הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד ותרבות של בתאי אבי העורקים הראשוניים מחזירים זעירים

8.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59673

⸱

14 באוגוסט 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nephrology, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, 2Shenzhen Xenotransplantation Medical Engineering Research and Development Center, Shenzhen Second People's Hospital, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen University School of Medicine, 3Department of Medical Laboratory, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, 4Department of Endocrinology, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, 5Xenotransplantation Program, Department of Surgery, University of Alabama at Birmingham, 6People's Hospital of Longhua

במאמר זה

סיכום

שיטת אנזימטית אפקטיבית לבידוד של תאי האבי-העורקים הראשוניים של החזיר (pAECs) מחזירים זעירים מתוארים. PAECs העיקרי מבודד ניתן להשתמש כדי לחקור את התגובה החיסונית קרישה ב xenotransplantation שתלת.

תקציר

Xenotransplantation היא דרך מבטיחה לפתור את המחסור של איברי האדם עבור חולים עם כשל איבר בשלב הסופי, והחזיר נחשב מקור איבר מתאים. דחייה וקרישה החיסונית הם שני מכשולים עיקריים להצלחת השתלת xenotransplantation הפציעה והתפקוד הגופני של כלי הדם (EC) הם חשובים לפיתוח התגובה לדלקות וקרישת דם ב-xenotransplantation שתלת. כך, בידוד של התאים החיוניים של האבי העורקים (pAECs) יש צורך לחקור את הדחייה החיסונית ואת התגובות קרישת דם. כאן פיתחנו גישה אנזימטית פשוטה לבידוד, אפיון והתרחבות של pAECs מטוהרים מאוד מחזירים זעירים. , החזיר הזעיר הרדימים עם קטמין. ואורך של העורקים היה מגורש שנית, משטח האנדותל של העורקים נחשף 0.005% הפתרון העיכול IV הרביעי עבור 15 דקות. השלישי, משטח האנדותל של העורקים היה מגורד בכיוון אחד בלבד עם מגרד תא (< 10 פעמים), ולא נדחס במהלך התהליך של גירוד. בסופו של דבר, pAECs מבודדים של היום 3, ואחרי מעבר 1 ומעבר 2, זוהו על ידי cy, הזרמת לנסות עם נוגדן anti-CD31. האחוזים של תאים CD31-חיוביים היו 97.4% ± 1.2%, 94.4% ± 1.1%, ו 92.4% ± 1.7% (ממוצע ± SD), בהתאמה. הריכוז של קולגן הרביעי, זמן העיכול, את הכיוון, ואת התדר ואת העוצמה של גירוד הם קריטיים להפחתת זיהום בפיברובלסט וקבלת טוהר גבוהה ומספר רב של ECs. לסיכום, השיטה האנזימטית שלנו היא שיטה מeffctive ביותר לבידוד ECs מן העורקים חזיר מיניאטורי, ואת התאים ניתן להרחיב בתוך מבחנה כדי לחקור את התגובות החיסונית קרישה ב xenotransplantation שתלת.

מבוא

המחסור של איברים זמינים עבור השתלת הוא בעיה מצטיינים ברחבי העולם1. על פי החברה הצולבת האדומה של סין, רק מספר קטן של חולים עם כשל איברים בשלב הסיום קיבל איבר מתאים בסין בשנת 2018.

Xenotransplantation היא דרך מבטיחה לפתור את הבעיה של מחסור באיברים. איברי חזיר נחשבים לאיברים המתאימים ביותר עבור בני אדם בגלל דמיון אנטומי ופיזיולוגי2,3. הכישלון של שהשתיל חזיר מבע ברובו לדחיית החיסון הקופים התגובות קרישת דם. תאים של porcine אנדותל (ecs) הם קריטיים מאז תאים אלה הם הראשונים אינטראקציה עם המערכת החיסונית של הפרימטים, הכוללת נוגדן, משלים, ציטוקינים, ותאים חיסוניים (למשל, T תאים, B תאים, מקרופאגים)4,5. המשחק ecs לשחק תפקיד חיוני באורגן חזיר ו השתלת איון xenotransplantation,7. כך, ECs הם תאים חשובים לחקירת דחייה והתגובות קרישת הדם שתל חזיר. בידוד של ECs באיכות גבוהה נדרש עבור מחקר xenotransplantation שתלת.

