מאמר שיטה

ניתוח פונקציונלי של תאים מיאלואידים חודרים לגידול על ידי ציטומטריית זרימה והעברה מאמצת

3.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/61511

⸱

5 במרץ 2021

 ,  , 
1Department of Pathology and Molecular Medicine, McMaster University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מספק שיטות אמינות לדיסוציאציה של גידול מוצק ובידוד תאים מיאלואידים במודלים של גידולים תוך-עוריים או תת עוריים של עכברים. זרימה ציטומטרית מאפשרת אפיון פנוטיפי של אוכלוסיות מיאלואידיות הטרוגניות בתוך המיקרו-סביבה של הגידול ומיון ידגים את הפונקציונליות שלהן בהקשר של העברה מאמצת.

תקציר

תא התאים המיאלואידים החודר לגידול מייצג אוכלוסייה הטרוגנית של תאים מדכאי חיסון נרחבים שנוצלו על ידי הגידול כדי לתמוך בצמיחתו. הצטברותם בגידול וברקמת לימפה משנית מובילה לדיכוי תגובות חיסוניות אנטי-גידוליות ולכן מהווה יעד להתערבות טיפולית. מכיוון שידוע שסביבת הציטוקינים המקומית יכולה להכתיב את התכנות התפקודי של תאים מיאלואידים חודרים לגידול, תוכננו אסטרטגיות למניפולציה של המיקרו-סביבה של הגידול (TME) כדי לבטא נוף ציטוקינים התורם יותר לפעילות תאים מיאלואידים אנטי-גידוליים. כדי להעריך שינויים הנגרמים על ידי טיפול בתאים מיאלואידים חודרים לגידול, מאמר זה יתאר את ההליך לניתוק רקמת גידול תוך-עורית/תת עורית מעכברים מוצקים נושאי גידול כהכנה להתאוששות לויקוציטים. יינתנו אסטרטגיות לניתוח זרימה ציטומטרי כדי לאפשר זיהוי של אוכלוסיות מיאלואידיות הטרוגניות בתוך לויקוציטים מבודדים ואפיון של פנוטיפים מיאלואידים ייחודיים. לבסוף, מאמר זה יתאר אמצעי לטיהור תאים מיאלואידים ברי קיימא לבדיקות תפקודיות וקביעת ערכם הטיפולי בהקשר של העברה לאימוץ.

מבוא

המיקרו-סביבה של הגידול (TME) מורכבת מתאים ניאופלסטיים המתרבים במהירות ותא תאי סטרומה הטרוגני מסביב. מכיוון שגידולים גדלים הם לרוב בעלי כלי דם גרועים, ה-TME הוא אתר היקפי המאופיין באופן ייחודי בהיפוקסיה, מחסור בחומרים מזינים וחמצת1. כדי לשרוד בנוף זה, תגובות עקה של גידול ותכנות מחדש מטבולי מביאות להפרשת גורמים מסיסים המקדמים עיצוב מחדש של רקמות ואנגיוגנזה, כמו גם גיוס סלקטיבי של תאי חיסון2. מכיוון שתאים מיאלואידים הם אחד הסוגים הנפוצים ביותר של תאים המטופויאטיים ב-TME, יש עניין גובר בבחינת תפקידם של תאים מיאלואידים חודרים לגידול ב-TME.

תאים מיאלואידים הם קבוצה הטרוגנית ופלסטית של תאי חיסון מולדים כולל מונוציטים, מקרופאגים, תאים דנדריטיים וגרנולוציטים. למרות שיש להם תפקידים קריטיים בהומאוסטזיס של רקמות ובוויסות תגובה חיסונית אדפטיבית, תפקודם יכול להיות מקטב בהתאם להרכב אותות ההפעלה בתוך המיקרו-סביבה המקומית3. גידולים מנצלים את מאפייני התאים המיאלואידים באמצעות הפרשת גורמים מסיסים בתוך ה-TME. אותות חלופיים אלה יכולים להסיט מיאלופואזיס לעבר התמיינות לא בשלה ולהטות את תפקודם של תאים מיאלואידים חודרים לגידול3. ואכן, תאים מיאלואידים בתוך TME מקדמים לעתים קרובות את התקדמות הסרטן ויכולים לדכא תגובות חיסוניות אנטי-גידוליות, מה שמוביל להשפעות שליליות על הטיפול בסרטן.

