מאמר שיטה

שימוש פתוגן חיידקי כדי בדיקה עבור הסלולר והמארח אורגניזם ברמת התגובות

DOI:

10.3791/58775

⸱

22 בפברואר 2019

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology & Immunology, University of Miami Miller School of Medicine, 2Department of Microbiology & Immunology, University of Illinois College of Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מתארים שני מבחני במבחנה, ויוו זיהום זה יכול לשמש כדי לנתח את פעילותם של גורמי קידוד המארח.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ישנם מגוון רחב של אסטרטגיות פתוגנים חיידקיים להעסיק כדי לשרוד להתרבות פעם אחת בתוך התא האיקריוטים. מה שנקרא 'cytosolic' פתוגנים (ליסטריה, שיגלה flexneri, Burkholderia pseudomallei, Francisella tularensisו ריקטסיה spp.) לקבל גישה ציטוזול תא נגוע על-ידי enzymatically ופיזית משפילים קרום vacuolar הראשי. פעם אחת ציטוזול, פתוגנים אלה הן להתרבות כמו גם ליצור כוחות מספיקים מכני לחדור קרום פלזמה של התא המארח כדי להדביק תאים חדשים. . הנה, אנחנו מראים כיצד מסוף שלב של מחזור הסלולר זיהום של ל' monocytogenes (Lm) ניתן לכמת על ידי המושבה יוצרי יחידת מבחני והן cytometry זרימה, לתת דוגמאות איך שני השפעת גורמים הפתוגן, המארח-בקידוד זה תהליך. אנו גם מראים התכתבות קרוב של Lm הדינמיקה זיהום של תאים בתרבית נגוע במבחנה, אלה בתאי הכבד נגזר עכברים נגועים ויוו. אלה מבחני מבוססי פונקציה פשוטה יחסית, ניתן בקלות לשנות-מבוססות-גילוי מסכי תפוקה גבוהה עבור מאפננים של תפקוד התאים האיקריוטים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זיהום מבוססי מודלים ניסיוניים הם מאתגר מיסודו בשל תלותם התנאים מדינת המוצא של המארח הפתוגן, את האסטרטגיות זיהום שונים של הפתוגן, ואת הקושי של ייחוס הפתוגן, המארח-מונחי תהליכים בהתבסס על תוצאות. החיידק ליסטריה (Lm) הפך פתוגן אידיאלי כדי לחקור את המארח ההגנה תגובות בגלל שלה גנטי, מיקרוביולוגי ללקוחות שלנו את האסטרטגיה מהיר ולא תהליכית זיהום הסלולר שלה, צלולים יחסית קשר בין פנוטיפים זיהום סלולרי-אורגניזם-ורמת שלה. זיהום הסלולר של Lm ממשיך דרך ארבעה שלבים ברורים1: (i) הפלישה הסלולר אשר מסכם עם Lm סגירות בתוך חלולית; (ii) Lm-בבימויו של התפרקות של קרום חלולית שחרורו של Lm לתוך ציטוזול; (iii) שכפול intracytosolic; חדירה פיזית (iv) של קרום פלזמה כי התוצאות גם זיהום של תאים סמוכים ישירות (כמו למשל גיליון אפיתל) או, בכל תאי בידוד, שחרורו של Lm לתוך חצרו חוץ-תאית. כל אחד משלבים אלה מקודמים על ידי ספציפי Lm-מקודד גורמים (המכונה 'הגורמים התקפה אלימה'), נמחק, לגרום למומים זיהום במודלים הסלולר והן בבעלי חיים. אסטרטגיה זו זיהום כללי התפתח באופן עצמאי על-ידי מספר של פתוגנים 'cytosolic' כביכול2.

