מאמר שיטה

מערכת מטריצה תלת-ממדית פיברובלסט הישימה בשיטת היווצרות שפופרת אנדותל

7.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60304

⸱

26 בדצמבר 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Medical Oncology Department, Instituto Ramón y Cajal de Investigación Sanitaria (IRYCIS), CIBERONC, 2Department of Medical Oncology, Hospital Universitario Puerta de Hierro de Majadahonda, 3Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, Consejo Superior de Investigaciones Científicas - Universidad Autónoma de Madrid, CIBERONC, 4Department of Oncology & Pathology, Karolinska Institutet

במאמר זה

סיכום

מטרת שיטה זו היא להשיג פיברוההדף מטריצות 3D נגזר כפיגום טבעי עבור הבאים הסלולר assays. פיברותקיעות מורצת לוחית התרבות שטופלו מראש ומגורה עם חומצה אסקורבית ליצירת מטריקס. מטריצות מdecellularized וחסומות לתאים רלוונטיים לתרבות (למשל, תאי האנדותל).

תקציר

מטריצת החילוץ (ECM) היא פיגום תלת מימדי הפועל כתמיכה העיקרית בתאים ברקמות. מלבד תפקידה הקונסטרוקטיבי, ה-ECM משתתפת גם בהעברת תאים, התפשטות ובידול. פיברותקיעות הם הסוג העיקרי של תאים שינוי הסדר סיבים ECM וייצור. בסרטן, CAFs (סרטן הקשורים בגידולים) הם במצב הפעלה קבע, השתתפות שיפוץ ECM, הקלה על הגירה תא הגידול, ומגרה אנגיוגנזה הקשורות לגידול, בין התפקידים הפרו-tuמגניים אחרים. המטרה של שיטה זו היא ליצור מטריצה תלת ממדית עם הרכב סיבים דומה בתוך מטריצות vivo, באמצעות פיברותקיעות מונצח או כף s הראשי האנושי. פיברופיצוצים הם מתורבתים בלוחות מטופלים מראש של תרבות התא, גדל תחת גירוי חומצה אסקורבית. לאחר מכן, פיברותקיעות מוסרים ומטריצות חסומות עבור זריעת תאים נוסף. במודל ECM זה, ניתן להפעיל או לשנות לייצר סוגים שונים של מטריקס, אשר השפעותיו ניתן ללמוד בתרבות התא. מטריצות תלת-ממדית מעוצבות גם על-ידי אותות תאים, כגון אנזימים השפלות או מקושרים, שעשויים לשנות את התפלגות הסיבים. בהקשר זה, ניתן ללמוד אנגיוגנזה, יחד עם סוגי תאים אחרים כגון תאים סרטניים אפיתל.

מבוא

מטריצת החילוץ (ECM) היא מבנה דינאמי הקיים בכל סוגי הרקמה. הוא מורכב מחלבונים ופוליסכרידים היוצרים רשת של סיבים חיוניים עבור הדבקה, הגירה ותקשורת1. הרכב ECM משתנה בהתאם לרקמה. בעוד סוג-I קולגן הוא חלבון מבניים הנפוצות ביותר, סוגי קולגן II, III, V ו-XI ניתן למצוא גם ברקמות שונות2. Fibronectin שנוצר על ידי פיברותקיעות נדרש עבור הדבקה תא2. יתר על כן, יש מולקולות מבניות אחרות כמו אלסטין, קולטני למינציה ו פני השטח הנקרא אינטגרציה כי בתווך סיבים הרכבה הם ספציפיים רקמות ECM שונים2. ה-ECM ממלאת תפקיד חשוב כפיגום תאים ויכול להיות גם מעורב בתהליכים פיזיולוגיים ופתולוגיים1. חריגות ב-ECM הם נצפו בפתוגיות כגון סרטן, אשר משנה קומפוזיציה ECM ו/או הארגון שלה. בגידולים, ה-ECM מייצגת את המרכיב הלא-סלולארי של הסביבה המיקרוקומבית (TME), מרכיב סביבתי מורכב של רכיבי תאים כגון פיברותקיעות, תאי החיסון, תאי האנדותל, קרום הלב ומגוון גורמים מסיסים. ידוע כי TME מקדמת התקדמות הסרטן גרורות; סרטן הקשורים פיברותקיעות, כמו סוג תא השולט בסטרומה הגידול, לקחת חלק בתהליך זה3. בניגוד לפיברותקיעות רגילה, cafs נמצאים הפעלה קבועה, מראה הפרשה מוגברת של חלבונים ecm וגורמי גדילה (g., שינוי מקדם הצמיחה-β, tgf-β), כמו גם ביטוי גבוה יותר של כמה סמנים, כגון α-השריר חלקה אקטין (α-SMA)וחלבון ההפעלה פיברוהפיצוץ (fap עם זאת, ה-CAFs הם אוכלוסיית תאים הטרוגנית, המציגה רמות שונות של הפעלה או סימן ביטוי5. ניתן להניח כי אז הרכב והמבנה של מטריצות הנגזר של פיברוהפיצוץ יהיה תלוי במצב ומאפיינים בפיברוהפיצוץ.

