מאמר שיטה

דגם העכבר כדי להעריך מולדת התגובה החיסונית לזיהום Staphylococcus aureus

12.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59015

⸱

28 בפברואר 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of California Davis, 2Department of Dermatology, Johns Hopkins University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

גישה זו מתוארת זיהוי בזמן אמת של התגובה החיסונית מולדת ופצעו עורית, Staphylococcus aureus זיהום של עכברים. מאת LysM בהשוואת-EGFP עכברים (אשר מחזיקים נויטרופילים פלורסנט) עם LysM-EGFP crossbred immunodeficient עכבר זן, נוכל לקדם את ההבנה שלנו של זיהום ופיתוח של גישות כדי להילחם זיהום.

תקציר

Staphylococcus aureus זיהומים (S. aureus), לרבות עמיד methicillin כתמים, הם נטל עצום על מערכת הבריאות. עם שיעורי ההיארעות של זיהום S. aureus טיפוס מדי שנה, יש ביקוש נוספים במחקר שלה פתוגניות. מודלים חייתיים של מחלות זיהומיות לקדם את ההבנה שלנו של התגובה פתוגן-פונדקאי ולהוביל להתפתחות של הרפוי יעיל. נויטרופילים לשחק תפקיד ראשי התגובה החיסונית מולדת השולט S. aureus זיהומים על ידי יצירת מורסה קיר את הזיהום, להקל על חיסול חיידקים; המספר של נויטרופילים זה לחדור זיהום עור S. aureus לעיתים קרובות עולה בקנה אחד עם תוצאות המחלה. עכברים LysM-EGFP, אשר מחזיקים את משופרת חלבון פלואורסצנטי ירוק (EGFP) הוכנס האזור יזם ליזוזים מ' (LysM) (לידי ביטוי בעיקר על ידי נויטרופילים), בעת שימוש בשילוב עם ויוו פלורסצנטיות כל חיה הדמיה (כאשר שגיא) לספק אמצעי לכימות הגירה נויטרופילים noninvasively ו longitudinally לתוך העור הפצוע. בשילוב עם ביולומנאסן S. aureus זן והדמיה רציפים ויוו כל בעלי חיים זוהרים (בלי), זה אפשרי לעקוב longitudinally dynamics גיוס נויטרופילים והן נטל חיידקי ויוו באתר של זיהום ומורדמת עכברים מן התחלה של זיהום רזולוציה או מוות. עכברים הם עמידים יותר בפני מספר גורמים התקפה אלימה המיוצר על ידי S. aureus המאפשרים קולוניזציה יעיל ולדלקת בבני אדם. עכברים immunodeficient מספקות מודל בעלי חיים רגיש יותר לבחון מתמשך S. aureus זיהומים ואת היכולת של הרפוי כדי להגביר את תגובות מערכת החיסון המולדת. במסמך זה, נוכל לאפיין תגובות בעכברים LysM-EGFP זה יש כבר וגדל לעכברים MyD88 לקויה (LysM-EGFP × MyD88- / - עכברים) יחד עם פראי-סוג עכברים LysM-EGFP לחקור זיהום הפצע העור S. aureus . זיהוי סימולטני מולטי ספקטריאליות מחקר של גיוס נויטרופילים dynamics באמצעות ויוו כאשר שגיא, נטל חיידקי באמצעות רבנות בלי ויוו, וההגדרה פצע ריפוי longitudinally, noninvasively לאורך זמן.

מבוא

Staphylococcus aureus (S . aureus) חשבונות עבור הרוב המכריע של העור וזיהומים רקמות רכות (SSTIs) ארצות הברית1. השכיחות של סטפילוקוקוס עמיד methicillin- S. aureus (MRSA) זיהומים גדל בהתמדה על העבר שני עשורים2, עידוד המחקר של המנגנונים של התמדה, הגילוי של אסטרטגיות טיפול חדשות. הטיפול לזיהומים MRSA הוא טיפול אנטיביוטי מערכתית, אבל MRSA הפכה יותר ויותר עמידים בפני אנטיביוטיקה במהלך הזמן3 , תרופות אלו יכולים להפחית microbiome מועיל של המחשב המארח, גרימת השפעות בריאותיות שליליות, בעיקר ילדים4. פרה מחקרים בחנו אסטרטגיות חלופיות לטיפול זיהומים MRSA5, אך בתרגום גישות אלה למרפאה הוכיח מאתגר בשל הופעתה של הגורמים התקפה אלימה לסכל מארח תגובות חיסוניות6. לנתח הדינמיקה פתוגן-מארח את הכונן SSTIs S. aureus , אנו משלבים לא פולשנית, המפרט האורך של המספר של נויטרופילים מגויס מיטת הפצע באמצעים קינטי השפע חיידקי פצע באזור.

