חיזוי קטיעה באמצעות תאי אב מונונוקלאואריים במחזור מקומי בחולים שטופלו באנגיופלסטיקה עם איסכמיה קריטית של הגפיים

Summary

קטיעה בגפיים התחתונות עלולה להתרחש גם לאחר אנגיופלסטיקה של כלי דם חסומים באיסכמיה של גפיים קריטיות (CLI). תאי אב מונונוקולריים (MPCs) משקפים תיקון כלי דם. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הכימות של MPCs מהמחזור קרוב אנגיופלסטיקה, ואת הקשר שלה עם תפקוד אנדותל וחיזוי של קטיעה בגפיים התחתונות.

Abstract

איסכמיה קריטית של הגפיים (CLI) מייצגת שלב מתקדם של מחלת העורקים ההיקפית. אנגיופלסטיקה משפרת את זרימת הדם לגפה התחתונה; עם זאת, חלק מהחולים להתקדם באופן בלתי הפיך לקטיעה בגפיים. היקף הנזק לכלי הדם ואת המנגנונים של תיקון כלי הדם הם גורמים המשפיעים על התוצאה שלאחר אנגיופלסטיקה. תאי אב מונונוקולריים (MPCs) מגיבים לנזק כלי דם ותיקון, עם היכולת לשקף מחלות כלי דם. הפרוטוקול הנוכחי מתאר כימות של MPCs המתקבלים ממחזור הדם מכלי קרוב לאתר אנגיופלסטיקה, כמו גם את הקשר שלה עם תפקוד אנדותל ואת יכולת החיזוי שלה לקטיעה גפיים ב -30 הימים הבאים לאחר אנגיופלסטיקה בחולים עם CLI.

Introduction

מחלת עורקים היקפית (PAD) מאופיינת בחסימה כלי דם כרונית ומתקדמת עם הגבלת אספקת הדם¹. בקנה מידה עולמי, PAD של הגפיים התחתונות משפיע על כ -10% מהאוכלוסייה המבוגרת, בעוד עד 7% מהמקרים האלה מוגשים לקטיעה גפיים^2,3.

איסכמיה גפיים קריטיות (CLI) מייצגת את המצגת החמורה ביותר של PAD¹. חולים בדרך כלל חווים כאב במנוחה, כיבים, או נמק המיוחס לעורקים occluded; בעוד פרוגנוזה קלינית היא שלילית מסומן על ידי סיכון של 30% של קטיעה ותמותה במהלך 1 שנה^3,4,5.

Protocol

ועדת האתיקה של המחקר המוסדי של Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE אישרה פרוטוקול פוטנציאלי זה, כל המטופלים הרשומים סיפקו הסכמה מדעת בכתב.

1. הערכת בלוק כלי הדם של הגפה התחתונה, דגימת דם ואנגיופלסטיקה בלון

הערה: מדגם המחקר המשמש לניסוי זה כלל 20 חולי סוכרת, בני 68 ו -10 מתוך 20 היו גברים. מחצית מהמדגם היו מעשנים ורוב התחלואה המשותפת השכיחה הייתה סוכרת מסוג 2, יתר לחץ דם עורקי מערכתי ו/או דיסליפידמיה. המדגם נועד להיות סטנדרטי לגיל, מין ותחלואה משותפת. לא ניתן לשלול הטיה אפשרית עקב השפעה קלינית-דמוגרפית על הקשר בין MPCs לבין CLI.

1. להעריך את החומרה הקלינית של איסכמיה גפיים על פי סיווג רתרפורד

Results

דגימות דם מעורקים חסומים, באתר שטופלו באנגיופלסטיקה, נאספו מ-20 חולי סוכרת, בני 68 ו-10 מתוך 20 היו גברים. מחצית מאוכלוסיית המדגם היו מעשנים. נגעים בכלי הדם הובקעו בעיקר בשם רתרפורד מחלקה 6; בעוד חולים הראו שכיחות גבוהה יותר של סוכרת מסוג 2 (100%), יתר לחץ דם (70%) ודיסליפידמיה (55%).

מעקב קליני של 30 יום לאחר אנגיופלסטיקה בגפיים התחתונות בוצע. אחוז אוכלוסיות המשנה של MPC בקו הבסיס או בדינמיקה לאחר אנגיופלסטיקה היה בקורלציה (ניתוח ספירמן) עם מידת תפקוד לקוי של אנדותל, כפי שהוערך על ידי FMD; וא.......

Discussion

איסוף דם באתר המדויק של בלוק כלי הדם עשוי להראות קשיים טכניים; לכן, ביצענו איסוף דם בסמיכות לבלוק כלי הדם. כמו כן, כמות MPCs קרוב ללוח כלי הדם נראה דינמי מאוד ועשויים מקורם וריאציות לפני ואחרי אנגיופלסטיקה. על פי התצפיות שלנו, מומלץ להעריך שינויים בסיסיים- ו -30 דקות לאחר אנגיופלסטיקה במספר MPCs, שכן הם עשויים לשקף מספר תהליכים פתופיזיולוגיים המתרחשים בתוך נזק כלי דם ותיקון.

עיבוד דגימת דם עבור קביעת MPCs מומלץ להתבצע בתוך 3 h הראשון; לכן, תוכנית ארגונית נאותה, ואפילו תרגול סימולציה קודם, ניתן.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	אלבומין סרום בקר (BSA) כחומר חציצה, מייצב, סטנדרטי ולערבוב.
חרוזי כיול	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	MACQ חרוזי כיול מסופקים בתמיסה מימית המכילה 0.05% נתרן אזיד. 3.5 מ"ל לעד 100 בדיקות
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	נוגדן מצומד ל-R-Phycoerythrin במאגר PBS/EDTA
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	IgG1 אנושי חד-שבטי, רקומביננטי איזוטיפי,
מצומד CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	נוגדן מצומד ל-R-Phycoerythrin במאגר PBS/EDTA
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	שיבוט הנוגדן החד-שבטי AC136 מסיר אפיטופ מסוג III של CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	נוגדן CD45 חד-שבטי,
צינורות חרוטיים מצומדים אנושיים	תרמו SCIENTIFIC	#339651	צינורות צנטריפוגה חרוטיים 15 מ"ל
צינורות ציטומטריה	FALCON Corning Brand	#352052	5 מ"ל פוליסטירן צינור תחתון עגול. סגנון 12x75. עקר.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	מתכות כבדות, (בצורת Pb) < 10 עמודים לדקה, Fe< 0.01%, As< 1ppm, מסיסים< 0.005%
נויבאואר משופר	ללא מותג	ללא מספר קטלוגי	המוציטומטר לספירת תאים. (טווח 0.1000 מ"מ, 0.0025 מ"מ)
צינורות איסוף דם K2 EDTA	שואב אבק BD #	367863	צינור ואקטיינר מפלסטיק לילך (K2E) 10.8 מ"ג, 6 מ"ל.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	סטרילי ובדק נוכחות אנדוטוקסינים. צפיפות: 1.077 & 0.001 גרם/מ"ל
Paraformaldehyde	SIGMA-ALDRICH		קיבוע דגימות ביולוגיות, (אבקה, 95%)
העברת פיפטה 1,3 מ"ל	CRM Globe	PF1016, PF1015	פיפטת ההעברה היא כלי המאפשר העברת נוזלים בדיוק רב יותר.
מבחנות	KIMBLE CHASE	45060 13100	מבחנות עמידות בחום. גודל/כובע 13 x 100 מ"מ