בהקשר זה, המטרה של מתודולוגיה זו היא ליצור מודל מתאים ליצירת מבחנה מתאימה לדור ECM באמצעות המקבילה לקביעת vivo ECM. אנו מציעים גישה זו במסגרת מתודולוגיה להפריה חוץ גופית למחקרים נוספים של הפונקציות של תאי הגידול, כמו הגירה או העברה, מתווכת על ידי ECM. כמו הקבוצה שלנו פרסמה במקום אחר, CAFs ניתן להשיג מדגימות רקמה טרייה, אבל יש לציין כי ה-CAFs ' הישרדות בתרבות מוגבלת מספר המעבר הסלולרי שלהם מופחת6. בנוסף, התרבויות הראשיות של קפה שהוקמו מדגימות המטופלים ניתן להשתמש עבור יצירת מטריקס. מניפולציה של ביטוי גנים בפיברותקיעות היא גם דרך מעניינת לייצר מגוון מטריצות מבחנה כדי להעריך את ההשפעות האפשריות על הרכב מטריקס, כיוון סיבים, וכו '. לאורך הקווים האלה, הקבוצה שלנו דיווחה לאחרונה על התפקיד של חילזון המבטא פיברותקיעות בהרכב וכיוון הסיבים של מטריצות נגזרות שונות7.

יתר על כן, CAFs ו-ECM מעורבים במערכת כלי הדם, הן בדור הספינה והן במסגרת האגרטל החיצוני שכבה8. שיפוץ ECM גורם לאנגיוגנזה; מטריצה מטאלופרוטטיות (mmps) נראה כסוג האנזים החשוב ביותר לתרום לתהליך זה9,10. רקמת הרקמה של התאים הראשוניים היוצרים את ECMs, ECMS קרו, גורמי צמיחה שיורית הכלולים ECMS, אלסטיות מטריקס, ואת עובי מטריצה מתוארים כגורמים מעורבים הפעלת תא אנדותל11. בגידולים, היפוקסיה מגדילה את הנוקשות ECM ואת הדור של נבט האנדותל12. יתר על כן, כף s להפריש כלי דם אנדותל מקדם גידול (בתוספת) וטסיות הנגזר גורם הצמיחה (PDGF) המעוררים אנגיוגנזה בגידול סטרומה13. בתחום זה, ניתן להשתמש ביצירת מטריצות חוץ גופית לחקר תהליכי אנגיוגנזה או פעולת MMP בתנאים ניסיוניים שונים. כך, הרבייה מחוץ לתחום של מטריצה האנלוגית ביותר vivo יכול להיות כלי רב ערך כדי לחקור את תפקידה של ECM באנגיוגנזה או מיקרו-סביבתי אינטראקציות תאים.

גירוי של גידולים מתורבתים עם חומצה אסקורבית כדי לשפר את התצהיר מטריצה וליצור ECM היא דרך מקובלת של הפקת אנלוגית vivo מטריצות. שורות התאים מונצח הפיצוץ בקלות הם מופעלים על ידי גורמי גדילה מגוונים, כמו PDGF-BB, מקדם הגידול נמק-α (TNF-α) או TGF-β14. בתוך TME, כף s סינתזה סוג-I קולגן ו fibronectin כמרכיב העיקרי של ECM4. באופן דומה, מרכיבים אלה מצויים כמרכיבים מרכזיים של מטריצות שנוצרו על-ידי הפריה חוץ גופית (איור 1).

