כאן, אנו מציגים מודל פיזיולוגיים ועוצמתי כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן, הספיגה במעיים – המעי הדק מבודד עכברוש perfused.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
המנגנונים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן באמצעות מבודד את Perfused המעי הדק עכברוש
במאמר זה
סיכום
תקציר
הבטן הוא האיבר הגדול ביותר האנדוקרינית של הגוף, לייצר יותר מ-15 שונים פפטיד ההורמונים המווסתים צריכת התיאבון ומזון, עיכול, ספיגת התזונתי, הפצה, וטיולים גלוקוז מים אחרונים. הבנת המנגנון המולקולרי המסדירים את הפרשת הורמון תחושת הבטן היא היסוד עבור הבנה ותרגום בטן הורמון פיזיולוגיה. באופן מסורתי, המנגנונים הפרשת הורמון בטן גם נלמדים ויוו (של חיות ניסוי או בני אדם) או באמצעות הבטן מפריש הורמון ראשי הרירית תא תרבויות או תא קווים. כאן, אנחנו מציגים של המעי הדק מבודד עכברוש perfused שיטה חלופית ללמוד הפרשת הורמון תחושת הבטן. המעלות של מודל זה זה מסתמך על הבטן ללא פגע, כלומר זה recapitulates רוב הפרמטרים החשובים מבחינה פיזיולוגית אחראי על הפרשת במחקרים ויוו, לרבות קיטוב הרירית, יחסים paracrine, דרכי חשיפה זלוף/גירוי. בנוסף, ולהבדיל מחקרים ויוו, המעי הדק מבודד עכברוש perfused מאפשר שליטה ניסויית כמעט מלאה והערכה ישירה של הפרשה. בניגוד מחקרים במבחנה, זה אפשרי ללמוד את סדר הגודל והן את הדינמיקה של הפרשת וכדי שאלות חשובות כתובות, כגון איזה גירויים לגרום הפרשת הורמונים שונים בבטן, באיזה צד של המעיים (luminal או כלי דם) הוא הפרשת גירוי, ולנתח את פירוט סנסורים המולקולרי שבבסיס התגובה הפרשה. בנוסף, ההכנה הוא מודל חזק לחקר הספיגה במעיים ופרטים לגבי הדינמיקה של הספיגה במעיים כולל אחראי למעליות.
מבוא
הבטן הוא האיבר הגדול ביותר האנדוקרינית של הגוף, לייצר יותר מ-15 שונים פפטיד ההורמונים לווסת את ספיגת התזונתי ואת תכונותיהם מזין, צמיחה מעיים, לווסת התיאבון1. הבטן הורמונים, לכן, מעורבים תהליכים פיזיולוגיים בסיסיים רבים, והוא להבנת הדפוסים הללו של הפרשת ופרטי מולקולרית הקובעות את הפרשת ההורמונים המתאימים לכן חשוב עבור טירונות פיזיולוגיים הבנה, למיעון היבטים translational מפעולות הורמון תחושת הבטן; אבל איך אחד יכול ללמוד את חישה. המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת בטן? באופן כללי, הפרשת הורמון יכול להילמד אורגניזמים שלמים (בני אדם או חיות ניסוי), ההכנות בטן מבודד או מתרבויות התא הראשי בטן מפריש הורמון או מונצחים תא תרבויות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל המחקרים נערכו באישור ניסויים חיה דנית Inspectorate (2013-15-2934-00833), הוועדה האתית המקומית, בהתאם להנחיות של חקיקה דנית בבע ח (1987) וסמכות הלאומית המכונים לבריאות (פרסום מס ' 85-23).
1. חיות ניסוי
- לקבל Wistar זכר חולדות (250 גרם) ואת בית 2 לכל כלוב, עם גישה ad libitum תקן האוכל והמים, ולשמור גם עם 12:12 h מחזור אור-כהה. המתקנים שלנו חיות משתמש מים שאינם מטופלים, Alrtromin מכרסם צ'או (1319 FORTI, Brogaarden, Lynge, דנמרק).
הערה: אפשר חיות לפחות שבוע של הסתגלות.