המושבה יוצרי מבחני יחידה (CFU) מועסקים באופן נרחב כדי להעריך את שניהם במבחנה (קרי, סלולר) כמו גם ויוו (קרי, אורגניזם) תוצאות הזיהום. בנוסף את רגישותם גבוהה, במיוחד עבור זיהומים ויוו, מבחני CFU מספקים readout ברורה וחד משמעית של פתוגן פלישה והתפשטות תאיים הישרדות /. CFU מבחני היו בשימוש נרחב כדי לנתח גורמים תא באימות Lm ומארח, שמשפיעים על זיהום. מחקרים קודמים אלה להיות לנתח הפלישה הסלולר ושכפול intracytosolic אינפורמטיבי, CFU מבחני. לא, לפי מיטב ידיעתנו, השתמשו כדי לעקוב אחר השלב הרביעי של תהליך זיהום Lm : הבריחה הסלולר. כאן, אנו מתארים פשוטה יחסית ניתן לנטר אמצעי לבריחה איך הסלולר (ןלהל 'הופעתה') על ידי CFU assay (כמו גם על ידי cytometry זרימה), הצג דוגמאות איך שני גורמים הפתוגן, המארח-מקודד לווסת את השלב הזה של Lm מחזור זיהום. הניתוח של השלב מסוף של מחזור הסלולר של זיהום Lm עלולה להפוך את זה ניתן לזהות הפתוגן נוספים, גורמים ספציפיים זיהום תא מארח ופעילויות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עכברים טופלו בצורה אנושית לפי כל ההנחיות המתאימות לטיפול ולא להשתמש של חיות מעבדה של מכוני הבריאות הלאומיים ואת השימוש בהם אושרה במחקר זה כולו על ידי אוניברסיטת מיאמי. טיפול בבעלי חיים מוסדיים וועדת שימוש (פרוטוקול 16-053).

1. מכינים את התאים לדלקת

  1. הפץ שורת התאים מקרופאג דמוי העכבר 264.7 גלם בתקשורת תרביות רקמה DMEM, בתוספת 10% עגל עוברית סרום (המכונה מעתה ואילך DMEM/FCS) באמצעות בקבוקון 125 מ ל וחממה של תרביות רקמה ומתוחזק על 37 °C/5% CO2.
  2. יום לפני הזיהום, להשתמש במגרדת התא כדי להסיר תאים מן הבקבוק הרחבה לאסוף צינור חרוטי בורג מכסה 15 מ"ל. צנטריפוגה תאים ב 800 x גרם במשך 10 דקות, decant תגובת שיקוע להשעות בגדר תא ב 1 מ"ל של DMEM/FCS (ללא אנטיביוטיקה) ולקבוע את כייל נוגדנים באמצעות hemocytometer או מונה הניתן תא אוטומטית.
  3. להתאים כייל נוגדנים ל 2 x 106 תאים למ"ל ולהוסיף 0.10 מ"ל (2 x 105 תאים) בארות של תבשיל תרביות רקמה 48-. טוב. ודא כי התליה תא מכסה את כל פני השטח של הבאר.
    1. צלחת תאים בבארות נוספים עבור מקור מאוחר יותר של מדיה ממוזגים. גם מקום מ 0.10 ל DMEM/FCS משלוש בארות נוספות כדי לשמש 'אין תא פקד'.
  4. דגירה בין לילה בחממה תרביות רקמה-37 °C/5% CO2. למחרת, מסירה החממה עד inoculum החיידק יהיה זמין ומוכן לשימוש.

2. הכנת ליסטריה (Lm) זיהום

  1. לחסן 2 מ של המוח ללב אינפוזיה (BHI) עם מושבה בודדת מתוך צלחת אגר טריות קווצות שער (< 2 ימים) של Lm דגירה בין לילה ב 37 מעלות צלזיוס שריפה-סבבים 130/min.
  2. למחרת, להוסיף מ 0.10 ל תרבות של 2 מ ל לילה מראש חימם BHI ולהמשיך המקננת ב 37 מעלות צלזיוס ברעידות עד הצפיפות האופטית (OD600) הוא בין 0.4 ל- 0.6.
  3. לקבוע בקירוב כייל חיידקי שימוש בנוסחת ההמרה נגזר מדעית. במעבדה שלנו, תרבות Lm גדל אקספוננציאלית ב- BHI הוא כ- 1.3 x 109 המושבה ויוצרים /OD יחידות (CFU)600. למזער את כמות הזמן תרבויות חיידקי נחשפים בטמפרטורת החדר.
  4. בדיוק לפני זיהום להתאים את כייל נוגדנים ל- 5 x 107 CFU/mL באמצעות DMEM מראש ומחוממת/FCS כמו diluent.

