מאמר שיטה

פיתוח של מודל פולשני, בסיוע לייזר של הקרנית הפסד של תא אנדותל

DOI:

10.3791/60542

⸱

24 באפריל 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Angiogenesis and Ocular Cell Transplantation, University of Lübeck, 2Department of Ophthalmology, University of Lübeck, 3Institute of Biomedical Optics, University of Lübeck

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לנתק את תאי הקרניות של הקרנית (CEC) מהקרום של האישה (DM) באמצעות "YAG" (בלייזר) של ממברנה הvivo לשעבר של המחלה של keratopathy בולולס (BK).

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nd: לייזרים YAG שימשו כדי לבצע ניתוח בעינית לא פולשנית, כגון capsulotomy במשך כמה עשורים עכשיו. האפקט המרחיק מסתמך על התמוטטות אופטית במוקד הלייזר. גלי הלם אקוסטי בועות הקצף נוצרות, גרימת קרע ברקמה. גודל בועה והגברה של הלחץ משתנים באמצעות אנרגיית הדופק ומיקומו של נקודת המוקד. במחקר זה, עיניים פורקלסי חזירי הוקמו מול מסחרית זמין Nd: YAG לייזר. משתנה אנרגיות הדופק, כמו גם עמדות שונות של נקודות מיקוד אחורי הקרנית נבדקו. נגעים וכתוצאה מכך הוערכו על ידי שני פוטון מיקרוסקופ ו היסטולוגיה כדי לקבוע את הפרמטרים הטובים ביותר עבור התנתקות בלעדית של תאים אנדותל הקרנית (CEC) עם נזק מינימלי השני. היתרונות של שיטה זו הם הצריבה המדויקת של CEC, מופחתת נזק סביבתי, ומעל לכל, טיפול ללא מגע.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שקיפות הקרנית חיונית להעברת האור לרשתית ולפוטוטורטורים1. בהקשר זה, מצב יחסי של התייבשות הוא קריטי כדי לשמור על סיבי הקולגן בתוך משתית הקרנית מיושרים כראוי. הומאוסטזיס זה מתוחזק על ידי תאי הקרנית אנדותל (CEC) ממוקם על קרום האמת (DM)2. האנדותל היא שכבת הקרניות הפנימית ביותר. יש לו מכשול חשוב ותפקוד המשאבה, אשר חיונית עבור שקיפות הקרנית3. בניגוד האפיתל, האנדותל אינו מסוגל לחדש את העצמי4. לפיכך, כל נזק תאי שנגרם על-ידי מחלה או טראומה מגרה את התאים האנדותל הנותרים כדי להגדיל ולהגר, לכסות את הפגמים הנובעים ולשמור על פונקציונליות הקרנית5. עם זאת, אם צפיפות ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים הכרוכים ברקמת בעלי חיים עוקבים אחר ההנחיות של ועדת האתיקה המקומית לטיפול בבעלי חיים.

1. הכנת תרבות איברים וטיפול לייזר

  1. השיגו עיניים פורקליות טריות מהמטבחיים שמור אותם קריר (4 ° c) ב שונה בינונית הנשר של דולבco (dmem) עם גלוקוז גבוה, שיושלם עם L-גלוטמין, נתרן פירובט, פניצילין/סטרפטומיצין (1%), סרום חזירי (10%), מעתה המכונה במאמר זה כמדיום מלא.
  2. הסרת רקמות מיסיביות עם מספריים ולהשרות את העיניים 5% povidone-הפתרון האופטלמולוגי של יוד עבור 5 דקות לפני הצבת אותם מלוחים מעוקר מאגור פוספט (PBS) עד השימוש.
  3. עיניים מסך עבור הפתווגיות מקטע הקדמי הראשי, כגון צלקות הקרנית, בצקת, ו אטימות אחרות עם התקן ספקטרלי קוהר....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באמצעות ההליך המוצג כאן, התייחסו לעיניים עם Nd: YAG לייזר, הערכת אנרגיות פולס שונות (1.0-4.6 mJ) ועמדות של נקודות מוקד (מרחק מהמשטח האחורי של הקרנית: 0.0-0.2 מ"מ) כדי למצוא את הפרמטרים האופטימליים. מספר משכפל (n = 3) הוערך עבור כל קבוצת כוכבים של פרמטרי הלייזר (12 x 21).

בנוסף לפרוטוקול הנ ל, הדגימה נותחה עם מיקרוסקופ שני פוטון לפני קיבעון ו-H & E כתמים. מיקרוסקופ שני פוטון השתמשו במצב מוצק, נעול במצב 80 MHz Ti: לייזר ספיר עם טווח כוונון של 690-1b040 nm ופלט לייזר ממוצע של > 900 mW ב 80.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התוצאות של המחקר הטיס הזה עולה כי Nd: YAG לייזר ניתן להשתמש באופן סלקטיבי בתאי הקרנית בצורה סלקטיבית כאשר הפרמטרים המתאימים למינון האנרגיה ומיקום נקודת המיקוד נבחרים.

כמו הפונקציה אנדותל חשוב עבור שקיפות הקרנית ושמירה על הקרנית מתוך בצקת סטרומה, מודלים של בעיות אנדותל לשחק תפקיד חשוב בפיתוח של תרופות נגד הגנה או ניתוחים כירורגיים. יש כמה הקים במודלים חוץ גופית עבור חיקוי במצב vivo10,14,15, אבל כפי שיד.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

. למחברים אין מה לגלות

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים לכריסטין וררן וליאן א. סוצ'יורק על עזרתם בשיטות נסיוניות.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ואקום BARRON TREPHINEKATENAK20-2058
CryostatLeicaCM 3050S
Dulbecco' s Modified Eagle' s בינוני - גבוה גלוקוזPAAE-15009
מחזיק עינייםעצמיN/A
מיקרוסקופ הפוךLeicaDMI 6000 B
KH2PO4Merck529568
Na2HPO4Merck1065860500
Nd:YAG לייזרZeiss MeditecvisuLAS YAG II פלוס
OCT רקמות טקסאקורה פינטכניק4583
פניצילין-סטרפטומיציןסיגמא-אולדריץ'P4333
פוספט חוצץ מלח (PBS)Gibco10010056
סרום חזירסיגמא-אולדריץ'12736C
טומוגרפיהקוהרנטית אופטית ספקטרליתהיידלברג הנדסהספקטרליס
צלחת תרבית רקמות 12 בארותSarstedt833921
מיקרוסקופ דו-פוטוניJenLabDermaInspect
ViscoelasticOmniVisionMethocel

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. DelMonte, D. W., Kim, T. Anatomy and physiology of the cornea. Journal of Cataract and Refractive Surgery. 37 (3), 588-598 (2011).
  2. Edelhauser, H. F. The balance between corneal transparency and edema: the Proctor Lecture. Investigative ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Nd YAG

מאמרים קשורים