עצם תלת-ממדי מטריצה חוץ-תאית מודל אוסטאוסרקומה

Summary

המודל מטריצה חוץ-תאית (טוב) עצם אוסטאוסרקומה (OS) הוא מבוסס היטב שמוצג כאן. זה יכול לשמש בדומה לפיגום מתאימים מחקה הגידול העיקרי לצמיחה במבחנה , מתן מודל אידיאלי ללמוד את הטרוגניות היסטולוגית ו cytogenic של מערכת ההפעלה.

Abstract

אוסטאוסרקומה (OS) היא הנפוצה ביותר של סרטן העצמות העיקרי אגרסיבי ביותר. הוא מאופיין עם שינויים אנטומיים היסטולוגיים יחד עם האבחון או prognostic בקשיים. מערכת ההפעלה כוללת תאים סרטניים genotypically ו phenotypically הטרוגנית. עצם microenvironment רכיבים הם הוכיחו לחשבון עבור התקדמות הגידול הטרוגניות ומחלות. מטריצה חוץ-תאית עצם (טוב) שומר על מטריצות microstructural ומרכיבים ביוכימיים של יליד מטריצה חוץ-תאית. הגומחה רקמות ספציפיות מספק לפיגום חיובית ולטווח תא OS זריעה והתפשטות. מאמר זה מספק פרוטוקול עבור הכנת מודל טוב והן ביישום נסיוני נוסף. מערכת ההפעלה התאים יכולים לגדול, להבדיל לתוך עקבית עם המורכבות histopathological של דגימות קליניות OS מרובים פנוטיפים. המודל מאפשר גם ויזואליזציה של מורפולוגיות מגוונות והקשר שלהן עם שינויים גנטיים, מנגנוני הרגולציה המשמש כבסיס. כמו הומולוגי ל OS אנושי, מודל טוב-OS זה יכול להתפתח והחיל פתולוגיה, מחקר קליני של מערכת ההפעלה.

Introduction

אוסטאוסרקומה (OS) מתרחשת בדרך כלל באופן פעיל גדל באזורים, metaphysis של עצמות ארוכות, במהלך גיל ההתבגרות. יותר מ- 80% מהאתרים מושפעות OS יש העדפה metaphysis של שוקה הפרוקסימלית ואת הזרוע proximal, כמו גם עצם הירך דיסטלי והן צינתור, המתאים למיקום של לוחית הצמיחה¹. מערכת ההפעלה כוללת תת תא מרובים עם מאפיינים mesenchymal והמגוון ניכר ב כיתה ותכונות היסטולוגית. עדויות תומכות גזע mesenchymal (MSCs), מבשרי מחויבת תאי העצם, pericytes של התאים של מקור^2,3,4,5. תאים אלה ניתן לצבור שינויים גנטיים או epigenetic, להצמיח OS תחת השפ....

Protocol

טיפול בבעלי חיים ושימוש מתנהלים על פי מוסדות לאומיים של בריאות המדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה (NIH הפרסום NO.80-23, תוקן בשנת 1996) לאחר אישור מהאוניברסיטה חיה אתיקה הוועדה של סאן יאט-סן.

1. עצם ההכנה

1. להשיג 4 כדי 6 בת עכברים BALB/c (ללא דרישה ספציפית סקס). המתת חסד של עכבר גילוח ורחיצה כירורגית מאת נקע בצוואר הרחם, לחתוך את שוקית טריים, שוקה, עצם הירך של hindlimb בעזרת מספריים כירורגיים סטרילי. לקלף את רקמת האפיתל, ואז להסיר כמה של הרקמות הרכות ככל האפשר באמצעות פינצטה ומספריים.
2. יש לשטוף את עצמות הרגל בתמיסת פוספט buffered סטרילי 10 מ מ (PBS) פעמיים כדי להסיר דם בקערה 6 ס מ. לטבול את העצמות 75% אתנול למשך 3 דקות....

Results

לאחר העלמות המינרלים, decellularization, טוב נראה שקוף עם חוסן ויותר אחיזה לעומת עצם העכבר מקורית. משקע שריר קטן ואת הרווח של חלל מדולרי ניתן בבירור לראות (איור 1א', ב'). כדי לקבוע את decellularization יעיל של טוב, טוב נעוץ פרפין לאחר קיבוע, ואז חתוכים למקטעים μm 3-5 עבור hematoxylin-אאוזין (H & E) מכתים. הסרת יסודית של גרעין התא מוצג על ידי שדה בהיר הדמיה. טבעי נקבובי המבנה של קולגן רשת הסידור מתוחזקות היטב, טוב decellularized (איור 1

Discussion

באופן כללי, OS ניתן לסווג כמו osteoblastic, chondroblastic, fibroblastic תת בהתאם רכיב היסטולוגית הדומיננטי שלו. הפרוגנוזה שלה תלויה לא רק פרמטרים היסטולוגית אלא גם באתר שלה אנטומיים. זה עלול להתרחש בתוך העצמות (בתיבה אורתופדיים או תא intracortical), על המשטחים של עצמות, ובעוד אתרים extraosseous¹⁹. הופעתה והטרוגניות של מערכת ההפעלה יכולה להיות הובהר כמו ההטיה של אירועים oncogenic דחיפה microenvironmental נאותה, ואחריו הגוברת פיתוח והעברה ל איברים רחוקים^20,

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
צינור צנטריפוגה 15 מ"ל	גריינר	188271
צינור צנטריפוגה 50 מ"ל	גריינר	227270
צלחת תרבית תאים 6 ס"מ	גריינר	628160
צלחת 6 בארות	גריינר	657160
אמפיצילין	סיגמא-אולדריץ'	A9393
C57-BL/6J עכבר	המעבדה האוניברסיטאית סאן יאט-סן חממת מרכז בעלי חיים
CO2 SHEL	LAB	SCO5A
נתרן פוספט דו-בסיסי	מפעל ריאגנט כימי גואנגג'ואו	BE14-GR-500G
DMEM/F12	סיגמא-אולדריץ'	D0547
סרום בקר עוברי	Hyclone	SH30084.03
המוציטומטר	BLAU	717805
Kanamycin	Sigma-Aldrich	PHR1487
MG-63	האקדמיה הסינית למדעים, בנק התאים של שנחאי	קו תאי אוסטאוסרקומה אנושית
			תמיסה של פנול אדום משמשת כאינדיקטור pH: צבעו מציג מעבר הדרגתי מצהוב לאדום בטווח ה-pH 6.6 עד 8.0.
אשלגן כלורי	סנגון ביוטק	A100395
אשלגן פוספט מונוביסיק	סנגון ביוטק	A501211
נתרן כלורי	סנגון ביוטק	A501218