למרות שהוכח כי אסטרטגיות טיפוליות המקדמות את דלדול התאים המיאלואידים המדכאים את מערכת החיסון מעכבות את צמיחת הגידול4, היעדר ספציפיות המטרה מסכן את הסרת התאים המיאלואידים החיסוניים, אשר בניגוד לכך, מסייעים ברזולוציה של סרטן. תאים מיאלואידים דלקתיים אלה יכולים להפעיל השפעות אנטי-גידוליות עמוקות כולל הרג ישיר של תאי גידול והפעלה של תאי CD8+ T ציטוטוקסיים5. לחלופין, אסטרטגיות המנרמלות את ההרכב והתפקוד של תאים מיאלואידים ב-TME הראו הצלחה טיפולית6; עם זאת, המנגנונים הביולוגיים העומדים בבסיס החינוך מחדש שלהם לפנוטיפ אנטי-גידולי עדיין לא הובנו במלואם. בסופו של דבר, אפיון מקיף של תאים מיאלואידים של הגידול נחוץ לשיפור נוסף של הטיפול בסרטן.

למרבה הצער, פירוק ניתן לשחזור של גידולים לבידוד תאים מיאלואידים הוא מאתגר. תאים מיאלואידים שמקורם בגידול רגישים למניפולציה ex vivo בהשוואה לתת-קבוצות לויקוציטים אחרות, והאגרסיביות של עיבוד הגידול עלולה להוביל למחשוף אפיטופ אנזימטי ולהפחתת הכדאיות של תאים משוחזרים7. מטרת שיטה זו היא לספק אמצעי אמין לדיסוציאציה של גידול כדי לשמר את שלמות סמני פני השטח לניתוח וחיוניות תאית למחקר פונקציונלי. בהשוואה לפרוטוקולי בידוד לויקוציטים חודרים לגידול (TIL) המעדיפים תערובות אנזימטיות קשות יותר כדי לשפר את השחרור הניתן לשחזור של תת-קבוצות תאיות שונות, שיטה זו מעדיפה עיכול אנזימטי שמרני יותר כדי למקסם את התאוששות התאים המיאלואידים. אסטרטגיות שער זרימה מרובות צבעים ברמה גבוהה ניתנות גם לזיהוי תת-קבוצות של תאים מיאלואידים של גידול עכברים לצורך אפיון ו/או מיון נוסף.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: כל המחקרים בבעלי חיים עמדו בהנחיות המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים ואושרו על ידי מועצת האתיקה למחקר בבעלי חיים של אוניברסיטת מקמאסטר.

1. קצירת גידולים ודיסוציאציה

  1. לחסן עכברים בני 6-8 שבועות, נקבה, C57BL/6 תוך עורית/תת עורית עם 2 × 105 תאי מלנומה B16 כפי שתואר על ידי Nguyen et al.8 אפשר לגידולים לצמוח במשך 7 ימים לפני הקטיף.
  2. המתת חסד של העכבר על ידי פריקת צוואר הרחם תוך הקפדה לא לשבש את הגידול בעת ביצוע פעולה זו. רססו את העכבר ב-70% אתנול לפני הקטיף.
  3. בעזרת אזמל ומספריים, הסר בניתוח את הגידול התוך-עורי/תת עורי מהרקמה שמסביב (כולל בלוטות לימפה מחוברות המנקזות את הגידול), והנח את הגידולים בצינור מיקרופוגה שקול מראש. המשיכו על הקרח.
    הערה: בצע את קציר הגידול בארון בטיחות ביולוגית לשימוש בעלי חיים. השתמש בצינור חרוטי של 15 מ"ל לגידולים גדולים יותר.
  4. שקלו את הגידולים, והוסיפו 500 מיקרוליטר של מדיום RPMI-1640 עם 10% סרום בקר עוברי (FBS) לכל צינור, בעזרת מספריים כדי לחתוך את הגידולים לחתיכות קטנות בתוך הצינור או בצלחת של 6 בארות.
    הערה: חלקי הגידול צריכים להיות קטנים מספיק כדי לערבב אותם על ידי פיפטור חשמלי לאחר הוספת מדיום העיכול.
  5. הכן את תערובת הדיסוציאציה על ידי המסת קולגנאז מסוג IV ב-0.5 מ"ג/מ"ל ו-DNase ב-0.2 מ"ג/מ"ל במדיום RPMI-1640 עם 10% FBS ו-5 מ"מ סידן כלורי.
    הערה: יש להכין תערובת דיסוציאציה טרייה כדי למקסם את פעילות הקולגנאז.
  6. העבירו את תרחיף הגידול הטחון לצינור חרוטי של 15 מ"ל, והוסיפו 10 מ"ל תערובת דיסוציאציה לכל 0.25 מ"ג גידול. הנח את הצינור בשייקר מסלולי מבוקר טמפרטורה למשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס עם תסיסה של 200 סל"ד. נטרלו את פעילות הקולגנאז על ידי הוספת שני נפחים של מדיום RPMI-1640 קר עם 10% FBS ו-2 מ"מ חומצה אתילנדיאמין טטראצטית (EDTA), ומקררים למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
  7. מערבולת קצרה ופיפטה את המתלה למסננת של 40 מיקרומטר על צינור חרוטי של 50 מ"ל. השתמש בבוכנת מזרק ובמדיה מנטרלת כדי לפרק את רקמת הגידול הנותרת, ולשטוף אותה דרך המסננת. צנטריפוגה את התרחיף למשך 5 דקות (500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה בתמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS) עם 2% FBS ו-1 מ"מ EDTA.

