הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

26.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59999

⸱

6 ביולי 2019

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology and Intensive Care Medicine, University Hospital Bonn

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

הציג כאן הוא צעד אחר צעד הליך כדי לגרום לפציעה ריאה חריפה בעכברים על ידי ישירה intratracheal ליפוסכאלפסיד ולבצע ניתוח FACS של דגימות דם, ברונמכתשי נוזל ששטיפה, ורקמות ריאות. מיניציה מינימלית, טיפול פשוט, תוכנות טובה, ו טיטור של חומרת המחלה הם יתרונות של גישה זו.

תקציר

מינהל דרכי הנשימה של ליפופוליסכד (LPS) היא דרך נפוצה לחקר דלקת ריאות ופגיעה בריאות חריפה (ALI) במודלים של בעלי חיים קטנים. היבטים שונים תוארו, כגון האינהלציה של aerosolized LPS, כמו גם אפי או intrracheal הסטילציה. הפרוטוקול המוצג מתאר נוהל צעד אחר צעד מפורט כדי לגרום לעלי בעכברים על ידי ישיר intratracheal לחות ולבצע ניתוח FACS של דגימות דם, ברונמישיים ששטיפה (BAL) נוזל, ורקמות ריאות. לאחר הרגעה הצפק פנימי, קנה הנשימה נחשף ו-LPS מנוהל באמצעות צנתר הווריד 22 G. תגובה דלקתית חזקה ומיועלת עם הפלישה הלוקוטית, upregulation של ציטוקינים proinflammatory, ושיבוש של מחסום מכתשי-נימים מושרה בתוך שעות לימים, בהתאם למינון LPS בשימוש. איסוף דגימות דם, נוזל בל וקצירת ריאות, כמו גם עיבוד לניתוח FACS, מתוארים בפרוטרוט בפרוטוקול. למרות שהשימוש ב-LPS סטרילי אינו מתאים לחקר התערבויות פרמקולוגית במחלות זיהומיות, הגישה המתוארת מציעה החלטיות מינימלית, טיפול פשוט, ומענה טוב למענה על שאלות אימונולוגיות מכניסטיות. יתר על כן, מינון המינון, כמו גם שימוש אלטרנטיבי LPS ההכנות או זנים העכבר לאפשר אפנון של ההשפעות הקליניות, אשר יכול להציג דרגות שונות של החומרה ALI או מוקדם לעומת התפרצות מאוחרת של תסמיני המחלה.

מבוא

מודלים ניסיוניים לבעלי חיים הינם חיוניים במחקרים חיסוניים בסיסיים. מינהל של חיידקים שלמים או מרכיבים מיקרוביאלית נעשה שימוש תכוף במודלים בעלי חיים קטנים כדי לגרום לדלקת מקומית או מערכתית1. ליפופוליסכריד (LPS, או אנדוטוקסין חיידקי) הוא רכיב קיר תא ואנטיגן פני השטח של חיידקים גראם שליליים (למשל, בריקובאכניים, פסאודומונס spp.). המולקולה התרמויציבה והגדולה (משקל מולקולרי 1-4 x 106 kda) מורכב moiety השומנים (ליפיד a), אזור הליבה (oligosaccharide), ו-o רב סוכר (או אנטיגן o). ליפיד A, עם שרשראות חומצות שומן הידרופובי שלה, עוגנים את המולקולה לתוך קרום חיידקי ו סכסוכי (על השפלה של חיידקים) את הפעילות החיסונית רעילות של lps. בעקבות הכריכה לחלבון איגוד lps (LBP), lps: LBP מתחמי פסיקים CD14/TLR4/MD2 מורכבות הקולטן ממוקם על המשטח של סוגי תאים רבים, גרימת תגובה חזקה proinflammatory עם טרנסלוקציה גרעינית NF-κB והבאים upregulation ביטוי של ציטוקין2.

