מיפוי תפקודי של מוח בעלי חיים יכול להפיק תועלת ממערך הניסויים של דימות תהודה מגנטית תפקודי בזמן אמת (fMRI). באמצעות התוכנה העדכנית ביותר המיושמת במערכת MRI של בעלי חיים, הקמנו פלטפורמת ניטור בזמן אמת עבור fMRI של בעלי חיים קטנים.
מאמר שיטה
מיפוי תפקודי של מוח בעלי חיים יכול להפיק תועלת ממערך הניסויים של דימות תהודה מגנטית תפקודי בזמן אמת (fMRI). באמצעות התוכנה העדכנית ביותר המיושמת במערכת MRI של בעלי חיים, הקמנו פלטפורמת ניטור בזמן אמת עבור fMRI של בעלי חיים קטנים.
תגובות fMRI דינמיות משתנות במידה רבה בהתאם לתנאים הפיזיולוגיים של בעלי חיים תחת הרדמה או במצב ער. פיתחנו פלטפורמת fMRI בזמן אמת כדי להנחות נסיינים לנטר תגובות fMRI באופן מיידי במהלך הרכישה, אשר ניתן להשתמש בהן כדי לשנות את הפיזיולוגיה של בעלי חיים כדי להשיג את התגובות ההמודינמיות הרצויות במוחות של בעלי חיים. מערך ה-fMRI בזמן אמת מבוסס על מערכת MRI פרה-קלינית 14.1T, המאפשרת מיפוי בזמן אמת של תגובות fMRI דינמיות בקליפת המוח הסומטוסנסורית הראשונית (FP-S1) של חולדות מורדמות. במקום ניתוח רטרוספקטיבי כדי לחקור מקורות מבלבלים המובילים לשונות של אותות fMRI, פלטפורמת fMRI בזמן אמת מספקת סכימה יעילה יותר לזיהוי תגובות fMRI דינמיות באמצעות פונקציות מאקרו מותאמות אישית ותוכנת ניתוח neuroimage נפוצה במערכת MRI. כמו כן, הוא מספק היתכנות מיידית לפתרון בעיות ופרדיגמת גירוי ביופידבק בזמן אמת למחקרים תפקודי מוח בבעלי חיים.
דימות תהודה מגנטית תפקודי (fMRI) היא שיטה לא פולשנית למדידת התגובות ההמודינמיות 1,2,3,4,5,6,7,8,9, למשל, תלויות ברמת החמצן בדם (BOLD), נפח הדם במוח ואות זרימה, הקשורים לפעילות עצבית במוח. במחקרים בבעלי חיים, אותות המודינמיים יכולים להיות מושפעים מהרדמה10, מרמת הלחץ של בעלי חיים ערים 11, כמו גם מהממצאים הפוטנציאליים שאינם פיזיולוגיים, למשל, פעימות לב ותנועות נשימה 12,13,14,15. למרות ששיטות רבות לאחר עיבוד פותחו כדי לספק ניתוח רטרוספקטיבי של אות ה- fMRI עבור הדינמיקה התפקודית הקשורה למשימה ומצב מנוחה ומיפוי קישוריות16,17,18,19, ישנן מעט טכניקות לספק פתרון מיפוי תפקודי מוח בזמן אמת וקריאות מיידיות במוח החיה 20 (שרובן משמשות בעיקר למיפוי המוח האנושי 21, 22,23,24,25,26,27). בפרט, סוג זה של שיטת מיפוי fMRI בזמן אמת חסר במחקרים בבעלי חיים. יש צורך להקים פלטפורמת fMRI שתאפשר חקירה של שלבים פיזיולוגיים תלויי מצב מוחי בזמן אמת ותספק פרדיגמת גירוי ביופידבק בזמן אמת למחקרים תפקודי מוח בבעלי חיים.
