הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ייצור פלזמה אוטולוגית עשירה בטסיות דם להגברת הרחבת פיברובלסטים אנושיים במבחנה

3.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60816

⸱

24 בפברואר 2021

 ,  , 
1Department of Plastic, Reconstructive and Aesthetic Surgery, Geneva University Hospitals, Faculty of Medicine, Geneva University, 2Regen Lab SA

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מציג מכשיר המייצר PRP כדי להגביר את ההתרחבות במבחנה של תאים במערכת תרבית פיברובלסטים אוטולוגית 100%.

תקציר

כיום יש עניין קליני רב בשימוש בפיברובלסטים אוטולוגיים לתיקון העור. ברוב המקרים נדרשת תרבית תאי עור במבחנה. עם זאת, לתרבית תאים באמצעות מדיה של תרבית קסנוגנית או אלוגנית יש כמה חסרונות (כלומר, סיכון להעברת חומרים זיהומיים או התפשטות תאים איטית). כאן, מערכת תרבית אוטולוגית מפותחת להרחבת תאי פיברובלסטים בעור אנושי במבחנה באמצעות פלזמה עשירה בטסיות דם (PRP) של המטופל עצמו. פיברובלסטים עוריים אנושיים מבודדים מהמטופל בזמן שהם עוברים ניתוח בטן. התרביות נמצאות במעקב עד 7 ימים באמצעות מדיום בתוספת סרום בקר עוברי (FBS) או PRP. תכולת תאי הדם בתכשירי PRP, שגשוג והתמיינות פיברובלסטים מוערכים. פרוטוקול זה מתאר את השיטה לקבלת תכשיר סטנדרטי ולא מופעל של PRP באמצעות מכשיר רפואי ייעודי. התכשיר דורש רק מכשיר רפואי (CuteCell-PRP) וצנטריפוגה. מכשיר זה מתאים בתנאי פרקטיקה רפואיים מספיקים והוא מערכת סגורה חד-שלבית, אפירוגנית וסטרילית הדורשת צנטריפוגת ספין אחת רכה של 1,500 x גרם למשך 5 דקות. לאחר הצנטריפוגה, מרכיבי הדם מופרדים, ואת פלזמה עשירה טסיות נאסף בקלות. מכשיר זה מאפשר הכנה מהירה, עקבית ומתוקננת של PRP שיכול לשמש כתוסף תרבית תאים להרחבת תאים במבחנה של תאים אנושיים. ה- PRP המתקבל כאן מכיל ריכוז טסיות פי 1.5 בהשוואה לדם שלם יחד, עם הסרה מועדפת של תאי דם אדומים ולבנים. נראה כי PRP מציג השפעה מגבירה בהתפשטות תאים בהשוואה ל- FBS (פי 7.7) וכי פיברובלסטים מופעלים בטיפול PRP.

מבוא

רפואה רגנרטיבית שואפת לרפא או להחליף רקמות ואיברים שניזוקו על ידי גיל, מחלה או טראומה, כמו גם לתקן פגמים מולדים. בטיפול אוטולוגי, תאים או רקמות נסוגים מהמטופל, מורחבים או משתנים, ואז מוצגים מחדש לתורם. לצורה זו של טיפולים יש פוטנציאל רחב בתחום הדרמטולוגיה1. בטיפול אוטולוגי בפיברובלסטים, הפיברובלסטים של המטופל מתורבתים ומוזרקים מחדש לטיפול בקמטים, קמטוטים או צלקות אקנה. מכיוון שפיברובלסטים הם התאים הפונקציונליים העיקריים בדרמיס, הזרקה של פיברובלסטים אוטולוגיים עשויה להיות מועילה יותר מטיפולים אחרים בהצערת הפנים2.