פגיעה חריפה בריאות (עלי) מוגדרת ככשל נשימתי חריף באמצעות בצקת בריאות דו-צדדית בהיעדר אי ספיקת לב3. מינהל דרכי הנשימה של lps היא דרך נפוצה כדי לגרום לדלקת ריאתי עלי4,5,6,7. למרות שהחומר הסטרילי אינו מתאים לחקר התערבויות פרמקולוגית במחלות זיהומיות, ניתן לענות על שאלות אימונולוגיות מכניסטיות בדיוק מספיק. הסטיזילציה של LPS לתוך קנה הנשימה גורמת תגובה דלקתית חזקה עם הפלישה לוקיציט, upregulation של ציטוקינים proinflammatory, ושיבוש של מחסום מכתשי-נימי בתוך שעות לימים, בהתאם למינון LPS3, 6,7.

הפרוטוקול המוצג מתאר נוהל צעד אחר צעד מפורט כדי לגרום לעלי בעכברים על ידי intratracheal לדבר. המודל אומת על ידי הערכת ביטוי ציטוקין, הפלישה נויטרופילים, ו מכתשיים הדליפה בתוך מכתשי כמתואר בעבר8.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

פרוטוקול בעלי חיים זה אושר על ידי הוועדה המקומית לטיפול בבעלי חיים (LANUV, רקלינגהאוזן, גרמניה; פרוטוקול 84-02.04.2015) ובוצע בהתאם הנחיות המכון הלאומי לבריאות לשימוש בעלי חיים חיים (הפרסום NIH No 85-23, תוקן 1996).

1. עלי השראה

  1. השתמש במבוגר C57BL/6 עכברים בגילאים של כ 10-12 שבועות. הבית בעלי החיים בכלובים מאוורר באופן אינדיבידואלי עם גישה חופשית למים ואוכל מכרסם רגיל. עם זאת, ניתן לבצע גישה זו על בעלי חיים צעירים יותר עם זנים עכברים אחרים.
  2. חנות LPS (EsO111 coli החיידק: B4) ב ali, בריכוזים של 5 מ"ג/mL ב-20 ° c. לגבי האינקטלציה, לדלל LPS בתמיסת מלח סטרילית באגירה (PBS) לריכוז הסופי של 2,000 μg/mL.
  3. . שוקלים את העכבר הכנס קטמין [120 mg/ק ג משקל גוף העכבר (BW) ו xylazine (16 מ"ג/ק"ג BW) intraperitoneally (נמוך יותר משליש הבטן, פאראדין), ולחכות עד תחילת ההרדמה.
  4. בדוק את עומק ההרדמה על ידי גרימת גירוי מישוש. במקרה של הרדמה מספקת, לחזור על הזריקה עם קטמין (30 מ"ג/ק"ג BW) ו xylazine (4 מ"ג/ק"ג BW).
  5. מניחים את העכבר בתנוחה מועדת על שולחן טמפרטורה מבוקרת כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של 37 ° c.
  6. . כדי למנוע התייבשות של קרניות בהרדמה
  7. הרם את הראש והקרס חותכות על פס אופקי הממוקם כ-5 ס מ מעל השולחן, בעוד שכפות הרגליים נשארות במגע צמוד עם השולחן. הארך את הצוואר בזווית 90 מעלות יחסית לטבלה (איור 1). להחזיק את הלשון עם מלקחיים כדי ליישר את הגרון לתנאי צנרור קל.
  8. לגזור a 22 מד (ז) קטטר ורידי לאורך של 20 מ"מ. בעדינות להכניס את הצנתר בכיוון האנכי לאורך שורש הלשון. מניחים מקור אור קר על העור מעל הגרון כדי לעזור להמחיש את מיתרי הקול ולכוון את קנה הנשימה. אם התנגדות של הגרון מתרחשת, למשוך את הקטטר כמה מילימטרים לפני להתקדם שוב.
  9. הכנס את הקטטר כ 10 מ"מ לתוך קנה הנשימה. ודא כי הכניסה אינה עמוקה מדי כמו זה יגרום הצטברות חד צדדית של נוזל לתוך ימין או שמאל ברונזה הראשי.
  10. הכנס LPS (5 μg/g BW) מדולל ב-PBS באמצעות פיפטה [אמצעי אחסון מוזרק תלוי במשקל גוף העכבר (למשל, 20 גר' משקל ← להשתמש 50 μL של פתרון LPS)].
    הערה: העכבר יגיב בדרך כלל עם שיעול או מתנשף בחוסר הסדר המתאים של נוזל לתוך קנה הנשימה.
  11. לחבר מזרק ולהוסיף בולוס של 50 מ"ל אוויר כדי להבטיח כי נפח נוזלי מלא מופץ בריאות. . הסירו לאט את הצנתר
  12. לשמור על הגוף העליון של העכבר בתנוחה זקופה עבור 30 כדי למנוע דליפה של הנוזל מקנה הנשימה.
  13. בבעלי חיים בעלי הפעלה מזויפת, הכנס 50 μL של הערוץ האחר במקום LPS.
  14. הכנס בופרנורפין הידרוכלוריד 0.08 מ"ג/ק"ג תת-עורי לתוך העור רופף על הצוואר מיד לאחר האינדוקציה עלי ואת כל 12 h לאחר מכן, במהלך הראשון 48 h.
  15. לשמור על טמפרטורת הגוף של 37 ° צ' עד מודעות מלאה מגיעה על ידי שמירה על העכבר על משטח ההתחממות.
  16. העבר את העכבר לכלוב מאוורר בנפרד עם גישה חופשית למזון ולמים. נטר את העכבר בקביעות. הפחתת טמפרטורת הגוף ודיכאון הנשימה מעיד על השראה מתאימה של עלי.

