הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ישיר לשושלת התכנות של העכבר למבוגרים פיברובלסט Erythroid אבות

6.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58464

⸱

14 בדצמבר 2018

 ,  ,  ,  , 
1Department of Molecular Medicine and Gene Therapy, Lund University

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מציגים שלנו פרוטוקול עבור הפקת המושרה אבות erythroid (iEPs) מן העכבר fibroblasts למבוגרים באמצעות מונחי-פקטור שעתוק ישיר לשושלת התכנות (DLR).

תקציר

Erythroid תא מחויבות ובידול המשך ההפעלה של שושלת היוחסין מוגבלת לרשת תעתיק בניצוחו של קבוצה של גורל קביעת והתבגרותו גורמים. קודם לכן יצאנו כדי להגדיר את ערכת מינימלי של הגורמים הדרושים להדרכת התפתחות תאי הדם האדומים באמצעות ישיר לשושלת התכנות של fibroblasts לתוך erythroid המושרה אבות/מבשרי (iEPs). הראנו את ביטוי של Gata1, Tal1, Lmo2ו- c-Myc (GTLM) יכול במהירות להמיר מאתר ואנושי fibroblasts ישירות אל iEPs הדומים פיד ה בונה תאים erythroid במונחים של מורפולוגיה, פנוטיפ, ביטוי גנים. בכוונתנו כי iEPs יספק כלי יקר ערך ללמוד אריתרופויזה ותא תקנה הגורל. כאן נתאר את תהליך stepwise המרת fibroblasts קצה הזנב מאתר iEPs דרך שעתוק מונחה גורם ישיר לשושלת התכנות (DLR). בדוגמה זו, אנו מבצעים את התכנות ב fibroblasts מן השושלת-עקיבה erythroid עכברים המבטאים החלבון הניאון צהוב (YFP) תחת השליטה של אריתרופויאטין קולטן ג'ין (EpoR) המקדם, המאפשר ויזואליזציה של תא erythroid אינדוקציה הגורל על התכנות. בעקבות פרוטוקול זה, שניתן לתכנת fibroblasts לתוך iEPs בתוך חמש עד שמונה ימים.

אמנם עדיין ניתן לבצע שיפורים לתהליך, אנו מראים כי בתיווך GTLM התכנות הוא תהליך מהיר וישיר, מניב תאים בעלי מאפיינים של פיד ה bona קדמון erythroid ותאי מבשר.

מבוא

תאי דם אדומים (RBCs) חיוניים כל החולייתנים ותשלימו 84% של כל התאים של הגוף האנושי1 מעובריים לחיים הבוגרים, הבריאות שלנו תלויה מאוד מדויק ההסדרה של RBC הומאוסטזיס. ייצור שוטף של בוגר RBCs במהלך פיתוח לבגרות מכונה אריתרופויזה. האתגר העיקרי במחקר אריתרופויזה הוא להגדיר הרגולטורים מאסטר זה שננהל את התפתחות RBC והבורר בין אריתרופויזה פרימיטיביים ומוחלטת. השושלת ישירה התכנות של אבות erythroid מהווה הזדמנות להבין עוד יותר erythroid פיתוח בתוך vivo.

השושלת ישירה התכנות (DLR), הידוע גם בשם transdifferentiation, הוא התהליך של התכנות סוג תא אחד ישירות לתוך אחר, תוך עקיפת pluripotent ושלבים קדמון multipotent. DLR שימש עד כה כדי לייצר סוגי תאים רבים כולל עצבית2,4,hematopoietic3,5, הכבד6 נפרוטית7, ובתאים. עבור ביולוגים התפתחותיים, DLR הפך כלי חשוב חוקר היבטים של שושלת היוחסין ומחויבות התמיינות סופנית תהליכים8,9. DLR ניתן להשלים ולהחליף חלקית ויוו ללימודי הבנה מנגנונים של גורל לקביעת גורמים במהלך הפיתוח. פרוטוקול DLR עבור התכנות אבות erythroid המתואר במאמר זה מספק השדה שיטה ללא תשלום עבור מחקרים התפתחותיים של אריתרופויזה.

