מאמר שיטה

מדבקת החיסון נגד הידבקות כרונית בנגיף הדלקת בפצע

8.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60599

⸱

20 בפברואר 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Infectious Diseases, School of Medicine, Stanford University, 2Stanford Immunology, Stanford University, 3Palo Alto Veterans Institute of Research

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים פרוטוקול חיסונים מושהה ליצירת זיהומים כרוניים הפצע בעכברים המוסמכים.

תקציר

פסאודומונס aeruginosa (P. aeruginosa) הוא פתוגן מחלה נוזוקומיאלית העיקריים של רלוונטיות הגוברת לבריאות האדם ומחלות, במיוחד בהגדרה של זיהומים הפצע כרונית חולי סוכרת ומאושפזים. יש צורך דחוף מודלים זיהום כרונית כדי לסייע בחקירת הפתוגנזה הפצע ופיתוח של טיפולים חדשים נגד פתוגן זה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול שעושה שימוש בחיסון מושהה 24 שעות לאחר שפצעו מלאה במלוא הנסיבות. הזיהום של מטריצה הפצע הזמני נוכח בזמן זה מפורקים או הפצה מהירה או הפצת זיהום ובמקום זאת יוצר זיהום כרוני נמשך 7 – 10 ימים ללא צורך השרשה של חומרים זרים או הדיכוי החיסונית. פרוטוקול זה מחקה קורס זמני טיפוסי של זיהום שלאחר הניתוח בבני אדם. השימוש של הזנים P. aeruginosa מאיר (PAO1: lux) מאפשר הערכה יומית כמותית של נטל בקטריאלי עבור P. aeruginosa זיהומים הפצע. זה מודל הרומן עשוי להיות כלי שימושי בחקירת הפתוגנזה חיידקי ופיתוח של טיפולים חדשים עבור כרונית P. מחלות הפצע.

מבוא

פסאודומונס aeruginosa (P. aeruginosa) הוא חיידק שלילי בצורת מוט עם רלוונטיות גוברת לבריאות האדם ומחלות. הוא אחראי על תחלואה נרחבת תמותה בהגדרות מחלה נוזוקומיאלית, במיוחד מעורבים דלקות פצעים בחולים חיסוני1,2. הופעתה של זנים עמידים בפני סמים מרובים של פתוגן זה סיפק תנופה נוספת לחקירת גורמים לתרום P. aeruginosa התקפה אלימה, מנגנונים של P. aeruginosa עמידות לאנטיביוטיקה, ושיטות חדשות למניעה וטיפול של זיהום זה קטלני3. ככזה, הצורך במודלים של בעלי חיים של זיהום הפצע כרונית כמו כלים לחקירת שאלות מחקר אלה מעולם לא היה גדול יותר.

למרבה הצער, דגמים רבים של בעלי חיים של P. aeruginosa זיהום נוטים לדמות זיהום אקוטי עם רזולוציה מהירה של זיהום או ירידה מהירה עקב אלח דם4,5, אשר אינה מהווה הדמיה מספקת של הטבע הכרוני לעתים קרובות של זיהומים אלה. כדי לטפל בחיסרון זה, כמה דגמים לנצל את ההשתלה של גופים זרים כגון חרוזים אגר, סיליקון שתלים, או קילוף פלסטיצידיות ג ' לים6,7,8. דגמים אחרים להשתמש בעכברים כי הם בסיכון חיסוני בשל גיל מתקדם, השמנת יתר, או סוכרת, או באמצעות אמצעים תרופתי כגון נויטרופילים המושרה הנגרמת כציקלופומיה9,10,11,12. עם זאת, או השימוש בחומרים זרים או מארחים החיסונית פרוצים כנראה משנה את התהליך הדלקתי המקומי, מה שמקשה להשיג הבנה של הפתופסולוגיה מעורב זיהומים הפצע כרונית במחשבים מארחים עם מערכות חיסונית נורמלית אחרת.