2. דגימת דם, ששטיפה ברונדושיים, קצירת איברים

הערה: עיתוי המתת החסד תלוי בסוגיה המדעית הנדונה. בדרך כלל, זה מבוצע 12-72 h לאחר ה, לאחר ה,3,4,9,10. חומרת עלי ניתן לקבוע קלינית על ידי התבוננות סדירה של טמפרטורת הגוף ואת הסימפטומים מצוקה הנשימה11.

  1. לגרום הרדמה על ידי הצבת העכבר בחדר מוצף באיזוofלאנה. השתמש ב-3 שימוש בזרימת חמצן של 1 L/min. להבטיח הרדמה עמוקה על ידי גרימת גירוי מישוש. במקרה של עומק מספיק של הרדמה, להגדיל את isofלאנה עד 5 vol%.
  2. להקריב את העכבר בהרדמה מעמיקה. ע י פריקת העורף לאטלנטיס
  3. תקן את העכבר עם קלטת על טבלת פעולה ובקרוב לחטא את הפרווה על הבטן עם 70% אתנול. פתח את חלל הבטן בזהירות בקו החציוני עם מספריים ומלקחיים. להסיר חלקים של המעי כדי להשיג גישה אל הנחות הבנה קאווה (IVC) הזכות לעמוד השדרה ואת אבי העורקים הבטני.
  4. לאתר את הוורידים כליה ולהוסיף כפוף 23 G צינורית מחובר מזרק 1 מ ל לתוך ה-ivc ישירות מתחת למפגש של הוורידים. מאספירין 250 μl של דם והעברה לתוך שפופרת 1.5 mL מלא 20 μl של 0.5 M ethylenediamiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii\ טלטל בעדינות כדי להקל על הערבוב של EDTA ולשים את השפופרת על הקרח.
  5. עבור ששטיפה ברונמאשיים (BAL), להכין שלושה מזרקים mL 1 מ מ עם 0.5 mL של PBS סטרילי ו 0.1 mL של אוויר כל אחד. זמן קצר לחטא את הפרווה של הגרון עם 70% אתנול ולחשוף בזהירות את קנה הנשימה עם מספריים ומלקחיים. להניע את קנה הנשימה. ולעטוף תפר
  6. לבצע BAL: נקב את קנה הנשימה באמצעות מיקרו מספריים ולהוסיף 22 קטטר ורידי ורידים לחתוך לאורך של 20 מ"מ. תקן את הקטטר עם תפר ו-in, 0.5 mL של PBS סטרילי ו 0.1 mL של אוויר. . מרוב הנוזל לאחר 60 ס חזור על ההליך עם שני מזרקים נוספים ולאסוף את כל הנוזלים בצינור 15 מ ל על הקרח.
  7. פתחו בזהירות את החזה עם מספריים ומלקחיים כדי לקצור את הריאות. חותכים את הסרעפת לאורך השוליים הקוסטל וחותכים את הצלעות עם שני חתכים לרוחב. הימנע בזהירות מלשאת את הריאות. הרם את עצם החזה בגולגולת. ותקן או הסר אותו
  8. הכינו מזרקים 2 10 mL עם 37 מעלות צלזיוס חם PBS (ללא סידן ומגנזיום). לעשות חתך קטן לתוך החדר השמאלי. לנקב את החדר הימני עם משחק 26 G צינורית ולשטוף את זרימת הריאות עם PBS הקדם. להיות מודעים לריאות להפוך חיוור במהלך ההליך.
  9. להסיר את האונה הימנית של הריאות ולחתוך אותו בשני חצאים. הצמד-הקפאת אותם בחנקן נוזלי, ואחריו אחסון לטווח ארוך ב-80 ° c עבור ביטוי גנטי נוסף ניתוח חלבונים.
  10. להסיר את הריאה השמאלית כולה ואת המגון את זה ב 48 צלחת היטב על ידי מיניב את הרקמה עם מספריים ו tweezer. מודדת את הרקמה 2 מ ל של מאגר העיכול [RPMI 1640 with 10% סרום עגל עוברי (fcs) ו 0.1% נאן3, כולגאז I (1 מ"ג/ml), ו dnase II (7 מ"ג/mL)] ב 37 ° צ' עבור 60 min. לבצע הומוגון נוספת על ידי ליטוף זהיר של חתיכות רקמת ה למטה.