הנויטרופילים הם ליקוציט במחזור הנפוץ ביותר בני האדם ואת המגיבים הראשונים זיהום חיידקי7. הנויטרופילים הם מרכיב הכרחי עבור מענה מארח יעיל נגד זיהומים S. aureus עקב מנגנונים אחרים שלהם, כולל הפקה של מינים חמצן תגובתי, פרוטאזות, פפטידים מיקרוביאלית ותגובות פונקציונלי לרבות phagocytosis נויטרופילים מלכודת חוץ-תאי ייצור8,9. בני אדם חולים עם פגמים גנטיים בתפקוד נויטרופילים, כגון מחלה גרגירומת ממושכת, תסמונת Chediak-היגאשי, מראים רגישות. מוגברת לזיהומים S. aureus . בנוסף, חולים עם גנטי (כגון נויטרופניה מולדים), שנרכש (כגון נויטרופניה לראות בחולים כימותרפיה) פגמים מספרים נויטרופילים הם גם רגישים מאוד S. aureus זיהום10. בהתחשב בחשיבות של נויטרופילים ב ניקוי S. aureus זיהומים, שיפור יכולת המערכת החיסונית שלהם או כוונון המספרים שלהם בתוך פצע S. aureus יוכיח אסטרטגיית יעיל בפתרון זיהום.

בעשור האחרון, העכברים הטרנסגניים עם כתבים נויטרופילים פלורסצנטיות פותחו ללמוד שלהם11,סחר12. שילוב כתב נויטרופילים עכברים עם כל החיות טכניקות הדמיה מאפשרת ניתוח זמן-מרחבי של נויטרופילים ב רקמות ואיברים. בשילוב עם זנים ביולומנאסן של S. aureus, ניתן לעקוב אחר ההצטברות של נויטרופילים בתגובה S. aureus שפע, התמדה בהקשר של התקפה אלימה חיידקי גורמים במישרין ובעקיפין perturb מספרים נויטרופילים הרקמה הנגועה13,14,15,16.

עכברים הם רגישים פחות התקפה אלימה S. aureus התחמקות מנגנוני החיסון מאשר בני אדם. ככזה, לא ייתכן פראי-סוג עכברים במודל חיה אידיאלי כדי לחקור את היעילות של בהתחשב טיפולית לטיפול כרוני S. aureus זיהום. MyD88 לקויה עכברים (קרי, MyD88- / - עכברים), זן העכבר immunocompromised חסר קולטן interleukin-1 תפקודית (IL-1R), אגרה דמוי קולטן (TLR) איתות, הצג רגישות גדולה יותר לזיהומים S. aureus בהשוואה פראי-סוג עכברים17 , ליקוי ב סחר נויטרופילים באתר של S. aureus זיהום העור18. התפתחות זן העכבר שמחזיק כתבת נויטרופילים פלורסנט בעכברים- / - MyD88 סיפקה מודל אלטרנטיבי לחקור את היעילות של טיפולים לטיפול זיהום S. aureus בהשוואה נויטרופילים הנוכחי כתב עכברים.

ב פרוטוקול זה, אנו מאפיינים את S. aureus זיהום בעכברים immunocompromised LysM-EGFP × MyD88- / - , להשוות את משך הזמן ואת הרזולוציה של זיהום עם העכברים LysM-EGFP. LysM-EGFP × MyD88- / - עכברים לפתח דלקת כרונית אינה פותרת, 75% ללקות זיהום לאחר 8 ימים. פגם משמעותי בגיוס נויטרופילים הראשונית מתרחשת מעל 72 h בשלב דלקתיות של זיהום, 50% פחות נויטרופילים לגייס בשלב האחרון של זיהום. הרגישות מוגברת של × LysM-EGFP MyD88 עכברים- / - הופכת את המסוים זן דגם פרה קפדני כדי להעריך את היעילות של טכניקות טיפוליות חדשות מיקוד S. aureus זיהום לעומת הנוכחי מודלים זה לנצל פראי-סוג עכברים, במיוחד טכניקות במטרה לשפר את התגובה החיסונית המולדת מפני זיהום.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל עכבר מחקרים נבחנו, אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים שימוש הוועדה ב- UC דיוויס, בוצעו בהתאם לקווים המנחים של חוק רווחת בעלי חיים, חוק הבריאות מחקר סיומת. הקפד להשתמש בכפפות סטריליות בעת עבודה עם בעלי חיים.

