מאמר שיטה

תיוג והדמיה של שלטי עמילואיד ברקמת המוח באמצעות פוליפנול טבעי כורכומין

DOI:

10.3791/60377

⸱

1 בנובמבר 2019

 ,  ,  ,  , 
1Field Neurosciences Institute, Ascension St. Mary's Hospital, 2Field Neurosciences Institute Laboratory for Restorative Neurology, Central Michigan University, 3Program in Neuroscience, Central Michigan University, 4Department of Psychology, Central Michigan University, 5Department of Health Sciences, Saginaw Valley State University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כורכומין הוא fluorophore האידיאלי עבור תיוג והדמיה של שלטי החלבון ביתא עמילואיד ברקמת המוח בשל הכריכה המועלת שלה לחלבון ביתא עמילואיד, כמו גם הדמיון המבני שלה עם אחרים מאגד עמילואיד מסורתי צבעים. זה יכול לשמש התווית ביתא עמילואיד התמונה לוחיות החלבון ביעילות רבה יותר מאשר שיטות מסורתיות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התצהיר של חלבון בטא עמילואיד (Aβ) בחללים נוספים ו תאיים הוא אחד הפתווגיות בעלי ההיכר של מחלת אלצהיימר (AD). לכן, זיהוי נוכחות של Aβ ברקמת המוח לספירה הוא כלי רב ערך לפיתוח טיפולים חדשים כדי למנוע את ההתקדמות של AD. מספר כריכת עמילואיד הקלאסי, fluorochrome, הדמיה בדיקה, ו נוגדנים ספציפיים Aβ שימשו כדי לזהות היסטלוכימית Aβ ברקמת המוח לספירה. השימוש תרכובות אלה עבור זיהוי Aβ הוא יקר זמן רב. עם זאת, בגלל פעילות פלורסנט אינטנסיבי שלה, אהדה גבוהה, וספציפיות עבור Aβ, כמו גם קווי דמיון מבניים עם כריכת עמילואיד מסורתיים הצבעים, כורכומין (Cur) הוא מועמד מבטיח תיוג והדמיה של שלטי Aβ בנתיחה שלאחר המוות . רקמת מוח זה פוליפנול טבעי מן העשב Curcuma longa. במחקר הנוכחי, שימש נוכחי תווית היסטAβ לוחיות שלטים ממודל העכבר הגנטי של מחלת אלצהיימר 5x משפחתית (5Xאופנה) ומרקמת האדם האנושי בתוך דקה. יכולת התיוג של נוכחי הושווה לצבעי עמילואיד קונבנציונליים, כגון thioflavin-S (Thio-S), קונגו האדום (CR), ו פלואורו-ג'ייד C (FJC), כמו גם נוגדנים ספציפיים Aβ (6E10 ו A11). הבחנו כי הנוכחי הוא הדרך הזולה ביותר והמהירה ביותר כדי לתייג ולצלם את הפלאק Aβ בהשוואה לצבעים אלה קונבנציונאלי והוא דומה לנוגדנים ספציפיים Aβ. בנוסף, הוא נקשר עם רוב המינים Aβ, כגון oligomers ו fibrils. לכן, הנוכחי יכול לשמש כסוכן החסכוני ביותר, פשוט, ומהיר fluorochrome לזיהוי עבור הפלאק Aβ.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת אלצהיימר (AD) היא אחת הנפוצות ביותר, הקשורות לגיל, הפרעות נוירולוגיות מתקדמת ואחד הגורמים המובילים של המוות ברחבי העולם1,2. למידה, זיכרון וליקויי קוגניציה, יחד עם הפרעות נפשיות, הן התסמינים השכיחים הנראים לספירה3. למרות האטיולוגיה של AD לא היה מובהר לחלוטין, הראיות הגנטיות, הביוכימי, וניסיוני מציין כי ההצהרה הדרגתית של Aβ הוא ביוארקר מוחלט עבור AD4. חלבון זה מקופל מצטבר בחללים תאיים ומחלוניים והוא נחשב להיות מעורב באובדן סינפטית, מוגברת דלקת נוירו, ו ניוון נוירוטיות באזורי היפוקמאל במוח המושפע על ידי AD5. לכן, גילוי היסטכימיות של Aβ ברקמת AD הוא צעד ראשון מכריע בפיתוח לא רעילים, תרופות נגד עמילואיד כדי למנוע התקדמות AD.