3. זיהום

  1. עובדת במהירות ובדייקנות, להוסיף 20 µL (1 x 106 CFU; ריבוי של זיהום, MOI = 5) של טריות Lm inoculum (שלב 2.4 לעיל) כדי בארות על ידי הטיית מעט את המנה והצבת בקפידה את הטיפ pipet בתקשורת שמעליה;
    הערה: להימנע מלגעת בקירות של הבאר עם קצה pipet.
  2. בעדינות pipet התוכן של כל טוב על מנת להבטיח להשלים ערבוב; לא ללחוץ או באופן משמעותי להטות את הצלחת כמו זה יתפשט Lm את החומות של הבאר. לחזור תא תרבות מנה 37 °C/5% CO2 מיכלים.
  3. להכין פתרון גנטמיצין 10 µg/mL באמצעות מדיה ממוזגים מבארות נגוע כמו diluent.
  4. ב 30 דקות לפרסם זיהום (mpi), בזהירות להוסיף 30 µL של גנטמיצין פתרון (הריכוז הסופי 2.5 µg/mL), בעדינות pipet התכנים גם לפני ו תא החזרה תרבות מנה 37 °C/5% CO2 מיכלים.
  5. ב 60 mpi, לקצור ולס המתאימות CFU assay (נקודת זמן mpi 60) או את כרטיס FCM ניתוח (כפי שמתואר להלן בסעיפים 4 ו-5 בהתאמה).
  6. וולס הנותרים, בזמנים שונים לאחר מכן גם לקצור תאי כמו בעבר, עבור או Lm הופעתה וזמינותו, לחלוטין להסיר מדיה מן הבאר ולהחליף עם 150 µL של גנטמיצין ללא מדיה ממוזגים.

4. דגימה עיבוד וניתוח של תאיים, מתהווים Lm מאת CFU Assay

  1. הקציר, מעט להטות את המנה, הסר בזהירות את התקשורת כולה מן הבאר. להוסיף 0.50 מ ל מים מזוקקים סטריליים (dsH2O) הבאר. לאחר 30 s, להעביר את המים וכתוצאה מכך lysate (100) צינור microcentrifuge 1.5 mL ו מערבולת נמרצות במשך 10 s.
  2. להכין 10-1 ו-2 10 דילולים על-ידי הוספת 4.5 µL או µL 50 של המים lysate כדי µL 450 של dsH2O או בקצרה מערבולת כדי להבטיח ערבוב יסודי.
  3. מורחים 50 µL של 100, 10-1 ו/או 10-2 דוגמאות על גבי פלטות אגר מרק (ליברות) lysogeny.
  4. Assay עבור מתהווים Lm (שלב 3.6 לעיל), להסיר 10 µL של התקשורת על-ידי כיסוי, מחלקים אותו 5 שני µL aliquots: כדי aliquot אחד להוסיף 5 µL של DMEM/FCS וכדי את aliquot השני להוסיף 5 µL של DMEM/FCS המכיל 5 גנטמיצין µg/mL. הפקד האחרון מבדיל בין חוץ-תאית Lm (גנטמיצין רגיש) ואת וזמינותו תאיים Lm (גנטמיצין עמיד) ב CFU עוקבות.
  5. לאחר 5 דקות בטמפרטורת החדר, להוסיף 90 µL של dsH2O, מערבולת נמרצות עבור 10 s, התפשטות 50 µL על פלטות אגר ליברות.
  6. ספירת מושבות Lm על פלטות אגר LB לאחר 2 ימי דגירה ב 37 º C.

5. דגימה עיבוד וניתוח של תאיים, מתהווים Lm מאת Cytometry זרימה (FCM)