3. הכנת רקמות לניתוחי FACS

  1. הכן מאגר FACS טרי (טבלה 1): השתמש תמיד ב-PBS ללא סידן ומגנזיום כדי להפחית את הדבקה של תא לתא-לתא התלוי בקטיון ולמנוע הסתעפות. תוספת עם FCS (1%) כדי להגן על התאים ואפופטוזיס, למנוע כתמים לא ספציפיים, ולמנוע תאים לדבוק צינורות FACS. כלול EDTA (0.5 mM) כדי למנוע הדבקה מבוססי-הקטיון תא לתא כאשר עובדים עם תאים נדבקים וחסיד כמו מקרופאגים. הוסף נתרן אזיד (0.1%), כפי שהוא מונע זיהום חיידקי והלבנת של fluorochromes וחוסם נוגדן שפיכת.
  2. להעביר את דגימות הדם (צעד 2.4) לתוך 5 מנורות FACS ולערבב בעדינות את הדם עם 2 מ ל של מאגר פירוק הדם של תא דם אדום. לשים את הצינורות על הקרח ולסיים את התגובה לאחר 2 דקות על ידי הוספת 2 מ ל של הקרח קר PBS. צנטריפוגה את הדגימות עבור 5 דקות ב 400 x g ולהיפטר supernatant. להשעות מחדש את הגלולה תא עם 60 μL של מאגר FACS והתהליך עבור כתמים של FACS לאחר מכן על פי פרוטוקולים שתוארו בעבר12.
    הערה: עיתוי של המתת חסד של השפעות העכבר לספירה כחלק מדלקת מערכתית. לכן, מומלץ להתאים את מספר התא ל 1 x 106 תאים/60 μl בשלב זה כדי להשיג את התוצאות מכתים הטוב ביותר עבור הניתוח cy, try הזרימה.
  3. צנטריפוגה נוזל BAL (שלב 2.6) עבור 5 דקות ב 400 x g. לאחר מכן, הקפאת הסופרנטאנט והקפא אותו בחנקן נוזלי, ואחריו אחסון לטווח ארוך ב-80 ° c לניתוח חלבון נוסף. השהה מחדש בל התאים עם 2 מ ל של מאגר facs קר, ולאחר מכן להעביר את ההשעיה לתוך 5 ml facs צינור באמצעות מסנן רשת מ100 יקרומטר לרסן שערות.
  4. שוב, צנטריפוגה את המדגם עבור 5 דקות ב 400 x g. השהה מחדש את הגלולה עם 60 μL של מאגר FACS ותהליך עבור כתמים של FACS לאחר מכן בהתאם לפרוטוקולים שתוארו בעבר12.
    הערה: עיתוי של המתת חסד של השפעות העכבר לספור בתוך בל כחלק מדלקת. לכן, מומלץ להתאים את מספר התא ל 1 x 106 תאים/60 μl בשלב זה כדי להשיג את התוצאות מכתים הטוב ביותר עבור הניתוח cy, try הזרימה.
  5. העבר את רקמת הריאה השמאלית מתעכל (שלב 2.10) לתוך צינור של 5 mL FACS באמצעות מסנן שינוי מגוון 100 μL כדי לחלץ גושים ולסיים את תהליך העיכול על ידי הוספת 2 מ ל של מאגר FACS קר קרח. צנטריפוגה את המדגם עבור 5 דקות ב 400 x g. להיפטר supernatant ולהשעות מחדש את הגלולה עם 60 μL של מאגר FACS והתהליך עבור כתמים הבאים של FACS בהתאם לפרוטוקולים שתוארו בעבר12.
    הערה: העיתוי של המתת החסד של השפעות העכבר ספירת לוקיציט ברקמת הריאה כחלק מדלקת. לכן, מומלץ להתאים את מספר התא ל-1 x 106 תאים/60 μl כדי להשיג את התוצאות מכתים הטוב ביותר עבור ניתוח cy, הזרמת ציטונסה.
