מאמר שיטה

העיכול של הכבד מאתר של ניתוח Cytometric זרימת הלימפה תאי אנדותל

DOI:

10.3791/58621

⸱

7 בינואר 2019

 ,  , 
1Division of Gastroenterology and Hepatology, Department of Medicine, University of Colorado Anschutz Medical Campus, School of Medicine, 2Department of Immunology and Microbiology, University of Colorado Anschutz Medical Campus

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המטרה של פרוטוקול זה היא לזהות הלימפה תאי אנדותל אוכלוסיות בתוך הכבד באמצעות סמנים המתואר. אנו מנצלים collagenase הרביעי ואת DNase לקמץ עדין של רקמות, בשילוב עם cytometry זרימה, לזהות אוכלוסייה ברורים של תאי אנדותל הלימפה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתוך הכבד, כלי הלימפה נמצאים בתוך הטראיידים פורטל, תפקידם המתואר הוא להסיר את נוזל בין-תאי הכבד אל קשרי הלימפה איפה להיות סקר פסולת הסלולר ו אנטיגנים. . אנחנו מאוד מעוניינים להבין כיצד להערכת הלימפה מעורבים דלקת ותפקוד תא החיסון בתוך הכבד. עם זאת, מעט מאוד שפורסם הקמת מערכת העיכול פרוטוקולים עבור בידודו של תאי אנדותל הלימפה (LECs) של הכבד או סמני ספציפי יכול לשמש כדי להעריך את הכבד LECs על בסיס לכל תא. לכן, אנחנו אופטימיזציה לפעולת העיכול, מכתים של הכבד על מנת להעריך את האוכלוסייה לץ בכבד. אנו בטוחים כי השיטה שמפורטות כאן יהיה שימושי עבור זיהוי ובידוד של LECs מן הכבד, תחזק את ההבנה שלנו של איך LECs להגיב microenvironment הכבד.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התפקיד של כלי הלימפה LECs בכבד אינה מובנת היטב. בעוד כלי הלימפה נמצאים בתוך הטראיידים הפורטל של הכבד1 ולהתרחב במהלך המחלה2, מעט מאוד מובנת לגבי תפקוד ו פנוטיפ של LECs בתוך הכבד. עם גילוי סמנים הנמצאים בעיקר על LECs3, ימלא החשיבות של תאים אלה בתוך גומחות רקמות שונות בהומאוסטזיס ומחלות פער משמעותי בהבנה שלנו. LECs יש תפקיד מרכזי בשמירה על סובלנות היקפיים הצומת לימפה, גידולים גרורות באמצעות אינטראקציה ישירה עם T תאים4,5,6,7,8, 9 , 10 , 11 , 12 , 13. LECs הצומת לימפה יכול לקדם חיסון הגנתי דרך האינטראקציות שלהם עם נדידת תאים דנדריטים14,15,16. לכן, ישנם תפקידים מרובים LECs אשר עשויים להיות ספציפיים ברקמות ואינטראקציות שבו הם נמצאים. עם זאת, מעט מאוד מובנת על איך LECs אינטראקציה עם תאים חיסוניים בתוך הרקמה או איך LECs פועלים מערכות איברים שונים; לפיכך, הערכת LECs על בסיס לכל תא בתוך הכבד או איברים אחרים עשויים להוביל ההתקדמות איך LECs תוכנית חסינות רקמות ספציפיות. אף רוב הספרים המתמקד LECs בכבד מיקרוסקופ כדי להמחיש LECs שימוש אחד או שני סמנים ומורפולוגיה17, מעט מאוד נעשה להעריך באופן ספציפי LECs על בסיס תא על-ידי התא באמצעות cytometry זרימה, מחקר אחד בכל זאת להעריך את ההבדלים בין תאי אנדותל sinusoidal הכבד (LSECs) LECs18. היכולת לנתח לץ אוכלוסיות בכבד על ידי cytometry זרימה מאפשר מחקר מעמיק של פנוטיפ לץ במהלך הומאוסטזיס נורמלי או מחלה.

