המסך הגנטי הקדמי באמצעות כתבת סידן טרנסגניים Aequorin כדי לזהות יעדים הרומן איתות סידן

Deepika Mittal; Shruti Mishra; Ramgopal Prajapati; Jyothilakshmi Vadassery

doi:10.3791/61259

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

המסך הגנטי הקדמי באמצעות כתבת סידן טרנסגניים Aequorin כדי לזהות יעדים הרומן איתות סידן

7.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/61259

⸱

1 באוגוסט 2020

Deepika Mittal¹ , Shruti Mishra¹ , Ramgopal Prajapati¹ , Jyothilakshmi Vadassery¹

¹National Institute of Plant Genome Research, Aruna Asaf Ali Marg, New Delhi 110067, India

במאמר זה

סיכום

המסך הגנטי הקדמי מבוסס על Ca^{2 +} העלאת כקריאה החוצה מוביל זיהוי של רכיבים גנטיים מעורבים התלויים סידן מסלולים איתות בצמחים.

תקציר

מסכים גנטיים הקדמי היו כלים חשובים בזיהוי משוחדת של רכיבים גנטיים המעורבים מסלולים ביולוגיים מספר. הבסיס של המסך הוא ליצור אוכלוסיית מוטציה שניתן להקרין באמצעות פנוטיפ של עניין. EMS (אתיל מתאן סולולאט) הוא סוכן al, המשמש בדרך כלל לגרימת מוטציה אקראית במסך הקלאסי קדימה גנטי כדי לזהות גנים מרובים המעורבים בכל תהליך נתון. סידן ציטוסולג (Ca^{2 +}) העלאת הוא מפתח מוקדם איתות במסלול המופעל על תפיסת המתח. עם זאת, הזהות של קולטני, ערוצים, משאבות ומובילים של Ca^{2 +} הוא עדיין חמקמק במערכות לימוד רבות. Aequorin הוא חלבון כתבת הסידן התאי מבודד מ aequorin ויקטוריה ובאופן מאוד מבוטא באריידאופזיס. אנו מנצלים את המצב הגנטי הקדמי. בו אנו מוטגנים את הטרנסאוגניים הזרעים של צמחי מוטציה נאספו (M₁) והקרנה עבור הפנוטיפ של עניין נעשה בפנקסי (m₂) אוכלוסיה. באמצעות פרוטוקול Ca^{2 +} מדידה של 96-היטב, מוטציות הרומן מספר ניתן לזהות כי יש תגובת סידן משתנה והם נמדדים בזמן אמת. המוטציות עם הפנוטיפ של עניין חולצו והופץ עד homozygous מוטציה האוכלוסייה הצמח מתקבל. פרוטוקול זה מספק שיטה עבור מסכים גנטיים מתקדמים ברקע של Ca^{2 +}עיתונאי ולזהות הרומן ca^{2 +}מוסדר מטרות.

מבוא

שינוי בסידן ציטוסולג (Ca^{2 +}) הריכוז על תפיסת של גירוי ביוטי או אביוטיים הוא אירוע מוקדם ללמוד איתות המפעיל הרבה¹^{מסלולים איתות 1,}²^,³^,⁴. תא במצב מנוחה בסיס שלו שומר על הנמוך ca^{2 +} ריכוז ב ציטוזול ו-העודפים ca^{2 +} ב אורגאואותאים שונים מוליך המוביל האחרון של ca תלולה^{2 +} הדרגתי⁵^,⁶. עם תפיסת האות, Ca^{2 +} רמות עלייה ציטוסול בשל זרם של ca^{2 +} מתוך החילוץ ו/או מקורות תאיים וליצור גירוי מסוים סידן חתימה⁷