היצרות לרינגוקנה התוצאות מתוך התצהיר צלקת פתולוגית כי באופן ביקורתי מצמצמת את דרכי הנשימה הקנה וחסר טיפולים רפואיים יעילים. באמצעות PLLA-PCL (70% פולי-L-lactide ו-30% pvc) סטנט כמערכת שילוח סמים מקומי, טיפולים פוטנציאליים המיועדים להפחתת התפשטות הצלקת בקנה הנשימה ניתן ללמוד.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
עיצוב של משחררי ביוטינג לסמים ביולוגיים בעכברים עם היצרות לרינגוקנה
במאמר זה
סיכום
תקציר
היצרות לרינגוקנה (הארה ב) היא היצרות פתולוגית של תת-הבית וקנה הנשימה המוביל לחסימה מחוץ לבית החזה וקוצר נשימה משמעותי. התוצאות של המנהיג מפציעה מגוף זר בקנה הנשימה, המובילה לפגיעה ברקמות ותגובה דלקתית מקומית אשר משתבש, המובילה לתצהיר של רקמת צלקת פתולוגית. הטיפול עבור הארה הוא כירורגי עקב חוסר טיפולים רפואיים יעילים. מטרת שיטה זו היא לבנות סטנט תואם ביולוגי זה יכול להיות מיניאטורי למקום עכברים עם הארה. הדגמנו כי PLLA-PCL (70% פולי-L-lactide ו-30% polycaprolactone) בונה היה חוזק ביומכאני אופטימלי, היה ביולוגי תואם, מעשית עבור vivo מיקום סטנט, ומסוגל להתחמק תרופה. שיטה זו מספקת מערכת העברת תרופות לבדיקת סוכנים אימונומודולטוריים שונים כדי לעכב את הדלקת באופן מקומי ולהפחית פיברוזיס של דרכי הנשימה. ייצור סטנטים לוקח 28 שעות וניתן לשכפל בקלות ולאפשר ניסויים עם כנופיית גדולים. כאן אנו שילב את rapamycin התרופה בתוך סטנט כדי לבדוק את יעילותו בהפחתת פיברוזיס והתצהיר קולגן. התוצאות התגלו כי האוהלים PLLA-PCL הראו לשחרר rapamycin אמין, היו יציבים מכנית בתנאים פיסיולוגיים, היו תואמים ביולוגית, וגרימת תגובה דלקתית קטנה בקנה הנשימה. נוסף על כך, הפחתת הצלקת של היווצרות הצלקות בקנה הנשימה בvivo.
מבוא
היצרות לרינגוקנה (הארה ב) היא היצרות פתולוגית של קנה הנשימה לרוב בשל פציעה הפוסט-צנרור. השילוב של הקולוניזציה החיידקית, תגובת גוף זר למעי הגס או צינורית אנדוקנה, וגורמים ספציפיים למטופל מובילים לתגובה דלקתית חריגה. זה התגובה החיסונית מסתגלת מוביל התצהיר של קולגן בקנה הנשימה, וכתוצאה מכך היצרות הלומיאל של קנה הנשימה ואת היצרות הבאים1,2. כמו הטיפול הנוכחי עבור מחלה זו היא כירורגית בעיקר, פיתוח אלטרנטיבה רפואית מבוססת טיפול הפרדיגמה מיקוד מסלולים דלקתיים והפרופיברוטיים להוביל התצהיר קולגן מוגזם נחקרו. Rapamycin, אשר מעכב את מתחם ה-mTOR איתות, הוכח כי יש אפקטים חיסוני מדכאים, כמו גם אפקט אנטיפיברוסט חזק. עם זאת, כ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הערה: כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת ג'ונס הופקינס (MO12M354).
1. הכנת רפצין ב-PLLA-PCL
- הכינו שתי בקבוקים מזכוכית (עם כמוסות) של 70:30 PLLA-PCL פולימר פתרונות (צמיגות הגלום 1.3 כ 1.8 DL/G; רשימת חומרים) פתרונות, עם בקבוקון אחד המכיל 1.0% rapamycin והשני ללא rapamycin.
- לעשות 1.0% rapamycin המכיל פתרון פולימרי על ידי הוספת 6 מ"ג rapamycin ל 600 מ"ג של 70:30 PLLA-PCL בבקבוקון זכוכית.
- עבור פתרון פולימרי ללא rapamycin (שליטה), רק להוסיף 600 mg של 70:30 PLLA-PCL לבקבוקון זכוכית.