בעבר הראו כי ביטוי קוקטייל ארבע-factor, GATA1, TAL1, LMO2, ו- c-MYC (GTLM), מספיקה לתכנת fibroblasts מאתר והן אנושיים ישירות אל erythroid המושרה אבות (iEPs) 10. erythroid היו GTLM תאים דומים במידה רבה bona פיד ה אבות erythroid פרימיטיבית במובן של ביטוי של מורפולוגיה, פנוטיפ, ג'ין-10. לפיכך iEPs מוגבלת יכולת התפשטות, התבגרת. דומים לאלו transiently מיוצר העובר מוקדם לפני התחלתה של אריתרופויזה סופית nucleated אריתרוציטים. על-ידי ביצוע שינויים בתנאים התיכנות (למשל, נקודת מוטציות בגן התכנות גורמים או גורמים אחרים), אפשר להבין איך זה יוביל לשינויים erythroid פיתוח ובידול. אנחנו למשל הראו כי תוספת של Klf1 או Myb GTLM במסיבת הקוקטייל משתנה התבנית ביטוי גלובין בעיקר עובריים (פרימיטיבי) כדי בעיקר למבוגרים (סופית). ממצא זה מאשר את החוקיות של השימוש DLR ככלי להגדרת גורמים התפתחותיים ב אריתרופויזה.

כאן, אנחנו חלוקה לרמות את התהליך של יצירת iEPs של עכבר זנב עצה fibroblasts (TTF). התוצאות נציג שלנו, ביצענו את התכנות על fibroblasts מן העכברים שושלת היוחסין-עקיבה erythroid (Epor- Cre R26- eYFP) אשר אקספרס החלבון הניאון צהוב (eYFP) של לוקוס Rosa26 כל התאים את זה הביעו את הקולטן אריתרופויאטין, המאפשר ויזואליזציה קל של מחויבות השושלת erythroid. באמצעות שיטה זו, YFP חיובי (EpoR +) תאים נוכחים מוקדם ככל חמישה ימים לאחר התמרה חושית. פרוטוקול זה, מציע לכן, טכניקה חזקה ומהירה לדור של erythroid אבות במבחנה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הקמה ותחזוקה של זנב העכבר הראשי עצה פיברובלסט תרבויות

  1. להכין מאכלים מצופים ג'לטין (ממליץ על צלחת 10 ס מ עבור אחד זנב) על ידי ציפוי המשטח 0.1% ג'לטין המקננת המנות למשך כ 20 דקות ב 37 º C. האחות הפתרון ג'לטין מתוך קערה ולאפשר לו להתייבש במשך שעתיים לפחות.
  2. המתת חסד העכברים מאת נקע בצוואר הרחם. להסיר את הזנב עם מספריים, חיתוך בבסיס הזנב. שים את הזנב ב- saline פוספט באגירה של Dulbecco (DPBS) עם 2% סרום שור עוברית (FBS) עד מוכן לשימוש.
    הערה: לקבלת תוצאות מיטביות, זנבות צריך לקחת מן העכברים בסביבות גיל 6 עד 8 שבועות. ניתן לקחת מלוגנו עכברים שגילן עולה על 8 שבועות של גיל, עם זאת, כמו עידן עכברים, את יכולת התפשטות fibroblasts ואת היעילות של התכנות ירידה11זנבות.
  3. ביצוע כל השלבים הבאים של פרוטוקול זה ברדס תרביות רקמה בתנאים סטריליים. להכין פתרון טריפסין מדוללת של 0.02% טריפסין-EDTA ב DPBS ולהוסיף 5 מ"ל לתוך צלחת נייר 10 ס מ.
  4. לשטוף את הזנב, תחילה ב-70% אתנול, ולאחר מכן ב- DPBS. בקערה, מניחים את הזנב שטוח ולהשתמש מלקחיים שיצמיד אותו למקום. לעשות חתך על הזנב לאורך ציר האורך מהבסיס לקצה.
  5. לתפוס את הזנב עם זוג מלקחיים והחזק אותו אנכית. באמצעות זוג מלקחיים השני, אחיזה על העור לצד החתך בבסיס של הזנב, לקלף אותו. לעשות זאת משני צידי החתך עד העור יכול לקלף ומשיכה כלפי מטה לכיוון קצה הזנב.
  6. החזק את הזנב קלופים עם מלקחיים מעל המנה המכיל את הפתרון טריפסין, לחתוך את הזנב לחתיכות כ 1 ס מ ארוך. את החתיכות הזנב בפתרון טריפסין, להשתמש במספריים קטע את החלקים לחתיכות קטנות יותר. דגירה החלקים הזנב בפתרון טריפסין ב 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות.
    הערה: קטן יותר החלקים המועדפות כדי לספק כל חתיכה פני שטח גבוהה יחס נפח.
  7. להרוות את טריפסין באמצעות 2 כרכים של פיברובלסט הרחבה (את פליקס) בינונית (high-גלוקוז Dulbecco ששינה נשר בינוני (DMEM) עם 15% FBS, 2 מ מגלוטמין, חומצות אמינו שאינן הכרחיות (NEAA), 100 U/mL פניצילין/סטרפטומיצין).
  8. לאסוף את כל התוכן של המנה לתוך שפופרת 50 מ ל צנטריפוגה ב × 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. וארוקן את תגובת שיקוע, resuspend השברים הזנב ב 10 מ"ל של מדיום את פליקס טריים.
  9. להעביר חלקים הזנב בינוני מאכל מצופה ג'לטין, דגירה-37 מעלות צלזיוס ב 5% CO2 ו- 4% O2, הוספת בינוני את פליקס טריים כל יומיים.
    הערה: לאחר חמישה עד שבעה ימים, הזנב שברי שיש המצורפת בתחתית של המנה, fibroblasts ניתן לראות מתרחק מהם.
  10. ברגע אשכולות של fibroblasts הם הבחינו, לנער בעדינות את המנה כדי לסלק את הזנב חתיכות וארוקן את המדיום ואת כל שברי עצם עוזב את fibroblasts מחובר לצלחת. הוסף חדש בינוני את פליקס, תרבות של fibroblasts עד confluent.
  11. כדי להבטיח שום זיהום fibroblasts על ידי אבות hematopoietic, לבטל את התאים מהצלחת באמצעות טריפסין x 1-EDTA עבור 5 דקות ולאסוף את התאים. לרוקן עבור תאים המבטאים סמנים hematopoietic (CD117, CD5, CD45R (B220), CD11b, אנטי-Gr-1 (Ly-6G/ג), 7-4, וטר-119) באמצעות מערכת הפרדה מגנטית10.

