מאמר שיטה

בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

14.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58499

⸱

18 בנובמבר 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 2Department of General Surgery, The Second Xiangya Hospital, Central South University

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאסוף דגימות דם מן הווריד בריחי של חולדה.

תקציר

איסוף דם עם מספיק נפח הדם חיונית בניסויים על בעלי חיים. איסוף דם מן הווריד של הזנב של חולדות הוא פופולרי פחות מלחיץ לעומת שיטות אחרות אגרסיבי יותר כמו רטרו-מסלולית מקלעת לטעום אוסף. עם זאת, שיטה זו של אוסף דם לפעמים מוגבל על ידי שיעור ההצלחה משביעת רצון. כאן, אנחנו מציגים את שיטת איסוף דם דרך הווריד בריחי הניקוב. תקחי את בריחי ממוקם בדיוק מתחת לעצם הבריח, הוריד הזה הוא מספיק גדול כדי למלא את דרישות האחסון של איסוף דם. התוצאות שלנו מראים כי בשיטה זו הוא בטוח וישימים לדיגום אוסף דם עם נפח הדם הנדרשת. איסוף דם דרך הווריד בריחי הניקוב יכול לשמש כמו שיטת איסוף דם חלופי במקרה של לקיחת דמים וריד הזנב שנכשלו בחולדות.

מבוא

איסוף דם חיוני בתחום המחקר בבעלי חיים. הורידים היעד עבור איסוף דם כוללים את מקלעת רטרו-מסלולית, ומוחלף על, וריד saphenous, כלי הדם הזנב את העורק הראשי1,2,3,4. לפעמים, דם יכולה להיות מושגת העורק הראשי, הנבוב או אפילו את הלב5,6,7. במקרים כאלה, בעלי החיים חייבים להיות מוקרבים ואין אפשרות להשתמש להשגחה הבאים; לכן, שיטות אלה משמשים פחות בעבודה היומיומית ניסיוני. איסוף דם מן הווריד של הזנב של חולדות הוא פופולרי ומלחיץ פחות לעומת שיטות8שהוזכרו לעיל.

עם זאת, איסוף דם מן הווריד של הזנב לפעמים מוגבל על ידי שיעור ההצלחה משביעת רצון. לפעמים, זה גם קשה להשיג מספיק נפח הדם בשיטה זו. כפי הווריד בריחי גדול מספיק והוא ממוקם בדיוק מתחת לעצם הבריח, ניקוב בריחי הווריד יכולה להיות שיטה חלופית עבור דגימה דם אם דם שגרתית אוסף שיטות נכשלות. כאן, אנחנו מציגים את שיטת איסוף דם דרך הווריד בריחי לנקב בחולדות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה אושרה על ידי ועדת האתיקה המרכזית של אוניברסיטת דרום לחקר בעלי חיים מבית החולים Xiangya השני (צ'אנג-שא, סין). כתב היד הוכן לפי יגיעו (חיה מחקר: דיווח ב- Vivo ניסויים) הנחיות9.

1. החומר של בעלי חיים הכנה

  1. להכין חומרים הדרושים: דבק, הסוכן epilating, 75% אתנול, דם אוסף שפופרת, מזרק 2.5 מ ל מחובר עם מחט (24 G, 0.6 מ"מ x 25 מ"מ), גילוח שיער, מידה אלקטרוניים מד (ראה טבלה של חומרים).
  2. השתמש 20 חולדות ספראג-Dawley (SD), בגילאי 8-10 שבועות, במשקל 153-200 g (ראה טבלה של חומרים). לשמור על חולדות לפי המדריך בשביל טיפול, שימוש של חיות מעבדה10.
  3. חולדות House בתנאים סטנדרטיים עם גישה חופשית שתייה ואוכל. לשמור אותם בכלובים2 ס מ 530 עם מצעים עץ גילוח (שני עכברושים לכל הכלוב). לשמור על חיות מבוקרי טמפרטורה טמפרטורת החדר. ב בסביבות 25 º C.
  4. זירוז הרדמה כללית (סודיום פנטוברביטל 40 מ"ג לק"ג) כל בעלי החיים באמצעות הזרקה בקרום הבטן לפני הניקוב בריחי וריד.
  5. מקם את החולדה במצב פרקדן. לתקן את הגפיים האחוריות בתנוחה נוחה ולתקן את הגפיים העליונות מקביל לציר הגוף ליד תא המטען.
    הערה: אין אוורור מכני נדרש עבור הליך זה (איור 1).
  6. לנקות את שני הצדדים של המרחב infraclavicular להסרת פרווה (עם גילוח שיער, הסוכן epilating, ראה טבלה של חומרים) ולכלוך לעין כל. נגב את הצוואר, בית החזה העור עם 75% אתנול. שמור על האזור עבור ניקוב נקי ויבש עם גזה.

2. הליך איסוף הדם

הערה: שני צידי הווריד בריחי מתאימים לנקב ולאחר כאן בחרנו את הצד הנכון עבור ניקוב. המיקום והכיוון של הבריח הימנית מזוהים על ידי האגודל השמאלית של המפעיל (איור 2). Fossae suprasternal הם נגע בעדינות עם האצבע. כמו fossae suprasternal הוא בכיוון של המחט (איור 2).

