המתואר כאן הוא השימוש בכמה כלים תוצרת בית כדי להעביר, לצנן, ולהרוג מבוגרים Drosophila ילה, כמו גם לנקות את התרבות זכוכית מבחנות ולאסוף ביצים. כלים אלה קלים לעשות והם יעילים למדי בטיפול Drosophila ילה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
כלים ביתיים פשוטים לטיפול בזבובי פירות-דרוסופילה מלאנוסטר
במאמר זה
סיכום
תקציר
הזבוב הפרי, דרוזופילה מלאנוסטר, משמש רבות גם בחינוך ביולוגי ובביולוגיה. טיפול בזבובים מבוגרים נפוץ אך קשה בפועל, כאשר זבובים מבוגרים עפים. הפגינו כאן היא איך לעשות כמה כלים פשוטים וחסכוניים כדי לטפל בבעיות קשות בטיפול Drosophila ילה. חורים בפקקים מוקצף נעשים ומfunnels ומוכנסים לתוך החורים. לאחר מכן, הזבובים זזים רק בכיוון אחד לתוך מכלול הפיפטה/משפך של הצינורות , ומאפשר שליטה יעילה על העברת הבוגרים לתוך או מתוך בקבוקון. הפרוטוקולים הקיימים שונו לזבובים מצננים על ידי התקררות בקרח כתוש והעברתם אל משטח קר, קשה מסכה. מסכה מכוסה פיסת גזה רפואי שמחזיק ללא קיבוע זבובים מהמים המרוכז כאשר נבדק תחת stereomicroscope. הזבובים מורדמים בסופו של דבר לספירה ולמיון או למחיקה על ידי המיקרוגל. הכלוב בצורת בקבוק פותחה גם עבור איסוף ביצים, כמו גם מכשיר לחסכון בעבודה וליווי פרוטוקול לניקוי בקבוקים של תרבות זכוכית.
מבוא
זבוב הפירות, דרוסופילה מלאנוסטר, הוא אורגניזם מודל המשמש רבות בחינוך ביולוגי ובביולוגיה לחקר מגוון רחב של נושאים1,2. הבעיות הבסיסיות בטיפול בדרוסופילה הן העברת מבוגרים ממבחנה לבקבוקון ולשתק את הזבובים כך שיהיה קל יותר לטפל בהם, כמו כל המבוגרים (למעט מוטציות מסוימות3,4) יכולים לעוף.
מקובל, חוקר מעביר זבובים ממבחנה אחת לאחרת על ידי החזקת שני מבחנות פה-לפה, הקשה על זבובים למטה או לאפשר זבובים לטוס לתוך בקבוקון אחר, ולאחר מכן הפרדת וחיבור מחדש שני מבחנות4. כמובן, הדבר דורש שפתיחת שני מבח....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת כלים ועזרים
- פקקים/משפך
- השג שני אטמי ספוג (קוטר התקעים חייב להיות מעט גדול יותר מהקוטר הפנימי של הבקבוקונים המשמשים להעברת זבובים). בצע חור במרכזי של אטמי ספוג עם ברזל מחומם להלחמה חשמלית.
- השיגו שני טיפים של הפיפטה, חותכים אחד לחצי בצורה מחוסרת עם סכין חדה, וזורקים את הקצה המחודד. ואז, לחתוך 1.5 ס מ של הקצה המחודד מהקצה השני של הצינורות. הדבק את השרידים של שני הפיפטה ביחד עם דבק לכל מטרה כדי ליצור קצה מוארך של פיפטה (איור 1A).
- הכנס משפך ואת הקצה הצינור מוארך לתוך אטמי ספוג כדי ליצור טיפ משפך פקק (להלן המכונה T-ו-F הפקקים) וכיפה את העצה הפיפטה עם צינור מיקרוצנטריפוגה 100 μL ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
T-ו-F הפקקים פותחו כקבוצה של כלים פשוטים שניתן להתאים ולהשתמש בכל לטוס העברת פעילויות. העברת זבובים מתרבות ישנה למספר תרבויות טריות כרוכה בהסרת אטמי הבקבוקונים הטריים, החלפתו בפקקים, ולאחר מכן הקשה על הזבובים בבקבוקון הישן, הסרת התקע במהירות והחלפתו בפקק T. אם האוכל הישן הוא קומפקטי, אז חשוב להפוך את הבקבוקון הישן להכניס את הקצה של הפקק T לתוך הפתיחה של מעצור F, ואז להקיש את הזבובים למטה לתוך בקבוקון טרי. לאחר מכן, החלפת הפקקים T ו-F וחיבור מחדש של הבקבוקונים מבוצעת. אם האוכל הישן הופך לה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מספר כלים תוצרת בית לטיפול בפעילויות בסיסיות הכרוכות בגידול בדרוזוהילה ובניסויים מתוארים במאמר זה. כלים אלה פשוטים אך יעילים למדי. כמעט, כל מעבדה יכולה לעשות את הכלים האלה בקלות, ומחקר או מעבדה להוראה לא צריך למצוא חלופה מוכנה שהיא אולי לא זמינה באופן מקומי.
העברת טיסה היא הפרקטיקה השכיחה ביותר ומשימה קשה בניסויי דרוזוהילה . למרבה הצער, עד היום, לא תוארו כלים העברת3,4,12,<.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. לסופר אין מה לגלות
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| זוג צבת | |||
| מקדחה | מהירות מקסימלית: 500 סל"ד | ||
| ברזל | |||
| קוטר | |||
| משפך | קובץ של הדיסק< 60 מ"מ | ||
| קופסת | |||
| קרח סיכות | |||
| מדחום | HCIYET HT-830 | ||
| גומי שרוול ארוך | |||
| עפרונות מכניים | |||
| גזה | |||
| צינור | 100 ul | ||
| תנור | |||
| Parafilm | |||
| Peri צלחת | קוטר פנימי 60 מ"מ | ||
| קצות | 1 מ"ל | ||
| סרט | |||
| פלסטיק צלחת | פלסטיק ופי; 36 מ"מ משמש לכיסוי הבקבוקון הריק | ||
| פינצטה | |||
| כפפות | |||
| חבילות קרח קשות הניתנות להקפאה חוזרת | 26.5 ופעמים; 14.5 ופעמים; 2.5 ס"מ ומעלה | ||
| מפוח | |||
| חותך | |||
| בקבוק | 500 מ"ל, קוטר פנימי c.a. 65 מ"מ | ||
| פקק | |||
| ספוג ספוגי נירוסטה מברשת | |||
| בקבוקון | & פי; 34 מ"מ ופיתוים; 90 מ"מ |
מקורות
- Jennings, B. H. Drosophila – a versatile model in biology & medicine. Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).
- JoVE Science Education Database. Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , JoVE. Cambridge, MA. (2018).
- Ashburner....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