בעור, פיברובלסטים אחראים לסינתזה ולהפרשה של חלבונים חוץ-תאיים (כלומר קולגן, אלסטין, חומצה היאלורונית וגליקוזאמינוגליקנים). הם גם משחררים גורמי גדילה המווסתים את תפקוד התא, נדידה ואינטראקציות בין מטריצת תאים/תאים בהומאוסטזיס עור רגיל ובריפוי פצעים3. פיברובלסטים עוריים כבר הוצגו כטיפול תאי קליני פוטנציאלי לריפוי פצעי עור4, התחדשות רקמות5, או מילוי עורי בהליכים אסתטיים ופלסטיים6. מחקרים מסוימים אף מצביעים על כך שבהקשר של רפואה רגנרטיבית, פיברובלסטים עשויים להיות טיפול תאי מעשי ויעיל יותר מאשר תאי גזע מזנכימליים7.

כדי להשיג מספר מספיק של פיברובלסטים ליישומים קליניים, הרחבת תאים היא בדרך כלל חובה. תרבית תאי Ex vivo/in vitro דורשת תווך בסיסי בתוספת גורמי גדילה, חלבונים ואנזימים לתמיכה בהידבקות ובשגשוג תאים. סרום בקר עוברי (FBS) הוא תוסף נפוץ לתרבית תאים, מכיוון שדם העובר 1) עשיר בגורמי גדילה בהשוואה לדם בוגר 2) מציג תכולת נוגדנים נמוכה8. ככל שהטיפול התאי מתקדם, ישנם חששות לגבי הבטיחות של תנאי תרבית תאים קלאסיים שבהם FBS מתווסף למדיום התרבית. יתר על כן, יש כיום נטייה להחליף את FBS בחלופות9. מספר תחליפים של FBS הראו תוצאות מבטיחות10.

חלופת הפלזמה העשירה בטסיות דם (PRP) נבחרה כאן, ופיתחנו מכשיר רפואי לייצור תכשיר סטנדרטי של PRP, בשם CuteCell-PRP. השימוש המיועד במכשיר זה הוא הכנת PRP אוטולוגי שישמש כתוסף מדיה לתרבית להרחבת תאים אוטולוגיים בתנאי GMP.

PRP מוגדר כתרחיף טסיות מרוכז בפלזמה. מכיוון שישנם פרוטוקולי הכנה רבים, הנבדלים זה מזה ב-1) כמות הדם הדרושה, 2) סוגי המכשירים שבהם נעשה שימוש, ו-3) פרוטוקול צנטריפוגה, ריכוזי טסיות הדם המתקבלים משתנים מעט מעל ליותר מפי 10 מערך הבסיס של הדם. בנוסף, תכשירי PRP מכילים רמות משתנות של זיהום תאי דם אדומים ולבנים. המינוח "PRP" משמש אפוא לתיאור מוצרים השונים מאוד בהרכבם הביולוגי ובהשפעות הטיפוליות האפשריות שלהם.

ברוב המחקרים, החלפת FBS מושגת באמצעות ריכוזים שונים של PRP המופעל (על ידי טרומבין או סידן). הפעלה מלאכותית זו מעוררת שחרור מיידי וחשוב של גורמי גדילה טסיות מ 15 דקות עד 24 שעות11. לכן, הוא האמין כי הפעלת טסיות אינו רצוי עבור יישומים בתרביות תאים, שבו שחרור איטי של גורמי גדילה מ degranulation טסיות הדרגתי נדרש.

טיפול PRP כרוך בהכנת טסיות דם אוטולוגיות בפלזמה מרוכזת12. ריכוז הטסיות האופטימלי אינו ברור, ומגוון רחב של מכשירים מסחריים זמינים להכנת PRP13. חוסר סטנדרטיזציה זה נובע מחוסר עקביות בין מחקרים והוביל לקופסה שחורה לגבי מינון ועיתוי ההזרקה. פרוטוקול זה מתאר הליך להשגת PRP אוטולוגי באמצעות מכשיר PRP ייעודי זה להרחבת פיברובלסטים בעור במודל תרבית אקס ויו אוטולוגי 100%.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

פרוטוקול המחקר תואם את הצהרת הלסינקי, וכל החולים סיפקו הסכמה מדעת בכתב לפני שהשתתפו במחקר. דגימות עור מתקבלות מנשים בריאות העוברות ניתוח בטן במחלקה לכירורגיה פלסטית, משחזרת ואסתטית בבתי החולים האוניברסיטאיים בז'נבה (ז'נבה, שוויץ). הנוהל תואם את עקרונות הצהרת הלסינקי ואושר על ידי ועדת האתיקה המוסדית המקומית (פרוטוקול #3126).