  6. עבור ניתוח FACS, התאים המענבית עם CD16/CD32 נוגדן ב 4 ° צ' עבור 15 דקות כדי לחסום את הכריכה הלא ספציפית של האימונוגלובולין לקולטנים Fc. הוסף 20 μL של פתרון חסימת 1 x 106 תאים ב 60 μl בתוך צינור 5 מ ל.
  7. בינתיים, להכין תערובת הורים עם מאגר FACS ונוגדנים כפי שמתואר בטבלה 2.
  8. לאחר חסימת, לא לשטוף את התאים. הוסף 20 μL של שילוב מאסטר נוגדן לדוגמה כדי לקבל את הנפח הסופי של 100 μL. מארג הדגימות עבור 20 דקות בחשיכה ב-4 ° c.
  9. לשטוף כל מדגם עם 1 מ ל של מאגר FACS ו צנטריפוגה עבור 5 דקות ב 400 x g. השמט את הסופרנטאנט והשהה מחדש את הגלולה עם מאגר ה-FACS לריכוז התא המתאים עבור מדידות ה-FACS.
    הערה: מספר תא של 1 x 106 תאים/500 μl הוא הציע להשיג את התוצאות הטובות ביותר של הפנוטיפים החיסונית בניתוח facs עם פרוטוקול זה. עם זאת, מומלץ לחייב את הנוגדנים בנפרד.
  10. במקרה הצורך, הוסיפו כתמים חיים/מתים לפני הצביעת המשטח באמצעות ערכות מסחריות זמינות מסוימות8.
  11. לבסוף, להוסיף מספרים קבוע של מסחרית fluorochrome בשילוב חרוזי כיול (3 x 105 חרוזים ב 20 μl של מאגר facs) לכל מדגם כדי לקבוע מספרי תאים מוחלטים12. באיור 2מוצגת אסטרטגיית היציאה לדם, בל ותאי הרקמה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הגישה המתוארת כדי לגרום ALI בעכברים היה מאומת על ידי הערכת ביטוי cy, הסתננות נויטרופילים, ומחסום מכתשי-נימים הפרעה 24 h ו 72 h לאחר LPS הפרעות. בעלי חיים מוזרקים. שימשו כשליטה ממשלת intratracheal LPS הנגרמת תגובה יציבה הריאות הריאתי. ביטוי של TNF-α ברקמת הריאה היה upregulated באופן משמעותי, הגעה מתמשכת ויותר 50-קיפול להגדיל בהשוואה לבעלי חיים בקרה [RQ (TNF-α/18s); 24 h: 53.7 (SD = 11.6); 72 h: 55.0 (SD = 20.6); p < 0.05)] הפלישה הלוקוציט לתוך רקמה ומכתשיים היא סימן ההיכר ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פולשני מינימלי, טיפול פשוט, ומהווה מאפיינים טובים הם תכונות מפתח של הגישה המוצגת כדי לגרום ALI במודל מכרסם קטן. השימוש LPS במקום חיידקים שלמים במודלים לבעלי חיים יש יתרונות. זהו תרכובת יציבה וטהורה, וניתן לאחסנם בצורה ליאופטוחה עד לשימוש. זהו ממריץ חזק עבור תגובות החיסונית מולדים באמצעות מסלול TLR4, הפעילות הביולוגית שלה עשוי בקלות להיות כמותית, הקלה טיטור של חומרת המחלה עם השגות טוב. יתר על כן, השימוש LPS הוכח לשמש מודל בטוח כדי לגרום ברונכיטיס חריפה במתנדבים בריאים אנושיים ובכך מאפשר תרגום מספסל למיטה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