פיתחנו מודל כרוני של P. aeruginosa זיהום הפצע בעכברים הכרוכים החיסון מתעכב עם חיידקים לאחר שפצעו. החיסון העיכוב מאפשר ניסויים בהערכת נטל חיידקי הנמשך לפחות 7 ימים. מודל זה פותח הזדמנויות חדשות עבור חקירת הן פתוגנזה טיפולים חדשים של P. aeruginosa זיהומים כרוניים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (IACUC) באוניברסיטת סטנפורד.

1. הכנה וצמיחה של חיידקים

  1. לנהל את כל העבודה עם P. aeruginosa ובעלי חיים עם אמצעי זהירות bsl-2 לכל ועדת בטיחות מוסדית של החוקר ובעלי החיים להשתמש הנחיות הוועדה. האם כל הצעדים המתוארים כאן מעורבים ב -P. aeruginosa, כולל עכבר החיסון, בארונית ביולוגית.
  2. PAO1 זורח: לוקס זן של P. aeruginosa זמין מהמעבדה שלנו על ידי בקשה. פס PAO1, המאוחסן כמו מלאי הגליצרול הקפוא, בציר ליססוגנזה (LB) אגר. עבור זורח PAO1: lux להתאמץ, LB אגר צריך להכיל אנטיביוטיקה סלקטיבית (100 μg/mL carbenicillin ו 12.5 μg/mL kanamycin). גדל ב 37 ° c לילה באינקובטור חיידקי.
  3. בחר מושבה מבודדת ולצמוח לילה ב 37 ° c ב 3 מ"ל LB בינונית, pH 7.4. עבור זנים זורח, ציר צריך להכיל 100 μg/mL carbenicillin. , לגדול תחת רעידות. מצבים אירוביים

2. הכנה לפרוצדורה

  1. האם כל העובדים לבצע ניתוח ללבוש שמלה נקייה מעיל המעבדה, מסכת פנים, רשת שיער, וכפפות.
  2. , אוטוקלב כל כלי הניתוח. כולל מספריים ומלקחיים השתמש בטכניקה אספטי לעקר כלים בין בעלי חיים.
  3. נקו את שולחן הניתוחים באתנול והכינו שדה כירורגי נקי.

3. הסרת שיער

  1. שימוש בעכבר C57BL/6J בשבוע 2%-3% שבועות באמצעות 1%. החוקרים צריכים לעקוב אחר ההנחיות של המוסד שלהם וטרינרי להרדמה בעת שימוש isofלאנה.
    1. הפעל הרדמה על ידי אספקת 1% – 3% isofלפני ולהתאים את קצב זרימת החמצן ל 1.5 L/min. מניחים את העכבר בתא אינדוקציה.
    2. צבוט את הבוהן של העכבר כדי להעריך את עומק ההרדמה. כאשר העכבר לא מגיב עוד לגירוי, להסיר אותו מן החדר אינדוקציה ומניחים אותו על הספסל כירורגי עם האף שלו בקונוס האף isofהלוראן.
    3. החלת חומר סיכה עינית על שתי העיניים.
  2. שקול את העכבר כדי לקבל משקל טרום ההליך הבסיסי.
  3. למקם את העכבר במצב נוטה. להזריק את העכבר תת-עורי עם מראש מחומם סטרילי 0.9% נתרן כלוריד, 250 μL בכל אגף עבור סך של 500 μL.
  4. לגלח את האזור החלק הימני של העכבר באמצעות מכונת גילוח חשמלית. הגילוח צריך להתרחש במקום אחר מאשר התחנה הכירורגית כדי למנוע זיהום שיער של הפצע.
  5. להחיל שכבה דקה של קרם הסרת שיער. תנו לתחליב לשבת במשך 20 עד 60. הסירו את השיער והקרם העודף עם גזה הלחלח במים חמים. בעקבות הסרת שיער, המשך אל הליך הפצועים.