במהלך העשורים האחרונים, מספר צבעים ונוגדנים שימשו על ידי מעבדות מחקר רבות כדי תווית ותמונה Aβ פלאק ברקמת המוח, אבל כמה שיטות אלה הם זמן רב, צבע או נוגדנים בשימוש הם יקרים, הדורשים מספר אביזר כימיקלים. לכן, פיתוח של אמצעי זול לגילוי של שלטי Aβ במוח המודעה יהיה כלי מבורך חדש. מעבדות רבות החלו להשתמש Cur, מבטיח אנטי עמילואיד טבעי polyphenol, עבור תיוג והדמיה Aβ, כמו גם סוכן טיפולי עבור AD6,7,8,9. ההידרופוטוליטי והטבע הלינופילית, קווי דמיון מבניים עם צבעי עמילואיד קלאסיים, פעילות פלורסנט חזקה, כמו גם זיקה חזקה לאגד עם Aβ עושה את זה במיוחד fluorophore לתיוג והדמיה של שלטי Aβ ברקמת לספירה10 . נוכחי נקשר עם Aβ-לוחות oligomers ונוכחותו מזוהה גם בחללים תאיים7,11,12,13. בנוסף, זה הוכח כי כמויות מינימליות (1-10 ננומטר) של נוכחי יכול לסמן Aβ שלטים במחלת אלצהיימר משפחתית 5x (5Xתחביב) רקמת המוח7. למרות הריכוזיות 1 ננומטר אינו מספק את עוצמת הקרינה האופטימלית לספירת שלטים Aβ, 10 ננומטר או ריכוז גבוה יותר של נוכחי עושה. רן ועמיתיו14 דיווחו כי מינונים נמוכים כמו 0.2 ננומטר של difluoroboron-לעבוד על הvivo Aβ פיקדונות כמעט כמו גם בדיקה אינפרא אדום. אם מינון זה מספיק כדי תווית Aβ שלטים ברקמה עדיין לא ברור. רוב המחקרים הקודמים השתמשו 20-30 דקות לצביעת לוחיות Aβ באמצעות Cur, אך כתמים אופטימליים עשוי לדרוש הרבה פחות זמן.

המחקר הנוכחי תוכנן כדי לבדוק את הזמן המינימלי הנדרש על ידי Cur כדי תווית Aβ פלאק ברקמת המוח לספירה וכלה להשוות את הרגישות לתיוג והדמיה של שלטי Aβ ברקמת המוח של העכברים 5xFAD לאחר הצביעת עם נוכחי עם קונבנציונאלי אחרים Aβ-כריכת צבעים, כגון Thioflavin-S (Thio-S), קונגו האדום (CR), ו פלואורו-ג'ייד C (FJC). היכולת תיוג Aβ של אלה הצבעים הקלאסיים עמילואיד מחייב הושווה עם כתמים נוכחי ב פרפין-מוטבע וקריוסטט מקטעים המוח ילתית מן העכברים 5xfad מן הבוגרת התואמת האדם לספירה ושליטה רקמת המוח. הממצאים מראים כי תוויות Cur שלטים Aβ באופן דומה לנוגדנים ספציפיים Aβ (6E10) בינוני טוב יותר מאשר Thio-S, CR, או FJC. בנוסף, כאשר זריקות הצפק של Cur לעכברים 5xFAD היו מנוהלים עבור 2-5 ימים, זה חצה את מחסום הדם-מוח מאוגד עם שלטים Aβ7. מעניין, ריכוזי nanomolar של נוכחי שימשו תוויות ותמונה Aβ פלאק ברקמת מוח 5xfad7,14. יתר על כן, שלטים מורפולוגית ברורים Aβ, כגון הליבה, neuritic, לפזר, ונשרף-out שלטים ניתן לתייג על ידי נוכחי ביעילות יותר מאשר עם כל אחד האחרים מאגד עמילואיד בעלי צבע7. בסך הכל, הנוכחי יכול להיות מוחל על תווית ותמונה Aβ פלאק ברקמת המוח לאחר המוות של AD מודלים בעלי חיים ו/או רקמת AD האדם בצורה קלה וזולה, כחלופה אמינה לנוגדנים ספציפיים Aβ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על-ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים ולשימוש (ACUC) של אוניברסיטת סאטינואו וואלי סטייט. רקמת האדם הושגה מבנק המוח הוקמה במכון הבריאות של השמש באנר באריזונה15,16.