יש שונות במתודולוגיות מבחנה כדי לדמות בvivo ECM. השימוש של מנות תרבות מצופה עם תערובות של סיבים ECM הוארך בשנים האחרונות, אבל זה 2D הגישה הדרושים לשיפור מבנים תלת-ממד, כגון ג'לים מקושרות (g., מטריצות)1. תוכנית ההתקנה מסוג מטריקס הפכה לשיטה הסטנדרטית להדמיית מטריצה תלת-ממדית. פיאין הוא גם חלופה בעת יצירת מטריצות אך נכשלת במונחים של חוזק ועמידות של ECM1. קולגן משמש בשילוב עם רכיבי ECM אחרים לכפר על כמה בעיות הנ ל. עם זאת, אלה ג'ל קולגן טופס רשת חזקה עם סיבים שיכולים להיות מכוונים, אבל הם הטרוגנית מאוד, אשר יכול להיות בעיה בחזרות ניסוי1. עם זאת, יש להניח כי, בהתאם למטרת הניסויים, השימוש במטריצה או בהידרוג אחרים מתאים יותר (למשל, במחקרים של התכווצות מטריקס שבהם ניתן לזהות בקלות את התכווצות ג'ל).

החיסוני הפוטנציאלי של מטריצות שנוצר יכול להיות בעיה בניסויים עם סוגי תאים מסוימים. לכן, כדי להפחית את האפשרות של תגובות החיסון בשל התאים ECM לייצר בעת שימוש בשיטה שלנו, מטריצות הם decellularized ושטף, למרות הסרת קטע התא לא יכול להיות סך15. ECM האידיאלית צריכה להיות תואמת לתרבות התאים ומסוגלת לתקשר ולהגיב לאותות תאים. ההליך שלנו מאפשר הקדמה של שינויים ללא קושי במהלך ייצור ECM (למשל, הוספת פיברוהפיצוץ גורמי צמיחה מעוררים).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

דגימות הרקמה האנושית הושגו באישור מועצת האתיקה של בית החולים רמון י קאחאל, מדריד.

1. הכנת פתרונות

  1. להכין 0.2% הפתרון ג'לטין: להוסיף g 1 של ג'לטין כדי 500 mL של PBS. הקלזו את הפתרון ושמרו ב -4 ° c. סנן עם מסנן יקרומטר 0.22 לפני השימוש.
  2. הכינו 1% גלוטאלדהיד: להוסיף 1 מ ל של 25% הפתרון מניות glutarאלדהיד כדי 24 מ ל של PBS. סנן עם מסנן יקרומטר 0.22 לפני השימוש.
  3. להכין 1 M אתנואנדואמין: להכין פתרון ethanolamine עם מסנן H2O סטרילי עם מסנן 0.22 יקרומטר לפני השימוש.
    הערה: כאשר ethanolamine מסופק עם כובע אבטחה, המחט מזרק יהיה צורך.
  4. להכין חומצה אסקורבית: להוסיף 0.1 mL של 50 mg/mL מניות פתרון חומצה אסקורבית (רגיש לאור) כדי 100 mL של בינוני.
  5. להכין מאגר לפירוק: להכין PBS 0.5% טריטון 100X עם 20 ננומטר של NH4הו. הוספת NH4או ימינה לפני השימוש.
  6. הכנת הערוץ הPBS/דלקת: לדלל את העט/דלקת המניה כדי 100 U/mL עט ו 100 μg/mL דלקת.
  7. הכן את DMEM עם 10% FBS: הוסף 10% FBS ל 500 mL של DMEM. תוספת עם 100 U/mL פניצילין, 100 μg/mL סטרפטומיצין, 0.1 mg/mL Normocin ו0.25 μg/mL אמפוריטיצין B.
  8. הכינו 2% החום BSA הלחץ: להוסיף 2 גרם של BSA כדי 100 mL של מים סטריליים. חם במים רותחים במשך 7 דקות.
  9. הכן FBS עם אנטיביוטיקה: תוספת FBS עם 200 U/mL פניצילין, 200 μg/mL סטרפטומיצין, 100 μg/mL gentamicin ו 2.5 g/mL אמפוריטיצין B.