4. בעובי מלא ניתוח הפצע הקצר

  1. הכנסת שחרור מתמשך בופרנורפין 0.6 – 1 מ"ג/ק"ג תת-עורי באמצעות מחט של 25 גרם באזור באמצע העכבר. בופרינורטין שחרור איטי מספק הקלה על הכאב מעל 48 – 72 h.
  2. . חטא את האתר הכירורגי נגב את המשטח הפנימי. עם דגימה סטרילית בבטאדין לנגב את העודף בבטאדין. עם ספוגית אלכוהול סטרילי זה צריך להתבצע 3 פעמים (לסירוגין בין הבטאדין לבין אלכוהול), שאיפה באמצעות הזזת מהמרכז בצורה מעגלית לקצה. הניחו לאזור להתייבש באוויר.
  3. צור העטוף סביב האתר כירורגי באמצעות גזה סטרילי או לעטוף פלסטיק הנצמד.
  4. מתיחה עור מתוח הזנה. שימוש סטרילי בקוטר 6-mm העור ביופסיה לעשות חתך הראשונית דרך האפידרמיס השמאלית הימנית. חזרו על האפידרמיס הימני.
  5. השתמש מלקחיים לאוהל את העור מהמרכז של אזור הפצע השמאלי המתואר. בלו את הרבדים העוריות והעורי באמצעות מספריים. חזור על האזור הימני המוקף הפצע כדי ליצור פצעים סימטריים.
  6. שטוף פצעים עם 50 μL של תמיסת מלח סטרילית. הניחו לאתר הכירורגי ולעור שמסביב להתייבש באוויר. לאחר מכן, כסו את הפצעים והדורסום בעזרת הקרנת סרטים שקופה.
  7. מניחים את העכבר חזרה בכלוב נקי. . בבית 1 חיה לכל כלוב
  8. הניחו את הכלוב על כרית החימום והצג עד שהעכבר יתעורר.
  9. בעת ביצוע הניתוח לעיל על בעלי חיים מרובים, להשתמש בעיקור חרוז חם כדי לנקות את כל כלי הניתוח בין בעלי חיים.
  10. אפשר 24 שעות על העכברים להתאושש מהליך כירורגי ולהקמת מטריצת הפצע הזמני על הפצעים לפני שתמשיך לחיסון נגד חיידקים.

5. חיסונים עם פ. אירוגסק

  1. לדלל לילה PAO1: לוקס התרבות כדי OD600 = 0.05 ב 75 mL של מדיה LB המכיל 100/mL carbenicillin ולגדול את החיידקים עד התרבות היא בשלב מעריכי מוקדם (OD600 ≈ 0.3). הדבר אמור להימשך כ-2-3 שעות.
  2. לדלל PAO1: lux ב PBS לריכוז של (7.5 ± 2.5) x 102 cfu/mL. הקפידו להכין את העודפים כדי להבטיח נפח מספיק ולאפשר ציפוי לאחר הניסוי. אם מעבירים בין מתקנים (כלומר מהמעבדה לוייונום), השתמשו בבלימה כפולה בתיבת הוכחה שמסומנת באופן ברור בהסגר.
  3. בצע את כל העבודה עם P. aeruginosa ועכברים באמצעות ציוד מגן אישי מאושר ברמת בטיחות ביולוגית 2 (בדרך-2) מאושר ארון בטיחות ביולוגי (תואר ראשון). ציוד הניתן לשימוש חוזר כגון סולם המשקל צריך להיות מכוסה עם להיאחז לעטוף כדי למנוע זיהום.
  4. שימוש ב-3% isofלמטה כמתואר לעיל. שוקלים עכבר ולהקליט את המשקל. להזריק את העכבר תת-עורי עם מראש מחומם סטרילי 0.9% נתרן כלוריד, 250 μL בכל אגף עבור סך של 500 μL.
  5. אם ההלבשה של הסרט השקוף של העכבר הגיע לילה, להסיר את כל המפר כתוצאה בזהירות ולשים על ההלבשה החדשה.
  6. השתמש 500 μL טוברקולב 27 מזרק כובע בטיחות כדי להזריק 40 μL של PAO1: lux ההשעיה דרך הסרט השקוף ההלבשה לתוך כל פצע. עכברים שונים צריכים לשמש עבור שאינם מחוסן/הפצע הערוץ כדי למנוע זיהום צולב של הצד הקונאלצידי.
  7. מניחים את העכבר חזרה בכלוב שלו על משטח חימום לפקח עד שהוא מתעורר. כל העכברים צריכים להיות מאוחסן בנפרד בכלובים נפרדים כדי למנוע זיהום צולב.
  8. מספקים תוספי תזונה גבוהים קלוריות להדביק בין כדורי מזון על רצפת הכלוב.
  9. השתמש ביתר הצורך לרצף לוחית של LB אגר. מושבות לספור כדי לאשר את מספר החיידקים מנוהל.