1. עכבר מקור ודיור

  1. שואבים עכברים LysM-eGFP על רקע גנטי C57BL/6J כפי שתואר לעיל12. שואבים LysM-EGFP × MyD88- / - עכברים על ידי מעבר LysM-EGFP עכברים עם עכברים- / - MyD88 על רקע C57BL/6J.
  2. עכבר הבית ביבר. על מחקרים אלו, שוכנו חיות ב אוניברסיטת קליפורניה, דייוויס בקבוצות לפני ניתוח, ניתוח הבאים שוכנו יחיד. השתמש עכברים בין הגילאים 10-16 שבועות.

2. חיידקי והכנה כמת

  1. הסר את ביולומנאסן S. aureus זן עניין מ-80 מעלות צלזיוס אחסון להפשיר על קרח. פס על צלחת אגר דם שור 5%. דגירה על צלחת מרוחים חממה humidified ב 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה (ג 16).
    הערה: פרוטוקול זה, המתח ALC2906 SH1000 שימשה. זן זה מכיל את pSK236 פלסמיד הסעות עם האמרגן פניצילין מחייב חלבון 2 התמזגו בקלטת כתב luxABCDE מ Photohabdus luminescens18.
  2. להכין מרק סויה tryptic (TSB) על ידי ערבוב 0.03 נקודות גר' אבקה TSB לכל מיליליטר מים טהורים, החיטוי TSB לחטא. מקורר, מוסיפים אנטיביוטיקה הצורך בטכניקה סטרילי. ב פרוטוקול זה, להוסיף 10 µg/mL כלורמפניקול18 TSB כדי לבחור עבור הבעת פלסמיד הסעות pSK236, אשר מכיל את הקלטת luxABCDE ביולומינסנציה.
  3. לבחור 3-4 מושבות נפרדות מהצלחת S. aureus לתוך TSB עם 10 µg/mL כלורמפניקול להתחיל תרבות בין לילה. דגירה חיידקים על שייקר ומוכנסות ב 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה (ג 16).
  4. התחל חיידקי תרבות חדשה מתרבות לילה דילול דוגמה 1:50 לתוך TSB עם 10 כלורמפניקול µg/mL. תרבות שייקר ומוכנסות ב 200 סל ד ו- 37 מעלות צלזיוס.
  5. שעתיים לאחר פיצול של S. aureusלפקח על הצפיפות האופטית-600 nm (OD600) על ספקטרופוטומטרים. לבחון את יתר600 לעומת זמן למצוא את הגידול שלב אמצע-לוגריתמי. לזן של ALC2906 SH1000 ', יתר600 של 0.5 אמצע-לוגריתמי, מקביל ריכוז עונה 1 פרק 10-8 CFU/mL (איור 1).
  6. כאשר יתר600 0.5, לשטוף חיידקים 1:1 עם DPBS קר כקרח. Centrifuge החיידק למשך 10 דקות, ב-3,000 x g ו- 4 מעלות צלזיוס. בזהירות decant את תגובת שיקוע ולהוסיף DPBS צוננים נוספים מערבולת ביסודיות. צנטריפוגה פעם נוספת עבור 10 דקות ב-3,000 x g ו- 4 מעלות צלזיוס.
  7. Decant בקפידה את תגובת שיקוע. Resuspend בגדר חיידקי-ריכוז הרצוי. מחקרים אלו, לאסוף 3 מ"ל של ALC2906 SH1000, resuspend ב mL 1.5 ל- PBS, מתאם כדי ריכוז חיידקים של בערך 2 x 108 CFU/mL. לשמור על חיידקים על הקרח עד השימוש.
  8. כדי לוודא ריכוז חיידקים, לדלל 100 µL של חיידקי מדגם 1:10,000, כוללות ב- PBS. צלחת 20 aliquots µL על צלחת אגר. דגירה-37 מעלות צלזיוס חממה humidified עבור ה 16 הרוזן CFUs בבדיקה מגעיל, לחשב ריכוז חיידקי ביום המחרת.