1. הכנת PRP

הערה: צינורות CuteCell-PRP (טבלת חומרים) מיועדים להכנה מהירה של PRP מנפח קטן של דם המטופל במערכת מעגל סגור.

  1. איסוף דם שלם
    הערה: קצירת דם אוטולוגי מווריד היקפי של הזרוע באמצעות מחט פרפר המחוברת ישירות לצינור PRP, על פי פרוטוקול האיסוף של המכון הרפואי. דם יכול להיות נסוג ישירות דרך צינורית ורידי אם החולה נמצא תחת הרדמה.
    1. פתח את חבילת שלפוחית הצינור. בצע את ניקוב ורידי ולמלא את המספר הרצוי של צינורות PRP עם דם שלם. הוואקום בתוך הצינורות יאפשר איסוף אוטומטי של נפח הדם הדרוש (~ 10 מ"ל).
    2. בזהירות להפוך את צינורות הפוך כמה פעמים כדי לערבב את הדם עם נוגדי קרישה.
    3. בתוך ארון בטיחות ביולוגית (Class 2), הסר 100 μL של דם מלא הכולל באמצעות מזרק 1 מ"ל לספירה נוספת של מספר תאי הדם.
  2. צנטריפוגה
    הערה: ודא שהצנטריפוגה מאוזנת כראוי לפני הפעלתה.
    1. לאחר איסוף הדם בצינורות PRP, במידת הצורך, להכין צינור איזון (מסופק בנפרד) עם מים באותה רמה כמו הדם בצינור PRP. הניחו את הצינורות המלאים בצנטריפוגה זה מול זה, וודאו שהמכונה מאוזנת.
    2. דגימות צנטריפוגות בגודל 1,500 x גרם למשך 5 דקות.
      הערה: הגדר את מהירות הסל"ד המתאימה בהתאם להוראות יצרן הצנטריפוגות. לאחר הצנטריפוגה, הדם יהפוך מקוטע. תאי הדם האדומים והלבנים לכודים מתחת לג'ל, וטסיות הדם מתיישבות על פני השטח של הג'ל (איור 1).
  3. הפוך בעדינות את צינור PRP 20x כדי להשעות מחדש את שקע טסיות הדם בפלזמה supernatant.
    הערה: ודא שהטסיות מנותקות לחלוטין מהג'ל. הפלזמה צריכה להשתנות משקופה ושקופה לעכורה. אם קיימים אגרגטים טסיות, יש לאסוף אותם עם הפלזמה.
  4. כדי לאסוף PRP, קח את פתרון הפלזמה מהצינור באמצעות מכשיר העברת מזרק המחובר מזרק 10 מ"ל.
    הערה: כ-5 מ"ל של PRP יתקבלו מכל צינור. פתרון ה- PRP מוכן כעת לערבב את ההכנה הסופית במדיום. ניתן לשמור את התמיסה בטמפרטורת החדר (RT) מתחת לארון הבטיחות עד לשלבים עתידיים הכוללים מנתח המטולוגי ושימוש.
  5. לפני השימוש ב- PRP, קבע את ריכוז טסיות הדם, נפח טסיות ממוצע ומספר תאי דם אדומים ולבנים באמצעות מנתח המטולוגי אוטומטי (טבלה של חומר). כדי לעשות זאת, בזהירות למשוך 100 μL של הפתרון ולהעביר לתוך צינור 1.5 מ"ל.
    הערה: PRP משמש כתוסף תרבית אוטולוגית בריכוז שבין 5-20% v/v. יש לקבוע את הריכוז האופטימלי של PRP עבור כל קו תא. כדי למנוע היווצרות קריש פיברין, יש להוסיף לתרבית הסופית 2 U/mL הפרין.

2. בידוד של פיברובלסטים אוטולוגיים ותרבית במדיה עם תוספת FBS או PRP

  1. יש לשטוף דגימות עור במי מלח חוצצי פוספט (PBS) על ידי ניעור עדין בצינור פוליפרופילן בנפח 50 מ"ל.
  2. אם דגימת העור גדולה יחסית (>10 ס"מ2), הניחו את הדגימה על מכסה צלחת תרבית רקמהבגודל 150 ס"מ (צד אפידרמיס כלפי מטה). הסר את רקמת השומן התת עורית באמצעות זוג מלקחיים ומספריים. כדי למנוע מהרקמה להתייבש, שטפו את הרקמה כל כמה דקות ב-PBS.
    הערה: השתמש בתרבית רקמה קטנה יותר עבור דגימות קטנות יותר.
  3. כאשר חיתוך השומן הושלם, חתכו את הרקמה לרצועות בגודל של כ-0.5X1.5 ס"מ באמצעות אזמל סטרילי.
  4. יש להוסיף 5 מ"ל תערובת קולגן-דיספאז (טבלת חומרים; 14 יחידות Wünsch/מ"ל) לצינור סטרילי בנפח 15 מ"ל.
  5. העבר את הרקמה החתוכה לצינור, וודא כי חתיכות הרקמה שקועות בתמיסה. יש לסגור את הצינור היטב.
  6. מניחים את הצינורות באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס עם רעידות מסלוליות במשך 150 דקות. לאחר הדגירה, הניחו את הצינור המכיל את הרקמה בארון הבטיחות הביולוגית.
  7. הניחו את המכסה של צלחת תרבית סטרילית בקוטר 100 מ"מ הפוכה בארון הבטיחות הביולוגית. מעבירים את תמיסת הרקמה המעוכלת לתחתית צלחת התרבית בקוטר 100 מ"מ, מבלי להתיז. אם נותרו חתיכות רקמה כלשהן בצינור, השתמש בפיפט סטרילי של 1 מ"ל או במלקחיים סטריליים כדי להעביר את חתיכות הרקמה לתחתית צלחת התרבית של 100 מ"מ.
  8. כאשר רצועת האפידרמיס פונה כלפי מעלה, יש להפריד את יריעת האפידרמיס השלמה מהדרמיס באמצעות שני זוגות מלקחיים. החזיקו את הדרמיס של רצועת הרקמה עם זוג מלקחיים ואת קצה האפידרמיס עם זוג מלקחיים נוסף. מקלפים את הדרמיס והאפידרמיס לשני חלקים, ושומרים את החתיכות המופרדות על אותו מכסה. נסה לבצע שלב זה במהירות ולחזור על המניפולציה עבור כל פיסת רקמה.
  9. מעבירים את חתיכות העור לצלחת תרבית חדשה בקוטר 100 מ"מ המכילה PBS.
  10. באמצעות מלקחיים מעבדתיים, מניחים את חתיכות העור בתוך צינור פוליפרופילן 15 מ"ל עם 3 מ"ל של 0.3% טריפסין/PBS. יש לדגור במשך 10-20 דקות באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ולהפוך את הצינור מספר פעמים כל 2-3 דקות.
  11. כדי לעצור את התגובה האנזימטית, יש להוסיף 3-5 מ"ל של מדיום גידול שלם קר כקרח (מדיום הנשר השונה של דולבקו [DMEM] או RPMI המכיל 10% FBS). מערבלים את הצינור במרץ מספר פעמים. סנן את מתלה הפיברובלסט דרך רשת ניילון 85 מיקרומטר (ממוקם מעל החלק העליון של צינור 50 מ"ל) כדי להסיר פסולת עורית.
  12. צנטריפוגה למשך 10 דקות ב 150 x גרם, ב 4 ° C. שאפו את הסופרנאטנט והשעו מחדש את הגלולה ב-100-1,000 מיקרוליטר של מצע צמיחה שלם.
  13. באמצעות טריפאן כחול (גורם דילול של x2) מעורבב עם השעיית התא, לספור את מספר התאים הכולל קיימא על ידי מילוי החדר של המוציטומטר.
    הערה: כדאיות התא תלויה בתנאים המשמשים לעיכול אנזימטי. כדי להגביר את התאוששות התאים ואת כדאיות התא, דגימת העור עשויה להיחתך לחתיכות קטנות יותר.
  14. צלחת 3-10 x 104 תאים ב-5 מ"ל של מצע גידול FBS מלא (DMEM, 10% FBS מנוטרל בחום למשך 60 דקות ב-56°C, 1% 1 M תמיסת חיץ HEPES, 1% 100x תערובת חומצות אמינו לא חיוניות, 1% 100x L-גלוטמין, 1% 100x פניצילין/סטרפטומיצין, 1% 100x נתרן פירובט) בצלוחית תרביתרקמה בגודל 25 ס"מ. לדגור ב 37 °C (77 °F).
    הערה: פיברובלסטים קיימא יתחברו לבקבוק תוך 24 שעות ויתחילו להציג את צורת הציר תוך 2-3 ימים.
  15. ביום השני, שואפים את המדיום המכיל תאים שאינם דבקים ומוסיפים מדיום טרי.
    הערה: מכיוון שתאים מתים במדיום התרבית משפיעים על הצמיחה של פיברובלסטים בני קיימא, יש להסיר תאים מתים שאינם דבקים בתרבית.
  16. שנה את המדיום כל 3-4 ימים עד שהתרבות מגיעה למפגש של 70-80%.
  17. כדי לקצור פיברובלסטים, יש לשטוף עם PBS ולדגור עם תמיסת טריפסין/EDTA למשך 3 דקות בטמפרטורה של 37°C באינקובטור.
  18. כדי לעצור את התגובה, הוסף 3-5 מ"ל של מדיום צמיחה מלא חם (DMEM או RPMI המכיל 10% FBS). קח aliquot של השעיית התא כדי לספור את התאים עם המוציטומטר. צנטריפוגה את המתלה במשך 5 דקות ב 200 x גרם ולהסיר את המדיום על ידי שאיפה.
  19. תרבית את הפיברובלסט בתווך PRP (DMEM, 20% PRP, 1% 1 M תמיסת חיץ HEPES, 1% 100x תערובת חומצות אמינו לא חיוניות, 1% 100x L-גלוטמין, 1% 100x פניצילין/סטרפטומיצין, 1% 100x נתרן פירובט, 2 U/mL הפרין) באינקובטור ב 37 ° C.
    הערה: צפיפות התאים המינימלית המומלצת היא 4,000 תאים בני קיימא/ס"מ2.
  20. כדי להעריך את השפעות PRP על התפשטות פיברובלסטים, פיברובלסטים זרעים (מעבר 2) ב -24 צלחות באר בצפיפות של 8 x 103 תאים לכל באר בתווך PRP עם ריכוזי PRP שונים (1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40% ו -50%) ועם 2 U/mL הפרין או בתנאים בינוניים של תרבות קלאסית (10% FBS). לאחר 7 ימים של תרבית, להוסיף צבע חיוני (התפשטות תאים סגול) לתאים ולהעריך את ההתרבות על ידי ציטומטריית זרימה.
  21. כדי לחקור סידורים מחדש של שלד ציטו-שלד, תאי זרע ב-96 לוחות תחתונים שטוחים שחורים/שקופים היטב בריכוז של 1 x 10 5 תאים/מ"ל ב-DMEM מלא של צמיחת FBS (ראה שלב 2.14) בתוספת FBS של0.5 % למשך 24 שעות. יש לטפל בתאים עם 10% FBS או ריכוזי PRP שונים (1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40% ו-50%) במשך 7 ימים.
    1. תקן את הפיברובלסטים עם 4% פרפורמלדהיד למשך 10 דקות וחדיר עם 0.1% Triton X-100 למשך 5 דקות ב- RT. הכתימו את הפיברובלסטים עם 50 מ"ל של 5 U/mL phalloidin, שטפו 2x עם PBS, וסמנו עם 50 מ"ל של 1 מ"ג/מ"ל 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) למשך 5 דקות. Cytation 3 cell imaging multimode reader (BioTek) שימש כדי להמחיש צביעת phalloidin.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