2. העשרת TIL וצביעה ציטומטרית בזרימה (FACS)

  1. כדי להעשיר TIL לאפיון תאים מיאלואידים, השתמש בערכת הפרדת תאים מגנטיים המיועדת לבחירה חיובית לביוטין עם נוגדנים CD45.2 ביוטיניליים בהתאם להוראות היצרן (ראה טבלת החומרים).
  2. השעו מחדש את התאים ב-200 מיקרוליטר של מאגר FACS (PBS עם 0.5% w/v אלבומין בסרום בקר (BSA)), והעבירו אותם לצלחת תחתונה U של 96 בארות.
    הערה: אין לחרוג מריכוז צביעה של 1 × 108 תאים/מ"ל. התאם את עוצמת הקול ופצל דגימות למספר בארות כדי לפצות על מספרי תאים גבוהים.
  3. צנטריפוגה את הצלחת למשך 5 דקות (500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), והשליכו את הסופרנטנט. הוסף 50 מיקרוליטר של תמיסת בלוק Fc (דילול של 1:200 של CD16/CD32 נגד עכבר חולדה מטוהרת [ראה טבלת החומרים) במאגר FACS, ריכוז סופי של 2.5 מיקרוגרם/מ"ל), והשהה מחדש את התאים על ידי פיפטינג. יש לדגור במשך 10 דקות בחום של 4 מעלות צלזיוס.
  4. הוסף 50 מיקרוליטר של מאגר FACS המכיל ריכוז פי 2 של נוגדן מכתים על פני השטח (דילול 1:50 של CD45.2, NK1.1, CD11c, F4/80, CD8a, Ly6C, CD11b, CD4, Ly6G) וכתם כדאיות הניתן לתיקון (FVS, דילול 1:500), וערבב את התאים על ידי פיפטינג. יש לדגור למשך 20 דקות בחום של 4 מעלות צלזיוס.
    הערה: מכסים את הצלחת בנייר אלומיניום כדי למזער את החשיפה לאור. יש לטטר נוגדנים לפני הניסוי כדי לקבוע באופן אמפירי את הדילול האופטימלי.
  5. שטפו את התאים פעמיים על ידי הוספת 200 מיקרוליטר של מאגר FACS לכל באר, צנטריפוגה של התרחיף (5 דקות, 500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), והשלכת הסופרנטנט.
  6. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת קיבוע/חדירות (ראה טבלת החומרים) לכל באר, ערבב את התאים על ידי פיפטינג ודגר במשך 20 דקות ב-4 מעלות צלזיוס.
  7. הוסף 100 מיקרוליטר של מאגר חדירות 1x (ראה טבלת החומרים) לכל באר, צנטריפוגה את הצלחת למשך 5 דקות (500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), והשליך את הסופרנטנט.
  8. שטפו את התאים על ידי הוספת 200 מיקרוליטר של מאגר חדירות 1x לכל באר, צנטריפוגה של התרחיף (5 דקות, 500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), והשלכת הסופרנטנט.
    הערה: ניתן להשהות את הניסוי למשך הלילה לאחר השעיית התאים במאגר חדירה. אחסן את הדגימה ב-4 מעלות צלזיוס ומוגן מפני אור. המשך לאחר ערבוב קצר של התאים לפני הצנטריפוגה.
  9. הוסף 100 מיקרוליטר של מאגר חדירות המכיל ריכוז פי 1 של נוגדן צביעה תוך תאי (דילול 1:100 של תחמוצת החנקן סינתאז 2 (NOS2), ארגינאז 1 (Arg1)), וערבב את התאים על ידי פיפטינג. יש לדגור למשך 20 דקות בחום של 4 מעלות צלזיוס.
    הערה: מכסים את הצלחת בנייר אלומיניום כדי למזער את החשיפה לאור. יש לטטר נוגדנים לפני הניסוי כדי לקבוע באופן אמפירי את הדילול האופטימלי.
  10. הוסף 100 מיקרוליטר של מאגר חדירות 1x לכל באר, צנטריפוגה את הצלחת למשך 5 דקות (500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), והשליך את הסופרנטנט.
  11. שטפו את התאים על ידי הוספת 200 מיקרוליטר של מאגר חדירות 1x לכל באר, צנטריפוגה של התרחיף (5 דקות, 500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), והשלכת הסופרנטנט.
  12. השעו מחדש את התאים ב-300 מיקרוליטר של מאגר FACS. סנן את הדגימה דרך צינור פוליסטירן תחתון עגול של 5 מ"ל עם מכסה מסננת של 40 מיקרומטר לפני ביצוע ניתוח ציטומטריית זרימה.

