הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אולטרה סאונד-מוגבר למבוגרים בידוד פיברוהפיצוץ

7.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59858

⸱

29 ביולי 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Pharmacology and Toxicology, Faculty of Medicine Carl Gustav Carus, Technische Universität Dresden

במאמר זה

סיכום

אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד את הפיברוטים הראשוניים העיקריים באופן קל, מהיר ואמין, performable על ידי למתחילים (למשל, סטודנטים). הליך זה משלב את העיכול ברקמה אנזימטית ועצבנות מכנית עם גלי אולטרה סאונד כדי להשיג פיברוהטיות ראשונית. ניתן להתאים את הפרוטוקול בקלות לדרישות נסיוניות ספציפיות (לדוגמה, רקמת אדם).

תקציר

הראשי פיברותקיעות למבוגרים הפכו כלי חשוב ללמוד פיברוזיס, פיברוהפיצוץ אינטראקציות ודלקת בכל רקמות הגוף. כיוון שהפיברופיצוצים העיקריים אינם יכולים להפריד ללא הגבלת הזמן בשל בידול או הזדקנות ביולוגית, יש להקים תרבויות חדשות באופן סדיר. עם זאת, ישנם מספר מכשולים כדי להתגבר במהלך התהליכים של פיתוח פרוטוקול בידוד אמין ובידוד העיקרי פיברוהפיצוץ עצמו: דרגת הקושי של השיטה (במיוחד למתחילים), הסיכון לזיהום חיידקי, ה זמן נדרש עד הפיברותקיעות הראשונית ניתן להשתמש עבור ניסויים, ואת איכות התא הבאים הכדאיות. במחקר זה, פרוטוקול מהיר, אמין וקל ללמידה כדי לבודד ולהתרבות למבוגרים בלבד ותרבות מתוך לב העכבר, ריאות, כבד וכליות המשלב עיכול אנזימטי ועצבנות אולטרה סאונד מסופק.

מבוא

פיברותקיעות הם שטוחים, תאים בצורת ציר עם תהליכים stellate מרובים ומעין הרשתית הרחב מחוספס רשתית פלזמית1,2. ממוצע פיברוהפיצוץ אמצעים 30-100 יקרומטר ויש לו תוחלת חיים של 57 ± 3 ימים1,3. משך המחזור הממוצע של התאים של האדם נע בין 16-48 h בהתאם לתנאי התרבות4. יש עדויות לכך שהיכולת המאובדית והאיכות הפונקציונלית של הגידולים הראשוניים העיקריים מתפקדים לרעה עם גיל התורם, ומציעה שתורמים צעירים יותר (בעלי חיים או חולים) צריכים להיות מועדפים אם אפשרי5,6 .

פיברותקיעות מהווים סוג תא דומיננטי של רוב ממחטות הגוף. למרות הנוכחות שלהם בכל מקום, הזיהוי המולקולרי של הפיברופיצוצים הוא עדיין אתגר7. פיברותקיעות להגר לפתח רקמות ואיברים ממקורות שונים במהלך פיתוח עובריים8. מסיבה זו, יש שפע של מסמן חלבונים שניתן למצוא בתוך פיברובפיצוצים בעוד החלבונים סמן ייחודי, אשר נמצאים בכל אוכלוסיית הפיברומה ובלעדית לפיברותקיעות, עדיין חסרים. לפיכך, דפוסי ביטוי של מספר סמנים מזוהים משמשים בדרך כלל כדי לזהות פיברומופיצוצים. בין הסמנים המוכרים ביותר הם vimentin, חלבון הקרקע האדם פיברוההדף (hfsp), discoidin התחום קולטן 2 (DDR2) ו אלפא שריר חלק שרירים אקטין (αSMA).