בניסיונות לבודד ecs מאיברים שונים (למשל, לב, כליות, כבד, העורקים), כמה פרוטוקולים דווחו בהגדרה xenotransplant שתלה8,9,10,11,12. עם זאת, שמירה על תרבות אולטרה-סאונד של ECs מבודדת היא בעיה יוצאת דופן בפרוטוקולים הסטנדרטיים. הריכוז המוגבר של הפתרון המתעכל, זמן העיכול הבלתי מתאים ועוצמת הגרד עשויה לתרום לזיהום פיברובסט מוגבר במחקרים הנוכחיים8,10,13. חוץ מזה, השיטה של pAECs מבודדים מחזירים זעירים הוא פחות לומד. כאן, אנו מתארים שיטה אנזימטית אופטימיזציה כדי לבודד pAECs מטוהרים מאוד מפני חזירים זעירים (וודז'שאן או במה). כמה צעדים בפרוטוקול נועדו להפחית את זיהום הפיברובלסט ולהשיג ECs טוהר גבוהה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

השימוש בבעלי חיים אושר על ידי ועדת ביקורת האתיקה של בית החולים השני של שנזן, בהתאם לעקרונות של רווחה בעלי חיים.

1. הכנת בעלי חיים, בינוניים ומאגרים

  1. . הכן את החזיר הזעיר
    הערה: כל החזירים הזעירים היו הסינים וודז'שאן או חזיר-במה (זכר). הגיל והמשקל של חזירים היו 100 ימים ± 8 ימים ו 5.7 ק"ג ± 1.0 ק"ג (ממוצע ± SD, n = 3), בהתאמה.
  2. הכינו את מדיום התרבות: בינונית תא אנדותל (ECM) בתוספת של 10% (v/v) החום העובר מופעל סרום (FBS), 1% (v/v) פניצילין/סטרפטומיצין (P/S) ו 1% (v/v) מוסף הצמיחה של התא האנדותל (ECM).
  3. הכן את מאגר כביסה: 1x פתרון PBS (pH 7.4) עם 1% (v/v) P/S.
  4. הכינו 0.005% קולגן לפתרון העיכול: 1 מ ג של הקולגן העירוי אבקת IV ב 20 מ ל של פתרון PBS. לחמם את התמיסה לפני העיכול ב 37 ° c לפני העיכול.
  5. הכן את מאגר העצירה: מדיום שונה של Dulbecco של הנשר (DMEM) שיושלם עם 10% חום מופעל FBS ו 1% P/S.