1. פרזיה של בעלי החיים

  1. הכן את מאגרי התיקונים והפרזיה.
    1. להכין 0.1 M נתרן פוספט מאגר על ידי הוספת 80 g של נתרן כלוריד (הנאל), 2 גרם של אשלגן כלוריד (kcl), 21.7 g של ניתרן מימן פוספט (Na2hpo4· 7h2O), 2.59 g של אשלגן ניתרן ימן פוספט (KH2PO4 ), מים מזוקקים כפולים כדי לעשות סכום של 1 L.
    2. הכינו 4% פאראפורמלדהיד.
      1. הוסף 40 g של פאראפורמלדהיד ל 1 L של PBS (0.1 M, pH 7.4).
      2. מחממים את התמיסה לחצי הדרך לכביש 60 עד 65 ° צ' ומערבבים בעזרת מערבב מגנטי.
        הערה: הטמפרטורה לא תעלה על 65 ° c.
      3. להוסיף מספר טיפות NaOH (1 N) עם טפטפת לפזר את החצי הראשון לחלוטין.
      4. לסנן את הפתרון בכיוון הבינוני עם נייר סינון בינוני עד דק ולאחסן ב-4 ° c.
        הערה: הפתרון טוב לחודש.
  2. בצע הרדמה לבעלי חיים ופרזיה.
    הערה: שנים עשר חודשים-B6SJL-Tg APP SwFlLon, PSEN1 * M146L * L286V, 1136799Vas/J (5 × האופנה) גיל-התאמה עכברים שליטה (n = 6 לכל קבוצה) נרכשו מספקים והתרבו בבית החיות של האוניברסיטה הממלכתית של Saginaw. הגנוהקלדה אושרה על ידי תגובת שרשרת פולימראז (PCR) כמתואר בעבר7. האדם רקמת המוח האנושית כוללת לאחר המוות רקמת המוח לספירה והגיל התאמה רקמת שליטה.
    1. להפחית את בעל החיים עם סוכן הרדמה מתאים, כגון נתרן פנטוברביטל (390 mg/ק"ג משקל הגוף), או תערובת קטמין/xylazine (עד 80 מ"ג/ק"ג משקל הגוף קטמין ו 10 מ"ג/ק"ג משקל הגוף xylazine) על ידי הזרקה הצפק (27 G המחט 1 מזרק mL). בדוק את רמת ההרדמה. על ידי צביטה בבוהן אם בעל החיים אינו מגיב, אז הוא מוכן לניתוח פרזיה.
    2. המקום בעלי חיים מורדם במצב פרקדן על מגש הניתוח זלוף ושימוש במספריים קטנות איריס לעשות חתך לקצה האחורי של החדר השמאלי.
    3. הכנס מחטים של 22 G זלוף אל החדר השמאלי ולעשות חתך קטן על האוריקל הנכון להסיר נוזל זלוף מהגוף. השתמש מערכת ההזנה הכבידה המזון כדי לאפשר את נוזלי הקרח קר זלוף (0.1 M PBS, pH 7.4) לזרום עבור 5-6 דקות (שיעור הזרימה 20 על 25 מ ל/דקה).
      הערה: כבד בהיר הוא האינדיקטור לפרזיה אופטימלית.
    4. העבר את שסתום החוצץ לתמיסת קרח קר 4% פאראפורמלדהיד לתיקון ואפשר לו לזרום במשך 8-10 דקות.
      הערה: רעידות ואחריו גפיים מוקשח או נוקשה הם אינדיקטורים של קיבעון טוב.
    5. להסיר את המוח מהגולגולת באמצעות מספריים. באמצעות מרית, לאסוף את המוח ולמקם אותו בבקבוקון של 4% בתחתית (לפחות 10x נפח המוח) ולאחסן ב 4 ° c עד שימוש נוסף.