6. בvivo הדמיה של פצעים נגועים

  1. עקבו אחר פרוטוקולי BSL-2 להובלת עכברים אל ומכלי הדימות, כולל שימוש במיכל משני. להיזהר לא להעביר או לשחרר מצעים בעלי חיים במהלך העברת העכבר לחדר אינדוקציה או מכשיר הדמיה.
  2. לגרום הרדמה של העכבר עם שאיפה 1% – 3% isofלוריאן בחדר אינדוקציה כמתואר בשלב 3.1.
  3. לאחר העכבר מורדם, למקם אותו במיקום נוטה בחדר ההדמיה של מערכת הדמיה אופטית עם האף בקונוס של האף isofהלוראן.
  4. פתח את תוכנת התוכנה.
  5. פרמטרי הרכישה ישתנו בהתאם למספר בעלי החיים המבוססים בו ובאינטנסיביות של ביולומינסנציה. הפרמטרים הבסיסיים להגדרה כוללים זמן חשיפה, ביננג, f/stop ושדה תצוגה (FOV). הגדרות ההתחלה המהווה ברירת מחדל הן בזמן החשיפה 30 שניות, בניה נמוכה (2), f/stop 1.2 ו-FOV 25. התאם הגדרות אלה לפי הצורך, בהתאם לצורכי החוקר.
  6. ניתוח נתונים באמצעות תוכנית הדמיה (ראה טבלת חומרים). לומינסנציה תהיה מיוצגת כתמונת צבע מדומה הצופה על תצלום צבע של העכברים.
    1. צור אזור של עניין (ROI) באתר הפצע ולמדוד שטף הממוצע (פוטונים/שנייה) זוהה. שים לב כי ניתן גם לדווח על נתונים כזוהר (פוטונים/שנייה/cm ²/סטרדיאן), אבל כל עוד המרחק של פלטפורמת ההדמיה מן המצלמה נשאר קבוע בין הדמיה, שטף מספיק.
    2. למדוד את הרקע על ידי יצירת ROI באזור אקראי בפלטפורמת ההדמיה. הפחת את מספר הרקע של פוטונים/שניה.
    3. יצא את הנתונים לגיליון אלקטרוני לצורך ניתוח נוסף.
  7. לבצע הדמיה כמתואר לעיל לעתים קרובות כיום כדי לעקוב אחר התקדמות הזיהום.

7. ניהול פוסט-פעיל

  1. לנטר עכברים לפי קווים מנחים שנקבעו על-ידי פרוטוקול IACUC של החוקר. אנו מפקחים על כל העכברים מדי יום במשך ארבעת הימים הראשונים, ואז כל יומיים עד סוף הניסוי. שקול את העכברים פעם ביום במשך 4 הימים הראשונים שלאחר הניתוח בתואר ראשון. הכנס 250 μL של 0.9% נתרן כלוריד תת-עורי בימים שלאחר ההדבקה 1 ו-2.
  2. בדקו סימנים של כאב/מצוקה בעכברים, כולל תנוחה מוזנחת, מעיל מוזנח, עייפות, קשיי נשימה, הפנים וירידה במשקל.
  3. אם בעלי חיים מציגים סימני בריאות מתדרדרים, התייעצו עם וטרינר. כל עכבר שנראה להראות מחמיר סימנים של כאב/מצוקה וירידה במשקל של 20% או יותר צריך להיות מורדמים.

