים מערכת לחקור את התהליכים פולשנית של תאים סרטניים אנושיים שלפוחית השתן באמצעות assay הפלישה ספרואיד תלת-ממדי הופכים ג'ל מבוססי קולגן מטריצות מיקרוסקופיה קונפוקלית כדי לאפשר חוקרים כדי לפקח על תנועתיות תא ו הפלישה ב בזמן אמת (איור 1א'). מערכת זו הוא תכליתי, יכול להיות שונה כדי לחקור את הגדרות סטרומה/גידול שונות. זה ניתן לשלב רוב שורות תאים של סרטן שלפוחית השתן או גידולים בשלפוחית השתן העיקרי, סטרומה תאים נוספים כגון סרטן הקשורים fibroblasts ותאים חיסוניים5,6,7. פרוטוקול זה מתאר מטריצה מורכבת של קולגן מסוג 1, אך יכול להיות שונה כדי לשלב את מולקולות אחרות כגון fibronectin, laminin או לחלבונים קולגן אחרים. יכול להיות מלווה תהליכים פולשניים במשך 72 h או יותר בהתאם היכולת של מיקרוסקופ, מערכת המשמשת. קיבעון, immunofluorescence מכתים של הגידול מוטבע בתוך המטריקס תלת-ממדי לפני, במהלך, ואחרי הפלישה מאפשר חקירת upregulated חלבונים בתאים פולשני, ובכך לספק מידע חיוני זה בדרך כלל נעדר או קשה לאסוף באמצעות דגמים תלת-ממדיים תרבות אחרים. גם יכול להיות מנוצל מערכת זו תרכובות מסך אשר לחסום את הפלישה, ניסחו איתות המסלולים מושפע תרכובות כאלה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. גידול סרטן Spheroids

  1. גידול מ שורות תאים
    1. התרבות האנושית שלפוחית השתן התאים הסרטניים תחת מחסידי קונבנציונאלי תא תרבות תנאים ולתחזק ב חממה 37 ° C שסופק עם 5% CO2. לשמור על תאים ב- < 90% confluency.
      הערה: תרבות מדיה המשמשת היא של Dulbecco ששינה המדיה מינימלי הכרחי (DMEM) המכילה 4.5 g/L D-גלוקוז-גלוטמין, 110 מ ג/ליטר נתרן פירובט, ויסופק עם 10% עוברית שור סרום (FBS) לאורך כל פרוטוקול זה.
    2. יום אחד לפני תחילת הניסוי, trypsinize (על-ידי שימוש 0.25% טריפסין-EDTA) תאים, לכמת תא ריכוז והפצה של תאים6 עונה 1 פרק 10 מ"ל 3 תרבות המדיה כל טוב של צלחת מצורף 6-ובכן נמוך במיוחד.
    3. דגירה בתאים תנאי ההחזקה נמוך ב 37 ° C ≥16 h. זה אמור לאפשר מספיק זמן עבור תאים להפעיל עליה פונקציית צבירה לתוך spheroids עבור רוב שורות תאים של סרטן שלפוחית השתן.
      הערה: היווצרות של spheroids יכול להיות שנצפו על ידי מיקרוסקופ שדה בהיר הפוכה. הגודל האופטימלי והמספר של spheroids תלויה ניסויים בודדים, אך נמצא כי spheroids עם קטרים מ- 50 מיקרומטר מיקרומטר 150 מתאימים בדרך כלל זמן לשגות הדמיה באמצעות עדשה המטרה X 20.
    4. כדי לשלב סוגי תאים נוספים, כגון fibroblasts או תאים חיסוניים לתוך spheroids, מערבבים את התאים הרצויים עם תאים סרטניים ביחס הרצוי (1:1, 1:10, וכו.) במצורף נמוך במיוחד צלחת, דגירה ב 37 ° C עבור ≥16 h לאפשר היווצרות מעורבות לתאים מסוג spheroids.
  2. גידול מ גידולים ראשי
    הערה: גידול spheroids יכול להיגזר גם גידול שלפוחית השתן העיקרי ממקורות כגון גידולים התפתח הנוצרות על-ידי גורם מסרטן שלפוחית השתן הגידול מודלים8. כך למשל, גידולים בשלפוחית השתן המופקים עכברים נמאס N-בוטיל - N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN), ניתן לקצור, כתוש לחתיכות קטנות (כ- 0.5 מ מ3) באמצעות כלי ניתוח סטרילי. מתעכל דגימות העיקרי של האדם שלפוחית השתן סרטן יכול להילמד גם במערכת זו.
    1. לאסוף ולשטוף 0.5 מ מ3 גידול חלקים בתוך 5 מ"ל כקרח באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS). צנטריפוגה ב x 200 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. חזור על שלב זה כביסה פעם אחת.
    2. לאסוף את השברים הגידול על ידי צנטריפוגה ב x 200 גר' 10 דקות ב 4 º C. הסר את תגובת שיקוע והוסף 5 מ של DMEM המכיל 10% FBS. העברה הגידול ספרואיד/מדיה תערובת צלחת מצורף 6-ובכן נמוך במיוחד. דגירה ב 37 ° C עבור ≥16 h לפני הטמעה לתוך מטריצת קולגן (ראה שלב 2.3).