2. הרטרווירוס הפקה

  1. זרע אריזה retroviral תאים על 2.5 × 104 תאים/cm2 (2.0 × 106 תאים עבור תבשיל 10 ס מ) צלחת שטופלו תרביות רקמה (על-ידי ואקום-גז פלסמה) ותרבות לילה ב- high-גלוקוז DMEM עם 10% FBS, 10 מ מ נתרן פירובט, 100 U/mL פניצילין/סטרפטומיצין-CO 37 ° C ו-5%2.
  2. למחרת בבוקר, לשנות את המדיום DMEM עם תוספים לא באמצעות לחצי מנפח נהגה תרבות בין לילה (5 מ"ל על צלחת 10 ס מ). אחר הצהריים, בדוק התאים הם 70-80% confluent להתחיל על תרביות תאים.
  3. עבור כל גורם התיכנות, Gata1, Tal1, Lmo2, ו- c-Myc, להכין תערובת 2:1 של הביטוי וקטור (pMX), המסייע וקטור (המכיל גנים איסור פרסום ו pol). תבשיל 10 ס מ של fibroblasts, לשימוש µg 6 של הביטוי וקטור ו- 3 µg של המסייע וקטור בנפח סופי של 100 µL DMEM בינוני.
  4. עבור כל גורם התיכנות, להכין µL 300 בטמפרטורת החדר (RT) DMEM בשפופרת פוליסטירן סטרילי ולהוסיף בזהירות µL 27 של ריאגנט תקנים מסחרי.
    הערה: הכימית תרביות תאים מוטב שינתן RT לפני השימוש, יש להוסיף ישירות לתוך המדיום כמו המאפיינים אלקטרוסטטית של המתחם יכול לעשות את זה להיצמד לקיר פלסטיק של הצינור.
  5. להוסיף את תערובת פלסמיד לתוך תרביות תאים המכילים ריאגנט הצינורית, מערבולת בקצרה, דגירה התערובת ריאגנט-DNA תרביות תאים למשך 15 דקות ב- RT. בקצרה מערבולת התערובת ולהוסיף אותו dropwise התאים retroviral אריזה כך תרביות תאים מיקס ריאגנט-DNA אחיד מורחים את התרבות, דגירה ב 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  6. 24 שעות לאחר תרביות תאים, לשנות את המדיום DMEM עם 20% FBS ו פניצילין U/mL 100/סטרפטומיצין.... 48 שעות לאחר תרביות תאים, לאסוף את תגובת שיקוע ולסנן אותו דרך מסנן גודל הנקבוביות מזרק 0.22 מיקרומטר.
    הערה: supernatants ויראלי יכול להיות קפוא-80 מעלות, נשמרים עד נדרש, למרות התמרה חושית יעילה יותר אם תגובת שיקוע ויראלי טרי משמש.