8. כריתה של הפצע

  1. בסוף הניסוי, להקריב את העכברים באמצעות שאיפת CO2 , ואחריו פריקה צוואר הרחם. היפטר מגופת החיה בהתאם. לפרוטוקולים של המוסד
  2. מיטות של פציעת בלו באמצעות מספריים ומלקחיים סטריליים בתואר ראשון. מניחים כל מיטת הפצע ב-1 מ ל סטרילי בתוך צינור פוליפרופילן 1.5 mL. . הללו את רקמת הפצע עם מספריים יש לטפל בכל הפצעים כ-ASBL-2, גם אם אינם נחשבים לנגועים.
  3. דגירה על שייקר ב 300 סל ד עבור 2 h ב 4 ° c. . ומדלל את השפכים החיידקיים בערוץ הPBS צלחת הקולחים בקטריאלי מדולל על LB אגר כדי לספור את הנטל החיידקי.
  4. שקול פצעים נגועים אם האות זורח בפצע הוא מעל לאור הרקע חיידקים יותר מזוהים הפצע בקולחים מאשר פצעים שחוסנו עם PBS כמו שליטה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

באמצעות זן זורח של PAO1 עם קידוד פלבאמצע מערכת הכתבת היוקרה (PAO1: lux), אנו ביצעו פציעה מוטעית על עכברים, חוסנו פצעים אלה עם P. aeruginosa 24 שעות מאוחר יותר, ומדד נטל חיידקי לאורך זמן (איור 1 ואיור 2). תמונה ייצוגית שהושגה באמצעות מערכת הדמיה אופטית ממחישה כי מודל זה מביא לאור לגילוי (איור 3א). הזיהום הגיעה ביום 3 לאחר החיסון והמשיך 7 ימים לאחר החיסון המבוסס על שני ביולומי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פיתחנו רומן מתעכב . במודל לזיהום בפצע האסטרטגיה של עיכוב הידבקות בחיידקים עד 24 שעות לאחר פציעה מהצועית מאפשרת הערכה של דלקות פצעים במשך שבוע אחד. באמצעות זן זורח של P. aeruginosa, ניתן לעקוב אחר התקדמות הזיהום במהלך הקורס זיהום. מסלול ארוך יותר של זיהום לעומת אחרים P. aeruginosa מודלים זיהום יאפשר הזדמנויות חדשות ללמוד אינטראקציות הפתוגן המארחים וטיפולים הרומן מיקוד P. aeruginosa הפצע זיהומים. לדוגמה, כבר השתמשנו במודל זה כדי להדגים את התפקיד של בקטאוגיה Pf בעירור תגובה חיסונית אנטי <...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין אינטרסים פיננסיים מתחרים לגלות.

תודות

לשים-Tn5-EM7-lux-Km1 לבנות וקטור זורח היה מתנה אדיבה של J. הארדי. . השרטוטים נוצרו עם BioRender.com אנו מודים למעבדה של הג גורטנר על העצה שלהם על מודל זיהום הפצע. כמו כן, אנו מודים ל-T. דויל ממרכז סטנפורד לחדשנות ב Vivo הדמיה למומחיות הטכנית שלו. עבודה זו נתמכת על ידי מענקים R21AI133370, R21AI133240, R01AI12492093, ומענקים מאוניברסיטת סטנפורד ספארק, הקרן לחקר הרפואה של פלק ובסיס סיסטיק פיברוזיס (CFF) ל P.L.B. C. R. D נתמך על ידי T32AI007502. מלגת לימודים למדעים ולהנדסה באוניברסיטת לוברט סטרייר ביוגרפיה באוניברסיטת סטנפורד הנתמכת ב-J.M.S.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.9% הזרקת נתרן כלוריHospira2484457
18 גרם x 1 מחט סטריליתBD305195
25 גרם x 1 1/5 מחט סטריליתBD305127
ספוגית אלכוהולBD326895
Aura Imaging SoftwareSpectral Instruments Imagingn/a
Betadine Purdue Frederick Company19-065534
בופרנורפין SR LABZoopharmn/a
C57BL/6J עכברים זכריםמעבדת ג'קסון000664
אגרוף ביופסיה חד פעמי, 6 מ"מאינטגרה33-36
מספריים עדינים - טונגסטן קרבידכלי מדע עדינים14568-09
מעקר יבש חרוזי זכוכיתמכשיר הרווארד61-0183
פישר ביו-ריאגנטיםמגורעניםBP9744
כרית חימוםמיליארד804879481218
מזרק אינסולין עם מחט 28 גרםBD329461
Lago X מערכת הדמיהמכשירים ספקטרליים הדמיהn/a
מרק LB פישרביו-ריאגנטיםBP1426
מזרק Leur-Lok 1 מ"לBD309628
Mini Arco Animal TrimmerWahl Professional919152
Nair תחליב להסרת שיער עם כנסיית שמן תינוקותודווייטn/aזמין בכל בית מרקחת
מלקחיים מתומןFine ScienceTools 11041-08
צלחת פטריפלקון351029
פוספט חוצץ מלח (PBS) 1xCorning21-040-CV
עיתונות וחותם עטיפה נצמדתשמחה n/a
SafetyGlide מזרק אינסולין עם 30 גרם מחטBD305934
מזרק אינסולין Safetyglide, 1/2 מ"ל, 30 גרם x 5/16 TWBD305934
סולםOhaus Scout ProSP202
תוסף תזונה מספקהנרי שיין בריאותבעלי חיים29908
טגאדרם, 6 ס"מ x 7 ס"מ3M1624W
אגר