2. עיבוד רקמה

  1. . חתכי את חלקי הקריוסטט
    1. העברת המוח לפתרונות מדורגים (10%, 20% ו -30%) ולאחסן ב-4 ° c עבור 24 שעות כל אחד, עד השימוש.
    2. באמצעות קריוסטט ב-22 ° c, גזור 40 μm-עבה סעיפים. לאסוף 10-20 סעיפים לכל טוב בצלחת 6 היטב מלא עם PBS ו נתרן אזיד (0.02%).
  2. פרפין להטביע את מקטעי העכבר ואת רקמת המוח האנושי.
    1. עבור מקטעי פרפין, הצבת רקמת המוח לאחר והוא 24 h לאחר קבוע עם האלכוהול מדורגים (50%, 70%, 90%) עבור 2 h כל אחד, ואחריו 100% אלכוהול 2x עבור 1 h כל אחד), ולאחר מכן עם קסילן 2x עבור 1 h כל אחד בטמפרטורת החדר.
    2. לחדור את הרקמה עם קסילן-פרפין (1:1) 2x עבור 1 h ב 56 ° צ' בבקבוקון זכוכית חרוט מכוסה רדיד אלומיניום.
    3. הישאב את הרקמה בפרפין (56 ° c) עבור 4 עד 6 שעות.
    4. גזור 5 μm-חלקים עבים באמצעות מיקרוטומה רוטרי בטמפרטורת החדר ומניחים אותם באמבט מים הרקמה ב 45 ° c.
  3. היסטכימית לסמן את הפלאק Aβ בסעיפים קריוסטט עם Cur.
    1. לשטוף את הסעיפים משלב 2.1.2 עם PBS (pH 7.4) 3x עבור 5 דקות כל אחד.
    2. לטבול את הסעיפים ב 70% אתנול עבור 2 דקות בטמפרטורת החדר.
    3. התמוססות מניות Cur (1 מ"מ) ב מתנול ו לדלל עם 70% אתנול כדי להשיג ריכוז העבודה הסופי של 10 μM.
    4. לטבול את המקטעים עם פתרון נוכחי עבודה עבור 1-5 דקות על טמפרטורת החדר על שייקר ב 150 סל ד.
    5. להיפטר פתרון נוכחי ולשטוף עם 70% אתנול 3x עבור 2 דקות כל אחד.
    6. הניחו את המקטעים על שקופיות זכוכית מצופות פולי-L-ליזין והבהר עם שמיכות באמצעות מדיה הרכבה אורגנית, כגון קסילן (DPX).
    7. מבט תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטית באמצעות 480/550 מסנני עירור/פליטה ננומטר.
  4. היסטכימית תווית הפלאק Aβ ב פרפין-עכבר מוטבע מקטעים המוח האנושי עם Cur.
    1. מחלקים את חתכי הרקמה משלב 2.2.4 עם קסילן 2x עבור 5 דקות כל אחד בטמפרטורת החדר.
    2. הידרוקסיד מחדש עם פתרונות אלכוהול מדורגים (100%, 80%, 70%, 50% עבור 1 דקות כל אחד) עם מים מזוקקים 2x עבור 5 דקות כל אחד בטמפרטורת החדר.
    3. קטעי כתם עם Cur (10 μM) עבור 10 דקות בטמפרטורת החדר בחושך, רועד ב 150 סל ד. שטוף עם 70%, 90%, ו 100% אלכוהול עבור 2 דקות כל אחד.
    4. ברור עם קסילן 2x עבור 5 דקות כל מכסה לכסות עם DPX.
    5. המחש תחת מיקרוסקופ של זריחה כפי שהוזכר בשלב 2.3.7.
  5. לוקליזציה עם נוגדן Aβ בפלאק Aβ ו oligomers.
    1. כביסה מקטעים קריוסטט משלב 2.1.2 עם PBS 3x ב 12 צלחת הבאר.