בעבודה הנוכחית, אנו מדגימים מערך ניסויי fMRI בזמן אמת עם פונקציות המאקרו המותאמות אישית של תוכנת מסוף ה-MRI, ומדגימים ניטור בזמן אמת של תגובות BOLD-fMRI המעוררות בקליפת המוח הסומטוסנסורית הראשונית (FP-S1) של החולדות המורדמות. מערך זה בזמן אמת מאפשר הדמיה של הפעלת המוח המתמשכת במפות פונקציונליות, כמו גם קורסי זמן פרטניים באופן ווקסל, תוך שימוש בתוכנה הקיימת לניתוח תמונות נוירואימג', Analysis of Functional NeuroImages (AFNI)28. הכנת מערך ניסויי fMRI בזמן אמת למחקר בבעלי חיים מתוארת בפרוטוקול. מלבד הגדרת בעלי החיים, אנו מספקים נהלים מפורטים להגדרת ההדמיה והניתוח של אותות fMRI בזמן אמת באמצעות תוכנת המסוף העדכנית ביותר במקביל לסקריפטי עיבוד התמונה. לסיכום, מערך ה-fMRI המוצע בזמן אמת למחקרים בבעלי חיים הוא כלי רב עוצמה לניטור אותות ה-fMRI הדינמיים במוח בעלי החיים באמצעות מערכת מסוף ה-MRI.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מחקר זה בוצע בהתאם לחוק הגרמני לרווחת בעלי חיים (TierSchG) ופקודת חיות המעבדה לרווחת בעלי חיים (TierSchVersV). הפרוטוקול הניסיוני המתואר כאן נבדק על ידי ועדת האתיקה (§15 TierSchG) ואושר על ידי רשות המדינה (Regierungspräsidium, Tübingen, באדן-וירטמברג, גרמניה).
1. הכנת מערך הניסויים BOLD-fMRI למחקר בבעלי חיים קטנים
2. ניתוח צנתור והנשמה
3. הצבת בעל החיים בתוך סורק ה-MRI
4. מדידת תמונות MR אנטומיות
5. הגדרת תוכנת fMRI בזמן אמת והדמיית תגובת fMRI
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
איור 3 ואיור 4 מראים מסלול זמן BOLD-fMRI מייצג בזמן אמת ומפות פונקציונליות עם גירוי חשמלי (3 הרץ, 4 שניות, רוחב פולס 300 לנו, 2.5 mA). פרדיגמת התכנון fMRI כוללת 10 סריקות קדם-גירוי, 3 סריקות גירוי ו-12 סריקות בין-גירוי עם סך של 8 תקופות (130 סריקות). זמן הסריקה הכולל הוא 3 דקות ו-15 שניות (195 שניות). איור 3 מציג את מהלך הזמן מבחינת ווקסל (קו שחור) של FP-S1 המקביל לפרדיגמת עיצוב הבלוקים (קו אדום) בתבנית הרכישה בזמן אמת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ניטור בזמן אמת של אות ה-fMRI מסייע לנסיינים להתאים את הפיזיולוגיה של בעלי חיים כדי לייעל את המיפוי התפקודי. ממצאי תנועה בבעלי חיים ערים, כמו גם אפקט ההרדמה, הם גורמים עיקריים המתווכים את השונות של אותות fMRI, מבלבלים את הפרשנות הביולוגית של האות בפני עצמה 31,32,33,34,35,36,37,38
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
סשה קוהלר היא עובדת בחברת Bruker BioSpin MRI GmbH.
אנו מודים לד"ר ד. צ'ן ולד"ר סי ין על שיתוף סקריפט AFNI להגדרת fMRI בזמן אמת עבור PV 5 ולצוות AFNI עבור תמיכת התוכנה. מחקר זה נתמך על ידי מימון יוזמת המוח של NIH (RF1NS113278-01, R01 MH111438-01), ומענק מכשיר S10 (S10 RR023009-01) למרכז מרטינוס, קרן המחקר הגרמנית (DFG) Yu215/3-1, BMBF 01GQ1702, והמימון הפנימי של אגודת מקס פלנק.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 14.1T Bruker MRI מערכת Bruker | BioSpin MRI GmbH | N/A | |
| A365 Stimulus Isolator | World Precision Instruments | N/A | |
| AcqKnowledge Software | Biopac | RRID:SCR_014279, http://www.biopac.com/product/acqknowledge-software/ | |
| AFNI | Cox, 1996 | RRID:SCR_005927, http://afni.nimh.nih.gov | |
| CO2SMO ( צג ETCO2/SpO2), דגם 7100 | Novametrix Medical Systems Inc | N/A | |
| Isoflurane | CP-Pharma | Cat# 1214 | |
| Master-9 | A.M.P.I | N/A | |
| מזרק ננוליטר | מכשירים מדויקים עולמיים | Cat# NANOFIL | |
| Pancuronium Bromide | Inresa Arzneimittel | Cat# 34409.00.00 | |
| ParaVision 6 | Bruker BioSpin MRI GmbH | RRID:SCR_001964 | |
| פוספט חוצץ מלח (PBS) | Gibco | Cat# 10010-023 | |
| חולדה: חולדת Sprague Dawley | מעבדות צ'ארלס ריבר | Crl:CD(SD) | |
| SAR-830/AP מאוורר | CWE | N/A | |
| α-כלורלוז | סיגמא-אולדריץ' | חתול# C0128-25G; ריד |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה