בפרוטוקול זה, שיטה של מורטין איון בידוד והשתלת לתוך רקמת השומן הלבן התת עורית מתוארת. האיים המבודדים של מורנה ממורג מושתלים לתוך המטופל מורין באמצעות קרום מרתף הידרוג'ל. רמת הגלוקוז בדם של המטופלים מנוטרים, ו ניתוח היסטולוגיה של שתלי איון מבוצע.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
השתלת מודל שומן לבן תת-עורית (ISWAT) מדגם ההשתלה של איויין מורנה
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
השתלת איון הלבלב הוא טיפול רפואי מבוסס היטב עבור סוכרת סוג 1. קפסולת הכליה הוא האתר הנפוץ ביותר עבור השתלת איון במודלים מכרסמים. עם זאת, קפסולת הכליה הדוקה מגבילה את ההשתלה של איונים מספיקים בבעלי חיים גדולים ובני אדם. רקמת השומן הלבנה לבנה תת עורית (ISWAT), חלל תת עורי חדש, נמצא להיות אתר בעל ערך פוטנציאלי עבור השתלת איון. באתר זה יש אספקת דם טובה יותר מאשר חללים תת עורית אחרים. יתר על כן, ISWAT להכיל מסה איון גדול יותר מאשר קפסולת הכליה, והשתלת לתוך זה הוא פשוט. כתב יד זה מתאר את ההליך של בידוד איון העכבר והשתלת באתר ISWAT של העכבר סוכרתית התחביריים. באמצעות פרוטוקול זה, מורטין איונים הלבלב היו מבודדים על ידי העיכול הסטנדרטי קולגן ומטריצות קרום המרתף הידרוג'ל שימש לתיקון איונים מטוהרים באתר ISWAT. רמות הגלוקוז בדם של עכברי המטופל היו מנוטרים במשך יותר מ 100 ימים. שתלי איון אוחזרו ביום 100 לאחר ההשתלה ניתוח היסטולוגית. הפרוטוקול להשתלה איון באתר ISWAT המתואר בכתב יד זה הוא פשוט ואפקטיבי.
מבוא
השכיחות העולמית והשכיחות של סוכרת מסוג 1 (T1DM) עולים במהירות, על פי הנתונים הסטטיסטיים של הפדרציה הבינלאומית לסוכרת (צה"ל)1. השתלת איון היא אחת הגישות המבטיחים ביותר לטיפול T1DM4. מאז פריצת הדרך הגדולה שנעשתה השתלת איון קליני באמצעות פרוטוקול אדמונטון2 דווח, תפקוד הישרדות השתל איון ב T1DM הנמענים לאחר 5 שנים מגיע כעת על 50%3.
בעבר, מספר אתרי השתלת, כגון הכבד, כמוסת כליות, טחול, אזור תוך שרירי, מרחב תת עורי, מח עצם, ואת הכיס אונטל נחקרו עבור השתלת איון ניסיוני5,6,
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים בפרוטוקול זה עקבו אחר עקרונות הרווחה של בעלי החיים של הוועדה לסקירת האתיקה של בית החולים השני של שנזן. מקבלי השתל איון ותורמים היו 8-עד 10-שבוע בן C57BL/6 עכברים זכרים שנרכשו מהמרכז הרפואי בעלי חיים בפרובינצית גואנג-דונג. ההליך של קצירת, בידוד, תרבות, או מינהל של תאים שנקטפו בוצעו בתנאים אספטי.
1. הכנה איון
- הכנת הקולגן הסוג V פתרון עבודה. שוקלים את הסוג V ולפזר עם D-האנק של מאגר לריכוז הסופי של 1 מ"ג/mL, מסנן באמצעות 0.22 יקרומטר מזרק מונחה יחידת מסנן ומזרק 60 mL ו-precool קרח. יש צורך בנפח של 5 מ"ל עבור כל נמען תורם.
- המתת חסד של 10 שבועות בן C57BL/6 עכבר זכר (23 ± 2 g) על ידי פריקה צוואר הרחם לרסס את החלק החי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
שני הליכים מוצגים בפרוטוקול זה: הכנה מורנה איון השתלת איון לאתר ISWAT. , בהליך הראשון לאחר השימוש והעיכול עם מסוג V קולגן הפתרון, טיהור עם Histopaque-1119 ו Histopaque-1077 וצעד נוסף לקטוף יד, איונים murine מבודדים יהיה טהור מספיק עבור השתלת (כפי שמוצג באיור 1) ואת איונים מבודדים כי יש כדאיות גבוהה ישמש השתלת (כפי שמוצג באיור 2). בהליך השני, האינדוקציה סוכרת עם כימיה STZ הוא קריטי. המינון האופטימלי של STZ תלוי במתח העכבר גיל, ואינדוקציה מוצלחת של סוכרת מוגדר על .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
השתלת איון הלבלב הוא טיפול מבטיח לטיפול T1DM. ההשפעה של טיפול זה מושפע גורמים רבים ובחירת אתר אופטימלי עבור השרשה איון חשוב מאוד. האתר האנטומי האידיאלי עבור השתלת איון צריך את המאפיינים הבאים: נגישות להשתלה פשוטה, ביופסיה, והליכי אחזור השתל; סיבוכים מופחתים; שיעור הצלחה גבוהה של בקרת גלוקוז בדם; ולטווח ארוך הישרדות של שתלי איון6,16.
