ביופסיה של האדם בלסטוציסטה וויטריפיקציה

סיכום

ביופסיה blastocyst ו ויטריפיקציה נדרשים ביעילות לבצע בדיקה גנטית מראש השרשה. גישה הדורשת את הפתיחה הרציפה של הסונה והחזרת התאים ה7-8 של תאי העור ביום 5-7 שלאחר ההפריה מגבילה גם את מספר המניפולציות הנדרשות ואת חשיפת העובר לתנאי הסביבה האופטימליים.

תקציר

ביופסיה blastocyst מבוצעת כדי לקבל אבחנה גנטית אמינה במהלך מחזורי IVF עם השרשה גנטית בדיקות. אז, זרימת העבודה האידיאלית כרוך פרוטוקול ויטריפיקציה בטוח ויעיל, בשל זמן הטיפול של טכניקות אבחון ולהעביר את העובר הנבחר (של) על רירית המין הפיזיולוגי במחזור הטבעי הבא. גישה ביופסיה המקיף את הפתיחה רציפים של הסונה pellucida ושליפה של 5-10 תאי עור trophectoderm באופן אידיאלי 7-8) מגביל הן מספר המניפולציות הנדרשות ואת החשיפה של העובר לתנאים סביבתיים תת אופטימלית. לאחר אימון נאות, הטכניקה היתה להיות מיויית על פני מפעילי שונים במונחים של עיתוי של ביופסיה (~ 8 דקות, החל 3-22 דקות מבוסס על מספר העוברים ביופסיה לכל מנה), אבחנות מכרעת שהתקבלו (~ 97.5%) ושיעורי לידה חיים לאחר העברת-העברה שחומם-אאופואיד-בליילויד (> 40%). שיעור ההישרדות לאחר ביופסיה, ויטריפיקציה והתחממות היה גבוה כמו 99.8%. שיעור ההתרחבות מחדש ב 1.5 h מהתחממות היה גבוה כמו 97%, תלוי בעיקר בעיתוי בין ביופסיה ו ויטריפיקציה (באופן אידיאלי ≤ 30 דקות), בלסטוציסט באיכות וביום של ביופסיה. באופן כללי, עדיף להתקשות לכווץ בלסטוציסטה; לכן, במחזורים שאינם PGT, לייזר בסיוע מלאכותי הצטמקות עשוי להתבצע כדי לגרום לקריסה העובר לפני הקפאת ההזמנה. הפרספקטיבה העתידית המבטיחה ביותר היא ניתוח לא פולשני של התקשורת התרבותית IVF לאחר התרבות בלסטוציסט כמקור פיוטי של דנ א עובריים. עם זאת, האוונגרד הפוטנציאלי הזה עדיין תחת חקירה ופרוטוקול אמין עדיין צריך להיות מוגדר ומאומת.

מבוא

המטרה העיקרית של אמבריולוגיה האנושי המודרני היא למקסם את המספר לידות חי לכל מחזור מגורה ולהפחית עלויות, זמן ומאמצים כדי להשיג הריון. כדי להשיג מטרה זו, גישות מאומתות עבור בחירת העובר צריך להיות מועסק כדי לזהות עוברים מוכשרים מחדש בתוך מפרק שהושג במהלך מחזור IVF. על פי העדויות האחרונות, התרבות בלסטוציסט¹ בשילוב עם בדיקות כרומוזומלית מקיפה-העברת העובר התחמם העברה (ET) היא המסגרת היעילה ביותר כדי להגדיל את יעילות IVF². ברור, בדיקות אנאפלואידיה דורש דגימה עובריים, אשר בשלב זה מיוצג בעיקר מתאים מעטים שאוחזרו מן הטרופטועור (TE), כלומר, את הקטע של הבלסטוציסטה המעניקה מקור לספח העובר (למשל, השליה) במהלך ההריון . מעבר ניתוח קריוט....

פרוטוקול

הפרוטוקול עבור ביופסיה של האדם בלסטוציסטה, כאן תיאר, עוקב אחר ההנחיות של הוועדה האנושית E.R.A. המחקר האנושי.

הערה: עיין בטבלת חומרים לחומרים הנדרשים. חומר נוסף נדרש כרוך הנעלה מעבדה התלבושת, מסכת מסיכה כירורגית, כיסוי שיער, כפפות כירורגי, סמן קבוע לא רעיל, מלקחיים וחיטוי. השימוש בחלוק כירורגי, כפפות ניתוח חד פעמיות, facemask, כיסוי שיער הוא הכרחי כדי למנוע סיכון של זיהום. כל תחומי העבודה, כמו גם את הציוד המעורב בתהליך, יש לנקות ביסודיות עם חיטוי מעבדה (g., Oosafe) לפני הפעלת כל הליך. כל החומרים והמדיה המשמשים צריך להיות סטרילי, ארוז או מצוטט בנפרד. הוא הציע להשתמש בתחנת עבודה ייעודית לביופסיה ואבובים ולהגבי....