פיברותקיעות הם מטריצת החילוץ העיקרית (ECM)-הפקת סוג תא. ובכך, הפיברובטות שומרות על ארכיטקטורת רקמה מסודרת ומספקות תמיכה מכנית לתאים שכנים1. האיזון בין סינתזה של ECM לבין השפלה הוא תהליך מוסדר היטב. משמרות לכיוון הסינתזה לסמן את תחילתה של התצהיר ECM מוגזמת אשר, אם לא הסתיים, מוביל פיברוזיס. פיברוזיס מתווכת על ידי מיופיברופיצוצים, אשר מקורם פיברופיצוצים המופעלות שעברו מולקולרית שינויים פנופי. אחד סימן ההיכר של מיופיברופיצוצים הוא הפרשה משופרת של ECM ו ציטוקינים ואת הביטוי של מסודר מסודרים αSMA מיקרופילטרים9.

פיברותקיעות הראשי כבר בזרקור של מחקר האחרונות התמקדות פיברוזיס, דלקת רקמות ופיברוהפיצוץ-תאים לסרטן-cell10,11. עם זאת, כדי ללמוד ביעילות תכונות פיברובלסט בריאות ומחלות, יש צורך לבודד פיברוהפיצוצים הראשוניים למבוגרים על בסיס קבוע. ישנן מספר שיטות זמין כדי לבודד פיברופיצוצים12,13,14. שלוש השיטות המרכזיות של בידוד פיברובלסט הן התרחבות מנתחי רקמות12, עיכול הרקמה האנזימטית15, ופרזיה אנזימטית של איברים חלולים9,13,16. היתרון של הצמיחה החוצה הוא תהליך בידוד עדין ללא השפלה תא אנזימטי. מצד שני, תרבויות מחוץ לצמיחה דורשים בדרך כלל תקופות התרבות ממושך עד התאים יכולים לשמש ניסויים. מהירות העיכול הנפוצה היא מהירה אך נושאת סיכון לזיהום עם סוגי תאים אחרים (למשל, תאי האנדותל) או חיידקים בתהליך העצבנות, הנחוץ לפזר מכנית את הרקמה. יתרה מזאת, שיטות אלה מורכבות לעתים קרובות ודורשות זמן ומיומנות ללמוד.

בנוגע לחשיבות הגידולים הראשוניים במחקר, עדיין יש צורך למטב את הגישות הקיימות של בידוד התא במונחים של זריזות, פשטות ואמינות. כאן, שיטת בידוד אנזימטית מבוססת על-קולי ומספקת תאים באיכות גבוהה מסופק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הפרוטוקול הבא עוקב אחר ההנחיות לטיפול בבעלי חיים מוסדיים של Technische אוניברסיטת דרזדן, גרמניה (מספר קובץ: T 2014/4), כמו גם הנחיות לטיפול בעלי חיים מקובלים (FELASA)17. איור 1 מדמיין את תהליך הבידוד של התא.

1. הכנת הכיוונון, החומר והמדיה

  1. להכין את התרבות התא בינונית, פתרון PBS, קולגן המניה מניות פתרון (מהווים 50 mg של הקולגן ליאופאז משתלב 12 מ ל של מים באולטרטהורים סטרילי), ו 0.25% טריפסין פתרון.
  2. לחמם את המדיום, הPBS ואת הטריפסין הפתרון ל 37 ° c.
  3. מחממים את אמבטיית המים האולטרה-סאונד עד 37 ° c.
  4. חיטוי מלקחיים, מרית פלדת אל-חלד, אזמל (2x אזמל לכל איבר) ו 2 כוסות זכוכית עם 70% אתנול ומניחים חומרים אלה תחת המכסה של תרבות התא.
  5. מלא גביע אחד עם 70% אתנול והשני עם מים סטריליים או פתרון PBS. כוסות אלה נדרשים לחיטוי ולשטוף את המכשיר לאחר כל תהלוכה עוגב.
  6. הניחו צינורות פלסטיק מעוקרים של 15 מ"ל המכילים PBS קר על קרח רטוב. מספר הצינורות תלוי במספר האברים שבהם ברצונך לבודד את הפיברופיצוצים.