2. הכנה לתרבות התאים

  1. קו בתאי פיברופיצוצים
    1. תרבות רקומביננטי טלומראז וחק הגידול המנוכר העורלה האדם (BJ-htert, ביטול האישורים atcc-4001) ב dmem עם 10% fbs ולשמור ב 37 ° צ' ו 5% CO2.
  2. תאים אנדותל
    1. התרבות האנושית וריד הטבור תאים (HUVECs, ATCC PCS-100-013) ב EBM-2 בינוני המכיל 2% FBS ולשמור ב 37 ° צ' ו 5% CO2.
  3. התרבות הראשית פיברובלסט
    הערה: להקמת קפה ותרבות, הפרוטוקול שפורסם בעבר על ידי הקבוצה שלנו הופיע לאחר6.
    1. בקצרה, לחתוך דגימות רקמות לחתיכות קטנות של כ 2-3 מ"מ3 ו זרע ב fbs עם ריכוז גבוה של אנטיביוטיקה.
    2. כאשר הפיברוהפיצוצים הראשונים הופיעו, להחליף בינוני עם מדיום FBM עבור תחזוקת תאים.
      הערה: בהתאם מקור הרקמה, תרביות תאים יכול להיות מזוהם בקלות. שטוף דגימות ב-PBS בתוספת אנטיביוטיקה, עם רקמה מזוהמת מאוד (למשל, נקודתיים6) ולנער עבור 30-45 דקות.

3. פיברובלסט-מטריצות תלת-ממד נגזרות (מותאם מ-Castelló-Cros וקוקירמן16)

  1. הוסף 2 מ ל של 0.2% הפתרון ג'לטין לכל טוב של 6-היטב צלחת הדגירה עבור 1 h ב 37 ° צ' או לילה ב 4 ° c.
  2. ולשטוף את זה ב 2 מ ל של PBS.
  3. הוסף 2 מ ל של 1% גלוטרלדהיד ו הדגירה עבור 30 דקות ב RT. גלוטרלדהיד תהיה הג חוצה קישור.
  4. ולשטוף את הבארות ב 2 מ ל של PBS עבור 5 דקות. חזור 3 פעמים
  5. הוסף 2 מ ל 1 מתוך ethanolamine ו דגירה עבור 30 דקות ב RT. Ethanolamine יפעל כדי לחסום את הגלוטרלדהיד הנותרת.
  6. מטפי את ethanolamine ולשטוף בארות 2 מ ל של PBS עבור 5 דקות.. חזור 3 פעמים
  7. הוסף 1 מ ל של DMEM עם 10% FBS. אם המדיום באופן מיידי הופך ורוד, להסיר את המדיום, לשטוף 2 mL של PBS ולהוסיף שוב 1 mL של DMEM זיכרון עם 10% FBS.
  8. זרע 1 מ ל של הבולם פיברוהפיצוץ, עם 5 x 105 תאים בכל טוב. נפח כולל בכל באר יהיה 2 מ ל.
  9. הגישה לתאי תרבות עד 100% מגיעה למפגש. לאחר מכן להסיר את המדיום ולהחליף עם DMEM עם 10% FBS עם 50 μg/mL חומצה אסקורבית טיפול נוסף אם נעשה שימוש.
  10. החלף בינוני עם DMEM טרי עם 10% FBS ו 50 μg/mL חומצה אסקורבית כל יומיים עבור 6 ימים.
    הערה: אם נעשה שימוש בטיפול נוסף (לדוגמה, PDGF-BB, tgf-β ו/או גורמים לגידול אחרים), הוסף אותם באותו היום כמו טיפול בחומצה אסקורבית נוסף.
  11. יומיים לאחר טיפול החומצה האסקורבית האחרון, להסיר את המדיום ולשטוף 2 מ ל PBS.
  12. הוסיפו באיטיות 1 מ ל של מאגר הליזה, שחומם מראש ב-37 ° c, לכל היותר. מודטה עבור 5-10 דקות בשעה RT עד הפיברוהכדורים הם למטה (הנצפה מתחת למיקרוסקופ).
  13. בזהירות ומבלי להסיר את מאגר הליזה, להוסיף 2 מ ל של PBS. ואז לאכול כ 2.5 מ ל של PBS. חזור פעמיים על סך של שלוש שטיפות.
  14. בסופו של דבר, להסיר 2.5 mL של PBS ולהוסיף 2 מ ל של PBS עם עט/דלקת (100 U/mL ו 100 μg/mL, בהתאמה). החותם בסרט והמשך ב -4 ° c עד 3 חודשים.
    הערה: בהתאם לניסוי, אחסון לטווח ארוך של מטריצות שנוצרו עשוי להשפיע על התוצאות. אנו ממליצים להשתמש באמצעות מטריצות בהקדם האפשרי, ואפילו יותר כך שאם הניסוי כרוך בזריעת תאים, בשל השפלה אפשרית בחלבון. אם מטריצות משמשות עבור assays מבניים, כגון תצפית קולגן, מטריצות ניתן לתקן ומאוחסן לתקופות ארוכות. פרוטוקול זה מצוין לצלחת התרבות 6-היטב. לוחות אחרים ניתן להשתמש, אבל כרכים מגיבים וריכוז ההשעיה התא צריך להיות מחושבים מחדש על פי אזור טוב.