2. הכנת תא תרבות תלת-ממדי

  1. לדלל קולגן מסוג 1 (נגזר זנב החולדה) ב- DMEM המכיל 10% FBS להכין תערובת 2 מ"ג/מ"ל לפי הנחיות היצרן.
    1. בקיצור, לערבב קולגן עם הכמות המתאימה של פתרון 1 N NaOH, DMEM על ידי pipetting עדינה בהתאם להוראות היצרן כדי להשיג את ה-pH הפיזיולוגיות.
    2. לאחר ערבוב קולגן, DMEM, במהירות מעיל הבארות של השקופית קאמרית (עבור מרבית היישומים, הקאמרית שקופיות עם מספר 1.5 כיסוי-זכוכית הוא אופטימלי) עם התערובת קולגן-DMEM לפני התמצקות (200 µL טוב). לאפשר את השקופית קאמרית מצופה להיות נייח בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות.
      הערה: הרכב מבוססי קולגן מטריקס יכול להיות שונה על-ידי הוספת מרכיבים אחרים של מטריצה חוץ-תאית, כגון fibronectin או laminin, בהתאם למטרות ניסוי.
  2. בעדינות pipet 500 µL של המדיה המכילה spheroids (או חתיכות הגידול, אם הגידול העיקרי מדגם משמש) מהצלחת מצורף 6-ובכן נמוך במיוחד לתוך צינור microcentrifuge mL 1.5 ריק. לחכות 2 דקות לאפשר את spheroids ליישב לתחתית הצינור.
  3. הסר בזהירות את תגובת שיקוע מהצינור. להכין עוד שפופרת של קולגן מסוג 1 (2 מ"ג/מ"ל) מעורבב עם DMEM המכיל 10% FBS ולהוסיף במהירות 500 µL של תערובת זו spheroids. מערבבים בעדינות את spheroids ואת קולגן מאת pipetting איטי.
  4. להוסיף 250 µL תערובת spheroids/קולגן טוב של קולגן טרום-מצופים קאמרית שקופיות. לאפשר את מטריצת קולגן המכיל spheroids לגבש לחלוטין (בערך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס).
  5. לאחר קולגן המטריצה היא פני השטח למוצק, להוסיף 1 מ"ל של DMEM המכיל 10% FBS כדי מכל קידוח (איור 1B). דגירה השקופית קאמרית ב חממה 37 ° C שסופק עם 5% CO2 עד מוכן עבור הדמיה.

3. חיים תא הדמיה בצילום מואץ

  1. הפעלת מיקרוסקופ קונפוקלי ההוראות של היצרן ולהבטיח כי תא האקלים מגיע ל- 37 מעלות צלזיוס, מסופק עם 5% CO2.
    הערה: המיקרוסקופ ואת החדר שלנו בדרך כלל דורשים h 1 להגיע מערכת שיווי משקל.
  2. בזהירות העברה השקופית קאמרית מתאם שקופיות המצורפת המיקרוסקופ.
  3. לאתר של spheroids עניין באמצעות מטרה צריכת חשמל נמוכה (למשל, 5 X) ולהתחיל הדמיה עם המטרה כוח גבוה יותר (בפרוטוקול הנוכחי, המטרה X 20 משמש עבור רוב ההדמיה תא בשידור חי עבור איכות התמונה טובה יותר).
    הערה: עבור דגימות הגידול העיקרי שלפוחית השתן, 5 X ויעדים X 10 עשוי להיות נחוץ כדי לכסות שטח גדול יותר הדמיה. עבור הדמיה בצילום מואץ שלנו, מרווח הזמן דימות שוכן כ 30 דקות, ערימה Z משמש לשיקוף ספרואיד כל. בדרך כלל המרחק בין Z-פרוסות מוגדר 4 מיקרומטר עבור 20 X המטרה את המרחק הכולל של ציר Z הוא בסביבות 200 מיקרומטר. תמונות יכולה להיות מושגת באמצעות DIC, עם פלורסצנטיות אם תאים/רקמות הנמל סמני חלבון פלואורסצנטי.
  4. לבצע הדמיה בצילום מואץ של 24-72 שעות.
    הערה: המשך נקבע לפי סוג התא ולצרכים של הניסוי.