תוצאות

איור 6 מייצג ערכה של כל התוצאות של הליך ביופסיה שניתן לאמץ כדי לתקנן את הפרוטוקול ולנטר את הביצועים של כל אופרטור. התוצאה הפרוצדורלית העיקרית היא העיתוי להשלמת ביופסיה/ביופסיות; התוצאה הטכנית העיקרית היא האיכות של העלילה המיוצר לאחר בדיקות גנטיות שעשוי לגרום לאבחנה מכרעת או לא מחד-משמעית, האחרון אשר דורש מחדש ביופסיה של בלאי אובחן; התוצאה הביולוגית העיקרית היא שיעור ההישרדות והתרחבות מחדש לעומת ניוון לאחר ההתחממות; לבסוף, התוצאה הקלינית העיקרית היא שיעור הליד.......

דיון

רק embryologists מיומנים מנוסים שסיימו את תקופת ההכשרה שלהם צריך לבצע הן TE ביופסיה ו בלסטוציסט ויטריפיקציה. יתרה מזאת, על העד לפקח על ההליכים ולהבטיח שעקיבות יעילה במהלך הזמן שאני מבצע את התנועות של ביופסיה מצלחת הביופסיה (איור משלים 1) לצלחת הפוסט-ביופסיה (איור משלים 1) ), ואז לצלחת הויטריפיקציה (איור משלים 1) ולבסוף לתמיכה הויטריפיקציה (איור משלים 1); ii) העברת תאי הביופסיה מצלחת הביופסה לצינור ה-PCR (איור משלים 1); iii) ההתחממות וצעד.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
<חזק>ציוד
מתלה צינור קר	Biocision	XTPCR96
בקר פיפטה אלקטרוני	פישר מדעי	710931
Flexipet סט ידית מתכוונן	טבח	G18674	מחזיק חשפנית
גילסון פיפטמן		גילסון 66003	p20
IVF מערכת עדים אלקטרונית	Cooperפוריות כירורגית & פתרונות גנומיים	RI Witness ART מערכת ניהול
		CSLQSPIN	עבור צינורות PCR 0.2 mLl
סטריאומיקרוסקופ	Leica	Leica M80
תרמוסטט	Panasonic	MCO-5AC-PE
חממת תלת גז	Panasonic	MCO-5M-PE	02/CO2
<חזק>חומרים מתכלים
ביופסיה פיפטה	RI	7-71-30FB35720	30 ומיקרו; m ID, שטוח 35 ו-deg; C
Cryolock	Cryolock	CL-R-CT
CSCM מדיום	IVF מלא Irvine Scientific	90165	בתוספת
צנתר העברת עוברים	HSA טבח	G17934
Flexipet פיפטה		G26712	140µ m הפשטת קצה פיפטה
Flexipet פיפטה	בישול	G46020	300µ m הפשטת קצות פיפטה
החזקת פיפטה	RI	7-71-IH35/20	30 ומיקרו; m ID, שטוח 35 ו-deg; C
סרום אנושי אלבומין	אירווין סיינטיפיק	9988
IVF צלחת באר אחת	פלקון	353653
שמן מינרלי לתרבית עוברים	אירווין סיינטיפיק	9305
שונה HTF בינוני	אירווין סיינטיפיק	90126	Hepes-Buffered
medium Nuclon Delta Surface	Thermofisher Scientific	176740	IVF צלחת 4- צלחת באר עם מכסה הזזה
פרימריה צלחת תרבית תאים	קורנינג	353802	60 מ"מ x15 מ"מ
Reproplate	Kitazato	83016
פיפטה סרולוגית	פלקון	357551	10 מ"ל
טיפים חד פעמיים סטריליים של גילסון	Eppendorf	0030 075.021	200 ומיקרו;
L ערכת צינורות	מסופקת על ידי המעבדה		צינורות PCR (0.2 מ"ל), תמיסת טעינה, תמיסת שטיפת ביופסיה
מדיית ויטריפיקציה	Kitazato	VT801	פתרונות שיווי משקל וזיגוג
אמצעי חימום	Kitazato	VT802	פתרונות הפשרה ודילול

מיקרוסקופ הפוך Nikon Eclipse TE2000-U מכסה מנוע זרימה למינרית IVF TECH דרגה A זרימת אוויר לייזר אובייקטיבי RI שבתאי 5 מיקרו-מזרקים Nikon Narishige NT-88-V3 מיני צנטריפוגה לצינורות PCR Eppendorf תרבית הגנטית