  1. להכין RAW 264.7 תאים כמתואר בצעדים 1.1-4. להתאים לתאים עונה 1 פרק 106 תאים למ"ל ולהוסיף 1 מ"ל (1 x 106 תאים) בארות של תבשיל תרביות רקמה 6-. טוב.
  2. להכין את חיידק inoculum כפי שמתואר בשלב 2.1-2.3, להדביק תאים עם נפח של inoculum המתאימים MOI של 50 (5 x 107 CFU).
  3. 1.5 שעות פוסט זיהום. מדד מחירי הבתים (. של), לאסוף את המדיה מן הסט הראשון של וולס, הכנס צינור microcentrifuge 1.5 mL עם 500 µL 4% paraformaldehyde (PFA) ומקום על הקרח עד שיסתיים העיבוד של כל בארות.
  4. כדי לאסוף תאיים Lm, להוסיף 1 מ"ל של dsH2O הבאר ואחרי 60 s, להעביר את המים וכתוצאה מכך lysate צינור microcentrifuge 1.5 mL עם 500 µL של 4% מחברים. מערבולת נמרצות עבור 10 s ומקום על הקרח עד שיסתיים העיבוד של כל בארות. (דוגמת עיבוד מתואר בשלב 5.8 להלן).
  5. וולס הנותרים, להסיר מדיה והחלף 1 מ"ל של DMEM/FCS עם גנטמיצין 5 µg/mL כדי להרוג חוץ-תאית Lm ולחזור מיד תאים חממה.
  6. לאחר 30 דקות (2 מדד מחירי הבתים של) להסיר מדיה והחלף DMEM/FCS ללא גנטמיצין.
  7. לאחר 2 ו 4 h (4 ו- 6 מדד מחירי הבתים של) לקחת את השנייה, פעם שלישית נקודות על ידי איסוף lysates ומדיה צעדים 5.3 ו- 5.4.
  8. צנטריפוגה צינורות ב x 10,000 g עבור 7 מינימלית הסר תגובת שיקוע ללא גלולה מטרידה.
  9. להשעות כל גלולה ב מכתים קוקטייל של 50 µL של 4% כדורגלן ו 15 µL של phalloidin. דגירה צינורות בחושך ב 4 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
  10. לאחר דגירה להוסיף 1 מ"ל FACS מאגר כל שפופרת של פיפטה למעלה ולמטה כדי לערבב.
  11. ספין צינורות ב x 10,000 g עבור 7 מינימלית הסר תגובת שיקוע ללא גלולה מטרידה.
  12. להשעות כל גלולה µL 400 FACS מאגר לשימוש מיידי, או 200 µL מאגר FACS, 200 µL של 4% מחברים אם מאחסן לניתוח בשלב מאוחר יותר.
  13. להפעיל דגימות cytometry זרימה וניתוח הנתונים שנאספו.