3. excisional Wounding העור, חיסון עם S. aureus

  1. לנהל µL 100 של 0.03 נקודות מ"ג/מ"ל. הבופרנורפין הידרוכלוריד (~0.2 מ"ג/ק"ג) כל העכבר באמצעות זריקה בקרום הבטן.
  2. פוסט-זריקה עשרים דקות, מקום 2-4 עכברים בחדר עם 2-3 LPM חמצן עם 2-4% איזופלוריין. ברגע עכברים הם מורדם לחלוטין, להעביר את העכברים אחד בכל פעם כדי קונוס האף מחובר לחמצן LPM 2-3 עם 2-4% איזופלוריין. ודא עכברים הם מורדם לחלוטין על ידי בחוזקה צובט כל כף הרגל האחורית בין האגודל לאצבע. המשך לשלב הבא, אם בעל החיים אינו מגיב בלחץ.
  3. לגלח 1 אינץ ' על-ידי סעיף 2 אינץ ' על הגב של העכבר עם קוצץ חשמלי ולנקות את האזור של גזירות פרווה באמצעות ניגוב נקי או גזה. הימנע משימוש קרם depilatory כי זה עלול לגרום לדלקת עודף.
  4. נקי האחורי של העכבר הראשון עם 10% povidone-יוד ספוג גזה ואחר כך עם אתנול 70% של ספוג גזה. נקו את האזור בדפוס ספירלה, נע החוצה מן המרכז של אזור הניתוח. המתן כ 1 דקות לאזור כירורגי להתייבש לפני הניתוח.
  5. החזק המגולח מאחורי העכבר באופן רופף בין שתי אצבעות ולחץ בחוזקה ביופסיה אגרוף סטרילי 6 מ מ במרכז של אזור הניתוח מוכן. . אל תעשה את העור מתוח.
    1. סובב את הביופסיה אגרוף כדי ליצור קו מיתאר מעגלית על העור באופן מלא שחותך דרך העור בסעיף אחד לפחות של החלוקה לרמות. יש להיזהר לא לחתוך fascia או הרקמה הבסיסית.
    2. להשתמש מלקחיים ומספריים סטרילי כדי לחתוך דרך האפידרמיס בדרמיס בעקבות התבנית המעגלית מוטבע על ידי לקחת את הביופסיה.

4. ס aureus חיסון

  1. ממלאים מזרק אינסולין 28 גרם inoculant הרצוי חיידקים זוהרים. במחקר זה, לנהל את ריכוז עונה 1 פרק 10-8 CFU/mL (50 µL). לא לנהל יותר מ 100 µL של אמצעי אחסון.
  2. מזריקים µL 50 של inoculant בין fascia רקמה במרכז של הפצע על הגב של העכבר. ודא כי inoculant הטפסים בועה במרכז הפצע עם דליפה מינימלי או פיזור.
    1. משוך הדרמיס לצד, החזק את המזרק כמעט במקביל הרקמה ולאחר לאט לדחוף את המזרק לתוך הרקמה עד לירידה פתאומית התנגדות מורגשת, המציינת נוקבת של fascia. בזהירות להוביל את המזרק לתוך המרכז של הפצע, לוותר על inoculant לאט. הסר את המזרק לאט החיה.
  3. מזריקים באותו אמצעי אחסון של PBS סטרילי לתוך הפצעים של בעלי חיים נגוע כמתואר לעיל.
  4. להחזיר את החיה לכלוב שלו. למקם את הכלוב מתחת למנורת חום או על גבי כרית החימום, ולעקוב אחר בעל החיים עד ההתאוששות מן ההרדמה.

