אנו מתארים שבאתר מעוצב במבחנה זרימה קאמרית מודל, אשר מאפשר החקירה של חיידקי ההקפדה להשתיל רקמות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל במבחנה של מערכת מקבילה-Plate זלוף ללמוד חיידקי ההקפדה להשתיל רקמות
במאמר זה
סיכום
תקציר
תעלות valved שונים ושסתומים רכוב סטנט משמשים עבור יצוא נכון חדרית בדרכי (RVOT) החלפת שסתום בחולים עם מחלת לב מולדת. בעת השימוש בחומרים תותבת עם זאת, אלה שתלי רגישים זיהומים חיידקיים ותגובות מארח שונים.
זיהוי גורמים בקטריאלי, המארח לשחק תפקיד חיוני endovascular הדבקות של מיקרואורגניזמים, יש חשיבות כדי להבין טוב יותר את הפתופיזיולוגיה של תחילת זיהומים כמו אנדוקרדיטיס זיהומית (IE) וכדי לפתח מניעתי אסטרטגיות. לפיכך, פיתוח מודלים המוסמכת לחקור אדהזיה חיידקי בתנאים הטיה פיזיולוגית נחוצה. כאן, אנו מתארים את השימוש החדש תוכנן במבחנה זלוף תא בהתבסס על לוחות מקבילים המאפשר שהמחקר של חיידקי ההקפדה מרכיבים שונים של השתלת רקמות כגון חשוף מטריצה חוץ-תאית, תאי אנדותל ואזורי אינרטי . שיטה זו בשילוב עם המושבה יוצרי יחידה (CFU) סופר מספיקה להעריך של הנטייה של שתל חומרים לקראת הדבקה חיידקית תחת זרימה. בהמשך, מערכת קאמרית הזרימה עשויה לשמש כדי לחקור את התפקיד של רכיבי הדם אדהזיה חיידקי בתנאים הטיה. להדגים כי המקור של רקמות, שלהם מורפולוגיה משטח וספציפיות חיידקים אינם היזע הגדולות בחיידקיים ההקפדה להשתיל רקמות באמצעות מודלי שלנו ללא צורך במיקור חוץ מעוצב במבחנה זלוף.
מבוא
Staphylococcus aureus (S. aureus) מעסיקה במגוון אסטרטגיות התקפה אלימה כדי לעקוף את מערכת ההגנה החיסונית המארח להמדינות משטחים ביולוגי או הלא-ביולוגיים מושתלים במחזור האנושי, אשר מוביל לזיהומים קרישה תוך-כלית חמורות כגון אלח דם, IE1,2,3,4,5. שרידים IE לטיפול חשוב הקשורים סיבוך בחולים לאחר ההשתלה של מסתמי לב תותב תוך בודדים גורמים התורמים תחילתה של IEare לא אך מובן לחלוטין6,7. תחת תנאי זרימה, חיידקים מפגש כוחות גזירה, אשר הם צריכים ל....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. מכינים את השתלת רקמות ללימודי במבחנה
הערה: שלושה סוגים של רקמות שימשו: תיקון קרום הלב שור (BP), שתלי מאותו מין Cryopreserved (CH), ומוחלף שור (BJV). במקרה של צינור BJV ושר (רקמות מעובד על ידי הבנק האירופי מאותו מין (אב) ומאוחסנים לפני השימוש בחנקן נוזלי), שימשו קיר והן valvular פליירים. BP תיקון של צינור BJV נרכשו מן היצרנים. לפני השימוש, יש להפשיר CH בעקבות ההוראות אב12.
- שוטפים לכל רקמות עם 0.9% NaCl לפני השימוש.
- להכין ביופסיות רקמות באמצעות ביופסיה העור חד פעמי ניקוב לחתוך חתיכות רקמה מעגלית (10 מ מ קוטר).
- חותכים כל רקמת טלאים לאותו גובה שימוש חד פעמי סטרילי ואזמלי מנתחים.<....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כדי להבין טוב יותר את המנגנונים מאחורי IE פיתוח, מודל זה מאפשר הערכת בקטריאלי ולהציג גורמים רקמות הקשורים במצב ויוו תחילת הזיהום.
