כאן אנו מציגים פרוטוקול אלגנטי ויוו הערכה של חיסון היעילות ומנחה תגובות מערכת החיסון. פרוטוקול זה ניתן להתאים מודלים חיסון ללמוד ויראלי, חיידקי, או טפילים פתוגנים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הערכה של פתוגן-פונדקאי תגובות והיעילות החיסון בעכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
חיסונים הם המאהה 20 רפואי פלא. הם צמצמו באופן משמעותי את התחלואה ואת התמותה הנגרמת על ידי מחלות זיהומיות, תרמה עלייה מרשימה בתוחלת החיים ברחבי העולם. למרות זאת, קביעת ליעילותו נשאר אתגר. מתעוררים הראיות עולה כי החיסון acellular הנוכחי (aPV) נגד שעלת בורדטלה (נולד ב- שעלת) מעניקה חסינות שיוצרת. לכן, האתגר העיקרי הוא עיצוב חיסון הדור הבא שגורם חיסון הגנתי ללא תופעות לוואי לוואי של חיסון כל-תא (wPV). כאן נתאר פרוטוקול השתמשנו כדי לבדוק את היעילות של אדג'וונט מבטיח, הרומן הטיה החיסון התגובות הפנוטיפ Th1/Th17 מגן ומקדם סיווג יותר אתגר שעלת דרב מ במערכת הנשימה מאתר. מאמר זה מתאר את פרוטוקול העכבר חיסון, חיסון חיידקי, קצירת רקמות של ניתוח של תגובות חיסוניות. באמצעות שיטה זו, בתוך המודל שלנו, אנו יש בהצלחה מבואר מנגנונים מכריע שהפיק חיסון שעלת acellular מבטיח, הדור הבא. בשיטה זו ניתן ליישם כל דגם למחלות זיהומיות על מנת לקבוע את יעילות החיסון.
מבוא
חיסונים מייצג את אחד ההישגים בריאות הציבור הגדולים של המאה ה-20, אך אנחנו עדיין אינם מבינים את המנגנון שלפיו חיסונים מצליח לעורר חיסון הגנתי. הזיהוי של חתימות מולקולרית (למשל., סמני הפעלת התא, הרחבה של סוגי הסלולר, ביטוי גנים) המושרה לאחר החיסון מספק שפע של מידע על חיזוי ותפיק יעיל התגובה החיסונית. המורכבות של פתוגן-פונדקאי תגובות לא ניתן שלמאחה לשכפל באמצעות במבחנה מערכות התרבות התא1. In vivo חיסון מודלים נועדו להעריך/ת מספר סוגי תאים חיסוניים בתוך המארח. זה מספק יתרון בעת אפיון חיסון נגד אנטיגן עיבוד, מצגת, הפרשת ציטוקינים דיפרנציאלית והרחבה של תאים חיסוניים. הפרוטוקול המתואר כאן מספק שיטה מפורטת כדי לקבוע יעילות הח....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ניסויים שנערכו על בעלי חיים נערכו בעקבות פרוטוקול שאושרו על-ידי IACUC של אוניברסיטת מדינת אוהיו בהתאם להנחיות IACUC. C57BL/6 עכברים שימשו כל החיסונים וזיהומים. גם זכר וגם נקבה עכברים משמשים בכל קבוצה לפי הנחיות NIH. מספר החיות לכל קבוצה נקבע על ידי כוח חישובים בהתבסס על ההבדלים החזוי התוצאה בקרב קבוצות הניסוי. לדוגמה, עכברים 8 לכל קבוצה תניב 80% כוח-α = 0.05 (דו-צדדית) עבור 2-sample t- test כדי לזהות הבדלים בין התוצאה של האינטרס של 1.33 סטיות תקן (מרחביות).
1. חיסון של עכברים
- להכין תערובת בסיס חיסון במאגר פיזיולוגית סטרילית כמו תמיסת מלח או DPS.