2. להסרת העכבר והסרת איברים

  1. לבש שני זוגות של כפפות אחד מעל השני, כך הזוג הראשון ניתן להסיר ברגע החיה כבר גזור.
    הערה: הליך זה מונע מחיידקים מפרוות החיה ומעורם להתפשט על האברים.
  2. המתת החסד של העכבר (למשל, פריקה צוואר הרחם) ו להצמיד את הגווייה עם מחטים לכל איבר בקערה.
  3. לחטא את גופת העכבר באמצעות 70% תרסיס אתנול. ודא שהפרווה ספוגה באתנול כך שהשיער לא יערבולת.
  4. השתמשו במלקחיים כירורגיים. ובמספריים מספריים חותכים את העור לצד הקו האמצעי מנקודת החתך הראשוני לצוואר (3-4 ס מ) ומוסיפים קיצוץ הקלה בגפיים.
    זהירות: לא לנקב את שכבת השרירים בשלב זה כדי למנוע זיהום חיידקי!
  5. הצמד את העור למשטח קצף פוליסטירן כדי לקבל גישה אופטימלית לשרירים המכסים את חלל הבטן.
  6. לחטא את שרירי הבטן פעמיים באמצעות 70% אתנול. תן לאתנול להתייבש לפני שימשיך לשלב הבא.
  7. . הסר את זוג הכפפות הראשון השתמש בערכה חדשה וסטרילית. של מלקחיים ומספריים
  8. פתח את חלל הבטן ואת החזה על ידי הסרת שכבת השרירים עם מספריים כירורגיים כדי להסיר בעדינות את אברי הבחירה. לכן, להחזיק את האיבר בעדינות עם מלקחיים כירורגית (לא לנקב את האיבר, להשתמש בלחץ מינימלי) ולחתוך את כלי הדם לספק ליד נקודת הכניסה באיבר עם מספריים.
  9. הכניסו את האיברים לצינורות. הסטריליים המכילים את הקור סגרו את הצינורות בחוזקה. הניחו את החצוצרות על הקרח הרטוב עד שתמשיכו בשלב 3.1.

3. מיצוי רקמות, העיכול והפקת התאים

  1. להעביר את הצינורות תחת המכסה של תרבות התא סטרילי.
    התראה: ללבוש זוג טרי של כפפות לחטא את הצינורות עם 70% אתנול לפני העברתו מתחת למכסה המנוע!
  2. להוציא את האיבר מתוך 15 מ"ל שפופרת באמצעות מלקחיים סטרילי. מניחים את האיבר על חצי אחד של צלחת פטרי 6 ס"מ ולשטוף את האיבר בקצרה עם PBS להסיר דם עודף. העבר את האיבר למחצית השנייה של צלחת פטרי, והסר את העודף PBS.
  3. מטפחת את הרקמה באמצעות שני מנתחים סטריליים. שברי הרקמה הנותרים לא צריך להיות גדול מ 1-2 מ"מ.
  4. העבירו את הרקמה הקצוצה לתוך צינור חדש של 15 מ ל סטרילי באמצעות המרית הסטרילית והוסיפו 2 מ ל 0.25% טריפסין פתרון. הציבו את הצינור בחממה לתרבות התא ב-37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
  5. מערבולת הצינור בעדינות (בסביבות 1400/דקות) עבור 10 s.
  6. עצור את תגובת טריפסין תחת המכסה של תרבות התא על ידי הוספת 4 מ"ל FCS המכילים תרבות התא בינונית (מדיום הנשר המתוקן של החברה (DMEM), למשל.
  7. הוסף 250 μL של מיזוג קולגן הפתרון לכל צינור המכיל לב או רקמת ריאות 100 μL עבור כליה או כבד, בהתאמה.
  8. מניחים את הצינורות לתוך אמבט מים אולטרה סאונד (37 ° c) ולהפעיל את sonicator אולטראסוניות עבור 10 דקות.
    הערה: אמבט מים אולטרה סאונד המשמש בפרוטוקול זה יש תדר הפעלה של 35 kHz כוח מקסימאלי של 320 W.
  9. מערבולת את החצוצרות בעדינות (בסביבות 1400/דקות) עבור 10 s.
  10. מניחים את הצינורות שוב לתוך אמבט מים אולטרה סאונד עבור 10 דקות.
  11. מערבולת בעדינות (בסביבות 1400/דקות) עבור 10 s.
  12. לחטא את הצינורות עם 70% אתנול ולהעביר אותם תחת מכסה התרבות התא סטרילי.
  13. סנן את הפתרון עם רשת מ40 יקרומטר לתוך צינור חדש מעוקר 15 mL.
  14. צנטריפוגה את הצינור ב 500 x g עבור 5 דקות.
  15. הסירו את הסופרנטאנט והשהה מחדש. את הגלולה בגודל 1 מ ל של בינוני טרי
  16. העבר את התאים לתוך כלי מתאים של תרבות התא (למשל, 6-באר צלחת) ולמקם את הכלי לתוך חממה תרבות התא לילה ב 37 ° צ' ו 5% CO2.
  17. למחרת, להסיר את המדיום, לשטוף 3 פעמים עם PBS, ולאחר מכן להוסיף בינוני טרי (הכרך הוסיף תלוי בכלי התרבות התא של הבחירה, 2 מ ל לכל טוב של 6-היטב צלחת וכו ').
  18. . לשנות את המדיום כל יום
    הערה: ניתן לפצל את הפיברופיצוצים לאחר שהגיעו למפגש אופטי של 90% (בדרך כלל לאחר 5-7 ימים).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

