כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לגרום דיכאון לאחר שבץ בחולדות על ידי הסגר את עורק המוח האמצעי באמצעות עורק הראש הפנימי. אנו משתמשים במבחן Porsolt שחייה כפויה במבחן העדפה הסוכות כדי לאשר ולהעריך מצבי דיכאון המושרה.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לגרום דיכאון לאחר שבץ בחולדות על ידי הסגר את עורק המוח האמצעי באמצעות עורק הראש הפנימי. אנו משתמשים במבחן Porsolt שחייה כפויה במבחן העדפה הסוכות כדי לאשר ולהעריך מצבי דיכאון המושרה.
לאחר שבץ דיכאון (PSD) הוא חוזר ונשנה ביותר של כל הסיבוכים הפסיכיאטריים כתוצאה משבץ איסכמי. רוב גדול (כ 60%) של כל המטופלים שבץ מוחי סובלים PSD, הפרעה שנחשבה להיות מבשר איסכמי שבץ הקשורים למוות מוגבר השפלה בריאות. הפתופסיולוגיה של PSD עדיין מעורפל. כדי ללמוד את המנגנון של פיתוח והתרחשות של PSD עוד, וכיצד למצוא טיפול, ניסינו לפתח פרוטוקול חדש שדורש חסימה של עורק המוח האמצעי (MCA) באמצעות עורק הראש הפנימי (ICA) בחולדות. פרוטוקול זה מתאר מודל של PSD המושרה חולדות באמצעות העורק האמצעי מוחין הסגר (MCAO). משמש גם בניסוי הם מבחן לשחות כפויה Porsolt ואת העדפת בדיקת סוכות כדי לאשר ולהעריך את מצב הרוח דיכאון של חולדות תחת חקירה. במקום להוסיף את הקטטר דרך העורק הראשי החיצוני (ECA), כאמור עבור ההליך המקורי, זו טכניקה MCAO יש המונופינט עובר ישירות דרך ה-ICA. טכניקת MCAO זו פותחה לפני מספר שנים ומובילה לירידה בתמותה ובשונות. מקובל בדרך כלל כי הקריטריונים המשמשים מעדיפים בבחירת מודלים ביולוגיים. הנתונים שהושגו עם פרוטוקול זה מראים כי מודל זה של MCAO יכול להיות דרך לגרום PSD בחולדות והוא עלול להוביל להבנת הפתופסולוגיה והתפתחות עתידית של תרופות חדשות וסוכנים עצביים אחרים.
השבץ הוא הרביעי ברשימת מחלות מבצע המוות בארצות הברית1,2,3, בעוד היא גורמת לרוב המוגבלות אצל מבוגרים במדינות מפותחות4; זה הופך שבץ מתמודד מוביל בין בעיות הבריאות המשמעותית ביותר בעולם. נורמליות בחולים ששרדו הוא נדיר, עם כ 15%-40% של קורבנות הישרדות סבל נכות קבוע, 20% הדורשים טיפול מוסדי 3 חודשים לאחר הופעת שבץ5, וכשליש של 6 חודשים שורדים הזקוקים לאחרים כדי לעזור להם לחיות כל יום6. קו הדיווחים גם לחשבון את ההוצאות הלאומיות בריאות לאומית7. האומדנים מאיגוד הלב האמריקני יש עלויות הקשורות לשבץ בארצות הברית ברחבי $50,000,000,000 ב 20108.
לא רק שבץ לגרום נזק לטווח ארוך של אנשים, אבל כמה ניצולים נוטים לסבול הפרעות רגשיות והתנהגותיות, כגון דמנציה, עייפות, חרדה, דיכאון, הזיות, ותוקפנות9,10,11 ,12,13,14. ההמשך הפסיכולוגי החוזרות ביותר לאחר שבץ הוא דיכאון לאחר שבץ (PSD), אובחן כ 40%-50% של שרידות15,16,17. דיכאון בהשפעת שבץ תוצאות התחלואה ותמותה מוגברת18,19,20,21,22. הפתופסיולוגיה של PSD הוא לא ידוע לחלוטין, אבל זה נגרם כנראה על ידי גורמים מרובים והוא מקושר נכות, ליקוי קוגניטיבי, ואת הנגע באתר23.
המודל חולדה של איסכמיה המוח מוקד, נוצר על ידי mcao, הוא הדגם הנפוץ ביותר בעלי חיים של שבץ24,25,26,27. ב להפגין את אינדוקציה של PSD בחולדות על ידי הסגר את MCA באמצעות ICA, טכניקות למזער את התמותה והשונות במודל MCAO מועסקים28.
המטרה העיקרית של פרוטוקול זה היא לתאר את הצעדים לגרימת PSD בחולדות על ידי הסגר את MCA דרך ה-ICA, מודל שונה של MCAO, אשר מפחית את התמותה ואת תוצאת השונות28. מטרות ספציפיות כוללות ביצוע בדיקות נוירולוגיות היסטולוגית (קביעת הציון החומרה הנוירולוגית [nss], נפח של אזור הלב, בצקת במוח) כדי לאמת את היעילות של mcao ושימוש במבחני התנהגות כדי לבחון את ה השפעה זו הליך MCAO על פיתוח הפרעות רגשיות, בעיקר PSD.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הוועדה לטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת בן-גוריון בנגב אישרה את כל תהליכי הטיפול והבדיקות המשמשים בפרוטוקול זה.