2. כירורגיה וההכנה לבידוד בתאי אבי העורקים של פורצין

  1. חיטוי חדר הניתוח עם אור UV עבור 1 h וחיטוי רפואי 84 נוזל (תוכן כלור זמין הוא 4.0%-5.0%, טבלת חומרים) לפני ביצוע ניתוח.
  2. לאחר שחזיר זעיר קיבל הזרקה התוך שרירי נוצר על ידי 15 מ"ג/ק"ג, 15 מ"ג/ק"ג Xylazine הידרוכללוריד ו 0.05 mg/ק"ג פנימטין הידרוכלוריד (כרכים: 100μL/ק"ג, לוח חומרים) (איור 1a), לאשר את החיה מצב הרדמה עם בדיקת חזירי גירוי כואב (למשל. צובט אחד האוזן או טלטול אחד forelimb) ואת המדד הפיזיולוגי (למשל. לחץ דם, הלב וקצב הנשימה).
    הערה: עוד הזרקת מינון חצי יכול להינתן חזיר אם הוא מראה את הסימנים של התעוררות.
  3. חותכים את הבטן עם אזמל, לחשוף את האובורד הנחותים וכתוצאה מכך להזריק הפארין נתרן (5,000 U, לוח החומרים) לתוך לבנה התחתית הנחותה עם מזרק 5 mL.
  4. חמש דקות מאוחר יותר, להכניס צנתר אל העורקים הבטן לדם, לחתוך את העור של החזה ולשלב את הסרעפת עם אזמל ולאחר מכן לחתוך את החדר השמאלי מחוץ.
    הערה: ודא שחזיר מורמת על-ידי בדיקת דופק אבי העורקים לאחר שהוא מוכתם בדם וחותך את הלב.
  5. בלו את הצלעות עם מלקחיים עצם (שולחן חומרים), וחשפו את הלב והריאות. למצוא את העורקים האחוריים ללב. ולריאות ולהדק את שני הקצוות רחץ את אב העורקים פעם אחת עם מכונת כביסה מקורר מראש (איור 1ב, ג).
  6. לחתוך את העורקים עם מספריים ולהשאיר. את העורקים מהודק בכל קצה . עם מלקחיים ומספריים סטריליים לשים את אבי העורקים לתוך שפופרת צנטריפוגה 50 mL, לשטוף את אבי העורקים עם מקורר מאגר כביסה 3x (30 מ"ל לשטוף), ולהעביר את אבי העורקים למעבדה (איור 1D).

3. בידוד תאים בעלי אבי העורקים האנתל

  1. בתנאים אספלי, להסיר את העורקים חזיר מתוך מאגר כביסה, ולמקם אותו על 150 מ"מ צלחת פטרי (איור 2A).
  2. לחתוך בעדינות את שני הקצוות של אב העורקים ואת הרקמה עודף בבלו סביב אב העורקים עם מלקחיים ומספריים סטרילי שוב (איור 2B). רוחצים את החוץ והפנימי של העורקים (מעל קערת התרבות בטמפרטורת החדר) עם 20 ל-50 מ ל של מאגר כביסה.
    הערה: נסו לחתוך רק את השטח שבו התפסים הוצבו במהלך הניתוח מאז שחלק מהecs ניזוקו באזור זה, ומסירים עודפי רקמות וענפים צדדיים.
  3. להעביר תפר כירורגי דרך העורקים ולאחר מכן לקשור קצה אחד של העורקים באמצעות תפר כירורגי (5-0, 90 ס מ, לוח חומרים). שמור את תפר כירורגי בתוך החלק הפנימי של העורקים (איור 2C,D).
  4. בעדינות לתקן את העורקים ליד הקצה קשור עם מלקחיים, ולאחר מכן למשוך את התפר הכירורגי לאט כדי להפוך את העורקים עד משטח האנדותל של העורקים נחשף (איור 2E-G).