  1. לשטוף מזרק 2.5 מ ל סטרילי עם הפרין פתרון (10 IU/mL).
  2. אתר החדירה 0.5 מ מ סימטרית לאזור 1/3 החיצוני של הבריח הימנית (איור 3). הזז את המזרק בעדינות לתוך העור של החדירה. ברגע שהמחט מזין את העור infraclavicular, הפעילו לחץ שלילי עם יד ימין של המפעיל (איור 4).
    הערה: נפח הדם הממוצע ואת מירבית הן 1.0 mL ומל ' 1.4, בהתאמה. כיוון המחט נמצאת בעמדה כלפי fossae suprasternal לבין צריך להיות כמעט מקבילים עצם הבריח אחורי רק אליו. בדרך כלל, תקחי את בריחי ניתן להגיע על ידי החדרת המחט בערך 2 מ מ בכיוון הזה. ברגע שהמחט נכנסת את הווריד, דם יזין את המזרק בלחץ שלילי.
    1. לשמור על לחץ שלילי עד נמשך מספיק נפח הדם (איור 5).
  3. אם האוסף דם בריחי וריד אינה מוצלחת, לשלוף את המחט אל אזור תת עורית ולהתאים את הכיוון של המחט מעט פנים לעצם החזה.
    1. אם שלושת הניסיונות, למנוע את הווריד בריחי מן הצד אותו ולהשתמש הצד contralateral עבור לקיחת דמים.
  4. לאחר איסוף דם, הסר את המחט לנקב, והפעילו לחץ כדי החדירה במשך 1-2 דקות לעצור את הדימום.
    הערה: הלחץ חייב להיות עדין מאוד כדי למנוע חנק.

3. דם לטעום עיבוד

  1. להעביר את דגימת הדם שפופרת ריק מצופים קרישה (עם EDTA) לתוך צנטריפוגה 10 דקות ב g x 1600 לאסוף פלזמה.
  2. וארוקן את תגובת שיקוע צינור נקי ו החנות ב-80 מעלות צלזיוס (איור 6).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

סכום כולל של 20 של חולדות SD (זכר n = 10, נקבה n = 10) שימשו כאן. Collectionwas דם המבוצעת על ידי מפעילי מיומן, אשר יש לבצע יותר מ-20 samplings דם הווריד בריחי בחולדות, ועל ידי האופרטורים מתחיל, שיש להם אין לנקב בריחי וריד ניסיון של חולדות או חיות אחרות. לפני פעולות, למתחילים צפו לפחות 3 הטיפולים על ידי מפעילים מיומנים.

לקיחת דמים הצליח ללבנים דרך הגישה וריד בריחי הנכון. הליך זה נכשל בחולדות 3 (1 בקבוצה מיומן) ו- 2 הקבוצה למתחיל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כאן, אנו מציגים את שיטה חלופית לחילוץ דם מן הווריד של הבריח, אנו מראים כי בשיטה זו הוא ריאלי, בטוח ו ישימים עבור דגימה דם בחולדות. שיטה זו נגזרת הניקוב בריחי וריד ב קוצב הלב הראשי השרשה עבור חולים11. הווריד בריחי ממוקם רק האחורי, סימטרית. יווארה לעצם הבריח, המשך הווריד בבית השחי. הפעלת מהגבול החיצוני של הצלע הראשונה לגבול המדיאלי של השריר הקדמי scalene12. מכאן, זה מצטרף עם הפנימי, ווריד הצוואר כדי ליצור את הווריד brachiocephalic ו מנקז לתוך הנבוב סופר, מתחת suprasternal fos...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

עבודה זו נתמכה על ידי המענק מן הלאומי מדעי הטבע קרן של סין מס 81670269, מס 81500355 מס 81500226.

תודות

אף אחד לא הכריז.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
חולדותהונאן SJA מעבדה בעלי חיים ושות', בע"מ (צ'אנגשה, מחוז הונאן, סין) 
תוכנה סטטיסטיתSPSS סטטיסטיקה 17
סוכן אפילציהצרפת Yi Sha קוסמטיקה ושות', בע"מ (גואנגג'ואו, מחוז גואנגדונג, סין)
2.5 מ"ל מזרקשאנדונג Weigao קבוצה פולימר רפואי ושות', בע"מ (Weihai, מחוז שאנדונג, סין)
מכונת גילוח שיערשנחאי FLYCO Electric Co., Ltd (שנחאי, סין)
סרט דבק3M Deutschland GmbH (EdisonstraBe 6,59157 Kamen, גרמניה)
נתרן פנטוברביטלMerck
75% אתנולהמחלקה לרוקחות, בית החולים השני Xiangya של אוניברסיטת
צינור איסוף הדםHubei Jinxing Technology& פיתוח ושות', בע"מ (ווהאן הוביי פרובינציה, סין) (2 מ"ל)
בקנה מידה אלקטרונידונגגוואן Shengheng אלקטרוניקה ושות', בע"מ (דונגגוואן, גואנגדנג פרובינציה, סין)
כפפות בדלהרדמה
נאנג'ינג Xinbai פרמצבטיקה  ושות', בע"מ (נאנג'ינג, מחוז ג'יאנגסו, סין) (2 מ"ל, 12500 IU)
מלחפיזיהונאן קלון פרמצבטיקה ושות', בע"מ (יואיאנג, מחוז הונאן, סין) (100 מ"ל)
מרכז דרום

מקורות

  1. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
  2. Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
  3. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).
  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
  5. Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture. Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).
  6. Cochran, B. J., et al. Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT. Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).
  7. Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture. Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).
  8. Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
  9. Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
  10. National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
  11. Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation. Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).
  12. Luis, A. L., et al. Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).
  13. Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Infraclavicular SpaceSuperior Sternum Fossa

מאמרים קשורים