את היכולת של פרוטוקול זה כדי לבודד פיברוהפיצוצים מבוגרים מרקמת murine מוצק הוכח. ניתן להשיג את הפיברופיצוצים קיימא שניתן להשתמש בהם עבור ניסויים שלאחר מכן כגון immunofluorescence כתמים או הפצת ניסויים (איור 2D-F, איור 5א).

בוגרים פיברותקיעות הם תאים שטוחים בצורת ציר עם תהליכים סלולריים מרובים בדרך כלל לצמוח monolayers12,18. התוצאות המתקבלות מש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בהשוואה לקווי התאים המושווים פיברוהפיצוץ, הפיברופיצוצים העיקריים מציעים מספר יתרונות. הם יכולים להיות מבודדים עלות בצורה יעילה באיכות גבוהה וכמות. יתר על כן, תרבויות העיקרי להציע את האפשרות ללמוד תאים מאנשים מרובים, אשר מגביר את האמינות של התוצאות המתקבלות ומקטין את הסבירות של רק לימוד חפצי תרבות התא. הדור המתמשך של התרבויות הראשיות החדשות מונע שינויים גנטיים אשר מתרחשים בדרך כלל לאחר passaging21. בנוסף, הזדקנות הסלולר22,23 או גדל בידול מי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין קונפליקטים של עניין להכריז.

תודות

אנו מודים לגב רומי קמפה וגב ' נט אופץ ' לתמיכה טכנית מקצועית. אנו מודים גם למר ביוארן בינניורג. על כך שהוא תומך עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מ-a) Förderkreis Dresdner Herz-קראסלאוף-e.V., ב) "הבליטבליםתוכניות לעלמה", הפקולטה לרפואה קרל גוסטב קאר דרזדן ו-c) אחרים Kröner-פורשיסקולאג (EKFK) הפקולטה לרפואה קרל גוסטב . כרמלה דרסדן . אנו אסירי תודה על המימון והתמיכה