4. הכנת המדגם בלוק המכיל Spheroids סרטן של רקמות קפוא חלוקתה

  1. בזהירות הרימו את הבלוק של קולגן ג'ל spheroids מהשקופיות קאמרית באמצעות מלקחיים קטנים. מקם את הבלוק ג'ל קולגן תבנית היסטולוגיה פלסטיק.
  2. לשטוף את הג'ל קולגן עם 1 x PBS לזמן קצר ולאחר מכן לתקן אותו עם 4% paraformaldehyde (PFA) ב- PBS למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.
    התראה: PFA הוא מסרטן אפשרי ויש לטפל בזהירות.
  3. לשטוף הג'ל קולגן עם 1.5 מ ל 1 x PBS ב מטרף במשך 15 דקות להחליף את PBS, חזור על השלב הקודם כביסה 3 x.
  4. למרוח שכבה דקה (כ 3 מ מ) לטמפרטורה אופטימלית חיתוך (אוקטובר) מתחם לכסות בתחתית תבנית פלסטיק היסטולוגיה חדש. המקום הקבוע, שטף קולגן ג'ל על גבי OCT מורכבים, ואז בזהירות מטביע את כל הג'ל ממלא את התבנית OCT מורכבים תוך הימנעות היווצרות בועות אוויר ב- OCT.
  5. להשאיר את התבנית 4 ° C עבור 1 h.
  6. מניחים את התבנית המכילה את הדגימה ואת OCT המורכב על צלחת פטרי 100 מ מ צף על חנקן נוזלי. לאפשר את הדגימה כדי הקפאה לחלוטין.
  7. חנות הרחוב דגימה קפוא ב- 80 ° C לשימוש עתידי.

5. immunofluorescence הדמיה עבור סרטן משרטוטי קפוא Spheroids

  1. העברה הרחוב דגימה קפוא מהמקפיא-80 ° C לשכת-20 ° C cryostat.
  2. לבצע חלוקתה קפוא המקובלת על-ידי הגדרת מרווח סעיף 7 מיקרומטר. תן דוגמאות משרטוטי לצרף השקופית זכוכית ללא קמטים או לכוד אוויר.
    1. אחסן את השקופיות ב-80 מעלות צלזיוס לפני ביצוע נוסף מכתים.
      הערה: ניתן להשתמש במרווחי זמן שונים כדי שיתאים לצרכים ניסיוני.
  3. האוויר יבש השקופיות לשעה בטמפרטורת החדר.
  4. Permeabilize את הדגימות עם PBS המכילה 0.5% טריטון X-100 למשך 15 דקות.
  5. שטיפת דוגם x 3 עם PBS 10 דקות לכל לשטוף.
  6. להקיף את הדגימות בשקופית מחסומים הידרופובי באמצעות עט הידרופובי המכשול.
  7. פנקו את הדגימות עם חסימה פתרון (1 x PBS המכילה 5% אלבומין שור (BSA)), לשעה בטמפרטורת החדר.
  8. µL 40 של ראשי המכיל נוגדנים פתרון (המכילה 5% BSA עם בטחונות דילול של נוגדן ראשוני PBS 1 x) חלות על כל מדגם בשקופית.
  9. דגירה השקופיות הראשית נוגדנים ב 37 ° C עבור 1 h או בטמפרטורת החדר למשך הלילה (זמן הדגירה והתנאים משתנים בהתאם נוגדן ראשוני).
  10. שטיפת דוגם x 3 עם PBS למשך 15 דקות (לכל לשטוף).
  11. µL 40 של פתרון המכיל נוגדנים משניים (המכילה 5% של BSA עם 1:300 נוגדנים משניים דילול PBS 1 x) חלות על כל מדגם בשקופית.
  12. שטיפת דוגם x 3 עם PBS למשך 15 דקות (לכל לשטוף).
  13. כתם הדגימות עם פתרון Hoechst 33342 (1 µg/mL, מדולל ב- PBS) בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. לאחר מכן לשטוף דגימות עם PBS במשך 5 דקות.
  14. הר הדגימות הרכבה בינונית ולכסות עם שער גולשת בגודל מתאים. להשאיר את השקופיות בחושך בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות ולאחר מכן בצע מיקרוסקופיה קונפוקלית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

