מאמר זה מתאר את ומגעים falcarindiol ב מצופים השומנים חלקיקים nm 74. ספיגת הסלולר של חלקיקים באמצעות תאי גזע אנושי לתוך טיפות השומנים מנוטרת על ידי הדמיה פלורסנט, קונפוקלי. חלקיקים מיוצרים בשיטת הזרקת מהירה של הממס הסטה, הגודל שלהם נמדד עם טכניקה פיזור אור דינאמי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ספיגת של חלקיקים חדשים מצופים השומנים, המכיל Falcarindiol על ידי גזע אנושי Mesenchymal
במאמר זה
סיכום
תקציר
חלקיקים הם מוקד עניין מוגבר מערכות לטיפול בסרטן. חלקיקים מצופים השומנים הינם בהשראת מבנה וגודל ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (LDLs) כי התאים הסרטניים יש צורך מוגבר כולסטרול להתרבות, זו נוצלה כמנגנון להעברת תרופות לסרטן תאים. יתר על כן, בהתאם סמים כימיה, לבצע את התרופה יכול להיות יתרון כדי למנוע השפלה של התרופה במהלך מחזור ויוו. לפיכך, במחקר זה, עיצוב זה משמש כדי לפברק השומנים מצופים חלקיקי של falcarindiol תרופה נגד סרטן, מתן מערך פוטנציאל משלוח חדש של falcarindiol כדי לייצב את המבנה הכימי שלו נגד השפלה ולשפר שלה ספיגת על ידי גידולים. Falcarindiol חלקיקים, עם טפט פוספוליפיד וכולסטרול לבצע הליבה סמים מטוהרים של החלקיק, עוצבו. ציפוי טפט השומנים מורכב 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC) כולסטרול (חול), 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (2000 פג DSPE) יחד עם פלורסנט תווית DiI (שן טוחנת יחסי של 43:50:5:2). חלקיקים מיוצרים בשיטת הזרקת מהירה, אשר היא טכניקה פשוטה ומהירה, כדי לזרז חלקיקים על ידי ממיס טוב לחילופי הממס אנטי. זה מורכב של זריקה מהירה של פתרון אתנול המכיל את הרכיבים nanoparticle לתוך שלב מימית. גודל חלקיקים פלורסנט נמדד באמצעות פיזור אור דינאמי (DLS) 74.1 ± 6.7 ננומטר. ספיגת של חלקיקים נבחנה האנושי בתאי גזע mesenchymal (hMSCs), עם תמונה באמצעות קרינה פלואורסצנטית ומיקרוסקופיה קונפוקלית. ספיגת של חלקיקים נצפית ב- hMSCs, מציעה את פוטנציאל סמים יציב משלוח מערכת כזו עבור falcarindiol.
מבוא
חלקיקים מצופים השומנים רואים שהאיחוד לגבי תפקידם כמו מערכות עבור סרטן טיפול1. סרטן התיכנות השומנים-מטבולי2 שונה ויש צורך מוגבר כולסטרול להתרבות3. הם overexpress LDLs1 , לקחת LDLs יותר מאשר תאים נורמליים, כך ספירת LDL של חולה סרטן יכולים ליפול אפילו4. ספיגת LDL מקדם פנוטיפים אגרסיבי5 והתוצאה היא התפשטות ופלישה סרטן השד6. שפע של רצפטורים LDL (LDLRs) הוא מחוון prognostic של פוטנציאל גרורתי7. בהשראת LDL ואת ספיגת שלה על ידי התאים הסרטניים, אסטרטגיה חדשה כבר נקרא: להפוך את הסם נרא....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. Nanoparticle סינתזה על ידי ממיס מהיר הסטה טכניקה
- להגדיר את הפריטים הבאים עבור ההכנה של חלקיקים: בלוק חימום/דוגמת רכז, desiccator, מערכת שחולק דיגיטלי עם מזרק זכוכית 1 מ"ל, בקבוקון זכוכית 12 מ ל, פגים, פרעוש מגנטי (15 מ"מ x 4.5 מ מ, בצורת גליל עם ציפוי טפלון [PTFE]) בתוך המבחנה זכוכית, ואת המאייד על כל ההזמנות.
- לוותר על 2.4 mL 250 מניות falcarindiol של מיקרומטר, מומס 70% EtOH תערובת המים בבקבוקון נצנוץ.
- להתנדף השבר נוזלי, באמצעות דגימת במסוע במשך כ 4 שעות, כדי להשיג falcarindiol יבש.