    2. לחסום את הסעיפים עם 10% סרום עז רגיל (NGS) הומס PBS עם 0.5% טריטון-X-100 בטמפרטורת החדר עבור 1 h.
    3. מחק את פתרון החסימה. מודלת את הסעיפים עם נוגדנים ספציפיים Aβ (6E10 או A11, מדולל 1:200) מומס פתרון חסימת טרי המכיל 10% NGS ו 0.5% טריטון-X100 לילה ב 4 ° c ב שייקר ב 150 rpm.
    4. להיפטר פתרון נוגדן לשטוף את הסעיפים עם PBS 3x עבור 10 דקות כל אחד.
    5. דגירה עם תג נוגדן משני עם fluorophore אדום (למשל, אלקסה 594) עבור 1 h בטמפרטורת החדר בחושך.
    6. לשטוף עם PBS 3x עבור 10 דקות כל אחד.
    7. לשטוף עם 70% אלכוהול 1x.
    8. מודיית את הסעיפים עם Cur (10 μM) עבור 5 דקות בטמפרטורת החדר.
    9. לשטוף עם 70% אלכוהול 3x עבור 1 דקות כל אחד.
    10. מייבשים עם 90% ו 100% אלכוהול עבור 1 דקות כל אחד, ברור עם xy2x עבור 5 דקות כל אחד, ו הר על שקופיות באמצעות DPX.
    11. המחש באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטית עם מסנני עירור/פליטה מתאימים לאותות האדומים והירוקים.
    12. עבור Aβ colocalization לוקליזציה, כתם את הסעיפים באמצעות Aβ-נוגדן (6e10), restain עם Cur בטמפרטורת החדר בחושך עם טלטול ב 150 סל ד, וכתמים עם או hoechst-33342 (1 מ"ג/ml) ו/או dapi (1ug/ml) עבור 10 דקות בטמפרטורת החדר ב הכהה עם טלטול ב 150 סל ד. לשטוף עם PBS 3x.
    13. לצלם תמונות עם מסננים אדום, ירוק, כחול עם מטרה 100x (הגדלה מלאה 1, 000x).
  6. תווית Aβ פלאק עם Thio-S, CR, ו-FJC.
    הערה: פרוטוקולים מפורטים עבור התיוג Thio-S ו-CR דווחו בעבר7.
    1. עבור כתמים FJC, לשטוף את הקטעים צף חופשי המתקבלים משלב 2.1.2 עם PBS 3x עבור 5 דקות כל אחד.
    2. מניחים את הסעיפים בצלחת 12 ומכתים עם FJC (0.001%) בטמפרטורה של 10 דקות בחשיכה בטמפרטורת החדר.
    3. להיפטר הפתרון FJC ולשטוף עם PBS 3x עבור 5 דקות כל אחד.
    4. דגירה עם אמוניום כלוריד (NH4Cl, 50 mM מומס ב-PBS) עבור 10 דקות בטמפרטורת החדר.
    5. להיפטר NH4Cl פתרון ולשטוף עם PBS 3x עבור 5 דקות כל אחד.
    6. בעקבות השלבים בסעיף 2.4, מייבשים עם פתרונות אלכוהול מדורגים, ברור, הר, ולהציג תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטית באמצעות 450/520 עירור/פליטה ננומטר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מדבקות כורכומין Aβ שלטים בתוך דקה. כאשר אנו מוכתם רקמות 5xFAD עם Cur, מצאנו כי התווית הנוכחי Aβ לוחיות בתוך 1 דקות. למרות זמן הדגירה המוגבר עם Cur מעט הגדילה את עוצמת הקרינה של הפלאק Aβ, מספר שלטים שנצפו Aβ לא היה שונה באופן משמעותי בין 1 דקות ו 5 דקות מכתים זמן (איור 1).

