הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השיטות כדי ליצור מודלים של מטופלים שנגזר על המטופל (PDX) ושורות של תאים סרטניים העיקרי מדגימות סרטן הקיבה כירורגית. השיטות מספקות כלי שימושי לפיתוח סמים וחקר ביולוגיה של הסרטן.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הקמת החולה סרטן קיבה-מודלים נגזרים הנגזרות וקווי התא הראשי
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
השימוש במודלים פרה-קליניים כדי לקדם את הבנתנו את הביולוגיה של הגידול ולחקור את היעילות של הסוכנים הטיפוליים הוא מפתח לחקר הסרטן. למרות שיש הרבה מבוססת סרטן קיבה מבוסס קווי ומודלים רבים של העכבר טרנסגניים קונבנציונאלי למחקר טרום קליני, החסרונות של אלה בתוך מבחנה במודלים vivo להגביל את היישומים שלהם. בגלל המאפיינים של מודלים אלה השתנו בתרבות, הם כבר לא מודל הגידול טרוגניות, ואת התגובות שלהם לא הצליחו לחזות את התגובות בני אדם. כך, מודלים חלופיים שמייצגים טוב יותר את טרוגניות הגידול מפותחים. המטופל נגזר מבע (pdx) מודלים לשמר את המראה היסטולוגית של תאים סרטניים, לשמור על טרוגניות intratumoral, וטוב יותר לשקף את הרכיבים האנושיים הרלוונטיים של מיקרוסביבה הגידול. עם זאת, זה בדרך כלל לוקח 4-8 חודשים כדי לפתח מודל PDX, אשר ארוך יותר ההישרדות הצפויה של חולי קיבה רבים. מסיבה זו, הקמת קווי התאים הראשוניים לסרטן עשויה להיות שיטה משלימה אפקטיבית ללימודי תגובה לסמים. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות להקמת מודלים PDX ושורות של תאים סרטניים העיקרי של סרטן כירורגי הקיבה דגימות. שיטות אלה מספקות כלי שימושי לפיתוח סמים וחקר ביולוגיה של הסרטן.
מבוא
סרטן קיבה הוא החמישי הנפוץ ביותר בעולם הסרטן הגורם המוביל השלישי למוות בסרטן. ב 2018, מעל 1,000,000 מקרים חדשים של סרטן קיבה אובחנו ברחבי העולם, ו מוערך 783,000 אנשים נהרגו על ידי מחלה זו1. השכיחות והתמותה של סרטן הקיבה להישאר גבוה מאוד במדינות אסיה הצפון מזרחי2,3. למרות התקדמות משמעותית בתחום של סרטן therapeutics, הפרוגנוזה של חולים עם סרטן קיבה מתקדם נשאר עני, עם שיעור ההישרדות של חמש שנים של כ 25%4,5,6, 7,. כך, יש צורך דחוף לפיתוח אסטרטגיות טיפו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
זה מחקר אנושי אושרה על ידי האתיקה המוסדית הוועדה של אוניברסיטת סון יאט-סן סרטן המרכז (SYSUCC, גואנגג'ואו, סין). המחקר בעלי חיים אושר על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועדת השימוש של אוניברסיטת סון יאט-סן. הערה: כל הניסויים בוצעו בהתאם לחוקים הרלוונטיים ולהנחיות המוסדיים, כולל ההנחיה להגנה על החשיפה התעסוקתית מפני פתוגנים הנישאים בדם.
1. הכנה לדוגמא
- להשיג רקמות סרטן קיבה (P0 = מעבר 0) ישירות מהפעולה. הדגימה צריך להיות גדול יותר מ 0.5 ס"מ3.
- הכינו 3-4 mL של פתרון מניות: לדוגמה, RPMI-1640 בינונית (1x) שיושלם עם 10% סרום פרה עוברי (FBS), 100 U/mL ו 0.1 mg/mL סטרפטומיצין.