2. הכנות ממושכות
- להפוך את מאגר זלוף: מאגר ביקרבונט קרבס-חיזוק בתוספת 0.1% BSA (שבר V), 5% לתוספי fumarate T-70, 3.5 גלו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
יכולת לקבוע גירוי מסוים גורם הפרשת הורמון תחושת הבטן של עניין מסתמך על הפרשת בסיס יציב. יתר על כן, אם אין תגובה הגירוי הוא ציין, בתגובה הפרשה חזקים הפקד חיובית להיות ניכר כדי לא לכלול כי העדר תגובת הגירוי המבחן אינו משקף חוסר ההיענות הכללי. איור 2A ו- 2B מראה דוגמה של נתוני איכות טובה; GLP-1 הפרשת מן המעי הדק מבודד עכברוש perfused מוצגים במרווחים 1-מין (± באמצעים SEM). -תנאי הבסיס הפרשת יציב; גם לפני וגם אחרי הניהול של הגירוי מבחן (אינסולין),.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
המעי הדק מבודד עכברוש perfused הוא כלי מחקר רב עוצמה המאפשר את הדינמיקה ואת המנגנונים המולקולריים שבבסיס בטן הפרשת הורמון שילמדו בפירוט. השלב הקריטי ביותר לייצור מוצלחת של נתונים עם מודל זה הוא הפעולה הכירורגית. טיפול של המעיים באופן בלתי נמנע יגרום נזק אל המעי, לכן ולמורה כדי אבסולוטי מינימלי. . וחשוב מכך, מהירות הפעולה היא המפתח, בייחוד בכל הקשור הזמן עבור מיקום הצנתר בעורק מצע המעי העליון. הניסיון שלנו הוא כי הצנתר יוצב בהצלחה, זלוף צריך להיות יזם בתוך כמה דקות לאחר שיש לחתוך את החור בתוך הכלי. המיקום של קטטרים החלק ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים של עבודה זו מצהירים שאין פוטנציאל ניגודי אינטרסים הרלוונטיים למאמר זה.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי גרנט מוגבל ל פרופסור Jens Juul הולסט מהמרכז נובו נורדיסק למחקר בסיסי מטבולית (נובו נורדיסק קרן, דנמרק), מענק נפרד מן הקרן נובו נורדיסק עושה מחקרים זלוף מכרסמים (מענק. לא. NNF15OC0016574), מענק הולסט פרופסור מן המועצה האירופית למחקר (גרנט no.695069) ו theEuropean האיחוד הוא תכנית המסגרת השביעית למחקר, TechnologicalDevelopment של פעילויות הדגמה (מענק מס 266408), כמו גם של פוסט דוקטורט להעניק לרון אי Kuhre של הקרן לונדבק (R264-2017-3492). אנו מודים ג'נה אי האנט, קרולין פ דיקון להגהת זהיר.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| כימיקלים לחוצץ זלוף | |||
| אלבומין בסרום בקר (BSA) | Merck | 1.12018.0500 | |
| סידן כלוריד דיהידראט (CaCl2 x 2 H2O) | Merck | 102382 | |
| Dextran 70 | Pharmacosmos | 40014 | |
| מלח דיסודיום חומצה פומרית (C44H2Na2O4) | סיגמא אולדריץ' | F9642 | |
| גלוקוז (C6H12O6) | Merck | 108342 | |
| מגנזיום סולפט הפטאהידרט (MgSO4) | Merck | 105886 | |
| פוטזיום כלוריד (KCl) | Merck | 104936 | |
| אשלגן דימימן פוספט (KH2PO4) | Merck | 104873 | |
| חומצה פירובית מלח נתרן (C3H3NaO4) | Merck | 106619 | |
| נתרן ביקרבונט (NaHCO<תת>3) | Merck | ||
| נתרן כלורי (NaCl) | Merck | 106404 | |
| נתרן L-גלוטמט מונוהידראט (C5H8NNaO4 x H2O) | Merck | 106445 | |
| name | Company< | strong>Catalog Number | >Comments |
| Perfusion equitment | |||
| Universial Perfusion system | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| בסיסית 732316 יוניפר UP-100, סוג 834 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| משאבת רולר, עם ארבעה ערוצים | Harvard Bioscience, Inc. | 730100 | |
| וינדקסל | הרווארד ביוסיינס בע"מ | ||
| סירקולטור תרמוסטטי 732068, נפח אמבטיה 3 ליטר, 230V/50Hz | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| 730125 שולחן ניתוחים, מחומם על מעמד חצובה, סוג 873 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| צינורית עם תחום, OD = 2.0 מ"מ, ID = 1.0 מ"מ | Harvard Bioscience, Inc. |
מקורות
- Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. The "normal" endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences. Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).
- Brighton, C. A., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