    הערה: הקפידו לתקן את העורקים בקרבת הקצה הקשור ולא לתקן את העורקים בחוזקה, אחרת לא ניתן להפוך את העורקים על ידי משיכת תפר הניתוח.
  5. שטוף את משטח האנדותל של אבי העורקים עם מאגר כביסה 3x (10 מ"ל לכביסה), ולאחר מכן למחוק את הפתרון. מניחים את העורקים לתוך 15 מ ל צנטריפוגה שפופרת, ולכסות את העורקים עם 10 מ ל של 0.005% קולגן הרביעי פתרון העיכול בצינור (איור 2H).
    הערה: לחמם מראש את 0.005% קולגן הפתרון העיכול IV ב 37 ° c לפני העיכול.
  6. מודרת ב 37 ° c עבור 15 דקות. מניחים את העורקים מתעכל ואת הפתרון העיכול לתוך מאכל התרבות 100 מ"מ ולהפסיק את ההשפעות של 0.005% הקולגן הרביעי על ידי הוספת 10 ל 15 מ ל של המנוע מקורר לעצור מאגר.
    הערה: זמן העיכול המומלץ הוא בין 10 ל -20 דקות. תוודא שמשטח האנדותל של. העורקים מכוסה ע י מאגר העצירה
  7. בעדינות לגרד pAECs מהמשטח הפנימי של העורקים באמצעות מגרד תא (איור 2I). שטוף את אבי העורקים 3x עם מאגר כביסה (5 מ ל לשעה). לשים את הפתרון מן הצלחת התרבות לתוך שפופרת צנטריפוגה 50 mL. לשטוף את החלק התחתון של תבשיל התרבות 2x עם מאגר כביסה (5 מ ל לשעה), ולשים את הפתרון לתוך שפופרת צנטריפוגה 50 mL שוב.
    הערה: שפשוף בכיוון אחד בעדינות ולא לדחוס. אין לגעת ברקמה ליד הקצוות והחורים. מומלץ לגרד 5-8x.
  8. צנטריפוגה את הצינור ב 600 x g עבור 6 דקות ב 4 ° c. להיפטר supernatant ולהשאיר 10 מ ל של הפתרון בחלק התחתון של שפופרת צנטריפוגה 50 mL. הוסף 20 מ ל של מאגר כביסה לצינור הצנטריפוגה 50 mL, והשהה מחדש את כדורי. להימנע בועות במהלך שלב זה.
  9. צנטריפוגה ב 600 x g עבור 6 דקות ב 4 ° c. . להשליך לאט את הסופרנטאנט השהה מחדש את כדורי התא עם 1 מ ל של תרבות בינונית וערבבו היטב.
    הערה: המספר הממוצע המתקבל של ECs לכל ס מ העורקים הוא 1.9 x 105 ± 1.4 x 104 (ממוצע ± SD, n = 3).
  10. ספור את התאים באמצעות מונה תאים. לוחית ותרבות התאים בכלי מבלי לציפוי כל חומר לפי מספר הטלפון. אם מספר התאים קטן או שווה ל-1.0 x 106, התאים התרבותייםבבקבוקון של 25 ס מ. אם מספר התא גדול יותר מ 1.0 x 106, התרבות תאים במספר 25 ס"מ2 מבחנות (1.0 x 106 תאים לכל בקבוקון). הניחו את הבקבוקון באינקובטור (ללא טלטול) ב-37 ° c עם 5% CO2 והחליפו את המדיום מדי 2-3 ימים.
    הערה: תאים מסוימים פגומים על-ידי מגרד התא. שיטת הכדאיות של התא מצאה את אחוז התאים החיים להיות 95.7% ± 1.7% (ממוצע ± SD, n = 3). זמן ההכפלה של התאים המבודדים הוא כ-1 ימים.