כדי להעריך את LECs על ידי cytometry זרימה, נדרשים מספר סמני פני השטח. בדרך כלל, LECs הם דמיינו ידי הביטוי של גנים homeobox הקשורות פרוספרו 1 (Prox-1), קולטן חומצה היאלורונית אנדותל כלי הלימפה 1 (LYVE1) או צמיחה אנדותל כלי הדם קולטן 3 (VEGFR3) באמצעות מיקרוסקופ. עם זאת, בכבד, הביטוי של סמנים אלה אינה מוגבלת LECs. Prox-1 מבוטא באופן נרחב על-ידי hepatocytes במהלך פיתוח בכבד, התחדשות, פציעה19, LYVE1 ו- VEGFR3 באים לידי ביטוי על ידי תאי אנדותל כבד sinusoidal18. הצומת לימפה, LECs מזוהים באמצעות cytometry זרימה כמו אשכולות של בידול (CD) CD45 - CD31 +, podoplanin + (PDPN)16. עם זאת, גישה זו היא יותר מידי מינימלית כדי לבודד LECs בכבד מאז CD45 - CD31 + תאים ללכוד תאי אנדותל, האוכלוסייה הדומיננטית של תאי אנדותל כלי הדם בכבד הם LSECs. לפיכך, סמנים אחרים נדרשים כדי להבחין בין האוכלוסייה לץ נדיר מהאוכלוסייה LSEC שופע. CD16/32 (לידי ביטוי LSECs בוגר18) והן CD146 (נפוץ תא אנדותל כלי הדם סמן זה יוכפל לאחר המרתו לידי בתוך sinusoids הכבד תאי אנדותל sinusoidal הכבד20 עם מעט שום הבעה על ידי הלימפה תאי אנדותל21) היו הסמנים המועמד.

לכן, אנחנו אופטימיזציה שיטה אנליטית והצגה של LECs בכבד באמצעות את לעיל סמנים CD45, CD31, CD146, CD16/32, PDPN עבור cytometry זרימה. אנו מתארים את השימוש collagenase הרביעי DNase 1, ההפרדה המכני לעיכול רקמת הכבד להשעיה תא בודד. אנו מתארים גם את השימוש iodixanol דחיסות צבע עבור הבידוד של תאים שאינם parenchymal (NPC), כדי לסלק פסולת הסלולר. לבסוף, באמצעות מספר סמני, נוכל לקבוע האסטרטגיה המגביל ביותר cytometry זרימה אופטימלית לזהות LECs מן הכבד עם PDPN כמו דה מרקר הדומיננטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של הקמפוס הרפואי של Anschutz אוניברסיטת קולורדו.

1. הכנת החומרים

  1. להפוך את פתרון 5 מ"ג/מ"ל של DNase. אני בתוך תמיסת מלח באגירה פוספט (PBS).
  2. להכין תערובת העיכול על-ידי הוספת 5,000 U/mL של collagenase הרביעי EHAA מדיה של לחץ.
  3. לחמם את תערובת עיכול ב 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות לפני השימוש.
  4. להפוך של בידוד מאגר על-ידי הוספת 4.8% אלבומין שור (BSA) ומאוזנת 2 מ מ חומצה ethylenediaminetetraacetic (EDTA) של הנקס תמיסת מלח (HBSS).
  5. להפוך את מאגר תאי הדם האדומים (RBC) פירוק על-ידי הוספת 100 מ מ אמוניום כלוריד, 10 מ מ KHCO3ו- 0.1 מ"מ EDTA כדי מזוקקים H2O.