המחברים רוצים להודות ליאן קליינר וסוזן שולץ על מתן תמיכה טכנית. המחברים מכירים בתמיכה המצוינת של מתקן הליבה של הזרם cy, בפקולטה לרפואה של אוניברסיטת בון. המחברים לא קיבלו מימון מארגון חיצוני כלשהו.  חלק מהנתונים שניתנו במקטע התוצאות ומתוארים באיור 3 כבר הוצגו בפרסום קודם8.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרקים 1 מ"לBD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב300013
מזרקים 10 מ"לBD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב309110
Anti-CD115 (c-fms) APCThermo Fisher, וולת'אם, MA, ארה"ב17-1152-80
Anti-CD11b (M1/70) - FITCThermo Fisher, וולת'אם, MA, ארה"ב11-0112-81
Anti-CD45 (30-F11) - eF450Thermo Fisher, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב48-0451-82
Anti-F4/80 (BM-8) - PE Cy7Thermo Fisher, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב25-4801-82
Anti-Gr1 (RB6-8C5)BD Biosciences, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב552093
Anti-Ly6C (HK1.4) PerCP-CY5.5Thermo Fisher, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב45-5932-82
Anti-Ly6G (1A8) APC/Cy7Bio Legend, סן דייגו, קליפורניה127623
בופרנורפין הידרוכלורידאינדיביור בריטניה בע"מ, ברקשייר, בריטניה
C57BL/6 עכברים, נקבה, 10 - 12 שבועותצ'ארלס ריבר, ווילמונגטון, מסצ'וסטס, ארה"ב
חרוזי APC של CaliBRITE (6µ m)BD Biosciences, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב340487
Canula 23 מד 1''BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב300800
Canula 26 מד 1/2''BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב303800
מסננת תאים 70 ומיקרו; mBD Biosciences, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב352350
קולגנאז סוג Iסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב1148089
Deoxyribonuclease IISigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בD8764 
תמיסת מלח פוספט בופר (PBS) של Dulbecco,סיגמא-אולדריץ' סטרילי, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בD8662
Dulbecco' s תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), ללא סידן כלורי ומגנזיום כלוריד, סטריליSigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בD8537
תמיסת חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA)Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בE7889
, 5 מ"לSarstedt, Nü mbrecht, גרמניה551579
סרום עגל עוברי (FCS)Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בF2442
ForcepsFine Science Tools, היידלברג, גרמניה11049-10
IsofluraneBaxter, Unterschleiß heim, גרמניה
קטמין הידרוכלורידסרומוורק ברנבורג, ברנבורג, גרמניה
ליפופוליסכרידים (LPS) מ- Escherichia coli O111:B4Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בL2630
LIVE / DEAD Fixable Dead Cell Green KitThermo Fisher, Waltham, MA, ארה"בL23101
חולדה מטוהרת נגד עכבר CD16 / CD32 (עכבר BD Fc Block ™), שיבוט 2.4G2BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב553141
מאגר ליזה של תאי דם אדומיםתרמו פישר, וולת'אם, MA, ארה"ב00-4333-57
RPMI-1640, עם L-גלוטמין ונתרן ביקרבונטסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בR8758
מספרייםכלי מדע עדין, היידלברג, גרמניה14060-09
נתרן אזיד (NaN3)סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בS2002
מספריים אביבייםכלי מדע עדין, היידלברג, גרמניה15018-10
מלקחייםלרקמות כלי מדע עדין, היידלברג, גרמניה11021-12
צינורותאפנדורף, המבורג, גרמניה30125150
קטטר ורידי, 22 מדB.Braun, Melsungen, גרמניה4268091B
קסילזין הידרוכלורידסרומוורק ברנבורג, ברנבורג, גרמניה
צינורות FACS

