הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל עכבר של Insected רקמה רכה לחלוטין סרקומה עבור בדיקה (ניאו) שפיטה טיפולים

8.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60882

⸱

28 ביולי 2020

במאמר זה

סיכום

בפרוטוקול זה, אנו מתארים מודל העכבר של כריתת כירורגית לא הושלמה של סרקומה של רקמה רכה עבור בדיקות (ניאו) שדון טיפולים.

תקציר

ניתוח הוא לעתים קרובות הטיפול הראשון עבור גידולים מוצקים רבים. עם זאת, התפרצויות מקומיות מתרחשות לעתים קרובות בעקבות הטיפול העיקרי הגידול, למרות הפסיקה או הניאו-שדון טיפולים. זה מתרחש כאשר שוליים כירורגי ללא מספיק גידול, וכתוצאה מכך תאים סרטניים שיורית. מנקודת מבט ביולוגית וחיסונית, ניתוח אינו אירוע null; סביבת הריפוי של הפצע ידוע כדי לגרום למסלולים הפרו-והאנטי-טוטגניים. כתוצאה מכך, דגמים פרה-קליניים לפיתוח תרופות שמטרתן למנוע התדרדרות מקומית צריך לשלב כריתת כירורגית כאשר בדיקות חדשות (ניאו) שדון טיפולים, כדי לדגמן את ההגדרות הקליניות בחולים שטופלו בניתוח.

כאן, אנו מתארים מודל העכבר של כריתת כירורגית שלא הושלמה של WEHI 164 סרקומה רקמה רכה המאפשר בדיקה של (ניאו) טיפולים והנמלה בקביעת תגובה ריפוי הפצע. במודל זה, 50% או 75% של הגידול מוסר, משאיר מאחורי רקמות סרטן באתרו כדי לדגמן מחלות שיורית גולמי לאחר הניתוח בסביבה הקלינית. מודל זה מאפשר טיפולים בדיקה בהקשר של ניתוח בעוד בהתחשב בתגובה ריפוי הפצע, אשר עשוי להשפיע על היעילות של הטיפול (ניאו) שדון טיפולים. כריתת כירורגית מלאה תוצאות לצמיחה מחודשת של הגידול בכל העכברים בהעדר טיפול שדון. הטיפול שדון עם המצור תוצאות מחסום לצמיחה מחודשת הגידול. מודל זה מתאים אפוא לבדיקת טיפולים בהקשר של ניתוח debulking ואת התגובה הקשורה שלה הפצע ריפוי והוא יכול להיות מורחב לסוגים אחרים של סרטן מוצק.

מבוא

ניתוח נשאר אפשרות הטיפול העיקרי עבור גידולים מוצקים רבים1, כולל סרקומה של רקמה רכה2,3. למרות שיפורים בטכניקות ניתוח סרטן, ושילובים עם (ניאו) שדון טיפולים, יש עדיין סיכון גבוה של התדרדרות סרטן גרורות בעקבות כריתת הגידול העיקרי4,5. ב סרקומה רקמת רך, הישנות להתרחש במיוחד locoregionally, באתר של ניתוח, וכתוצאה מכך תחלואה מוגברת תמותה. בהגדרה הקלינית, זה יכול להיות קשה להשיג שוליים רחבים מספיק (למשל, עקב אילוצים אנטומיים), וכתוצאה מכך כריתת שלמים והחזרה הגידול הבאים6. לחץ כירורגי והתהליך הבא של ריפוי הפצע ידוע....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

בעלי חיים ששימשו בניסויים אלה התקבלו ממרכז המשאבים בעלי חיים (פרת ', אוסטרליה המערבית). בעלי חיים שמרו בתנאים הסטנדרטיים ללא הפתוגן במכון הארי פרקינס לחקר הרפואה ביוריאסוסס נורת ' מתקן (פרת ', אוסטרליה המערבית). כל הניסויים בוצעו בעקבות הפרוטוקול שאושר על ידי המכון לאתיקה בבעלי חיים של הארי פרקינס. עכברים BALB/c של 8-12 שבועות של גיל שימשו ניסויים אלה. קו התאים של WEHI 164 פיברוסרקומה התקבל מ-CellBank אוסטרליה (ווסטמיד).