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.25% טריפסין-EDTAסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, ארה"בT4049-100ML
אנטיביוטיקהGibco-Life Technologies, קרלסבד, ארה"בGibco LS15140148 פניצילין/סטרפטומיצין (10,000 יח'/מ"ל)
קולט אדים לתרבית תאיםThermo Fisher Scientific, וולת'אם, ארה"ב51023608HeraSafe KSP15
חממת תרבית תאיםThermo Fisher Scientific, וולת'אם, ארה"ב50049176BBD 6220
צלחות תרבית תאיםThermo Fisher Scientific, וולת'אם, ארה"ב תלוי בכלי6-, 12-, 24 בארות משטח Nunclon
יניקת תרבית תאיםVACUUBRAND GMBH + CO KG, ורטהיים, גרמניה20727400מסננת תאי יניקה מקצועית BVC
(רשת)קורנינג, טוקסברי, ארה"ב43175040 ומיקרו; m
צנטריפוגהתרמו פישר סיינטיפיק, וולת'אם, ארה"ב75007213Megafuge 8R
הירשמן, אברשטדט, גרמניה9907200קצות פיפטה
חד פעמיותפיפטוס סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, ארה"ב תלוי בנפחטיפים של SafeSeal לפיפטות (10 ומיקרו; L, 20 ומיקרו; L, 100 ומיקרו; L, 200 ומיקרו; L, 1000 ומיקרו; L)
פיפטות פלסטיק חד פעמיותסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, ארה"ב תלוי בנפח5 מ"ל, 10 מ"ל, 25 מ"ל, 50 מ"ל
אזמל סטרילי חד פעמיMyco Medical, קארי, ארה"בn.a.Technocut
Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM)Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA41965-062עם גלוקוז גבוה
אפנדורף, המבורג, גרמניה תלוי בנפח50 ומיקרו; L, 500 ומיקרו; L, 1.500 ומיקרו; L, 2.000 ומיקרו; L
סרום עגל עוברי (FCS)סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, ארה"בF2442-50ML
תערובת קולגנאזסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, ארה"ב5401020001Liberase TL צלחת פטרי בדרגת מחקר
6 ס"מסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, ארה"בP5481-500EA
מי מלח פוספט חוצץ (PBS)סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, ארה"בD8537-500 מ"ל500 מ"ל
ערכת זיהוי הזדקנותAbcam, קיימברידג', בריטניהab65351
Shaker/ VortexIKA, Staufen im Breisgau, גרמניהn.a.MS2Minishaker (דגם עוקב: Ident-Nr.: 0020016017)
צינורות פלסטיק סטרילייםThermo Fisher Scientific, Waltham, ארה"בצינורות Falcon 352095BD Falcon (15 מ"ל, 50 מ"ל)
אמבט מים אולטראסוניBANDELIN אלקטרוני GmbH & Co. KG, ברלין, גרמניה312Sonorex RK100H
מספריים כירורגיים (א-טראומטיים)Aesculap AG, טוטלינגן, גרמניהNR 82
מספריים כירורגיים Aesculap AG , טוטלינגן, גרמניהeq 1060.09
מלקחיים כירורגייםAesculap AG , טוטלינגן, גרמניהBD577
ניילון בקר פיפטינג אלחוטי צינורות אפנדורף