4. הקציר ואפיון תאי האנדותל הטהורים

  1. השאירו את התאים גדלים במשך כ-4-5 ימים. כאשר התאים מגיעים 80% המפגש (איור 3A), לעכל את התאים עם 0.25% טריפסין ומעבר את התאים. לאחר מכן, לאסוף כמה תאים מבודדים (יום 3, מעבר 1 ומעבר 2) ולזהות על ידי cy, הזרימה האנטי (עם נוגדן anti-CD31).
  2. תווית מבודדת pAECs (מספר תא: 1 x 105) (יום 3, מעבר 1 ומעבר 2) עם anti-PORCINE CD31-fluorescocyanyate (fitc) מצוקת הנוגדן (10 μl הנוגדן עבור תאים 100 μl, ויטראז עבור 30 דקות ב -4 ° c) עבור הניתוח cy try.
  3. שער כולל של אוכלוסיית תאים בשידור חי עם מגרש מפוזר לפנים, דגימה ללא המוכתמת כפקד שלילי. ואז להציג את התאים CD31 חיוביים של התאים מגודרת עם היסטוגרמה.
    הערה: היעילות של תאים CD31-חיוביים היא 97.4% ± 1.2% (יום 3), 94.4% ± 1.1% (P1) ו-92.4% ± 1.7% (P2) (ממוצע ± SD), בהתאמה (איור 3B).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השיטה שלנו שואפת לספק דרך יעילה לבידוד ECs מטוהרים מאוד מaortas של חזירים זעירים. תהליך ניתוח העורקים מוצג באיור 1. הצעד הראשון הוא שכל. כללי העורקים מרוטרים מהחזיר מניעת מזהמים אחרים של תאים או בקטריאליים מאוד חשובים. כך, לא לפגוע באיברים אחרים או רקמות במקרה תאים לא ממוקדים או חיידקים לזהם את אבי העורקים, ולשטוף את אב העורקים עם מקורר מקרר מאגר כביסה 3x (איור 1ב-D). צעד קריטי נוסף לשמירת הכדאיות בתאים הוא למזער את תקופת הזמן בין קבלת הדגימה הכ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