5. ב מתה על Vivo ו זאת ביחד

  1. אתחל םלצה כל בעלי חיים דרך התוכנה כלי נגינה. עזים ומתנגד עכברים בחדר קבלת חמצן LPM 2-3 עם 2-4% איזופלוריין. להעביר nosecones בתוך םלצה הרדמה.
  2. הנח את העכבר פצועים ואף נגוע לתוך םלצה. מיקום העכבר כך הפצע הוא שטוח ככל האפשר. השתמש את קביעת רצף הבאים כדי התמונה העכברים.
    1. בחר הפריה חוץ גופית , לצלם מצב הדמיה. זמן החשיפה הוא 1 דקות binning קטן ו- F/להפסיק 1 (הפריה חוץ גופית), F/להפסיק 8 (צילום). מסנן פליטה פתוחה. לחץ על לחצן ייבוא כדי להקליט את התמונה.
    2. בחר פלורסצנטיות , לצלם מצב הדמיה. הגיע הזמן חשיפה 1 s binning קטן, F/להפסיק 1 (זריחה) ו- F/להפסיק 8 (צילום) עם אורך גל עירור של 465/30 nm ו של ננומטר אורך גל 520/20 פליטה בעוצמה המנורה גבוה. לחץ על לחצן ייבוא כדי להקליט את התמונה.
  3. להחזיר את החיה לכלוב של צג עד ההתאוששות מן ההרדמה.
  4. התמונה עכברים מדי יום כמפורט לעיל.

6. ניתוח תמונות

  1. תמונות פתוח ניתן לכמת.
  2. מיקום אזור עגול גדול עניין (ROI) מעל אזור הפצע כולו כולל שמסביב עור עבור כל העכבר בתמונה. נויטרופילים ויוו שמסמן כאשר שגיא EGFP ויוו מתה על S. aureus אותות להרחיב מעבר לקצה פצע לאחר מספר ימים, נכללו במחקרים אלה (איור 2A ו- 2B). לחץ על רועי למדוד ערכי רשומה עבור השטף הממוצע עבור כל עכבר. מגרש שטף הממוצע של כל אות (p/s) לעומת פעם.
  3. אם מספרים מוחלטים של נויטרופילים או S. aureus בפצע הם הרצויה, לבצע את הניסויים הבאים.
    1. לתאם מספרים נויטרופילים על האותות כאשר שגיא EGFP ויוו, פצע עכברים C57BL/6J כמתואר לעיל, ולאחר להעביר מגוון של נויטרופילים הנגזרות מח עצם (5 x 105 ל 1 x 107) LysM-EGFP או תורמים- / - LysM-EGFPxMyD88 ישירות מעל לפציעות שונות. התמונה כפי שתואר לעיל, correlate EGFP כאשר שגיא ויוו אותות לכמות הידוע של נויטרופילים.
    2. תשבחות S. aureus CFU האותות רבנות בלי ויוו, פצע ולהדביק על עכברים כמתואר לעיל. ביום 1 לאחר הפגיעה הרשומה ויוו רבנות בלי אותות מן העכברים ומיד המתת חסד ולהירגע הגוויות. לסלק את הפצע, homogenize את הרקמה, צלחת דילולים חיידקי על אגר במשך לילה הדגירה. למחרת, לספור מושבות כדי לקבוע CFU לכל הפצע.
  4. כדי למדוד את בכושר ריפוי הפצע של רועי מעגלית מעל הקצה הפצע, למדוד האזור הפצע (2ס מ), מגרש את השינוי החלקי מקו לעומת זמן (איור 2C).

7. סטטיסטיקה

הערה: כל הנתונים מוצגים ±SEM רעה. p < 0.05 נחשבו סטטיסטית

  1. לקבוע את ההבדלים בין שתי הקבוצות ביום יחיד באמצעות השיטה הולם-Sidak עם אלפא = 0.05, לנתח כל נקודת זמן בנפרד, מבלי בהנחה SD. עקבית
  2. להשוות הבדלים בין קבוצות מרובות באותו יום על ידי חד-כיווני אנובה עם posttest השוואות מרובות Tukey. הישרדות בין קבוצות הניסוי נותחה על ידי שיטת האח-קוקס.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

LysM-EGFP × MyD88- / - עכברים רגישים יותר לזיהומים S. aureus מאשר עכברים LysM-EGFP

המתח של S. aureus השתמשו במחקר זה, ALC290618, נבנה עם פלסמיד המכיל הבונה לאקס המייצר אותות ביולומנאסן של חיידקים חיים פעיל חילוף חומרים. כאשר מחוסן לתוך עכברים, ויוו ביולומינסנציה הדמיה (בלי) טכניקות ניתן למדוד longitudinally נטל חיידקים בתוך פצע מזוהם. LysM-EGFP × MyD88- / -...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