3. התמרה חושית GTLM ו- iEP קציר

  1. זרע הזנב עצה fibroblasts-1 × 104 תאים/cm2 ב- 0.1% ג'לטין מצופה מראש מנות במדיום את פליקס, דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה.
  2. למחרת, להכין תערובת התמרה חושית כדלקמן.
    1. להוסיף נפח 1 של תגובת שיקוע נגיפי עבור כל גורם התיכנות בתוספת 4 µg/mL של זיהום retroviral ריאגנט (40%) 6 כרכים של פליקס בינונית (60%).
    2. תבשיל 10 ס מ של fibroblasts, הוסיפו 1 מ"ל של כל תגובת שיקוע ויראלי (וירוסים × 4 = 4 מ"ל) בתוספת 4 µg/mL של זיהום retroviral ריאגנט 6 מ של בינוני את פליקס, נותן סך של 10 מ"ל התמרה חושית תערובת.
  3. וארוקן את פליקס בינוני מתרבות פיברובלסט ולהחליף אותו עם התערובת התמרה חושית. דגירה של התמרה חושית במשך 4 שעות ב 37 מעלות צלזיוס בתנאים ובשפתיים (5% CO2 ו- 4% O2).
  4. וארוקן את התערובת התמרה חושית ולהחליפו בינוני התיכנות טריים (ללא סרום הרחבה בינונית (SFEM), 100 U/mLPenicillin/סטרפטומיצין, 100 ננוגרם למ"ל תאי גזע מאתר פקטור (mSCF), 10 ננוגרם למ"ל מאתר אינטרלוקין-3 (IL3), 2 רקומביננטי האנושי U/mL אריתרופויאטין (hrEPO), ו- 100 ננומטר דקסאמתאזון).
  5. תקופת דגירה של יופי 8 37 מעלות צלזיוס בתנאים שתקבעו, הוספת בינוני התיכנות טריים כל יומיים. אחרי חמש-שמונה ימים, התכנות מוצלחת תניב אשכולות של תאים יש תלושים מהצלחת.
  6. כדי לאסוף מחדש תאים עבור ניתוח, בעדינות פיפטה למעלה ולמטה כדי לקצור אותם ישירות מתוך קערה. הקציר fibroblasts untransduced להשוואה, לנתק את התאים מהצלחת באמצעות טריפסין x 1-EDTA ולאסוף.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כאן אנו מציגים עבור הייצור של iEPs מ fibroblasts למבוגרים באמצעות שעתוק מקדם מונחה-DLR פרוטוקול לשחזור. נוכל להעריך את התא התכנות באמצעות cytometry זרימה, המושבה יוצרי מבחני ג'ין ביטוי ניתוח. על מנת לסייע החזיית ההמרה לגורל erythroid, ביצענו את התכנות על fibroblasts מן העכברים שושלת היוחסין-עקיבה erythroid (Epor- Cre R26- eYFP) אשר מבטאים את החלבון הניאון צהוב (eYFP) מתוך מיקומה Rosa26 בתאים כל המבטאים את הקולטן אריתרופויאטין (Epor, Cre והגיון אלל אחד ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ביטוי של קוקטייל ארבע-factor, GATA1, TAL1, LMO2, ו- c-MYC (GTLM), מספיקה לתכנת fibroblasts מאתר ואנושי ישירות אל iEPs10. התאים היו erythroid דמה מאוד בונה פיד ה אבות erythroid במונחים של מורפולוגיה, פנוטיפ, ביטוי גנים ויכולת המושבה יוצרי. ממצא זה אם יאשר הרציונל של שימוש ישיר התכנות ככלי להגדרת גורמים התפתחותיים ב- hematopoiesis. כדי לתמוך את תוקפו של שיטה זו, iEPs גם ניתן להפיק באמצעו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים יש שאין ניגודי אינטרסים לדווח.