תאי האנדותל משמשים בדרך כלל במחקר של תפקוד כלי דם, סוכרת, התחדשות רקמות, השתלת, סרטן14,15,16,17,18. כדי להבין ולאפיין את הביולוגיה ואת התפקוד של ecs במחלות אלה, שיטות רבות כדי לבודד ecs של איברים חולים שונים או רקמות דווחו8,19,20, מיכל בן ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

העבודה נתמכת על ידי מענקים מקרן המדע הטבעי של מחוז גואנג-דונג, גרנט/מספר הפרס: 2016A030313028; הקרן המדעית למחקר רפואי של פרובינציית גואנג-דונג, גרנט/מספר הפרס: B2018003; קרן שנזן למדע וטכנולוגיה, מספר גרנט/פרס: JCYJ20180306172449376, JCYJ20180306172459580, JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425103000011 וJCYJ20160428142040945; הקרן למדע וטכנולוגיה של שנג לונחואה, הענקת מספר פרס: 2017013; מפתח לאומי R & D תוכנית של סין, גרנט/מספר הפרס: 2017YFC1103704; פרויקט sanming של הרפואה שנזן, גרנט/מספר הפרס: SZSM201412020; קרנות מיוחדות להקמת בתי חולים ברמה גבוהה בפרובינצית גואנג-דונג (2019); קרן ברמה גבוהה משמעת רפואית בנייה של שנג, גרנט/מספר הפרס: 2016031638; קרן שנזן בריאות ותכנון משפחה הנציבות, גרנט/מספר הפרס: SZXJ2017021 ו SZXJ2018059. אנו מודים לחננג ג'אנג ולדז'נג זיאו מאוניברסיטת שנזן לסיוע בהכנת כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
BD FACSAria IIBD Bioscience
Boneforcepsבייג'ינג HeLi KeChuang טכנולוגיה פיתוח ושות', בע"מ סיןHL-YGQ   
מזרק חד פעמי BOON (10 מ"ל)ג'יאנגסו Yile מאמר רפואי ושות', בע"מ סין
CD31-FITC נוגדןBio-RadMCA1746F
מגרד תאיםקורנינג 3010#
קולגנאז IVסיגמא-אולדריץ'C5138#-1G
תרכובת הזרקת קטמין מפעל התרופות הווטרינרי של שניאנג, סיןקטמין הידרוכלוריד?0.3 גרם/2 מ"ל, קסילזין הידרוכלוריד: 0.3 גרם/2 מ"ל, פנאצטין הידרוכלוריד?1 מ"ג/2 מ"ל
DAPI (4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד)Life TechnologiesD1306#
DMEMLife Technologies11965118#
ECMSciencell1001#
ECGSSciencell1052#
Eppendorf Snap-Cap Microtube (1.5 מ"ל) AXYGENMCT-150-C#
Falcon 100 מ"מ צלחת תרבית תאים353003#
סרום בקר עובריGIBCO10270-106#
Flowjo v10.0
מלקחיים ShangHai מכשירים רפואיים ושות', בע"מ סין
Heparin נתרןג'יאנגסו WanBang ביופרמצבטיקה ושות', בע"מ סין
תמיסת יודגווילין LiFeng ציוד רפואי ושות', בע"מ סין
חזיר מיניאטורי (במה או ווז'ישאן)קאנג יי חקלאות אקולוגית ושות', בע"מ, סין
Mshot מיקרוסקופ גואנגג'ואו מיקרו-שוט טכנולוגיה ושות', בע"מM152
(150 x 15 מ"מ)Biologixgroup66-1515#
Penicillin/StreptomycinLife Technologies15070063#
בקבוק תרבית תאי צוואר מלבני עם מכסה אוורור? T25?קורנינג 3289 #
מספרייםShangHai מכשירים רפואיים ושות', בע"מ סין
פיפטות העברה סרולוגיות (10 מ"ל)JET BiofilGSP010010# 
פיפטה פסטר סטריליתGeneBrickGY0025#
מסנן מזרק סטרילי (0.22µ מ)MilliporeSLGV033RS#
אזמל כירורגיShangHai מכשירים רפואיים ושות', בע"מ סין22 #
תפר כירורגישנחאי Pudong Jinhuan ציוד רפואי ושות', בע"מ5-0 #
מזרק?5 מ"ל?Shengguang Medical Instrument Co., Ltd.סין
Trypsin-EDTA (0.25%), פנול אדוםGIBCO25200056#
75% אלכוהול רפואיGuilin LiFeng ציוד רפואי ושות', בע"מ סין
20 x תמיסת PBS (pH 7.4, ללא נוקלאז)סנגון ביוטקB540627#
חומר חיטוי רפואי 84 נוזלימחוז סצ'ואן Yijieshi טכנולוגיה רפואית ושות', בע"מ450 מ"ל / בקבוק
צלחות פטרי