טכנולוגיה זו, המוגנת בפטנט, היא מכשיר רפואי פשוט, מהיר וניתן לשכפול המשמש לייצור תכשירי PRP סטנדרטיים. זוהי מערכת חד שלבית, סגורה לחלוטין המאפשרת הכנת PRP מדם שלם ורידי לאחר 5 דקות של צנטריפוגה ב 1,500 x גרם (בשל טכנולוגיית ג'ל ההפרדה). ה- PRP המתקבל לאחר ניקוי הצנטריפוגה מתאי דם אדומים ולבנים, היושבים מתחת לג'ל. לאחר כמה היפוכי צינור, טסיות הדם שנמצאות מעל הג'ל מושעות מחדש בפלזמה, וה-PRP מוכן לשימוש (איור 1).

כדי להעריך את יכולת השחזור של תכולת תאי הדם ב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

היתרונות של שימוש בפיברובלסטים אוטולוגיים כחלופה טבעית בהשוואה לחומרי מילוי אחרים בטיפול בתאי פצע כוללים תאימות ביולוגית טובה, תופעות לוואי מינימליות וקלות הקציר והשימוש. עם זאת, לפני השימוש בטיפולים אלה במסגרת קלינית יומיומית, יש צורך במחקרים פרה-קליניים נאותים כדי לזהות את תכונות הגידול ולהעריך את התפקוד הביולוגי והבטיחות של פיברובלסטים מבודדים לפני ואחרי ההשתלה. לכן, מיד לאחר תהליך הבידוד, הרחבה חוץ גופית של התאים חייבת להתבצע במהירות על מנת להגביל את מספר חלוקות התא. תנאי התרבית חייבים להיות מבוקרים היטב כדי להבטיח א...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

פרויקט זה מומן על ידי Regen Lab SA. שרה ברנדט היא מנהלת הפרויקט הראשי של תרפיה תאית במעבדת Regen ומועסקת על ידי Regen Lab SA. אנטואן טורזי הוא מנכ"ל RegenLab.

תודות

אנו מודים למר גרגורי שנייטר על הסיוע הטכני בנתוני ציטומטריית זרימה; פרופ' מיוריאל קונדט (מעבדת הפרמקוגנוזיה, בית הספר למדעי התרופות ואוניברסיטת ז'נבה) על התרת השימוש בציטומטר זרימת Attune ובמיקרוסקופ Cytation 3 בעל תפוקה גבוהה; פרופסור בריג'יט פיטט לייעוץ מדעי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
96 באר שחור שקוף שטוח תחתוןBD פלקון353219 32/מארז
עקבות תאים צבעסגול תרמו פישר מדעיC34557180 בדיקות
CuteCell PRPRegen Lab SACC-PRP-3T3 צינורות לחבילה
DAPISigmaD95421 מ"ג
DMEMGibco52400-025500 מ"ל
FBSGibco10270106500 מ"ל
גלוטמין 200 מ"לGibco25030024100 מ"ל
מונה המטולוגיהSysmexKK-21N
Heparin 5000E ליקמיןDrossapharm AG0.5 מ"ל
HEPES Buffer Solution 1MGibco15630-056100 מ"ל
Liberase DHRoche54010540012x 5 מ"ג לחבילה
MEM NEAA 100xGibco11140-035100 מ"ל
Na Pyruvate 1 מ"ג/מ"לGibco11360-039100 מ"ל
פניצילין סטרפטומיציןGibco15140122100 מ"ל
פלואידין אלקסה פלואור 488בדיקות מולקולריותA12379300 יחידות
RPMIGibco31966-021500 מ"ל
טריפסין 1x 0.25%Gibco25050-014100 מ"ל
טריפסין EDTA 0.25%גיבקו25200056100 מ"ל

