להעשיר ולהרחיב בתאי T אנטיגן ספציפי נדיר עם חלקיקים מגנטיים

John W. Hickey; Jonathan P. Schneck

doi:10.3791/58640

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

להעשיר ולהרחיב בתאי T אנטיגן ספציפי נדיר עם חלקיקים מגנטיים

10.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58640

⸱

17 בנובמבר 2018

John W. Hickey¹^,²^,³^,⁴ , Jonathan P. Schneck²^,⁴

¹Department of Biomedical Engineering, School of Medicine, Johns Hopkins University, ²Institute for Cell Engineering, School of Medicine, Johns Hopkins University, ³Institute for Nanobiotechnology, Johns Hopkins University, ⁴Department of Pathology, School of Medicine, Johns Hopkins University

במאמר זה

סיכום

תאי T אנטיגן ספציפי קשים לאפיין או לנצל טיפולים עקב שלהם בתדר נמוך מאוד. במסמך זה, אנו מספקים פרוטוקול לפתח חלקיק מגנטי אשר ניתן לאגד בתאי T אנטיגן ספציפי כדי להעשיר תאים אלה ולאחר מכן להרחיב אותם כמה פי100 אפיון וטיפול.

תקציר

פיתחנו כלי הן להעשיר ולהרחיב את תאי T אנטיגן ספציפי. הדבר יכול להיות שימושי במקרים כגון א) להבחין בקיומה של תאי T אנטיגן ספציפי, ב) לחקור את הדינמיקה של אנטיגן ספציפי תגובות, ג) להבין כמה תגובות אנטיגן ספציפי משפיעים על מצב מחלה כגון מחלת חיסון עצמי, ד) להזדהותו הטרוגניות תגובות עבור תאי T אנטיגן ספציפי או E) לנצל תאים אנטיגן ספציפי לטיפול. הכלי מבוסס על חלקיקים מגנטיים כי אנחנו נזווג אנטיגן ספציפי של אותות co-stimulatory תא T, כך שאנחנו טווח כמו מלאכותי אנטיגן הצגת תאים (aAPCs). כתוצאה מכך, מאז הטכנולוגיה היא פשוט לייצר, זה יכול בקלות להיות שאומצה על ידי מעבדות אחרות; לכן, המטרה שלנו כאן הוא לתאר בפירוט את ייצור ושימוש עוקבות aAPCs. נסביר כיצד לצרף אותות אנטיגן ספציפי, co-stimulatory aAPCs, כיצד לנצל אותם כדי להעשיר עבור תאי T אנטיגן ספציפי וכיצד להרחיב את תאי T אנטיגן ספציפי. יתר על כן, אנו ידגיש הנדסה עיצוב שיקולים בהתבסס על מידע ניסיוני והביולוגיה של הניסיון שלנו עם אפיון בתאי T אנטיגן ספציפי.

מבוא

עם עליית immunotherapies רבים, יש צורך להיות מסוגלים לאפיין ולשלוט תגובות מערכת החיסון. בפרט, התגובה החיסונית מסתגלת היא עניין בשל ירידה לפרטים העמידות של התאים. לאחרונה, טיפולים chimeric אנטיגן-קולטן תא T אושרו לטיפול בסרטן; עם זאת, אנטיגן-הקולטנים מבוססים הנחה נפוצה תא השטח אנטיגן CD19, במקום אנטיגנים ספציפיים סרטן¹. מעבר יחודיות, immunotherapies יכול גם סובלים מחוסר שליטה, ומוגבל להבנת התגובה החיסונית דינאמיים בתוך סרטן או מחלת חיסון עצמי.

הוא אחד האתגרים של הלומדים אנטיגן ספציפי תגובות שלהם בתדר נמוך מאוד, למשל., תאי T אנטיגן ספציפי הם 1 מתוך כל 10⁴ עד 10⁶ T תאים^2<....