- מתחת למכסה המנוע, הוסיפו 6 מ ג של דילורומתאן לכל בקבוקון ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
מתכלה PLLA-PCL סטנט לבנות טעון עם rapamycin בשימוש במחקר זה היה מסוגל להתחמק rapamycin בצורה עקבית וצפויה בתנאים פיסיולוגיים (איור 1). איור 2 מראה את הסטנט של plla-PCL בסביבות 22 G אנגיוקטטר לשימוש במודל murine של הארה. כדי לקבוע אם ההשפעות של הימנעות rapamycin בקנה הנשימה היא יעילה פיברוזיס מחליש, שינויים מדודים פיברוזיס ביטוי גן הקשורים וסמנים של דלקת חריפה ניתן להעריך באמצעות ביטוי גנים ניתוח, הזרמת cy, החיסונית, immunofluorescence, ו-אליסה. מיקום מוצלח של סט.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הצעדים הקריטיים ביותר עבור בהצלחה בנייה ושימוש סטנט משחררי התרופה ב vivo הם 1) קביעת היחס האופטימלי של PLLA-PCL עבור שיעור התרופה הרצוי, 2) קביעת הריכוז המתאים של התרופה כדי להיות משתמט, 3) ליציקת סטנטים סביב הקטטר לשימוש vivo, ו 4) מעביר את הסטנט לתוך העכברים לאחר האינדוקציה של הארה ב מבלי לגרום לחסימת דרכי הנשימה קטלנית.
בעוד ישנן מספר שיטות להעברת סמים באמצעות סטנטים בדגמי בעלי חיים של מחלת דרכי הנשימה, פיתוח סטנט תואם ביולוגי המסוגל לשלוח סמים במודל מורטין חולה הוא הראשון. בפיתוח שיטה זו ל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
המכון הלאומי על חירשות והפרעות תקשורת אחרות של המוסדות הלאומיים לבריאות תחת מספרי הפרס 1K23DC014082 ו 1K23DC014082 (אלכסנדר הלל). מחקר זה היה גם נתמך מבחינה כספית על ידי האגודה הטריולוגית והמכללה האמריקנית למנתחים (אלכסנדר הלל), קרן האגודה האמריקנית לרפואה, שיקגו, IL (Madhavi Duvvuri) ו מענק הכשרה T32 נדבך (קווין Motz).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>1. לאנגיוקטטר סטנט | |||
| 22 מד | Jelco | 4050 | |
| דיכלורומתאן | סיגמא אולדריץ' | 270997-100 מ"ל | |
| גליצרול | פישר סיינטיפיק | 56-81-5 | זמין גם אצל ספקים אחרים. |
| PDLGA | Sigma Aldrich | 739955-5G | |
| PLLA-PCL (70: 30) | Evonik Industries AG | 65053 | |
| Rapamycin | LC Laboratories | R-5000 | |
| 2. כירורגיה של בעלי חיים | |||
| חוט | חברת מיל-רוז | 320101 | |
| <חזקה>3. לצביעה אימונוהיסטוכימית | |||
| אנטיגן מאגר חוזר | Abcam | ab93678 | זמין גם אצל ספקים אחרים; pH חומצי דרוש |
| DAPI | Cell Signaling | 8961S | |
| DMEM | ThermoFisher Scientific | 11965-092 | זמין גם אצל ספקים אחרים. |
| FBS (סרום בקר עוברי) | MilliporeSigma | F4135-500ML | |
| נוגדן עיזים נגד ארנב-488 טכנולוגיית | Lif | a11008 | |
| נוגדן עז נגד חולדות-633 טכנולוגיית | Lif | a21094 | |
| הידרופילי פלוס שקופית | BSB7028 | ||
| PBS | ThermoFisher Scientific | 100-10023 | זמין גם אצל ספקים אחרים. |
| נוגדן ארנב נגד CD3 | Abcam | ab5690 | |
| Rat antiF4/80 נוגדן | Biolengend | 123101 | |
| Zeiss LSM 510 Meta Confocal | Microscope Zeiss | ||
| 4. עבור חרוזי זכוכית כמותיים PCR | |||
| 0.5 מ"מ | OMNI International | 19-645 | |
| Bead Mill Homoginizer | OMNI International | ||
| Gene Specific Gene Primers Forward/Reverse משאבים | גנומיים מתקן | ||
| Nanodrop 2000 ספקטרופוטומטר | Thermo Scientific | ||
| Power SYBR Green Mastermix | Life Technologies | 4367659 | |
| ערכת מיני RNeasy | Qiagen | 80404 | |
| StepOnePlus בזמן אמת PCR מערכת | Life Technologies |
מקורות
- Minnigerode, B., Richter, H. G. Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood. Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).
- Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