2. הכנת השעיה תא בודד של כבד עכבר

  1. המתת חסד את העכבר עם CO2 ונקע בצוואר הרחם.
  2. תרסיס למטה העכבר עם 70% אתנול להרטיב את פרוותו. להצמיד את העכבר הרגליים לקרש חיתוך.
  3. באמצעות חיתוך מספריים לחתוך את העור, כ- 1 ס מ מעל פי הטבעת, נזהר לחתוך רק העור (בערך 1 מ מ). משוך את העור מהגוף עם מלקחיים במיתולגיות והכנס את המספריים בין העור לבין הצפק. פתח את המספריים כדי להפריד את העור הצפק, ואז לחתוך את העור של החתך בצוואר.
  4. להצמיד את העור ללוח לנתיחה באמצעות סיכה אחת תחת כל זרוע ומעל כל רגל. . תעלה את שק הצפק וחותכים כלפי מעלה לכיוון הצוואר. תפוס את אונות הכבד, לחתוך בדיוק מתחת לעצם החזה.
    הערה: כדאי לשים לב אם כל הכבד ישמש עבור אימונוהיסטוכימיה (IHC).
  5. . לחתוך את הכבד, להסיר את הכבד של העכבר והנח אותו ב- 4 מיליליטר EHAA מדיה של לחץ.
  6. באמצעות אזמל, חותכים הכבד ב ~ 1 מ"מ קוטר חתיכות.
  7. להוסיף 500 µL של תערובת עיכול, µL 500 של DNase אני (2 מ"ג/מ"ל) עד הכבד.
  8. דגירה הכבד למשך 30 דקות ב- 37 מעלות צלזיוס. לאחר 15 דקות, מערבבים את הנוזל בעזרת פיפטה 5 מ.
  9. לאחר 30 דקות של דגירה, להעביר את הדגימה מתעכל דרך מסננת 100 מיקרומטר צינור חרוטי 50 מ.
  10. דחף בעדינות את החלקים הנותרים דרך המסנן עם הבוכנה של מזרק 1-mL.
  11. רוחצים את המסנן עם 5 מ של בידוד מאגר את דחף בעדינות את הרקמות דרך מסננת בגב בוכנה של מזרק 1 מ"ל. חזור על פעולה זו עד המסנן נשטף עם 25 מ של מאגר בידוד.
  12. Centrifuge התאים ב 400 x g עבור 5 דק בקפידה וארוקן את תגובת שיקוע.
  13. Resuspend בגדר עם 4 מ של RBC פירוק מאגר. דגירה התאים בטמפרטורת החדר במשך 5 דקות.
  14. לשטוף את התאים עם 10 מ"ל של מאגר בידוד, צנטריפוגה ב 400 x g למשך 5 דקות.
  15. לספור את התאים על hemocytometer כדי לקבוע את ספירת מלא כבד.
  16. Resuspend התאים ב- 5 מ של 20% iodixanol ושכבה אותם עם 1 מ"ל ל- PBS.
  17. Centrifuge התאים ב x 300 גרם למשך 15 דקות בלי בלם.
  18. להסיר את שכבת בין מגניב של iodixanol ולמקם אותם, דרך מסנן 100 מיקרומטר, לתוך צינור חרוטי 50 מ.
  19. לשטוף את התאים עם 10 מ"ל של מאגר בידוד, צנטריפוגה ב 400 x g למשך 5 דקות.
  20. למחוק את תגובת שיקוע, resuspend תאי µL 500 ל- PBS עם 2% סרום שור עוברית (FBS).

3. זרימה ניתוח Cytometric של תאים בודדים מן הכבד

  1. לספור את התאים באמצעות מיקרוסקופ, באמצעות אי-הכללה trypan blue כדי למדוד את התאים קיימא hemocytometer. להוסיף 10 µL של התאים µL 10 של trypan blue, מיד למקם אותם על hemocytometer ולספור את התאים הפועלים (לא כחול) תחת מיקרוסקופ. לאחר מכן, לחשב את מספר התאים לכל microliter.
  2. Aliquot כ-5 מיליון של התאים nonparenchymal הנותרים לבאר בודדת של צלחת 96-ובכן.
  3. Centrifuge התאים ב x 400 g למשך 5 דקות.
  4. למחוק את תגובת שיקוע, resuspend תאי µL 90 ל- PBS עם 2% FBS.
  5. להוסיף אנטי-CD45 (1:200), אנטי-CD146 (1:200), אנטי-CD31 (1:200), PDPN (1:200) מעורבבת עם µL 10 של 10 x 2.4G2 או אנטי-CD16/32 (1:200).
    הערה: אין לחסום Fc (2.4G2) נעשה שימוש כאשר נוגדן anti-CD16/32-שכותרתו הייתה בשימוש.
  6. כדי לקבוע היכן צריך להיות מוגדר השערים חיוביים ושליליים, כוללים פלורסצנטיות מינוס הכתם (FMO) אחת עבור כל צבע ונוגדן שליטה isotype.
  7. כדי לקבוע חיים לעומת תאים מתים, כתם עם סמן הכדאיות (למשל, רפאים אדומים 780). דגירה התאים ב 4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  8. לשטוף את התאים עם µL 100 ל- PBS עם 2% FBS.
  9. השתמש aliquot קטן של תאים כדי לכוונן את ההגדרות לייזר ופיצוי על cytometer הזרימה. כתם התאים עם נוגדן כל fluorophore נפרדים, אחד ללא כל נוגדן.
    הערה: בהתאם cytometer זרימה בשימוש, יש להקים מטריצה פיצוי כדי להסיר חפיפה ספקטרלי.
  10. למקם את הצינור מדגם על גבי החללית cytometer ו לאסוף ולהקליט כל האירועים.