מקורות

  1. Kumar, S., Mahajan, B. B., Kaur, S., Singh, A. Autologous therapies in dermatology. The Journal of Clinical and Aesthetic Dermatology. 7 (12), 38-45 (2014).
  2. Martin, I., et al. The survey on cellular and engineered tissue therapies in Europe in 2009. Tissue Engineering. Part A. 17 (17-18), 2221-2230 (2011).
  3. Stunova, A., Vistejnova, L. Dermal fibroblasts-A heterogeneous population with regulatory function in wound healing. Cytokine & Growth Factor Reviews. 39, 137-150 (2018).
  4. Thangapazham, R. L., Darling, T. N., Meyerle, J. Alteration of skin properties with autologous dermal fibroblasts. International Journal of Biological Sciences. 15 (5), 8407-8427 (2014).
  5. Costa-Almeida, R., Soares, R., Granja, P. L. Fibroblasts as maestros orchestrating tissue regeneration. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (1), 240-251 (2018).
  6. Weiss, R. A. Autologous cell therapy: will it replace dermal fillers. Facial Plastic Surgery Clinics of North America. 21 (2), 299-304 (2013).
  7. Ichim, T. E., O'Heeron, P., Kesari, S. Fibroblasts as a practical alternative to mesenchymal stem cells. Journal of Translational Medicine. 16 (1), 212(2018).
  8. Gstraunthaler, G. Alternatives to the use of fetal bovine serum: serum-free cell culture. ALTEX. 20 (4), 275-281 (2003).
  9. Karnieli, O., et al. A consensus introduction to serum replacements and serum-free media for cellular therapies. Cytotherapy. 19 (2), 155-169 (2017).
  10. van der Valk, J., et al. Fetal Bovine Serum (FBS): Past - Present - Future. ALTEX. 35 (1), 99-118 (2018).
  11. Cavallo, C., et al. Platelet-Rich Plasma: The Choice of Activation Method Affects the Release of Bioactive Molecules. BioMed Research International. 2016, 6591717(2016).
  12. Peng, G. L. Platelet-Rich Plasma for Skin Rejuvenation: Facts, Fiction, and Pearls for Practice. Facial Plastic Surgery Clinics of North America. 27 (3), 405-411 (2019).
  13. Fadadu, P. P., Mazzola, A. J., Hunter, C. W., Davis, T. T. Review of concentration yields in commercially available platelet-rich plasma (PRP) systems: a call for PRP standardization. Regional Anesthesia and Pain Medicine. 44, 652-659 (2019).
  14. Berndt, S., Turzi, A., Pittet-Cuenod, B., Modarressi, A. Autologous Platelet-Rich Plasma (CuteCell PRP) Safely Boosts In Vitro Human Fibroblast Expansion. Tissue Engineering. Part A. 25 (21-22), 1550-1563 (2019).
  15. Zeng, W., et al. Preclinical safety studies on autologous cultured human skin fibroblast transplantation. Cell Transplantation. 23 (1), 39-49 (2014).
  16. Lee, E. C. R., et al. Efficacy of Autologous Cultured Fibroblast Cells as a Treatment for Patients with Facial Contour Defects: A Clinical Replication Study. Journal of Cosmetics, Dermatological Sciences and Applications. 7, 306-317 (2017).
  17. Eca, L. P., Pinto, D. G., de Pinho, A. M., Mazzetti, M. P., Odo, M. E. Autologous fibroblast culture in the repair of aging skin. Dermatologic Surgery. 38 (2), 180-184 (2012).
  18. Nilforoushzadeh, M. A., et al. Autologous fibroblast suspension for the treatment of refractory diabetic foot ulcer. Indian Journal of Dermatology, Venereology and Leprology. 82 (1), 105-106 (2016).