מקורות

  1. Fink, M. P. Animal models of sepsis. Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).
  2. Lu, Y. -C., Yeh, W. -C., Ohashi, P. S. LPS/TLR4 signal transduction pathway. Cytokine. 42 (2), 145-151 (2008).
  3. Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. Animal models of acute lung injury. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (3), 379-399 (2008).
  4. Rabelo, M. A. E., et al. Acute Lung Injury in Response to Intratracheal Instillation of Lipopolysaccharide in an Animal Model of Emphysema Induced by Elastase. Inflammation. 41 (1), 174-182 (2018).
  5. Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trübel, H., Wang, C. Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation. Toxicology. 304, 158-166 (2013).
  6. Rittirsch, D., et al. Acute Lung Injury Induced by Lipopolysaccharide Is Independent of Complement Activation. Journal of Immunology. 180 (11), Baltimore, Md. 7664-7672 (2008).
  7. D'Alessio, F. R., et al. CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury. The Journal of Clinical Investigation. 119 (10), 2898-2913 (2009).
  8. Ehrentraut, H., Weisheit, C., Scheck, M., Frede, S., Hilbert, T. Experimental murine acute lung injury induces increase of pulmonary TIE2-expressing macrophages. Journal of Inflammation. 15, 12(2018).
  9. Szarka, R. J., Wang, N., Gordon, L., Nation, P. N., Smith, R. H. A murine model of pulmonary damage induced by lipopolysaccharide via intranasal instillation. Journal of Immunological Methods. 202 (1), 49-57 (1997).
  10. Reutershan, J., Basit, A., Galkina, E. V., Ley, K. Sequential recruitment of neutrophils into lung and bronchoalveolar lavage fluid in LPS-induced acute lung injury. American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 289 (5), 807-815 (2005).
  11. Hoegl, S., et al. Capturing the multifactorial nature of ARDS - approach to model murine acute lung injury. Physiological Reports. 6 (6), (2018).
  12. Weisheit, C., et al. Ly6Clow and Not Ly6Chigh Macrophages Accumulate First in the Heart in a Model of Murine Pressure-Overload. PLoS ONE. 9 (11), (2014).
  13. Grommes, J., Soehnlein, O. Contribution of Neutrophils to Acute Lung Injury. Molecular Medicine. 17 (3-4), 293-307 (2011).
  14. Müller-Redetzky, H. C., Suttorp, N., Witzenrath, M. Dynamics of pulmonary endothelial barrier function in acute inflammation: mechanisms and therapeutic perspectives. Cell and Tissue Research. 355 (3), 657-673 (2014).
  15. Fujita, M., et al. Endothelial cell apoptosis in lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. International Archives of Allergy and Immunology. 117 (3), 202-208 (1998).
  16. Doyen, V., et al. Inflammation induced by inhaled lipopolysaccharide depends on particle size in healthy volunteers. British Journal of Clinical Pharmacology. 82 (5), 1371-1381 (2016).
  17. Stephens, R. S., Johnston, L., Servinsky, L., Kim, B. S., Damarla, M. The tyrosine kinase inhibitor imatinib prevents lung injury and death after intravenous LPS in mice. Physiological Reports. 3 (11), (2015).
  18. Yu, Y., Jing, L., Zhang, X., Gao, C. Simvastatin Attenuates Acute Lung Injury via Regulating CDC42-PAK4 and Endothelial Microparticles. Shock. 47 (3), Augusta, Ga. 378-384 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

החדרה תוך-קנה נשימהציטומטריה של זרימהשטיפה ברונכיאולביתניתוח דגימות דםקצירת רקמת ריאהצביעת FACSמודל עכברמינון LPS
גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.