נוכחי יכול לתייג שלטים Aβ בקריוסטט-מוכן, פרפין מוטבע העכבר ורקמת AD האדם הממבצים עם נוגדנים ספציפיים Aβ בעכבר לספירה רקמת המוח. כ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההשערה שלנו הייתה כי הנוכחי יכול לשמש כדרך המהירה, הקלה ביותר, והזולה ביותר לתווית ותמונה Aβ פלאק ברקמת המוח הנתיחה לאחר המוות בהשוואה לצבעים אחרים של האיגוד עמילואיד, כמו גם נוגדנים ספציפיים Aβ. מטרות מחקר זה היו כדי לקבוע את הזמן המינימלי הנדרש תווית ותמונה לוחיות Aβ ידי Cur בנתיחה לאחר המוות המוח לספירה ולקבוע אם הנוכחי יכול לשמש כחלופה Aβ נוגדן עבור תיוג Aβ פלאק. למטרה זו, Aβ-יכולת תיוג של נוכחי נצפתה בנקודות זמן שונות. נוכחי הצליח לתייג את Aβ תוך דקה אחת. בנוסף, תיוג של Aβ על ידי Cur היה גדול יותר מאשר אחרים בעלי כר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

. למחברים אין מה לגלות

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התמיכה עבור מחקר זה הגיע מן המכון למדעי השדה בהתעלות של מריה הקדושה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)IHC world, Woodstock, MD
מודל Aanimal של מחלת אלצהיימרהמעבדה של ג'קסון, בר הרבור, ME
אלכוהול מוחלטVWR, Radnor, PA
Alexa 594Santacruz Biotech, דאלאס, טקסס
נוגדן 6E10Biolegend, סן דייגו, קליפורניה
נוגדן A11Millipore, ברלינגטון, MA
מיקרוסקופ אור מורכבאולימפוס, שינג'וקו, יפןאולימפוס BX51
קונגו אדוםסיגמא, סנט לואיס, MO
CryostatGMI, רמזי, MNLeicaCM1800
כורכומיןסיגמה, סנט לואיס, MO
דיסודיום מימן פוספטסיגמא, סנט לואיס, MO
פלסטיק דיסטירן קסילןBDH, דוסונוויל, ג'ורג'יה
ניירות סינוןפישר מדעי, פיטסבורג, פנסילבניה
Hoechst-33342סיגמא, סנט לואיס, מיזורי
מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוךלייקה, באפלו גרוב, ILLeica DMI 6000B
פלורסנט הפוך מיקרוסקופאולימפוס, שינג'וקו, יפןאולימפוס 1x70
סרום עזים רגילסיגמה, סנט לואיס, MO
פרפיןסיגמה, סנט לואיס, MO
Paraformaldehydeסיגמה, סנט לואיס, MO
פלוי-ליזין מצופה זכוכית טעונה שקופיתגלובוס סיינטיפיק בע"מ, Mahwah, NJ
אשלגן כלוריסיגמא, סנט לואיס, MO
אשלגן דימימן פוספטסיגמא, סנט לואיס, MO
נתרן אזידסיגמא, סנט לואיס, MO
נתרן כלוריסיגמא, סנט לואיס, MO
נתרן הידרוקסידEMD Millipore, ברלינגטון, MA
נתרן פנטוברביטלוורטקס פרמצבטיקה בע"מ, דירבורן, מישיגן
Thioflavin-Sסיגמא, סנט לואיס, MO
Triton-X-100סיגמא, סנט לואיס, MO
קסילןVWR, רדנור, פנסילבניה