4. שיטת היווצרות הצינור

  1. הגדל את תאי HUVEC ב-EBM-2 2% FBS עד למפגש מרבי.
  2. החלף בינוני באמצעות EBM-2 ללא FBS עבור 8 h.
  3. הכן מטריצות לפני זריעת תאים.
    1. הסרת מטריצות מהמקרר והמקום עבור 1 h ב RT.
    2. מטריצות בלוק על-ידי הוספת 2 מ ל של חום-2% BSA. מודטה 1 h ב 37 ° c.
    3. ולשטוף ב 2 מ ל של PBS.
  4. זרעי 2 x 105 תאים huvec ב-fbs-דלה בינונית על כל באר של 6-היטב צלחת מצופה בעבר עם 3d פיברובלסט מטריצות נגזר.
  5. מודטה תאים אנדותל ב 37 ° c עבור 16 h.
  6. בדוק את מבנה המבנה כמו שפופרת תחת מיקרוסקופ שדה בהיר סטנדרטי בהגדלה של 20-40x.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

PDGF-BB גירוי פיברופיצוצים ליצור ECM עבה יותר. הררה ו-al. הראה כיצד ממריצים את הטריתקיעות של PDGF שיצרו מטריצה עבה יותר וכיוון סיבים גבוהים יותר7. BJ-hTERT פיברותקיעות היו מודחים עם או בלי PDGF ואזורים הנציג נצפתה הראה התפלגות התא מיושר יותר בתוך מטריצות המיוצר על-ידי PDGF-מגורה הפיצוץ (איור 1א). קולגן I ו-fibronectin חלבון הביטוי הוגדלה בתוך מטריצות נגזר של PDGF-מגורה פיברומופיצוצים (איור 1

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מטריצות ניתן לייצר עם פיברופיצוצים מונצח או תרבויות העיקרי פיברוהפיצוץ. פיברותקיעות קל לשמור בתרבות מתורבת עם שיעור צמיחה גבוהה התנגדות מתח. הם יכולים אפילו להיות מבודדים מרקמות שלאחר המוות3, למרות זיהום יכול להיות מגבלה, בהתאם למקור הרקמה.

מודל 3D-מטריקס כאן מציע מערכת חדשנית ויעילה למחקר בהצלחה הרכב ECM וכיוון הסיבים. הוא מתאים גם לניתוחים של מצב הפעלה פיברוהפיצוץ, ביטוי גנטי/חלבון, אינטראקציות עם סוגי תאים אחרים, וכו '. חשוב להדגיש כי מטריצות שנוצרו עם פיברופיצוצים מ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים לא מצהירים. על ניגוד אינטרסים

תודות

הפיתוח של פרוטוקול זה נתמך על ידי PI12/02037, PI15/02101, PI17/01847, PI18/01034 ו-RD12/0036/0041 מהמכון דה סלרוד קרלוס השלישי; על ידי Fondo אירופo דה Desarrollo אזורית (פדר); על ידי "CIBER de Cáncer", CB16/12/00273 ו CB16/12/00446, מן המכון דה סלרוד קרלוס השלישי-פדר; ועל ידי הדרך הטובה AECC (גישה רבת-פנים כדי למקד את סרטן הלבלב). כריסטינה פוניה היא מקבל חוזה של מיגל סרוט, ממכון דה סלרוד קרלוס השלישי. מ. Eaude עזר עם הטקסט באנגלית. אנו מודים לחברי המעבדה על עזרה וייעוץ במהלך המחקר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אמוניום הידרוקסיד (NH<תת>4OH)RothA990.1
Amphotericin-BCorning30-003-CF
אלבומין סרום בקר (BSA)SigmaA7906-50G
מדיום הנשר השונה של Dulbecco (DMEM)קורנינג10-014-CVR
מדיום בזאלי אנדותל (EBM)LonzaCC-3121יש להוסיף תוספי תזונה לפני השימוש
תוספי תזונה בינוניים בסיסיים של תאי אנדותל (EGM-2)LonzaCC-4176
אתנולמיןסיגמא411000-100ML
סרום בקר עוברי (FBS)BiowestS181B-500מנוטרל בחום לפני השימוש
Fibroblast Growth Basal Medium (FBM)LonzaCC-3131הוסף תוספי תזונה לפני השימוש
תוספי תזונה וגורמי גדילה בינוניים של פיברובלסטים (FGM-2)לונזהCC-4126
ג'לטין מעור בקרסיגמאG9391-100G
גלוטראלדהידסיגמאg5882
L-חומצה אסקורביתסיגמאA92902-100Gלונזה רגיש לאור
BE17-605E
נורמוציןInvivogen3ANT-NR-2
עיפרון/סטרפטומיצין (עט/סטרפטוקוק)Gibco15140122
פוספט חוצץ מלח (PBS)קורנינג21-040-CVR
Triton X100Roth3051
טלומראז רקומביננטי טרנספקט פיברובלסטים אנושיים מורחיים (BJ-hTERT)ATCCATCC CRL-4001
וריד טבור אנושי תאי אנדותל (HUVECs)ATCCPCS-100-013
L-גלוטמין