יצירה מוצלחת של ספרואיד גידול סרטן שלפוחית השתן פולשנית דורש את היווצרות גידול בגודל מתאים spheroids של שורות תאים או גידולים העיקרי. איור 2 א מראה בגודל מתאים spheroids התפתח ארבע האנושי שלפוחית השתן סרטן שורות תאים (אום-UC9, אום-UC13, אום-UC14, 253J ו- UM-UC18). איור 2 B מראה על גידול ספרואיד בגלל גידול שלפוחית השתן שנוצר על-ידי BBN העכבר בתוך מטריצת קולגן. Spheroids אלו הוטבעו כמתואר לעיל, להח...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כאן נתאר מודל תלת-ממדי הגידול ספרואיד המאפשר תצפית בזמן אמת של פלישה של סרטן שלפוחית השתן אשר הוא קריטי עבור התקדמות סרטן, גרורות. מערכת זו היא נוטה שילוב של רכיבים סטרומה וסלולריות שונים כדי לאפשר חוקרים כדי לסכם טוב יותר microenvironment את רקמת שם מתקיים הפלישה סרטן שלפוחית השתן. Spheroids סרטן שלפוחית השתן ניתן להפיק ממקורות שונים כגון שורות תאים (כולל שורות תאים מהונדסים שימושי עבור הבחינה של מסלולי להשפיע על תהליכים הפלישה איתות), ועכבר העיקרי גידולים (המתוארים כאן). זה יכול להיות גם להיות מותאם לניתוח הגידול העיקר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

המחברים רוצה להודות המעבדה של ד ר הווארד קרופורד (אוניברסיטת מישיגן) עבור תמיכה טכנית מתן וחומרים במחקר זה ציוד אלן קילר לקבלת תמיכה טכנית.

עבודה זו מומן על ידי מענקים מן האוניברסיטה של מישיגן רוגל סרטן מרכז הליבה גרנט CA046592-26S3, NIH K08 CA201335-01A1 (פיפ), ניתן YIA (פיפ), CA17483601A1 R01 NIH (DMS).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
קווי תאים של סרטן שלפוחית השתן האנושית UM-UC9, UM-UC13, UM-UC14, UM-UC18, 253J
מדיום תרבית תאי DMEMThermo Fisher Scientific11995065
סרום בקר עוברי תרמו פישר סיינטיפיק26140079
אנטיביוטיקה-אנטי-פטרייקטית (100x)Thermo Fisher Scientific15240062
טריפסין-EDTA (0.25%), פנול אדוםתרמו פישר סיינטיפיק25200056
אלבומין בסרום בקר (BSA)Sigma-AldrichA3803
תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), pH 7.4 Thermo Fisher Scientific10010023
Costar Ultral-low attachment 6-well cluster קורנינג3471
מיקרוסקופ הפוך קונבנציונלי Carl Zeiss491206-0001-000שימוש כללי לתרבית תאים ובדיקת ספרואידים
קולגן מסוג 1 מזנב חולדה, ריכוז גבוה Corning354249
Nunc Lab-Tek II Chambered CoverglassThermo Fisher Scientific155382
מיקרוסקופ קונפוקלי Carl ZeissLSM800מיסקוסקופ קונפוקלי עם תא אקלים, הדמיה מרובת מיקומים ופונקציית סריקה Z-stack 
Cryostat micromtomeLeica BiosystemsCM3050 S
Zen 2 תוכנה לעיבוד תמונה תמיסת קרל זייס
פרפורמלדהידמדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית15710
ImmEdge מחסום הידרופובי PAPמעבדות וקטור עט תרכובת H4000
O.C.T תרמו פישר סיינטיפיק23730571
פתרון Hoechst 33342 תרמו פישר סיינטיפיק62249
נוגדן נגד ATDC (Trim29)סיגמא-אולדריץ'HPA020053
אנטי ציטוקרטין 14 נוגדןAbcamab7800
נוגדן נגד וימנטיןAbcamab24525
ProLong Diamond מדיום הרכבה