6. דגימה עיבוד וניתוח של Lm קולוניזציה ותגובות מארח בכבד

  1. להכין Lm זיהום כפי שמתואר בשלב 2.1-2.3.
  2. לחשב את הסכום הדרוש של תת-תרבות עבור כייל הרצוי של 3 x 106 CFU/mL.
  3. בדיוק לפני זיהום לדלל את כמות החיידקים מחושב מאוזנת מלח פתרון (HBSS של האנק מראש ומחוממת), נפח סופי של 1 מ"ל. . זה inoculum קלט זה מוזרק לתוך העכבר...
  4. באמצעות מזרק אינסולין 28 G½ 100U, לצייר µL 100 (3 x 105 CFU) של inoculum קלט ולהסיר את כל בועות האוויר גלוי.
  5. למקם את העכבר (זן C57BL/6; גברים בין 6 ל- 12 שבועות) הריסון אחזקות, השתמש מים חמים (לא יותר מ 45 ° C) להתרחב את הווריד הזנב, ואז להזריק את inoculum קלט לתוך הווריד.
  6. צלחת 10-2 ו- 10-3 דילולים של inoculum קלט על גבי לוחות 10bcm אגר ליברות, דגירה בין לילה ב 37 ° C כדי לקבוע את המינון קלט בפועל.
  7. ב. מדד מחירי הבתים, של 18 בצורה הומאנית המתת חסד העכבר (CO2 חנק ואחריו נקע בצוואר הרחם) ושימוש צפק העכבר פתוח לחתוך במספריים סטרילי כדי לאסוף את האונה הקדמית של הכבד באמצעות זוגות נפרדים של פינצטה ומספריים עבור מבחוץ פנימה של העכבר. מקם את הכבד 6 ס מ פטרי על קרח.
  8. חותכים את הכבד לקוביות קטנות ומניחים לתוך בקבוקון זכוכית עם פס מגנטי מערבבים. להוסיף 2 מ של 2 מ"ג/מ"ל collagenase D מחדש DMEM ללא FCS. דגירה הבקבוקונים-37 מעלות צלזיוס על פגים 30−45 דקות. ברגע הרקמה הוא הומוגני, להוסיף 3 מ"ל של DMEM/FCS כדי להשבית את collagenase.
  9. לסנן את התאים דרך מסננת תא מיקרומטר 70 לתוך צינור חרוטי, הוספת יותר DMEM/FCS במידת הצורך.
  10. צנטריפוגה תאים ב x 800 גרם הצניפה ב 4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, להסיר את תגובת שיקוע, להשעות את התא גלולה ב 500 µL ACK המאגר כדי lyse כדוריות דם אדומות.
  11. דגירה תאים בטמפרטורת החדר במשך 5 דקות במאגר ACK. להשעות תאים 1 מ"ל של DMEM/FCS.
  12. צנטריפוגה תאים ב x 800 גרם הצניפה ב 4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, להסיר את תגובת שיקוע, להשעות ב 1 מ"ל של DMEM/FCS. אז לספור את התאים באמצעות hemocytometer או מונה הניתן תא אוטומטית.
  13. להעביר עונה 1 פרק 106 תאים צינור microcentrifuge 1.5 mL ו spin כדי גלולה. ואז להשעות ב 1 מ"ל של dsH2O ו מערבולת כדי lyse התאים. צלחת µL 50 על צלחות LB-מדולל ו-2 10 דילולים, דגירה ב 37 מעלות צלזיוס, לספור Lm לניתוח CFU.
  14. להעביר עונה 1 פרק 106 תאים לתוך צינורות FACS עבור כל דגימה רקמה על פי הסעיפים תא, לשטוף עם 1 מ"ל של מאגר FACS.
  15. צנטריפוגה תאים ב x 800 גרם הצניפה ב 4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולהסיר תגובת שיקוע.
  16. להכין מקוקטייל נוגדן המכיל את הנוגדנים עניין בהתבסס על הריכוז המומלץ עבור כל נוגדן ומאגר FACS. ראה טבלה של החומרים הכמויות המומלצות ניתוח.
  17. להשעות גלולה ב 100 µL של נוגדן קוקטייל, דגירה צינורות בחושך ב 4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  18. לאחר דגירה, להוסיף 2 מ"ל FACS מאגר כל שפופרת, להשעות את התאים.
  19. צנטריפוגה תאים ב x 800 גרם כדי הצניפה ב 4 ° C ולמחוק את תגובת שיקוע. ואז להשעות בגדר µL 400 FACS מאגר לשימוש מיידי, או 200 µL מאגר FACS, 200 µL של 4% מחברים אם אחסון עבור מאוחר יותר.
  20. לנתח תאים ידי cytometry זרימה (ראה שלב 5.13).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הערכת תפקידה של פתוגן וגורמים מקודד מארח להשפיע על זיהום הסלולר
שימוש בתנאים זיהום המתוארים לעיל, 0.15% פראי-סוג הקלט Lm הוא התאושש לאחר h 1.5 של דגירה שיתוף עם תרבותי מקרופאגים (איור 1א'). ב ה 1.5 עוקבות של שיתוף דגירה (3 h פוסט זיהום, מדד מחירי הבתים של), הייתה עלייה 4-fold בחדר התאוששות של קיימא Lm והיה בין 3 ל 6 מדד מחירי הבתים של עלייה 7.5-fold נוספים ההתאוששות של קיימא Lm. מאז גנטמיצין לאנט...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בשל תוכנית תהליכית וברכבות זיהום הסלולר שלה, Lm הוא פתוגן אידיאלי כדי לחקור את פעילות הסלולר להשפיע זיהום. זוהו מספר גורמים המארח, המשפיעות באופן חיובי או שלילי Lm זיהום הסלולר11,12,13,14. לארח שתיים כאלה גורמים מאופיין במעבדה שלנו, Perforin-2 ו- Heme מווסת המדכא (P2, שלום), לווסת את תכונות שונות של תהליך זיהום Lm . כפי שמוצג באיור3, תאים...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מאגר ליזינג ACKGibco 
ArC אמין חרוזי פיצוי תגובתי Life TechnologiesA10346
BHI (עירוי לב למוח) מרקEMD Miliporeמסננת תאים 110493
, 70 ומיקרו; mVWR10199-656
קולגנאז DRoche11088858001
DMEM media גיבקו 11965-092
צינורות FACS BD Falcon352054
FBS - מנוטרל בחום סיגמא-אולדריץ'F4135-500ML
הנקס תמיסת מלח מאוזנתSigma-AldrichH6648-6X500ML
LB אגרתאי גידול MSMBPE-4040
LIVE / DEAD ערכת כתמי תאים מתים צהובים לתיקון Life TechnologiesL349S9
רודמין פלואידין תרמו פישרR415
SP6800 מנתח ספקטרליסוני
28 גרם 1/2 אינץ' 1 סמ"קBD329461
TPP תרבית רקמות 48 צלחות MIDSCITP92048
TPP תרבית רקמות 6 צלחות באר MIDSCITP92406
UltraCompeAds eBioscience01-2222-42
<חזק>אנטיגן
CD11b BiolegendFlurochrome = PE Cy5, דילול = 1/100, Clone = M1/70
CD11cBiolegendFlurochrome = AF 647, דילול = 1/100, Clone = N418
CD45BiolegendFlurochrome = APC Cy7, דילול = 1/100, Clone = 30-F11
F4/80BiolegendFlurochrome = PE, דילול = 1/100, Clone = BM8
Live/DeadInvitrogenפלורוכרום = AmCyN, דילול = 1/100
Ly6CBiolegendFlurochrome = PacBlue, דילול = 1/200, שיבוט = HK1.4
MHC IIBiolegendFlurochrome = AF 700, דילול = 1/200, Clone = M5/114.15.2
NK 1.1BiolegendFlurochrome = BV 605, דילול = 1/100, Clone = PK136
A1049201 מזרק