  19. Cowper, M., et al. Human Platelet Lysate as a Functional Substitute for Fetal Bovine Serum in the Culture of Human Adipose Derived Stromal/Stem Cells. Cells. 8 (7), 724(2019).
  20. Atashi, F., Jaconi, M. E., Pittet-Cuenod, B., Modarressi, A. Autologous platelet-rich plasma: a biological supplement to enhance adipose-derived mesenchymal stem cell expansion. Tissue Engineering Part C: Methods. 21 (3), 253-262 (2015).
  21. Martinez-Zapata, M. J., et al. Autologous platelet-rich plasma for treating chronic wounds. The Cochrane Database of Systematic Reviews. (5), (2016).
  22. Cervelli, V., et al. Use of platelet-rich plasma and hyaluronic acid in the loss of substance with bone exposure. Advances in Skin & Wound Care. 24 (4), 176-181 (2011).
  23. Nicoli, F., et al. Severe hidradenitis suppurativa treatment using platelet-rich plasma gel and Hyalomatrix. International Wound Journal. 12 (3), 338-343 (2015).
  24. Gentile, P., Bottini, D. J., Spallone, D., Curcio, B. C., Cervelli, V. Application of platelet-rich plasma in maxillofacial surgery: clinical evaluation. The Journal of Craniofacial Surgery. 21 (3), 900-904 (2010).
  25. Saleem, M., et al. Adjunctive Platelet-Rich Plasma (PRP) in Infrabony Regenerative Treatment: A Systematic Review and RCT's Meta-Analysis. Stem Cells International. 2018, 9594235(2018).
  26. Everts, P. A., Pinto, P. C., Girao, L. Autologous pure platelet-rich plasma injections for facial skin rejuvenation: Biometric instrumental evaluations and patient-reported outcomes to support antiaging effects. Journal of Cosmetic Dermatology. 18 (4), 985-995 (2019).
  27. Fiaschetti, V., et al. Magnetic resonance imaging and ultrasound evaluation after breast autologous fat grafting combined with platelet-rich plasma. Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (4), 498-509 (2013).
  28. Gentile, P., Scioli, M. G., Orlandi, A., Cervelli, V. Breast Reconstruction with Enhanced Stromal Vascular Fraction Fat Grafting: What Is the Best Method. Plastic and Reconstructive Surgery. 3 (6), 406(2015).
  29. Modarressi, A. Platlet Rich Plasma (PRP) Improves Fat Grafting Outcomes. World Journal of Plastic Surgery. 2 (1), 6-13 (2013).
  30. Muraglia, A., et al. Culture Medium Supplements Derived from Human Platelet and Plasma: Cell Commitment and Proliferation Support. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 5, 66(2017).
  31. Ferrao, A. V., Mason, R. M. The effect of heparin on cell proliferation and type-I collagen synthesis by adult human dermal fibroblasts. Biochimica et Biophysica Acta. 1180 (3), 225-230 (1993).
  32. Gonzalez-Delgado, P., Fernandez, J. Hypersensitivity reactions to heparins. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 16 (4), 315-322 (2016).
  33. Atashi, F. S. B., Nayernia, Z., Pittet-Cuénod, B., Modarressi, A. Platelet Rich Plasma Promotes Proliferation of Adipose Derived Mesenchymal Stem Cells via Activation of AKT and Smad2 Signaling Pathways. Stem Cell Research & Therapy. 5 (8), (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

תרבית תאים אוטולוגיתהכנת PRPעיכול רקמותקולגנאז דיספאזטריפסין EDTAבדיקת פרולפרציית תאיםהפעלת פיברובלסטיםיציבות גנומית
ייצור פלזמה אוטולוגית עשירה בטסיות דם להגברת הרחבת פיברובלסטים אנושיים במבחנה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.