הערה: הנפח הכולל בתערובת צריך לכלול 10% יותר מאשר זה נדרש חיסון בקבוצה ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
המודל המתואר מציג שיטה כדי להעריך את יעילות החיסון, תגובות מערכת החיסון במהלך אינטראקציות פתוגן-פונדקאי. איור 1 מציג לוח הזמנים חיסון נציג נהגה להתחסן ולא להדביק עכברים ולקצור רקמות לצורך ניתוח. איור 2 מדגים את ההתקנה של מערכת הרדמה המועסקים לזירוז עכברים, הפעלת חוקרים כדי לספק החיסונים, חיידקי inoculums. איור 3 מראה דוגמה OD600 מדידות וחישובים להשגת השעיה חיידקי 1 OD להכין 100-fold inocul.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול מקיף המתוארים כאן ללמוד חסינות הנוצרות על-ידי חיסון שעלת דרב זיהום יאפשר גם הערכה של תגובות מארח מגוון רחב של פתוגנים אחרים. הפרוטוקול דן שיטות כדי לספק החיסונים, לקבוע את יעילות החיסון הבא הפתוגן. אתגר ולאחר ניתוח מקביל של תפקוד מערכת החיסון. בהתאמת הפרוטוקול ללימוד פתוגנים אחרים, מספר פרמטרים צריכים להיות שונה. אלה כוללים, אך אינם מוגבלים, למצב של הרדמה בעלי חיים, הרכב החיסון, מינון התוואי של המינהל. בנוסף, המינון ואת המסלול של הממשל של המחלה המוגבל של עניין, רקמות שנבחר לקציר, והערכה במורד הזרם של תג.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי קרנות 1R01AI125560-01, סטארט-אפ של אוניברסיטת אוהיו.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תא אינדוקציה 2L | Vet Equip | 941444 | |
| Fluriso | Vet One | V1 501017 | כל מותג מתאים |
| Bordet Gengou Agar Base | BD bioscience | 248200 | |
| קזאין | סיגמא | C-7078 | |
| חומצות קסמינו | VWR | J851-500G | מסננת Scholte (SS) רכיבי מדיה |
| חומצה L-גלוטמית | מוצרי מחקר Int | G36020-500 | |
| L-Proline | מוצרי מחקר Int | P50200-500 | |
| נתרן כלורי | פישר | BP358-10 | |
| אשלגן פוספט מונו-בסיסי | פישר | BP362-1 | |
| אשלגן כלורי | פישר | P217-500 | |
| מגנזיום כלוריד הקסהידרט | פישר | M2670-500G | |
| סידן כלוריד | פישר | C75-500 | |
| טריס בסיס | פישר | BP153-1 | |
| L-ציסטאין הידרוכלוריד | פישר | BP376-100 | SS חומרי אספקה |
| סולפט הפטהידראט | סיגמא | F-7002 | |
| ניאצין | מוצרי מחקר Int | N20080-100 | |
| גלוטתיון | מוצרי מחקר Int | G22010-25 | |
| חומצה אסקורבית | Int | A50040-500 | |
| RPMI 1640 | ThermoFisher Scientific | 11875093 | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | כל מקור אמריקאי, |
| גנטמיצין | ThermoFisher Scientific | 15710064 | |
| B-מרקפטואתנול | פישר | BP176-100 | |
| מטחנת רקמות 15 מ"ל | Wheaton | 357544 | כל מותג דומה מתאים |
| הומוגנייזר ידני אלחוטי | Kontes/Sigma | Z359971-1EA | כל מותג דומה מתאים |
| מכשירים - מספריים, מספריים עקומה, מלקחיים, מלקחיים עדינים, מפזרי | כל מותג מתאים | ||
| מזרקי 3 מ"ל | BD bioscience | 309657 | |
| צינורות חרוטיים 15 מ"ל | פישר | ||
| 339651 צינורות מיקרופוגה 1.5 מ"ל | דנוויל | C2170 | |
| 70um מסנני תאים | פישר | ||
| 22363548 צלחות 60 מ"מ | ThermoFisher Scientific | 130181 | |
| צלחות תרבית רקמות 48 בארות | ThermoFisher Scientific | 08-772-1C | |
| 1 מ"ל מזרק אינסולין 28G1/2 | Fisher Scientific/Excel Int. | 14-841-31 | |
| עכבר IFN-gamma ELISA Ready-SET-Go! ערכה | Invitrogen / eBioscience | 50-173-21 | |
| עכבר IL-17 ELISA Ready-SET-Go! ערכה | Invitrogen / eBioscience | 50-173-77 | |
| עכבר IL-5 ELISA Ready-SET-Go! ערכת | Invitrogen / eBioscience | 50-172-09 |
מקורות
- Tacken, P. J., Figdor, C. G. Targeted antigen delivery and activation of dendritic cells in vivo: steps towards cost effective vaccines. Seminars in Immunology. 23 (1), 12-20 (2011).
- Kilgore, P. E., Salim, A. M., Zervos, M. J., Schmitt, H. J.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