- הכניסו את הדגימה הטרייה של הגידול בתמ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כאן, רקמות הגידול מפעולה נשמרו בפתרון מניות עד לשלב הבא. בתוך 4 שעות, רקמות הגידול נחתכו לחתיכות קטנות מושתל לתוך האגפים הקטנים של עכברים NSG כי היה מורדם באמצעות כותנה שספוגה isofלוריאן. גידולים גדולים יותר 1 ס"מ3 יכול להיות resected עבור השרשה לתוך עכברים חדשים (איור 1) או לפרוס בזהירות ונשמר בחנקן נוזלי לאחר הפרוטוקול. במחקר זה, גידולים הדור הראשון גדל לאט יותר מאשר אלה בדורות המאוחרים, לוקח 3 שבועות או יותר כדי להגיע לגודל המתאים. שיעור ההצלחה של היווצרות הדור הראשון גידול תת .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
סרטן קיבה היא מחלה אגרסיבית עם אפשרויות טיפוליות מוגבלות; thus, מודלים של סרטן קיבה הפכו משאב קריטי כדי לאפשר לימודי מחקר פונקציונלי עם תרגום ישיר למרפאה4,8,17. כאן, יש לנו לתאר את השיטות ואת הפרוטוקול של יצירת סרטן קיבה מודלים PDX וקווי התא הראשי. חשוב מכך, הן המאפיינים הביולוגיים מורפולוגיים וביולוגיים של דגימות סרטן הקיבה נשמרו בעיקר בדגמי PDX.
קיימות מספר נקודות קריטיות בפרוטוקול להקמת דגמי PDX שי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
עבודה זו נתמכת על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81572392); תוכנית המחקר ופיתוח המפתח הארצי של סין (2016YFC1201704); טיפ-top כשרונות מדעיים וטכניים חדשניים של הנוער של גואנג-דונג מיוחד תמיכה תוכנית (2016TQ03R614).
אנחנו במיוחד להודות גואנגג'ואו Sagene ביוטכנולוגיה ושות, בע מ לסיוע בהכנת הדמויות.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 40 μ m מסננת תאים | Biologix, שאנדונג, סין | 15-1040 | |
| מיקרוסקופ ביולוגי | OLYMPUS, טוקיו, יפן | OLYMPUS CKX41 | |
| צנטריפוגה | Eppendorf, Mittelsachsen, גרמניה. | 5427R | |
| CO2 חממה | תרמו פישר סיינטיפיק, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב | HERACELL 150i | |
| DPBS | Basalmedia Technology, שנחאי, סין | L40601 | |
| ארון מים אלקטרו-תרמוסטטי | Yiheng, שנחאי, סין | DK-8AXX | |
| סרום בקר עוברי | Wisent Biotechnology, ונקובר, קנדה | 86150040 | |
| Isoflurane | Baxter, סין | CN2L9100 | |
| ערכת רקמות חיות ערכת קריו | Celliver Biotechnology, שנחאי, סין | LT2601 | |
| ערכת הפשרת רקמות חיות | Celliver Biotechnology, שנחאי, סין | LT2602 | |
| NSG | Biocytogen, בייג'ינג, סין | B-CM-002-4-5W | |
| Penicilin& סטרפטומיצין | תרמו פישר סיינטיפיק, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב | 15140122 | |
| מאגר ליזה של תאי דם אדומים | סולארביו, בייג'ינג, סין | R1010 | |
| RPMI-1640 בינוני | תרמו פישר סיינטיפיק, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב | 8118367 | |
| מחטי תפר כירורגיות עם חוט | LingQiao, נינגבו, סין | 3/8 קשת 4 פעמים; 10 | |
| תבניות ולהבי עזר מעובדים ברקמות | Celliver Biotechnology, שנחאי, סין | LT2603 | |
| Trypsin-EDTA | Thermo Fisher Scientific, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב | 2003779 | |
| קולגנאז מסוג 1 | Thermo Fisher Scientific, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב | 17100017 |
מקורות
- Bray, F., et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. Ca-a Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).
- Sugano, K.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