תודות

אנו מודים אוולין וואנג והייד גרגורי (מכון וייטהד, Cambridge, MA) על שיבוט, הארווי Lodish (מכון וייטהד) למתן רבים פלסמידים משמש ליצירת ספריית retroviral. אנו מודים Kavitha Siva, סופי Singbrant (המחלקה לרפואה מולקולרית, ריפוי גנטי, אוניברסיטת לונד), גוראן קרלסון, סאנג'י שמיט (המחלקה להמטולוגיה מולקולארית, אוניברסיטת לונד) על תפקידיהם בתיאור של ייצור iEP. אנחנו רוצים גם להכיר ולהודות ג'וליאן Pulecio (מרכז של רפואה רגנרטיבית, ברצלונה פארק מחקר ביו-רפואית), ויולטה זהורית-אסטרדה (רוקפלר אוניברסיטה, ניו יורק), קארל Walkley (המכון למחקר רפואי סנט וינסנט, מחלקת רפואה, בית החולים סנט וינסנט, אוניברסיטת מלבורן), רעיה אנחל (קטלאנית במוסד לחולי ומחקר ללימודים מתקדמים, ברצלונה), ענבר G. עמי הולצמן (מכון רחבה של מכון מסצ'וסטס של טכנולוגיה, הרווארד, קיימברידג ) על תרומתם קודמת לעבודה זו. עבודה זו נתמכה על ידי קרן Söderberg רגנר (כדי ג'יי); מחקר שוודי המועצה (כדי ג'יי); Stiftelsen Olle Engkvist Byggmästare (כדי ג'יי); העמותה השבדית לחקר אסטרטגי (כדי ג'יי); הקרן של אקא Wiberg (כדי ג'יי); מענק אינטגרציה מארי קירי (כדי ג'יי).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMEM ללא נתרן פירובטGE Life SciencesSH30022.01אמצעי תרבית לתאי PhGP
DMEM עם נתרן פירובטGE Life SciencesSH30243.01אמצעי תרבית לפיברובלסטים בקצה הזנב
StemSpan Serum Free Expansion Media (SFEM)טכנולוגיות תאי גזע9650מדיית תכנות מחדש 
סרום בקר עוברי HyCloneGE Life SciencesSH30071.03HIגורם גדילה
פניצילין/סטרפטומיצין HyClone (100x)GE Life SciencesSV30010אנטיבויוטיות
לא חיוניות (100x)Thermo Fisher11140050SNL Media מסופקת עם
חומר דיסוציאציהTrypsin HyClone (1x)GE Life SciencesSH30042.01
פקטור תאי גזע של עכברים (mSCF)פרוטק250-03נוסף לתכנות מחדש
של מדיה רקומביננטית עכברית Il-3פפרוטק213-13נוסף לתכנות מחדש של מדיה
אריתרופוייטין אנושי רקומביננטי (hrEPO)פפרוטק100-64נוסף לתכנות מחדש של מדיה
דקסמתזוןסיגמא50-02-2   נוסף לתכנות מחדש של מדיה
ג'לטין מעור חזירסיגמא9000-70-8 מפורק ב- dH2O ומשמש לציפוי צלחות. יש לוודא סטריליות לפני השימוש.
Blasticidin S hydrochlorideSigma3/9/3513אנטיביוטיקה לבחירה. משפיע הן על תאים פרו-והן על תאים אוקריוטיים
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)Ge Life SciencesSH30850.03משמש לשלבי כביסה
PolybreneMerckTR-1003-Gזיהום / טרנספקציה  מגיב
FuGENE HD Transfection ReagentPromegaE2311מגיב טרנספקציה לקו תאים PhGP
Millex-GP יחידת מסנן מזרק 0.22 ומיקרו; mMerckSLGP033RSמשמש לסינון וירוסים סופרנטנט
BD אמרלד מזרק היפודרמיבקטון דיקינסוןמק"ט: 307736משמש לסינון וירוס סופרנטנט
100 מ"מ צלחת תרביתקורנינג430167תרבית תאים
צלחת 6 בארותפלקון10799541תרבית תאים
תכשיטן מלקחיים #5Sklar66-7642משמש ל טיפול בשברי זנב קטנים
מספריים איריס SklarliteSklar23-1149משמש לחיתוך הזנב לחתיכות קטנות
ערכת דלדול תאים שושלת, עכברMiltenyi Biotec130-090-858לדלדול תאים המטופויאטיים בתרביות פיברובלסטים
CD117 MicroBeads, עכברMiltenyi Biotec130-091-224לדלדול תאים המטופויאטיים בתרביות
פיברובלסטיםתאי PheonixGPATCCCRL-3215קו תאי אריזה רטרו-ויראלי
וקטור EcoPAC (pCL-Eco) Novus BiologicalsNBP2-29540וקטור עוזר רטרו-ויראלי המכיל גנים gag ו-pol
pMX-Gata1משובט במעבדה
pMX-Tal1משובט במעבדה
pMX-Lmo2משובט במעבדה
pMX-cMycמשובט במעבדה
תוכנת CellSens Standard 1.6 תוכנה לניתוח ציטוספין
חומצות אמינו תאים זה של