- הכנס את המבחנה נצנוץ החימום בלוק; במסוע מדגם מספק גז על המדגם באמצעות מחטים פלדת אל-חלד, ריכוז המדגם. להתאדות בטמפרטורת החדר; אל תשתמש חום. <....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
שני סוגים שונים של חלקיקים היו חלקיקים מפוברק, כלומר טהור falcarindiol falcarindiol מצופים השומנים חלקיקים. ריכוזים שונים של שומנים וכולסטרול נבדקו. כפי שמוצג בטבלה 1, ללא ציפוי חלקיקי שנוצר במים ונמדד ב PBS היה בקוטר של 71 nm ± 20.3 עם מדד polydispersity (PDI) 0.571. פרמטרים אלה נמדדו על מנתח DLS. חלקיקים מצופים השומנים של falcarindiol משמשת את הניסויים, והיא כל כך כולל את הפלורסנט, DiI, היו בגודל דומה, כלומר 74.1 ננומטר ± 6.7; עם זאת, הם כנראה יחסית monodispersed והיה P.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול מפורט עבור בדיית מצופים השומנים חלקיקים למשלוח סמים עם התם, זריקה מהירה מהר, הדירים מדרגי שיטה של הסטה הממס היה בעקבות27,28 , כפי שהוצגו במאמר זה, להחיל על falcarindiol. על ידי שליטה המהירות של ההזרקה של השלב אורגני לשלב מימית, באמצעות ציפוי ליפידים בריכוזים המתאימים כדי מעיל המרכזי falcarindiol, חלקיק בטווח תת-100 ננומטר יכולה להיות מושגת בהצלחה. האפשרות של polydispersity המושרה בשל מעורבותם של ערבוב הסוערים של משקעים falcarindiol לבד היה נשלט על ידי הנ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
המחברים תודה ד ר קאסם Moustapha (בית החולים של אוניברסיטת אודנסה, דנמרק) גזע mesenchymal האנושית. המחברים תודה המרכז Bioimaging הרפואי דנית לגישה מיקרוסקופים שלהם. המחברים תודה את היסודות קרלסברג ובירה Villum התמיכה הכספית (E.A.C.). המחברים להכיר את התמיכה הכספית שסופקו על-ידי בפרס נילס בוהר פרופסורה של קרן המחקר הלאומית הדנית.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| בקבוקון צוואר בורג 12 מ"ל (זכוכית שקופה, חוט 15-425, 66 X 18.5 מ"מ) | Microlab Aarhus A/S | ML 33154LP | |
| 6 צלחות באר | Greiner Bio One International GmbH | 657160 | |
| אתנול אבסולוט | EMD Millipore (VWR) | EM8.18760.1000 | |
| כלורופורם | ראת'בורן כימיקלים בע"מ | RH1009 | |
| כולסטרול | Avanti Polar Lipids, Inc. | 700000P | |
| מיקרוסקופ קונפוקלי | Zeiss LSM510 | ||
| עובי החלקות כיסוי #1.5 | Paul Marienfeld GmbH & Co | 117650 | |
| מייבש | בנייה | ||
| DiI | Invitrogen | D282 | |
| DLS | בקמן קולטר | DelsaMAXpro 3167-DMP | |
| DSPC (מלאי כלורופורם) | Avanti Polar Lipids, Inc. | ברקוד 850365C | |
| DSPE PEG 2000 (מלאי כלורופורם) | Avanti Polar Lipids, Inc. | 880120C | |
| eVol XR | SGE מדע אנליטי, Trajan Scientific Australia Pty Ltd. | 2910200 | |
| סרום בקר עוברי | Gibco | 10270-106 | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי | Olymous IX81 | TIRF ידנית ו-Andor iXon EMCCD | |
| Panasonic | MCO-18AC | ||
| פרעוש מגנטי | VWR כימיקלים | 15 x 4.5 מ"מ | צורה גלילית עם ציפוי PTFE |
| מערבל מגנטי | IKA | RT-10 | |
| מינימום מדיה חיונית | Gibco | 32561-029 | |
| טבליות PBS לתרבית תאים | VWR כימיקלים | 97062-732 | |
| עט/סטרפטוקוקוס | VWR כימיקלים | 97063-708 | |
| מלח מאגר פוספט (PBS, pH 7.4) | Thermo Fisher | 10010031 | |
| מאייד סיבובי | Rotavapor, Bü chi Labortechnik AG | R-210 | |
| רכז לדוגמא | סטיוארט, חברת קול-פארמר אינסטרומנט, LLC | SBHCONC/1 |
מקורות
- Firestone, R. A. Low-Density Lipoprotein as a Vehicle for Targeting Antitumor Compounds to Cancer Cells. Bioconjugate Chemistry. 5 (2), 105-113 (1994).
- Beloribi-Djefaflia, S., Vasseur, S., Guillaumond, F. Lipid metabolic reprogramming in cancer cells. Oncogenesis.....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