הצוות שלנו תיאר בעבר פרוטוקול עבור השתלת איון ב המנטום במודל murine17. במהלך המנ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אינם מדווחים על ניגודי אינטרסים.
תודות
עבודה זו נתמכת על ידי מענקים לאומי מפתח R & D תוכנית של סין (2017YFC1103704) קרנות מיוחדות לבניית בתי חולים ברמה גבוהה בפרובינצית גואנג-דונג (2019), פרויקט Sanming של הרפואה שנזן (SZSM201412020), קרן לרמה גבוהה משמעת רפואית בנייה של שנג (2016031638), קרן שנזן של המדע והטכנולוגיה (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556), קרן שנזן לבריאות ותכנון משפחה הנציבות (SZXJ2017021SZXJ2018059), רפואי הקרן למחקר מדעי של פרובינציית גואנג-דונג של סין (A2019218), הקרן פוסט-דוקטורט בסין (2018M633218).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.22 μ m יחידת סינון מונעת מזרק | Merck Millipore | SLHV033RB | |
| צינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל | Axygen | MCT-150-C | |
| 5 מ"ל פסטר פיפטה | ג'ינגאן ביולוגית, סין | J00085 | |
| מזרק 5 מ"ל | Szboon, סין | 20170829 | |
| 50 מ"ל צינור חרוטי | קורנינג | 430829 | |
| 5-0 תפר כירורגי | sh-Jinhuan, סין | CR537 | |
| מזרק 60 מ"ל | Szboon, סין | 20170623 | |
| 75% אתנול | LIRCON, סין | 9180527 | |
| Alexa Fluor 488 חמור נגד עכבר IgG (H + L) | Invitrogen | A21202 | דילול (1:200) |
| נוגדן גלוקגון נגד עכבר | Abcam | ab10988 | דילול (1:100) |
| נוגדן אינסולין נגד עכבר | תא טכנולוגיית איתות | 3014s | דילול (1:100) |
| מחט זלוף מחודדת קהה | Oloey, סין | 005 | 32G, |
| צהוב BSA | Meilune, סין | MB4219 | |
| C57BL / 6 עכברים | מרכז בעלי חיים רפואיים במחוז גואנגדונג | 8 ~ 10 שבועות | |
| צלחת תרבית תאים | BIOFIL, סין | TCD000100 | כללי, לא מטופל, קוטר 87.8 מ"מ |
| צנטריפוגה | Thermo Scientific | ST16R | |
| cephalosporin | Lukang רפואי, סין | 150303 | |
| CMRL-1066 | Sigma-Aldrich | C0422 | |
| Codos Pet Clipper | Szcodos, סין | CP-8000 | |
| קולגנאז מסוג | V Sigma | C9262 | |
| DAPI | Thermo Fisher | D1306 | |
| המאגר של D-hank | Coolaber, סין | PM5140-10 | |
| dithizone | Sigma-Aldrich | D5130 | |
| Dnase I | Sigma-Aldrich | D4263 | |
| Eosin צביעת | מדיה Beyotime Biotech, סין | C0109 | |
| FBS | GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| פלואורסצאין דיאצטט (FDA) | תרמו פישר | F1303 | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי | Leica | DMIL | |
| קצות פיפט לטעינת ג'ל | קורנינג | CLS4884 | |
| HBSS | Coolaber, סין | PM5150-10 | |
| המטוקסילין מכתים מדיה איתות | תאים טכנולוגיית איתות תאים | 14166S | |
| HISTOPAQUE-1077 | סיגמא-אולדריץ' | RNBG0522 | |
| HISTOPAQUE-1119 | Sigma-Aldrich | RNBG0536 | |
| הידרוג'ל | BD Biosciences | 356234 | מטריצת קרום מרתף |
| Iodophor | LIRCON, סין | צלחת | |
| DVS, סין | AN-5058548 | מתוצרת עצמית, צלחת זכוכית מרוססת בצבע שחור | |
| סרט דבק רפואי | Cofoe, סין | K12001 | |
| מיקרו-פינצטה לא פולשנית | RWD Life Science | F11033-11 ו-F12016-15 | |
| One Touch ultraeasy מערכת ניטור סוכר בדם בסיסית | Johnson & Johnson | 33391713 | |
| מספריים עיניים | RWD Life Science | S12012-12 ו- S11001-08 | |
| P/S (פניצילין / סטרפטומיצין) | Gibco | 15140-122 | |
| נתרן פנטוברביטל | סיגמא-אולדריץ' | P-010 | |
| פרופידיום יודיד | סיגמא-אולדריץ' | P4864 | |
| STZ (סטרפטוזוטוצין) | סיגמא-אולדריץ' | S0130 | |
| רצועת בדיקה | GenUltimate | 100-50 | |
| TRITC מצומד עזים אנטי-ארנב IgG (H + L) | proteintech | SA00007-2 | דילול (1: 200) |
| מהדק כלי דם | RWD מדעי החיים | R31006-04 |
מקורות
- Cho, N. H., et al. IDF Diabetes Atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045. Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).
- Shapiro, A. M., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