מקורות

  1. American Cancer Society. The Society. , Atlanta, GA. (2018).
  2. Knowles, M. A., Hurst, C. D. Molecular biology of bladder cancer: new insights into pathogenesis and clinical diversity. Nature Reviews Cancer. 15 (1), 25-41 (2015).
  3. DeGeorge, K. C., Holt, H. R., Hodges, S. C. Bladder Cancer: Diagnosis and Treatment. American Family Physician. American Family Physician. 96 (8), 507-514 (2017).
  4. Repesh, L. A. A new in vitro. assay for quantitating tumor cell invasion. Invasion Metastasis. 9 (3), 192-208 (1989).
  5. Doillon, C. J., Gagnon, E., Paradis, R., Koutsilieris, M. Three-dimensional culture system as a model for studying cancer cell invasion capacity and anticancer drug sensitivity. Anticancer Research. 24 (4), 2169-2177 (2004).
  6. Duong, H. S., Le, A. D., Zhang, Q., Messadi, D. V. A novel 3-dimensional culture system as an in vitro. model for studying oral cancer cell invasion. International Journal of Expermintal Pathology. 86 (6), 365-374 (2005).
  7. Rebelo, S. P., et al. 3D-3-culture: A tool to unveil macrophage plasticity in the tumour microenvironment. Biomaterials. , 185-197 (2018).
  8. Vasconcelos-Nobrega, C., Colaco, A., Lopes, C., Oliveira, P. A. Review: BBN as an urothelial carcinogen. In Vivo. 26 (4), 727-739 (2012).
  9. Palmbos, P. L., et al. ATDC/TRIM29 Drives Invasive Bladder Cancer Formation through miRNA-Mediated and Epigenetic Mechanisms. Cancer Research. 75 (23), 5155-5166 (2015).
  10. Wang, L., et al. ATDC induces an invasive switch in KRAS-induced pancreatic tumorigenesis. Genes & Development. 29 (2), 171-183 (2015).
  11. Fife, C. M., McCarroll, J. A., Kavallaris, M. Movers and shakers: cell cytoskeleton in cancer metastasis. British Journal of Pharmacology. 171 (24), 5507-5523 (2014).
  12. Akhmanova, A., Steinmetz, M. O. Control of microtubule organization and dynamics: two ends in the limelight. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 16 (12), 711-726 (2015).
  13. Cheung, K. J., Gabrielson, E., Werb, Z., Ewald, A. J. Collective invasion in breast cancer requires a conserved basal epithelial program. Cell. 155 (7), 1639-1651 (2013).
  14. Kidd, M. E., Shumaker, D. K., Ridge, K. M. The role of vimentin intermediate filaments in the progression of lung cancer. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (1), 1-6 (2014).
  15. Lowery, J., Kuczmarski, E. R., Herrmann, H., Goldman, R. D. Intermediate Filaments Play a Pivotal Role in Regulating Cell Architecture and Function. Journal of Biological Chemistry. 290 (28), 17145-17153 (2015).
  16. Papafotiou, G., et al. KRT14 marks a subpopulation of bladder basal cells with pivotal role in regeneration and tumorigenesis. Nature Communications. 7, 11914(2016).
  17. Sun, W., Lim, C. T., Kurniawan, N. A. Mechanistic adaptability of cancer cells strongly affects anti-migratory drug efficacy. Journal of the Royal Society Interface. 11 (99), (2014).
  18. Goddette, D. W., Frieden, C. Actin polymerization. The mechanism of action of cytochalasin D. Journal of Biological Chemistry. 261 (34), 15974-15980 (1986).
  19. Berrier, A. L., Yamada, K. M. Cell-matrix adhesion. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 565-573 (2007).
  20. Lee, J. H., et al. Collagen gel three-dimensional matrices combined with adhesive proteins stimulate neuronal differentiation of mesenchymal stem cells. Journal of the Royal Society Interface. 8 (60), 998-1010 (2011).
  21. LeBleu, V. S., Macdonald, B., Kalluri, R. Structure and function of basement membranes. Experimental Biology and Medicine. 232 (9), 1121-1129 (2007).
  22. Rakha, E. A., et al. Invasion in breast lesions: the role of the epithelial-stroma barrier. Histopathology. , (2017).
  23. Erler, J. T., Weaver, V. M. Three-dimensional context regulation of metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 26 (1), 35-49 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Time Lapse
תא תלת-ממדי מערכת תרבות עבור הלומדים הפלישה והערכת הרפוי בסרטן שלפוחית השתן
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.