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cummings, J. L. Alzheimer's disease. New England Journal of Medicine. 351 (1), 56-67 (2004).
  2. Jack, C. R., Holtzman, D. M. Biomarker modeling of Alzheimer's disease. Neuron. 80 (6), 1347-1358 (2013).
  3. Tarawneh, R., Holtzman, D. M. The clinical problem of symptomatic Alzheimer disease and mild cognitive impairment. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (5), (2012).
  4. Selkoe, D. J. Cell biology of protein misfolding: the examples of Alzheimer's and Parkinson's diseases. Nature Cell Biology. 6 (11), 1054-1061 (2004).
  5. Hardy, J., Allsop, D. Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease. Trends in Pharmacological Sciences. 12 (10), 383-388 (1991).
  6. Chen, M., et al. Use of curcumin in diagnosis, prevention, and treatment of Alzheimer's disease. Neural Regeneration Research. 13 (4), 742-752 (2018).
  7. Maiti, P., et al. A comparative study of dietary curcumin, nanocurcumin, and other classical amyloid-binding dyes for labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue of 5x-familial Alzheimer's disease mice. Histochemistry and Cell Biology. 146 (5), 609-625 (2016).
  8. Maiti, P., Dunbar, G. L. Use of Curcumin, a Natural Polyphenol for Targeting Molecular Pathways in Treating Age-Related Neurodegenerative Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 19 (6), (2017).
  9. Maiti, P., Dunbar, G. L. Comparative Neuroprotective Effects of Dietary Curcumin and Solid Lipid Curcumin Particles in Cultured Mouse Neuroblastoma Cells after Exposure to Abeta42. International Journal of Alzheimer's Disease. , (2017).
  10. den Haan, J., Morrema, T. H. J., Rozemuller, A. J., Bouwman, F. H., Hoozemans, J. J. M. Different curcumin forms selectively bind fibrillar amyloid beta in post mortem Alzheimer's disease brains: Implications for in-vivo diagnostics. Acta Neuropathologica Communications. 6 (1), 75(2018).
  11. Koronyo, Y., et al. Retinal amyloid pathology and proof-of-concept imaging trial in Alzheimer's disease. JCI Insight. 2 (16), (2017).
  12. Koronyo, Y., Salumbides, B. C., Black, K. L., Koronyo-Hamaoui, M. Alzheimer's disease in the retina: imaging retinal abeta plaques for early diagnosis and therapy assessment. Neurodegenerative Diseases. 10 (1-4), 285-293 (2012).
  13. Koronyo-Hamaoui, M., et al. Identification of amyloid plaques in retinas from Alzheimer's patients and noninvasive in vivo optical imaging of retinal plaques in a mouse model. NeuroImage. 54 (Suppl 1), S204-S217 (2011).
  14. Ran, C., et al. Design, synthesis, and testing of difluoroboron-derivatized curcumins as near-infrared probes for in vivo detection of amyloid-beta deposits. Journal of the American Chemical Society. 131 (42), 15257-15261 (2009).
  15. Beach, T. G. The Sun Health Research Institute Brain Donation Program: Description and Experience, 1987-2007. Cell Tissue Bank. 9 (3), 229-245 (2008).
  16. Green, S. J., Killiany, R. J. Subregions of the inferior parietal lobule are affected in the progression to AD. Neurobiology of Aging. 31 (8), 1304-1311 (2010).
  17. Ono, K., Hasegawa, K., Naiki, H., Yamada, M. Curcumin has potent anti-amyloidogenic effects for Alzheimer's beta-amyloid fibrils in vitro. Journal of Neuroscience Research. 75 (6), 742-750 (2004).
  18. Garcia-Alloza, M., Borrelli, L. A., Rozkalne, A., Hyman, B. T., Bacskai, B. J. Curcumin labels amyloid pathology in vivo, disrupts existing plaques, and partially restores distorted neurites in an Alzheimer mouse model. Journal of Neurochemistry. 102 (4), 1095-1104 (2007).
  19. Mutsuga, M., et al. Binding of curcumin to senile plaques and cerebral amyloid angiopathy in the aged brain of various animals and to neurofibrillary tangles in Alzheimer's brain. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (1), 51-57 (2012).
  20. Tei, M., Uchida, K., Mutsuga, M., Chambers, J. K., Nakayama, H. The binding of curcumin to various types of canine amyloid proteins. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (4), 481-483 (2012).
  21. Liu, L., Komatsu, H., Murray, I. V., Axelsen, P. H. Promotion of amyloid beta protein misfolding and fibrillogenesis by a lipid oxidation product. Journal of Molecular Biology. 377 (4), 1236-1250 (2008).
  22. Wu, C., Scott, J., Shea, J. E. Binding of Congo red to amyloid protofibrils of the Alzheimer Abeta(9-40) peptide probed by molecular dynamics simulations. Biophysical Journal. 103 (3), 550-557 (2012).
  23. Wu, C., Wang, Z., Lei, H., Zhang, W., Duan, Y. Dual binding modes of Congo red to amyloid protofibril surface observed in molecular dynamics simulations. Journal of the American Chemical Society. 129 (5), 1225-1232 (2007).
  24. Gutierrez, I. L., et al. Alternative Method to Detect Neuronal Degeneration and Amyloid beta Accumulation in Free-Floating Brain Sections With Fluoro-Jade. ASN Neuro Methods. 10, 1-7 (2018).
  25. Yang, F., et al. Curcumin inhibits formation of amyloid beta oligomers and fibrils, binds plaques, and reduces amyloid in vivo. Journal of Biological Chemistry. 280 (7), 5892-5901 (2005).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

kurkuminkurkumin

מאמרים קשורים