מקורות

  1. Frantz, C., Stewart, K. M., Weaver, V. M. The extracellular matrix at a glance. Journal of Cell Science. 123 (24), 4195-4200 (2010).
  2. Kular, J. K., Basu, S., Sharma, R. I. The extracellular matrix: Structure, composition, age-related differences, tools for analysis and applications for tissue engineering. Journal of Tissue Engineering. 5, (2014).
  3. Kalluri, R. The biology and function of fibroblasts in cancer. Nature Reviews Cancer. 16 (9), 582-598 (2016).
  4. Erdogan, B., Webb, D. J. Cancer-associated fibroblasts modulate growth factor signaling and extracellular matrix remodeling to regulate tumor metastasis. Biochemical Society Transactions. 45 (1), 229-236 (2017).
  5. Erez, N., Truitt, M., Olson, P., Hanahan, D. Cancer-Associated Fibroblasts Are Activated in Incipient Neoplasia to Orchestrate Tumor-Promoting Inflammation in an NF-kB-Dependent Manner. Cancer Cell. 17 (2), 135-147 (2010).
  6. Herrera, M., et al. Colon Cancer-associated Fibroblast Establishment and Culture Growth. Bio-protocol. 6 (7), e1773(2016).
  7. Herrera, A., et al. Endothelial cell activation on 3D-matrices derived from PDGF-BB-stimulated fibroblasts is mediated by Snail1. Oncogenesis. 7 (9), 76(2018).
  8. MacColl, E., Khalil, R. A. Matrix Metalloproteinases as Regulators of Vein Structure and Function: Implications in Chronic Venous Disease. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 355 (3), 410-428 (2015).
  9. Shian, S. G., Kao, Y. R., Wu, F. Y. H., Wu, C. W. Inhibition of Invasion and Angiogenesis by Zinc-Chelating Agent Disulfiram. Molecular Pharmacology. 64 (5), 1076-1084 (2003).
  10. Neri, S., et al. Cancer cell invasion driven by extracellular matrix remodeling is dependent on the properties of cancer-associated fibroblasts. Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. 142 (2), 437-446 (2016).
  11. Du, P., Subbiah, R., Park, J. H., Park, K. Vascular morphogenesis of human umbilical vein endothelial cells on cell-derived macromolecular matrix microenvironment. Tissue Engineering. (Part A), (2014).
  12. Bignon, M., et al. Lysyl oxidase-like protein 2 regulates sprouting angiogenesis and type IV collagen assembly in the endothelial basement membrane. Blood. 118 (14), 3979-3989 (2011).
  13. Huang, L., Xu, A. M., Liu, S., Liu, W., Li, T. J. Cancer-associated fibroblasts in digestive tumors. World Journal of Gastroenterology. 20 (47), 17804-17818 (2014).
  14. Herrera, A., Herrera, M., Peña, C. The emerging role of Snail1 in the tumor stroma. Clinical and Translational Oncology. 18 (9), 872-877 (2016).
  15. Sheng, Y., Fei, D., Leiiei, G., Xiaosong, G. Extracellular Matrix Scaffolds for Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Current Stem Cell Research & Therapy. 12 (3), 233-246 (2017).
  16. Castelló-Cros, R., Cukierman, E. Stromagenesis during tumorigenesis: characterization of tumor-associated fibroblasts and stroma-derived 3D matrices. Methods in Molecular Biology. 522, 275-305 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

HUVECPDGF

מאמרים קשורים