מקורות

  1. Baum, J., Duffy, H. S. Fibroblasts and myofibroblasts: what are we talking about. Journal of Cardiovascular Pharmacology. 57 (4), 376-379 (2011).
  2. Tallquist, M. D., Molkentin, J. D. Redefining the identity of cardiac fibroblasts. Nature Reviews. Cardiology. 14 (8), 484-491 (2017).
  3. Weissman-Shomer, P., Fry, M. Chick embryo fibroblasts senscence in vitro: pattern of cell division and life span as a function of cell density. Mechanisms of Ageing and Development. 4 (2), 159-166 (1975).
  4. Angello, J. C. Replicative potential and the duration of the cell cycle in human fibroblasts: coordinate stimulation by epidermal growth factor. Mechanisms of Ageing and Development. 62 (1), 1-12 (1992).
  5. Serra, V., von Zglinicki, T. Human fibroblasts in vitro senesce with a donor-specific telomere length. FEBS Letters. 516 (1), 71-74 (2002).
  6. Mateu, R., et al. Functional differences between neonatal and adult fibroblasts and keratinocytes: Donor age affects epithelial-mesenchymal crosstalk in vitro. International Journal of Molecular Medicine. 38 (4), 1063-1074 (2016).
  7. Ivey, M. J., Tallquist, M. D. Defining the Cardiac Fibroblast. Circulation Journal: Official Journal of the Japanese Circulation Society. 80 (11), 2269-2276 (2016).
  8. Kanisicak, O., et al. Genetic lineage tracing defines myofibroblast origin and function in the injured heart. Nature Communications. 7, 12260(2016).
  9. Kuenzel, S. R., et al. Hypoxia-induced epigenetic silencing of polo-like kinase 2 promotes fibrosis in atrial fibrillation. bioRxiv. , 445098(2018).
  10. Van Linthout, S., Miteva, K., Tschöpe, C. Crosstalk between fibroblasts and inflammatory cells. Cardiovascular Research. 102 (2), 258-269 (2014).
  11. Kalluri, R. The biology and function of fibroblasts in cancer. Nature Reviews Cancer. 16 (9), 582-598 (2016).
  12. Poulet, C., Künzel, S., Büttner, E., Lindner, D., Westermann, D., Ravens, U. Altered physiological functions and ion currents in atrial fibroblasts from patients with chronic atrial fibrillation. Physiological Reports. 4 (2), (2016).
  13. Gündüz, D., Hamm, C. W., Aslam, M. Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart. Journal of Visualized Experiments. (123), e55601(2017).
  14. Weldrick, J. J., Abdul-Ghani, M., Megeney, L. A., Burgon, P. G. A rapid and efficient method for the isolation of postnatal murine cardiac myocyte and fibroblast cells. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 96 (5), 535-539 (2018).
  15. Wang, H., Van Blitterswijk, C. A., Bertrand-De Haas, M., Schuurman, A. H., Lamme, E. N. Improved enzymatic isolation of fibroblasts for the creation of autologous skin substitutes. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. 40 (8-9), 268-277 (2004).
  16. El-Armouche, A., et al. Phosphatase inhibitor-1-deficient mice are protected from catecholamine-induced arrhythmias and myocardial hypertrophy. Cardiovascular Research. 80 (3), 396-406 (2008).
  17. Guillen, J. FELASA Guidelines and Recommendations. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 51 (3), 311-321 (2012).
  18. Seluanov, A., Vaidya, A., Gorbunova, V. Establishing primary adult fibroblast cultures from rodents. Journal of Visualized Experiments. (44), 2033(2010).
  19. Masur, S. K., Dewal, H. S., Dinh, T. T., Erenburg, I., Petridou, S. Myofibroblasts differentiate from fibroblasts when plated at low density. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (9), 4219-4223 (1996).
  20. Rohr, S. Cardiac fibroblasts in cell culture systems: myofibroblasts all along. Journal of Cardiovascular Pharmacology. 57 (4), 389-399 (2011).
  21. Cell lines: Valuable tools or useless artifacts. PubMed - NCBI. , Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22553484 (2019).
  22. Coppé, J. P., et al. Senescence-associated secretory phenotypes reveal cell-nonautonomous functions of oncogenic RAS and the p53 tumor suppressor. PLoS biology. 6 (12), 2853-2868 (2008).
  23. Childs, B. G., Durik, M., Baker, D. J., van Deursen, J. M. Cellular senescence in aging and age-related disease: from mechanisms to therapy. Nature Medicine. 21 (12), 1424-1435 (2015).
  24. Singh, M., Sharma, A. K. Outgrowth of fibroblast cells from goat skin explants in three different culture media and the establishment of cell lines. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. 47 (2), 83-88 (2011).
  25. Linge, C., Green, M. R., Brooks, R. F. A method for removal of fibroblasts from human tissue culture systems. Experimental Cell Research. 185 (2), 519-528 (1989).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

בידוד פיברובלסטים ראשונייםערבול אולטרסוניעיכול אנזימטידיסוציאציה של רקמהפרוטוקול תרבית תאיםקצירת איברים מעכברטיפול בטריפסיןתערובת קולגנאזסינון תאיםצנטריפוגציה
אולטרה סאונד-מוגבר למבוגרים בידוד פיברוהפיצוץ
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.