4. ניתוח נתונים

  1. מסתכלים על הצד-פיזור לעומת העבר-פיזור איזור, שער על תאים "חי" בהתבסס על הגודל, צפיפות, הכדאיות סמן צבע.
  2. בשלב הבא, שימוש 510 סגול מבריק CD45 ו CD31 PerCp Cy5.5, שער על תאים CD45 - CD31 + שימוש פקדים isotype ו- FMO כדי לקבוע אוכלוסיות חיוביים ושליליים.
  3. לבסוף, באמצעות CD146 v450 או FITC CD16/32 ו PDPN APC, לקחת את CD146 - PDPN + או CD16/32-PDPN + תאים, שוב באמצעות פקדי isotype ו- FMO, כדי לקבוע אוכלוסיות חיוביים ושליליים. תאים אלה הם LECs.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לימודי ניתוח lymphatics בכבד בעיקר השתמשו אימונוהיסטוכימיה כדי quantitate את התדירות ואת קוטר של כלי הלימפה בכבד. עם זאת, שיטה זו אינה מאפשרת עבור הערכת LECs על בסיס תא-על ידי תאים-תאים או ביטוי של מספר סמנים, ציטוקינים, נוגדנים או גורמי שעתוק. לכן, שאלנו אם הכבד LECs יכול להיות מבודד מן הכבד ואת להעריך באמצעות cytometry זרימה. העבודות הקודמות לבודד את הצומת לימפה LECs בוצעה באמצעות Liberase DL (collagenase I-II-ו-dispase) ו- 1 DNase בשילוב עם ההפרדה מכני של רקמת לימפה עם מחטים