1. חיסונים של תאים

  1. הכנת תאים ובעלי חיים
    1. ודא ששורת התאים נשמרת במדיה המומלצת. לדוגמה, לשמור WEHI 164 תא קו בשנת הזיכרון ברוזוול פארק (RPMI) 1640 בינונית בתוספת עם 2 מ"מ L-גלוטמין, 10% סרום שור העובר, 20 מ"מ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

גידול בגודל של 50 mm2 הוא גודל אידיאלי עבור debulk חלקי. הניתוח הכירורגי ללא שלמות של 50 mm2 גידולים תוצאות ב 100% (n = 5) לצמיחה מחודשת של גידולים בהעדר הטיפול חיסוני שדון (איור 4א). הפעם הבאה השתמשו במודל כדי לבחון את הטיפול החיסוני שימוש בנוגדנים נגד מולקולות המחסום ציטוטוקסיים חלבון משויך לימפוציטים 4 (CTLA-4) וקולטן מוות מתוכנת 1 (PD-1). טיפול בעכברים עם anti-CTLA-4 או anti-PD-1 הביא שיעור הריפוי של 80% ו 25% (n = 4.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

אנו מספקים פרוטוקול עבור מודל העכבר של כריתת כירורגית שלא הושלמה של סרקומה רקמת רך לבדוק טיפולים פרי-פעיל. אנו גם מתוקננת את החתך כירורגי כדי לאפשר הערכה של ריפוי הפצע בין עכברים בעקבות הטיפול.

הצבת הגידול היא חלק חשוב. בפרוטוקול הזה בחרתי מודל גידול תת עורי כדי לאפשר גישה כירורגית קלה לאתר הגידול וניהול של טיפולים מקומיים עם נטל מינימלי על העכברים. חשוב גם להבטיח כי גידולים לצמוח בחלל תת עורית ולא בתוך צפק, אשר יכול לגרום לתחלואה בלתי צפויה תמותה.

בעת בחירת קו תאים.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין הגילויים.

תודות

עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מתוך גרב זה סרקומה! קרן, האוסטרלי, ניו זילנד האגודה סרקומה, לוקמיה לילדים & הקרן לחקר הסרטן ופילנתרופיה נצחית. W. J. L נתמך על ידי מלגת סימון לי ומלגת מחקר מבית החולים הלאומי לחקר הרפואה, ואת המועצה לסרטן WA.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרק אינסולין 26 מד 0.5 מ"לבקטון דיקינסון, אוסטרליה326769אף אחד
2-MercaptoethanolLife Technologies Australia Pty Ltd21985023ללא
מכונת גז הרדמהDarvall Vet, אוסטרליהמק"ט: 2848ללא
אנטי-CTLA-4BioXcell, ארה"בBE0164ללא
אנטי-PD-1BioXcell, ארה"בBP0273ללא
הזרקת בופרנורפין הידרוכלוריד, 0.3 מ"ג/מ"לRB healthcare UK Limited, UK55175הזמנת מרשם
פילינג כירורגי כלורהקסידין 4%פריגו אוסטרליה, אוסטרליהCHL01449F (קרצוףללא
סרום בקר עובריCellSera, אוסטרליהAU-FBS-PGללא
מלקחיים בסדר 10.5 ס"מבית כירורגי, מערב אוסטרליהCC74110ללא
מלקחיים Fine 12 ס"מבית כירורגי משונן, מערב אוסטרליהCC74212ללא
מלקחיים Halsted 14 ס"מבית כירורגי, מערב אוסטרליהCD01114ללא
תא חימוםDatesand Ltd, בריטניהMini-Thermacageללא
HEPES (1M)Life Technologies Australia Pty Ltd15630080ללא
איזופלורןהנרי שיין בריאות בעלי חיים, אוסטרליהמק"ט: 29405הזמנת מרשם
משחת עיניים סיכהאלקוןn/aללא
פניצילין/סטרפטומיצין 1000XLife Technologies Australia Pty Ltd15140122ללא
תמיסת חוצץ פוספט 10xLife Technologies Australia Pty Ltd70013-032ללא
רפלקס 7 מ"מ קליפים מסוגלים מדעי, אוסטרליהAS59038אף אחד
רפלקס 7 מ"מ קליפ פצע מוליךמסוגל מדעי, אוסטרליהAS59036אף אחד
רפלקס פצע קליפ מסיר מסוגלמדעי, אוסטרליהAS59037ללא
מכרסם Qube הרדמה מעגל נשימהDarvall Vet, אוסטרליה#7885אף אחד
מכון הזיכרון רוזוול פארק (RPMI) 1640 בינוני + L-גלוטמיןLife Technologies Australia Pty Ltd21870092ללא
מספריים איריס STR 11 ס"מבית כירורגי, מערב אוסטרליהKF3211ללא
מספריים איריס STR 9 ס"מבית כירורגי, מערב אוסטרליהJH4209ללא
תא אינדוקציה קטןDarvall Vet, אוסטרליהמק"ט: 9630ללא
TrypLE אקספרס 1xLife Technologies Australia Pty Ltd12604-021ללא
נביטה 500 מעקר חרוזי זכוכיתCellpoint Scientific Inc., ארה"ב5-1460-DK

מקורות

  1. Orosco, R. K., et al. Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers. Scientific Reports. 8 (1), 5686(2018).
  2. Haas, R. L., et al. Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas. Journal of Clinical Oncology. 36<....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

כריתה חלקיתהפחתת נפח הגידולריפוי פצעיםטיפול עזרחסימת נקודות בקרהAnti-CTLA-4Anti-PD-1ציטומטריה של זרימה