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen. Nature Review Microbiology. 7 (9), 623-628 (2009).
  2. Ray, K., Marteyn, B., Sansonetti, P. J., Tang, C. M. Life on the inside: the intracellular lifestyle of cytosolic bacteria. Nature Review Microbiology. 7 (5), 333-340 (2009).
  3. Miner, M. D., Port, G. C., Freitag, N. E. Functional impact of mutational activation on the Listeria monocytogenes central virulence regulator PrfA. Microbiology. 154, 3579-3589 (2008).
  4. McCormack, R., et al. Perforin-2 Protects Host Cells and Mice by Restricting the Vacuole to Cytosol Transitioning of a Bacterial Pathogen. Infection and Immunity. 84, 1083-1091 (2016).
  5. Gregory, S. H., et al. Complementary adhesion molecules promote neutrophil-Kupffer cell interaction and the elimination of bacteria taken up by the liver. Journal of Immunology. 168, 308-315 (2002).
  6. Shi, C., et al. Monocyte trafficking to hepatic sites of bacterial infection is chemokine independent and directed by focal intercellular adhesion molecule-1 expression. Journal of Immunology. 184, 6266-6274 (2010).
  7. Pitts, M. G., Combs, T. A., D'Orazio, S. E. F. Neutrophils from Both Susceptible and Resistant Mice Efficiently Kill Opsonized Listeria monocytogenes. Infection and Immunity. 86, 00085(2018).
  8. Carr, K. D., et al. Specific depletion reveals a novel role for neutrophil-mediated protection in the liver during Listeria monocytogenes infection. European Journal of Immunology. 41 (9), 2666-2676 (2011).
  9. Blériot, C., et al. Liver-resident macrophage necroptosis orchestrates type 1 microbicidal inflammation and type-2-mediated tissue repair during bacterial infection. Immunity. 42 (1), 145-158 (2015).
  10. Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. Monocytes are the predominant cell type associated with Listeria monocytogenes in the gut, but they do not serve as an intracellular growth niche. Journal of Immunology. 198, 2796-2804 (2017).
  11. Agaisse, H., et al. Genome-wide RNAi screen for host factors required for intracellular bacterial infection. Science. 309, 1248-1251 (2005).
  12. Cheng, L. W., et al. Use of RNA interference in Drosophila S2 cells to identify host pathways controlling compartmentalization of an intracellular pathogen. Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102, 13646-13651 (2005).
  13. Singh, R., Jamieson, A., Cresswell, P. GILT is a critical host factor for Listeria monocytogenes infection. Nature. 455, 1244-1247 (2008).
  14. Burrack, L. S., Harper, J. W., Higgins, D. E. Perturbation of vacuolar maturation promotes listeriolysin O-independent vacuolar escape during Listeria monocytogenes infection of human cells. Cellular Microbiology. 11, 1382-1398 (2009).
  15. Shrestha, N., et al. The host-encoded Heme Regulated Inhibitor (HRI) facilitates virulence-associated activities of bacterial pathogens. PLoS One. 8, 68754(2013).
  16. Bahnan, W. The eIF2α Kinase Heme-Regulated Inhibitor Protects the Host from Infection by Regulating Intracellular Pathogen Trafficking. Infection and Immunity. 20, 00707(2018).
  17. Kortebi, M., et al. Listeria monocytogenes switches from dissemination to persistence by adopting a vacuolar lifestyle in epithelial cells. PLoS Pathogen. 13, 1006734(2017).
  18. VanCleave, T. T., Pulsifer, A. R., Connor, M. G., Warawa, J. M., Lawrenz, M. B. Impact of Gentamicin Concentration and Exposure Time on Intracellular Yersinia pestis. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 505(2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Listeria monocytogenes

מאמרים קשורים