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החשיבות הכללית של LECs הומאוסטזיס המערכת החיסונית, רגולציה לאחרונה הובא אור25. רוב הספרים שפורסמו הלימפה מתמקד העור ואת בלוטות הלימפה; עם זאת, lymphatics פזורים ברחבי הגוף26 ו, לכן, נדרש הבנתנו את החשיבות של איברים שונים. הנה אנחנו מראים שיטה שבה ניתן יהיה ללמוד LECs בכבד על בסיס תא-על ידי תאים-תאים כדי להבין טוב יותר את הבעת רגשותיהם בו-זמניות סמני פני שטח שונים, ציטוקינים, נוגדנים, חלבונים תאיים כגון גורמי שעתוק. שיטה זו יהיה שימושי עבור מחקרים עתידיים להעריך את פנוטיפ וה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים רוצה להודות GI של תוכניות החיסון מולדים בכבד לתמיכה כספית של פרויקט זה. B.A.J.T. גם ממומן על ידי R01 AI121209.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
קליקים/EHAA מדיהאירווין סיינטיפיק9195
קולגנאז IVתאגיד ביוכימי וורת'ינגטוןLS004188
DNase Iתאגיד ביוכימי וורת'ינגטוןLS002145דאוקסיריבונוקלאז 1
OptiPrepSigma AldrichD1556שיפוע צפיפות בינוני
V450 אנטי עכבר CD146 (שיבוט ME-9F1)BD Biosciences562232
FITC אנטי עכבר CD146 (שיבוט ME-9F1)Biolegend134706פלואורסצאין איזותיוציאנט (FITC)
פסיפיק כחול נגד עכבר CD31 (שיבוט 390)Biolegend102422
PerCp/Cy5.5 אנטי עכבר CD31 (שיבוט 390)Biolegend102420חלבוני פרידינין-כלורופיל-ציאנין 5.5 (PerCP-Cy5.5)
APC נגד עכבר PDPN (שיבוט 8.1.1)Biolegend127410Allophycocyanin (APC), פודופלנין (PDPN)
APC/Cy7 אנטי עכבר CD45 (שיבוט 30-F11)Biolegend103116
Brilliant Violet 510 אנטי עכבר CD45 (שיבוט 30-F11)Biolegend103138
FITC אנטי עכבר CD16/32 (שיבוט 93)Biolegend101306פלואורסצאין איזותיוציאנט (FITC)
PerCp/Cy5.5 אנטי עכבר CD16/32 (שיבוט 93)Biolegend101324חלבוני פרידינין-כלורופיל-ציאנין 5.5 (PerCP-Cy5.5)
צבע אדום רפאים 780 כדאיותTONBO biosceinces3-0865-T100
APC אוגר סורי IgG (שיבוט SHG-1)Biolegened402102
PerCp/Cy5.5 חולדה IgG2a (שיבוט RTK2758)Biolegend400531
FITC חולדה IgG2 (שיבוט eBR2a)ebioscience1-4321-80
אנטי עכבר LYVE1 (שיבוט 223322)R& מערכות DFAB2125A
אנטי עכבר ציטוקרטין (שיבוט EPR17078)abcamab181598
נגד עכבר F4 / 80 (שיבוט Cl: A3-1)Bio-radMCA497
BSA (שבר V)פישרBP1600-100סרום בקר אלבומין (BSA)
סרום עיזיםג'קסון Immunoresearch017-000-121
סרום חמורג'קסון Immunoresearch017-000-121
EDTAVWRE177חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA) - עבור מאגר ליזה RBC
אמוניום כלורידפישרA687-500עבור מאגר ליזה RBC
אשלגן ביקרבונטפישרP184-500עבור מאגר ליזה RBC
נוצתאזמל2975 # 21
100 μ מסננת תאים mפישר22363549
2.4G2בבית/ATCCATCC HB-197FC בלוק לעיכוב קשירה לא ספציפית לתאי Fc גמא + - עשוי מהיברידומה
פוספט בופר מלח (PBS)קורנינג21-040-CV
הנקס תמיסת מלח מאוזנת (HBSS)Gibco14185-052
סרום בקר עוברי (FBS)אטלנטה ביולוגיתS11550
96 צלחת בארקורנינג3788
צלחת באר6 קורנינג3506
50 מ"ל חרוטיTrulineTR2004
15 מ"לפלקון352196
1 מ"ל קצה פיפטהארה"ב מדעי1111-2721
200 ומיקרו; L קצה פיפטהארה"ב מדעי1110-1700
10 ומיקרו; L פיפט טיפארה"ב מדעי1111-3700
סריולוגי 10 מ"ל פיפטהגריינר ביו-אחד607107
סריולוגי 5 מ"ל פיפטהגריינר ביו-אחד606107
חממת תאיםפישרהרסל 160i
BD FacsCanto II זרימה ציטומטרBD מדעי הביולוגיה
קליניתבקמן קולטרדגם X-14R
חרוטי צנטריפוגה