S. aureus זיהום מודלים לנצל ביולומנאסן S. aureus זיהום ב עכבר כתב נויטרופילים פלורסנט בשילוב עם טכניקות מתקדמות של כל חיה דימות אופטי ויוו המתקדמת שלנו ידע מולד התגובה החיסונית לזיהום. מחקרים קודמים באמצעות העכבר LysM-EGFP הראו כי למעלה עונה 1 פרק 107 נויטרופילים לגייס כדי פצע מזוהם S. aureus במשך 24 השעות הראשונות של זיהום14ו נויטרופילים גייס הפצע להאריך מחצית החיים שלהם מ- 1.5 ימים עד חמישה ימים בתגובה S. aureus-נגוע הפצע22. ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

לויד מילר ס קיבל מענק תמיכה MedImmune, פייזר, Regeneron, צ'אן מוקדם-Shiong Nanthealth קרן ואת דמי ייעוץ של חברת Noveome וקרן Nanthealth מוקדם-Shiong Chan שאינן קשורות לעבודה דיווח נייר זה. המחברים האחרים אין לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי נבחרת מוסדות של בריאות מענקים R01 AI129302 (כדי רפ), את תוכנית האימונים בפרמקולוגיה: מן הספסל אל מיטתה ב UC דייוויס (NIH T32 GM099608 אל L.S.A). מולקולרית של גנומית הדמיה (CMGI) ב אוניברסיטת קליפורניה דיוויס סיפק תמיכה טכנולוגית מעולה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
14 מ"ל פוליפרופילן צינור תחתון עגולפלקון352059
6 מ"מ חד פעמי ביופסיה אגרוףאינטגרה Miltex33-36
Bioluminescent S. aureusLloyd Miller, Johns Hopkins ALC 2906 SH1000
אגר דם בקר, 5%, Hardy DiagnosticsVWR10118-938
בופרנופרין הידרוכלוריד הזרקהWestern Medical Supply72920.3 מ"ג/מ"ל
C57BL/6J עכבריג'קסון Labratory000664
כלורמפניקול (אבקה גבישית)פישר ביו-ריאגנטיםBP904-100
DPBS (1x)גיבקו 14190-144
מזרקי אינסוליןבקטון, דיקסון ושות'3294610.35 מ"מ (28 גרם) x 12.7 מ"מ (1/2 אינץ')
IVIS Spectrum In Vivo ImagingSystem Perkin Elmer124262
Living Image Software – סדרת ספקטרום IVISפרקין אלמר128113
LysM-eGFP עכבריםתומאס גראף אלברט איינשטיין קולג' בניו יורק 
ספקטרופוטומטר מיקרו-נפחThermoFisher ScientificND-2000
MyD88 KO עכבריםג'קסון מעבדה009088
ספוגים לא ארוגיםAMD- Ritmed IncA2101-CH5 ס"מ x 5 ס"מ
Povidone Iodine 10% תמיסהAplicare697731
Prism 7.0GraphPad רישיון תוכנה 
מרק סויה טריפטיבקטון, דיקסון ושות'211825
NA