מקורות

  1. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair and Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).
  2. Serra, R., et al. Chronic wound infections: the role of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. Expert Review of Anti-infective Therapy. 13 (5), 605-613 (2015).
  3. Obritsch, M. D., Fish, D. N., MacLaren, R., Jung, R. Nosocomial infections due to multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa: epidemiology and treatment options. Pharmacotherapy. 25 (10), 1353-1364 (2005).
  4. Secor, P. R., et al. Filamentous Bacteriophage Produced by Pseudomonas aeruginosa Alters the Inflammatory Response and Promotes Noninvasive Infection In Vivo. Infection and Immunity. 85 (1), (2017).
  5. Rice, S. A., et al. The biofilm life cycle and virulence of Pseudomonas aeruginosa are dependent on a filamentous prophage. The ISME Journal. 3 (3), 271-282 (2009).
  6. Bayes, H. K., Ritchie, N., Irvine, S., Evans, T. J. A murine model of early Pseudomonas aeruginosa lung disease with transition to chronic infection. Scientific Reports. 6, 35838(2016).
  7. van Gennip, M., et al. Interactions between polymorphonuclear leukocytes and Pseudomonas aeruginosa biofilms on silicone implants in vivo. Infection and Immunity. 80 (8), 2601-2607 (2012).
  8. Trøstrup, H., et al. Pseudomonas aeruginosa biofilm aggravates skin inflammatory response in BALB/c mice in a novel chronic wound model. Wound Repair and Regeneration. 21 (2), 292-299 (2013).
  9. Zhao, G., et al. Time course study of delayed wound healing in a biofilm-challenged diabetic mouse model. Wound Repair and Regeneration. 20 (3), 342-352 (2012).
  10. Brubaker, A. L., Rendon, J. L., Ramirez, L., Choudhry, M. A., Kovacs, E. J. Reduced neutrophil chemotaxis and infiltration contributes to delayed resolution of cutaneous wound infection with advanced age. Journal of Immunolology. 190 (4), 1746-1757 (2013).
  11. Watters, C., et al. Pseudomonas aeruginosa biofilms perturb wound resolution and antibiotic tolerance in diabetic mice. Medical Microbiology and Immunology. 202 (2), 131-141 (2013).
  12. Lee, C., Kerrigan, C. L., Picard-Ami, L. A. Cyclophosphamide-induced neutropenia: effect on postischemic skin-flap survival. Plastic and Reconstructive Surgery. 89 (6), 1092-1097 (1992).
  13. Sweere, J. M., et al. The immune response to Chronic Pseudomonas aeruginosa wound infection in immunocompetent mice. Advances in Wound Care. , (2019).
  14. Sweere, J. M., et al. Bacteriophage trigger antiviral immunity and prevent clearance of bacterial infection. Science. 363 (6434), (2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

BSL 2

מאמרים קשורים