מקורות

  1. Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. Are We Really Vastly Outnumbered? Revisiting the Ratio of Bacterial to Host Cells in Humans. Cell. 164 (3), 337-340 (2016).
  2. Lujan, E., Chanda, S., Ahlenius, H., Sudhof, T. C., Wernig, M. Direct conversion of mouse fibroblasts to self-renewing, tripotent neural precursor cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (7), 2527-2532 (2012).
  3. Szabo, E., et al. Direct conversion of human fibroblasts to multilineage blood progenitors. Nature. 468 (7323), 521-526 (2010).
  4. Pereira, C. F., et al. Induction of a hemogenic program in mouse fibroblasts. Cell Stem Cell. 13 (2), 205-218 (2013).
  5. Batta, K., Florkowska, M., Kouskoff, V., Lacaud, G. Direct reprogramming of murine fibroblasts to hematopoietic progenitor cells. Cell Reports. 9 (5), 1871-1884 (2014).
  6. Yu, B., et al. Reprogramming fibroblasts into bipotential hepatic stem cells by defined factors. Cell Stem Cell. 13 (3), 328-340 (2013).
  7. Hendry, C. E., et al. Direct transcriptional reprogramming of adult cells to embryonic nephron progenitors. Journal of the American Society of Nephrology. 24 (9), 1424-1434 (2013).
  8. Vierbuchen, T., Wernig, M. Direct lineage conversions: unnatural but useful. Nature Biotechnology. 29 (10), 892-907 (2011).
  9. Capellera-Garcia, S., Flygare, J. Direct lineage reprogramming: a useful addition to the blood cell research toolbox. Expert Review of Hematology. 10 (2), 107-109 (2017).
  10. Capellera-Garcia, S., et al. Defining the Minimal Factors Required for Erythropoiesis through Direct Lineage Conversion. Cell Reports. 15 (11), 2550-2562 (2016).
  11. Mahmoudi, S., Brunet, A. Aging and reprogramming: a two-way street. Current Opinions in Cellular Biology. 24 (6), 744-756 (2012).
  12. Singbrant, S., et al. Erythropoietin couples erythropoiesis, B-lymphopoiesis, and bone homeostasis within the bone marrow microenvironment. Blood. 117 (21), 5631-5642 (2011).
  13. Heinrich, A. C., Pelanda, R., Klingmuller, U. A mouse model for visualization and conditional mutations in the erythroid lineage. Blood. 104 (3), 659-666 (2004).
  14. Gautier, E. L., et al. Gene-expression profiles and transcriptional regulatory pathways that underlie the identity and diversity of mouse tissue macrophages. Nature Immunology. 13 (11), 1118-1128 (2012).
  15. Psaila, B., et al. Single-cell profiling of human megakaryocyte-erythroid progenitors identifies distinct megakaryocyte and erythroid differentiation pathways. Genome Biology. 17 (1), 83(2016).
  16. Pulecio, J., et al. Direct Conversion of Fibroblasts to Megakaryocyte Progenitors. Cell Reports. 17 (3), 671-683 (2016).
  17. Kurita, R., et al. Establishment of immortalized human erythroid progenitor cell lines able to produce enucleated red blood cells. PLoS One. 8 (3), 59890(2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

המרה של פיברובלסטיםביטוי יתר של גורמי שעתוקתכנות מחדש של GTLMמבחן יצירת מושבותניתוח FACSביטוי גנים ב-qPCRתאים חיוביים ל-YFPסמן TER-119
ישיר לשושלת התכנות של העכבר למבוגרים פיברובלסט Erythroid אבות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.