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tanaka, M., Iwakiri, Y. Lymphatics in the liver. Current Opinion in Immunology. 53, 137-142 (2018).
  2. Vollmar, B., Wolf, B., Siegmund, S., Katsen, A. D., Menger, M. D. Lymph vessel expansion and function in the development of hepatic fibrosis and cirrhosis. The American Journal of Pathology. 151 (1), 169-175 (1997).
  3. Podgrabinska, S., et al. Molecular characterization of lymphatic endothelial cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (25), 16069-16074 (2002).
  4. Cohen, J. N., et al. Lymph node-resident lymphatic endothelial cells mediate peripheral tolerance via Aire-independent direct antigen presentation. Journal of Experimental Medicine. 207 (4), 681-688 (2010).
  5. Cohen, J. N., et al. Tolerogenic properties of lymphatic endothelial cells are controlled by the lymph node microenvironment. PLoS One. 9 (2), e87740(2014).
  6. Rouhani, S. J., et al. Roles of lymphatic endothelial cells expressing peripheral tissue antigens in CD4 T-cell tolerance induction. Nature Communications. 6, 6771(2015).
  7. Tewalt, E. F., et al. Lymphatic endothelial cells induce tolerance via PD-L1 and lack of costimulation leading to high-level PD-1 expression on CD8 T cells. Blood. 120 (24), 4772-4782 (2012).
  8. Dubrot, J., et al. Lymph node stromal cells acquire peptide-MHCII complexes from dendritic cells and induce antigen-specific CD4(+) T cell tolerance. Journal of Experimental Medicine. 211 (6), 1153-1166 (2014).
  9. Hirosue, S., et al. Steady-state antigen scavenging, cross-presentation, and CD8+ T cell priming: a new role for lymphatic endothelial cells. Journal of Immunology. 192 (11), 5002-5011 (2014).
  10. Lund, A. W., et al. VEGF-C promotes immune tolerance in B16 melanomas and cross-presentation of tumor antigen by lymph node lymphatics. Cell Reports. 1 (3), 191-199 (2012).
  11. Lund, A. W., et al. Lymphatic vessels regulate immune microenvironments in human and murine melanoma. Journal of Clinical Investigation. 126 (9), 3389-3402 (2016).
  12. Swartz, M. A. Immunomodulatory roles of lymphatic vessels in cancer progression. Cancer Immunology Research. 2 (8), 701-707 (2014).
  13. Dietrich, T., et al. Cutting edge: lymphatic vessels, not blood vessels, primarily mediate immune rejections after transplantation. Journal of Immunology. 184 (2), 535-539 (2010).
  14. Kedl, R., et al. Migratory Dendritic Cells acquire archived antigen from Lymphatic Endothelial Cells for antigen presentation during lymph node contraction. Nature Communications. 8, 2034(2017).
  15. Kedl, R. M., Tamburini, B. A. Antigen archiving by lymph node stroma: A novel function for the lymphatic endothelium. European Journal of Immunology. 45 (10), 2721-2729 (2015).
  16. Tamburini, B. A., Burchill, M. A., Kedl, R. M. Antigen capture and archiving by lymphatic endothelial cells following vaccination or viral infection. Nature Communications. 5, 3989(2014).
  17. Yokomori, H., et al. Lymphatic marker podoplanin/D2-40 in human advanced cirrhotic liver--re-evaluations of microlymphatic abnormalities. BMC Gastroenterology. 10, 131(2010).
  18. Nonaka, H., Tanaka, M., Suzuki, K., Miyajima, A. Development of murine hepatic sinusoidal endothelial cells characterized by the expression of hyaluronan receptors. Developmental Dynamics. 236 (8), 2258-2267 (2007).
  19. Dudas, J., et al. Prospero-related homeobox 1 (Prox1) is a stable hepatocyte marker during liver development, injury and regeneration, and is absent from "oval cells". Histochemistry and Cell Biology. 126 (5), 549-562 (2006).
  20. Schrage, A., et al. Murine CD146 is widely expressed on endothelial cells and is recognized by the monoclonal antibody ME-9F1. Histochemistry and Cell Biology. 129 (4), 441-451 (2008).
  21. Amatschek, S., et al. Blood and lymphatic endothelial cell-specific differentiation programs are stringently controlled by the tissue environment. Blood. 109 (11), 4777-4785 (2007).
  22. Huang, L., Soldevila, G., Leeker, M., Flavell, R., Crispe, I. N. The liver eliminates T cells undergoing antigen-triggered apoptosis in vivo. Immunity. 1 (9), 741-749 (1994).
  23. Shay, T., Kang, J. Immunological Genome Project and systems immunology. Trends in Immunology. 34 (12), 602-609 (2013).
  24. Li, B., et al. Adult Mouse Liver Contains Two Distinct Populations of Cholangiocytes. Stem Cell Reports. 9 (2), 478-489 (2017).
  25. Randolph, G. J., Ivanov, S., Zinselmeyer, B. H., Scallan, J. P. The Lymphatic System: Integral Roles in Immunity. Annual Review of Immunology. 35, 31-52 (2016).
  26. Olszewski, W. L. The lymphatic system in body homeostasis: physiological conditions. Lymphatic Research and Biology. 1 (1), discussion 21-14 11-21 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PodoplaninCD45 CD31

מאמרים קשורים