בפירוט, הגישה הרומן במבחנה מאפשר לכמת אדהזיה חיידקי בתנאי זרימה לרקמות שונות השתל על ידי פרפוזיה חיידקים fluorescently שכותרתו על הרקמות הפעלת הלחצים הטיה בטווח פיזיולוגיים של דיין 3-10 / ס מ2 עבור RVOT. בעבודה זו, השתמשנו קצב זרימה של 4 mL/min שמשקף דיין 3/ס מ
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
תצפיות קליניות האחרונות נותן מודעות מיוחדת IE כמו סיבוך בחולים שעברו החלפת שסתום של6,RVOT13. תפקוד לקוי של השסתום מושתל ב- IE הוא התוצאה של חיידקי אינטראקציה עם השתל endovascular שמוביל נרחב דלקתיות ו procoagulant תגובות1,14. המודל הציג הרומן במבחנה אפשר לנו לחקור אם הבדלים רקמות מבנים וגורמים חיידקי סביר לווסת את הרגישות לזיהומים ויוו בשימוש שתלי15. BJV ורקמות שת.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
מחקר זה מומן על ידי מענק של לופן KU קרן מחקר (OT 14 097) שניתנה RH. TRV היה בחור דוקטורט של קרן המחקר FWO - פלנדרס (בלגיה; להעניק מספר - 12K0916N) ו RH הוא נתמך על ידי קרן מחקר קליני של UZ לוון.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מדבקת קרום הלב בקר (BP), Supple Peri-Guard Pericardium | Synovis Surgical Innovations, ארה"ב | PC-0404SN | |
| צינורות וריד צוואר בקר (BJV) | Contegra; מדטרוניק בע"מ, ארה"ב | M333105D001 | |
| CH הומוגרפט שמור בהקפאה | European Homograft Bank (EHB) | - | |
| Acu-Punch | Acuderm Inc, ארה"ב | P850 (8 מ"מ); P1050 (10 מ"מ) | |
| אלבומין אנושי | Flexbumin; בקסטר, בלגיה | BE171464 LOT:16G12C | |
| מרק סויה טריפטי (TSB) | פלוקה, שטיינהיים, גרמניה | 22092-500 גרם | |
| מרק עירוי לב (BHI) | Fluka | 53286-500G | |
| מלח פוספט חוצץ (PBS). | Gibco | 14190-094 | |
| 5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester (CF) | Sigma-Aldrich, גרמניה | 21878-100MG-F | |
| משאבה פריסטלטית (דגם ISM444B) | תקן Ismatec BVP-Z; קול פארמר, ורטהיים, גרמניה | 631942-2 | |
| אמבט סוניקציה | VWR מנקה אולטראסוני; VWR, רדנור, Pa | 142-6044 | 230V/50 -60Hz 60VA; HF45kHz, 30W |
| ProLong Gold Antifade | Mountant Invitrogen מאת ThermoFisher | P36930 | |
| InCell Analyzer 2000 (סורק פלואורסצנטי) | GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA | 29027886 | |
| Arium Pro VF - מים אולטרה-טהורים - H2O MilliQ | Millipore | 87206462 | |
| שקופיות מיקרוסקופיות - תאי תרבית רקמות (1-well) | Sarstedt | 94.6140.102 | |
| באר אחת על Lumox ניתנת להסרה | Sarstedt | 94.6150.101 | |
| נירוסטה - להבים כירורגיים | Swann-Morton | 311 | |
| צינורות סיליקון טיגון, 1/8 אינץ' ID x 1/4 אינץ' OD | Cole-Parmer | EW-95702-06 | טווח טמפרטורות: – 80 עד 200° עיקור C : עם תחמוצת אתילן, קרינת גמא או חיטוי למשך 30 דקות, 15 psi של |
| לחץ צינורות PharMed BPT | Saint-Gobain | AY242012 | ניתנים לחיטוי 30 דקות ב-121 מעלות; C |
| Tygon LMT-55 צינורות | סנט גוביין ביצועים פלסטיק וסחר; | ||
| 15312022 תרמוסטט | BMG BIOMEDIZINTECHNIK | 300-0042 | 230V, 90VA, 50Hz |
מקורות
- Que, Y. A., Moreillon, P. Infective endocarditis. Nature Reviews Cardiology. 8 (6), 322-336 (2011).
- Werdan, K., et al. Mechanisms of infective endocarditis: pathogen-host interaction and risk states. Nature Reviews Cardiology. 11 (1), 35-50 (2014).<....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