מקורות

  1. Zhang, G. Y., Liao, T., Fu, X. B., Li, Q. F. Organ transplantation in China: concerns remain. Lancet. 385 (9971), 854-855 (2015).
  2. Ekser, B., et al. Clinical xenotransplantation: the next medical revolution? Lancet. 379 (9816), 672-683 (2012).
  3. Cooper, D. K., Ekser, B., Ramsoondar, J., Phelps, C., Ayares, D. The role of genetically engineered pigs in xenotransplantation research. The Journal of Pathology. 238 (2), 288-299 (2016).
  4. Pober, J. S., Sessa, W. C. Evolving functions of endothelial cells in inflammation. Nature Reviews Immunology. 7 (10), 803-815 (2007).
  5. McGill, S. N., Ahmed, N. A., Christou, N. V. Endothelial cells: role in infection and inflammation. World Journal of Surgery. 22 (2), 171-178 (1998).
  6. Ekser, B., Cooper, D. K. Overcoming the barriers to xenotransplantation: prospects for the future. Expert Review of Clinical Immunology. 6 (2), 219-230 (2010).
  7. Yeom, H. J., et al. Porcine aortic endothelial cell genes responsive to selected inflammatory stimulators. The Journal of Veterinary Medical Science. 71 (11), 1499-1508 (2009).
  8. Beigi, F., et al. Optimized method for isolating highly purified and functional porcine aortic endothelial and smooth muscle cells. Journal of Cellular Physiology. 232 (11), 3139-3145 (2017).
  9. Jansen of Lorkeers, S. J., et al. Xenotransplantation of Human Cardiomyocyte Progenitor Cells Does Not Improve Cardiac Function in a Porcine Model of Chronic Ischemic Heart Failure. Results from a Randomized, Blinded, Placebo Controlled Trial. PLOS One. 10 (12), e0143953(2015).
  10. Zhang, J., et al. Potential Antigens Involved in Delayed Xenograft Rejection in a Ggta1/Cmah Dko Pig-to-Monkey Model. Scientific Reports. 7 (1), 10024(2017).
  11. Paris, L. L., et al. ASGR1 expressed by porcine enriched liver sinusoidal endothelial cells mediates human platelet phagocytosis in vitro. Xenotransplantation. 18 (4), 245-251 (2011).
  12. Paris, L. L., Chihara, R. K., Sidner, R. A., Tector, A. J., Burlak, C. Differences in human and porcine platelet oligosaccharides may influence phagocytosis by liver sinusoidal cells in vitro. Xenotransplantation. 19 (1), 31-39 (2012).
  13. Bernardini, C., et al. Heat shock protein 70, heat shock protein 32, and vascular endothelial growth factor production and their effects on lipopolysaccharide-induced apoptosis in porcine aortic endothelial cells. Cell Stress & Chaperones. 10 (4), 340-348 (2005).
  14. Endemann, D. H., Schiffrin, E. L. Endothelial dysfunction. Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 15 (8), 1983-1992 (2004).
  15. Graupera, M., Claret, M. Endothelial Cells: New Players in Obesity and Related Metabolic Disorders. Trends in Endocrinology and Metabolism: TEM. 29 (11), 781-794 (2018).
  16. Kawamoto, A., Asahara, T., Losordo, D. W. Transplantation of endothelial progenitor cells for therapeutic neovascularization. Cardiovascular Radiation Medicine. 3 (3-4), 221-225 (2002).
  17. Rafii, S., Lyden, D. Therapeutic stem and progenitor cell transplantation for organ vascularization and regeneration. Nature Medicine. 9 (6), 702-712 (2003).
  18. Jain, R. K., et al. Endothelial cell death, angiogenesis, and microvascular function after castration in an androgen-dependent tumor: role of vascular endothelial growth factor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (18), 10820-10825 (1998).
  19. Pratumvinit, B., Reesukumal, K., Janebodin, K., Ieronimakis, N., Reyes, M. Isolation, characterization, and transplantation of cardiac endothelial cells. BioMed Research International. 2013, 359412(2013).
  20. Crouch, E. E., Doetsch, F. FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions. Nature Protocols. 13 (4), 738-751 (2018).
  21. Nakano, H., Nakano, K., Cook, D. N. Isolation and Purification of Epithelial and Endothelial Cells from Mouse Lung. Methods in Molecular Biology. 1799, 59-69 (2018).
  22. Naschberger, E., et al. Isolation of Human Endothelial Cells from Normal Colon and Colorectal Carcinoma - An Improved Protocol. Journal of Visualized Experiments. (134), e57400(2018).
  23. Yu, S., et al. Isolation and characterization of endothelial colony-forming cells from mononuclear cells of rat bone marrow. Experimental Cell Research. 370 (1), 116-126 (2018).
  24. Chi, L., Delgado-Olguin, P. Isolation and Culture of Mouse Placental Endothelial Cells. Methods in Molecular Biology. 1752, 101-109 (2018).
  25. Hawthorne, W. J., Lew, A. M., Thomas, H. E. Genetic strategies to bring islet xenotransplantation to the clinic. Current Opinion in Organ Transplantation. 21 (5), 476-483 (2016).
  26. Yi, E., et al. Mechanical Forces Accelerate Collagen Digestion by Bacterial Collagenase in Lung Tissue Strips. Frontiers in Physiology. 7, 287(2016).
  27. Masson-Pevet, M., Jongsma, H. J., De Bruijne, J. Collagenase- and trypsin-dissociated heart cells: a comparative ultrastructural study. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 8 (10), 747-757 (1976).
  28. Yonenaga, K., et al. Optimal conditions of collagenase treatment for isolation of articular chondrocytes from aged human tissues. Regenerative Therapy. 6, 9-14 (2017).
  29. French, M. F., Mookhtiar, K. A., Van Wart, H. E. Limited proteolysis of type I collagen at hyperreactive sites by class I and II Clostridium histolyticum collagenases: complementary digestion patterns. Biochemistry. 26 (3), 681-687 (1987).
  30. Hara, H., et al. In vitro investigation of pig cells for resistance to human antibody-mediated rejection. Transplant International: Official Journal of the European Society for Organ Transplantation. 21 (12), 1163-1174 (2008).
  31. Takashima, A. Establishment of fibroblast cultures. Current Protocols in Cell Biology. Chapter 2, 2.1.1-2.1.12 (2001).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

אורטה של חזיר זעירעיכול באמצעות קולגןז IVבידוד תאי אנדותלאנליזת פלוו-ציטומטריהצביעה בנוגדן CD31טכניקת גירוד תאיםמחקר בשינוע איברים מזויל (Xenotransplantation)תאי אנדותל וסקולרייםהרחבת תרביות תאים
בידוד ותרבות של בתאי אבי העורקים הראשוניים מחזירים זעירים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.