1. הכנת חולדות להליך הניסיוני
הערה: בחר חולדות בוגרים גברי-דאולי במשקל 300-350 g.
2. הכנת חולדות לניתוח
3. כירורגיה (טכניקת MCAO)
הערה: לבצע ניתוח כפי שמתואר על ידי Boyko et al.28 ולהשתמש במכשירים שסופקו על ידי mcgarry ואח '29 ו uluç ואח '30.
4. לאחר ניתוח התאוששות
5. סיכון נוירולוגי ציון31
הערה: הליך זה מבוצע על ידי שני משקיפים שאינם משתתפים בהליכים כירורגיים; הם בודקים את החסרונות הנוירולוגיים וכיתות מנוע בציון מצטבר של 0-432. הערכה של ציון זה ניתן לבצע במרווחי זמן שונים; בחקירה זו, היא בוצעה 50 דקות, 24 שעות, 7, 15, ו 30 ימים לאחר הניתוח. חפש מתחת לשלבים להערכת ה-NSS. למרות שאין צורך במצב זה, ציון זה נדרש כדי לוודא שבץ במכרסמים כדי לנהל את הטיפול.
6. קביעת עוצמת הקול הסיכונים (בחינת היסטולוגית)
7. מדידה של בצקת המוח38
הערה: בצקת המוח נמדדה 24 שעות. לאחר MCAO האחרון בעלי חיים בעלי גרעון נוירולוגי חמור המפריעים לאכילה ו/או לשתייה למשך שלושה ימים לפחות, יותר מ -20% הרזיה, המיפלגיה או התקפים.
8. תבניות התנהגותיות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ממצאים היסטולוגית (שולחן 1) חשף אמצעי אחסון משמעותי סיכונים מבחינה סטטיסטית כאחוז של המוח הכולל (p < 0.0001) post-mcao כאשר בהשוואה לבעלי חיים בקבוצת שליטה מזויף. כמו כן דווח שהיה בצקת מוחית סטטיסטית משמעותית כאשר ההערכה מהקבוצה הניסיונית (p < 0.0003) הושם זה לצד זה של קבוצת השליטה המזויף.
הציונים NSS השיגו, כפי שמיוצג בטבלה 2, להראות הופעות נוירולוגיות נמוכה יותר בקבוצה ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
אחת הדרכים בהן טכניקת MCAO המוצגת כאן יכולה להיחשב בטוחה יותר ממודל MCAO המקורי מומחש על-ידי העובדה כי ה-ECA וענפיו, כולל עורק העורף, המסוף הלשוני ועורק הלסת הראשי, אינם נחשפים כשסגר את הMCA באמצעות ה-ICA. מודל MCAO המקורי של היסט של ECA (ואת ענפיו), על ידי מבתר קרוש אותם46, גורם לקויי מסטיק, בשל פשרה לאספקת כלי הדם כדי מדביק שרירי47. הרס השריר יכול בסופו של דבר לגרום לשחרור של דינמיקה של נוזל חישוביות נוסף. בניגוד לטכניקת MCAO המקורית שבה הגישה MCA מתרחשת דרך ECA, הטכניקה ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
. למחברים אין מה לגלות
אנו מודים לפרופסור אולנה סוינינסקה של מחלקת הפיזיולוגיה, הפקולטה לביולוגיה, אקולוגיה ורפואה, יולס הונchar דניפרו, דניפרו, אוקראינה לתמיכה ותרומות מועילות לדיונים שלנו. הנתונים שהושגו הם חלק מעבודת הדוקטורט של ק.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| כרית סופגת | - | -- | |
| קופסת פרספקס שחורה חסרת ברק | - | (120 ס"מ וזמנים 60 ס"מ; 60 ס"מ), מחולקת לאזור מרכזי של 25% ואזור הגבול שמסביב | |
| בקבוקים | טכניפלסט | ACBT0262SU | בקבוקי 150 מ"ל מלאים ב-100 מ"ל מים ו-100 מ"ל תמיסת סוכרוז 1% (w/v) מערכת |
| הלם חשמלי | Ultasonic Inc. | - | - |
| Horizon-XL | Mennen Medical Ltd | ||
| מערכת הדמיה | קודאק | - | להדמיה וכימות |
| מונופילמנט | - | -- | |
| מגבות נייר | בית מרקחת | מגבות יבשות המשמשות לשמירה על חולדות יבשות לאחר טבילתן | |
| במים גליל פקסגלס | - | -גליל בגובה 100 ס"מ ובקוטר 40 ס"מ המשמש לביצוע מבחן השחייה הכפויה | |
| פורינה צ'או | פורינה | 5001 | צ'או מעבדה מכרסמים הניתן לחולדות, עכברים ואוגרים הוא תזונה במחזור חיים המשמשת במחקר ביו-רפואי כבר למעלה מ-5 עשורים. מסופק לחולדות ad libitum בניסוי זה |
| כלובי חולדות | Techniplast | 2000P | דיור קונבנציונאלי למכרסמים. שימש לשיכון חולדות לאורך כל הניסוי |
| Scanner | Canon CanoScan | 4200F-מצלמת | |
| וידאו | ETHO-VISION (Noldus) | - | מצלמת וידאו דיגיטלית להקלטה בחדות גבוהה של התנהגות חולדות בבדיקה בשטח פתוח |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאהAn erratum was issued for: A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats. The Authors section was updated.
One of the author names was updated from:
Dmitri Frank
to
Dmitry Frank