מקורות

  1. Moran, G. J., et al. Methicillin-Resistant S. aureus Infections among Patients in the Emergency Department. New England Journal of Medicine. 355 (7), 666-674 (2009).
  2. Suaya, J. A., et al. Incidence and cost of hospitalizations associated with Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections in the United States from 2001 through 2009. BMC Infectious Diseases. 14 (1), 296(2014).
  3. Ventola, C. L. The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats. P & T : a Peer-Reviewed Journal for Formulary Management. 40 (4), 277-283 (2015).
  4. Blaser, M. J. Antibiotic use and its consequences for the normal microbiome. Science. 352 (6285), 544-545 (2016).
  5. Hilliard, J. J., et al. Anti-Alpha-Toxin Monoclonal Antibody and Antibiotic Combination Therapy Improves Disease Outcome and Accelerates Healing in a Staphylococcus aureus Dermonecrosis Model. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (1), 299-309 (2015).
  6. Proctor, R. A. Recent developments for Staphylococcus aureus vaccines: clinical and basic science challenges. European Cells & Materials. 30, 315-326 (2015).
  7. Mölne, L., Verdrengh, M., Tarkowski, A. Role of Neutrophil Leukocytes in Cutaneous Infection Caused by Staphylococcus aureus. Infection and Immunity. 68 (11), 6162-6167 (2000).
  8. Kolaczkowska, E., Kubes, P. Neutrophil recruitment and function in health and inflammation. Nature Reviews Immunology. 13 (3), 159-175 (2013).
  9. Borregaard, N. Neutrophils, from Marrow to Microbes. Immunity. 33 (5), 657-670 (2010).
  10. Miller, L. S., Cho, J. S. Immunity against Staphylococcus aureus cutaneous infections. Nature Reviews Immunology. 11 (8), 505-518 (2011).
  11. Hasenberg, A., et al. Catchup: a mouse model for imaging-based tracking and modulation of neutrophil granulocytes. Nature Methods. 12 (5), 445-452 (2015).
  12. Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96 (2), 719-726 (2000).
  13. Falahee, P. C., et al. α-Toxin Regulates Local Granulocyte Expansion from Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Staphylococcus aureus-Infected Wounds. Journal of immunology. 199 (5), Baltimore, Md. 1772-1782 (2017).
  14. Kim, M. -H., et al. Dynamics of Neutrophil Infiltration during Cutaneous Wound Healing and Infection Using Fluorescence Imaging. Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1812-1820 (2008).
  15. Liese, J., Rooijakkers, S. H. M., Strijp, J. A. G., Novick, R. P., Dustin, M. L. Intravital two-photon microscopy of host-pathogen interactions in a mouse model of Staphylococcus aureus skin abscess formation. Cellular Microbiology. 15 (6), 891-909 (2013).
  16. Bogoslowski, A., Butcher, E. C., Kubes, P. Neutrophils recruited through high endothelial venules of the lymph nodes via PNAd intercept disseminating Staphylococcus aureus. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (10), 2449-2454 (2018).
  17. Takeuchi, O., Hoshino, K., Akira, S. Cutting Edge: TLR2-Deficient and MyD88-Deficient Mice Are Highly Susceptible to Staphylococcus aureus Infection. The Journal of Immunology. 165 (10), 5392-5396 (2000).
  18. Miller, L. S., et al. MyD88 Mediates Neutrophil Recruitment Initiated by IL-1R but Not TLR2 Activation in Immunity against Staphylococcus aureus. Immunity. 24 (1), 79-91 (2006).
  19. Macedo, L., et al. Wound healing is impaired in MyD88-deficient mice: a role for MyD88 in the regulation of wound healing by adenosine A2A receptors. The American Journal of Pathology. 171 (6), 1774-1788 (2007).
  20. Cho, J. S., et al. Neutrophil-derived IL-1β Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice. PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047(2012).
  21. Granick, J. L., et al. Staphylococcus aureus recognition by hematopoietic stem and progenitor cells via TLR2/MyD88/PGE2 stimulates granulopoiesis in wounds. Blood. 122 (10), 1770-1778 (2013).
  22. Kim, M. H., et al. Neutrophil survival and c-kit+-progenitor proliferation in Staphylococcus aureus-infected skin wounds promote resolution. Blood. 117 (12), 3343-3352 (2011).
  23. Foster, T. J. Immune evasion by staphylococci. Nature Reviews Microbiology. 3 (12), 948-958 (2005).
  24. Gordon, R. J., Lowy, F. D. Pathogenesis of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Infection. Clinical Infectious Diseases. 46 (Supplement_5), S350-S359 (2008).
  25. Cho, J. S., et al. Neutrophil-derived IL-1β Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice. PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047-e1003020 (2012).
  26. Bernthal, N. M., et al. A mouse model of post-arthroplasty Staphylococcus aureus joint infection to evaluate in vivo the efficacy of antimicrobial implant coatings. PLoS ONE. 5 (9), e12580(2010).
  27. Plaut, R. D., Mocca, C. P., Prabhakara, R., Merkel, T. J., Stibitz, S. Stably Luminescent Staphylococcus aureus Clinical Strains for Use in Bioluminescent Imaging. PLoS ONE. 8 (3), e59232(2013).
  28. Dillen, C. A., et al. Clonally expanded γδ T cells protect against Staphylococcus aureus skin reinfection. The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 1026-1042 (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

LysM EGFPMyD88

מאמרים קשורים