3. מיון תאים מיאלואידים של גידול למחקרים פונקציונליים

  1. לאחר זיהוי אוכלוסיות התאים המיאלואידים הרצויות על ידי ניתוח זרימה ציטומטרית, יש להעשיר מראש תאים מיאלואידים בתפזורת למיון עם ערכת הפרדת תאים מגנטיים המיועדת לבחירה חיובית CD11b או CD11c בהתאם להוראות היצרן (ראה טבלת החומרים).
  2. באמצעות נוגדנים לצביעה על פני השטח הספציפיים לתת-קבוצות התאים המיאלואידיים הרצויים (דילול 1:100 של CD11b, Ly6C, Ly6G), צובעים את התאים המועשרים מראש כמתואר בשלבים 2.2-2.5.
    הערה: כלול כתם כדאיות הניתן לתיקון כדי להבטיח מיון של תאים מיאלואידים חיים. אין לחרוג מריכוז צביעה של 1 × 108 תאים/מ"ל. התאם את עוצמת הקול ופצל את הדגימות למספר בארות כדי לפצות על מספרי תאים גבוהים.
  3. השעו מחדש את התאים במאגר מיון קר (PBS עם 1% w/v BSA, 25 מ"מ 4-(2-הידרוקסיאתיל)-1-פיפרזינאתיל-חומצה סולפונית (HEPES) ו-1 מ"מ EDTA). מסננים את הדגימה דרך צינור פוליפרופילן תחתון עגול בנפח 5 מ"ל עם מכסה מסננת של 40 מיקרומטר. שמור את התאים על קרח, וכסה את הצינור בנייר אלומיניום.
    הערה: התאם את ריכוז התאים/נפח למפרט המכשיר הרצוי למיון.
  4. הכן צינור איסוף דגימות עם מדיום לכידה (צינור פוליפרופילן תחתון עגול 5 מ"ל המכיל PBS עם 50% FBS).
    הערה: מצפים צינורות עם 5 מ"ל לכידת מדיום למשך הלילה לפני המיון. השלך את כל אמצעי הלכידה מלבד 1-2 מ"ל למחרת לפני הפעלת הדגימה.
  5. שנה את הגדרות מכשיר המיון כדי להפחית את לחץ הדגימה ולמנוע הפרעות בהיווצרות טיפות. צייד את קצה הזרבובית של 130 מיקרומטר, והשתמש בהגדרה של 10 psi. הפעל את הדגימה בקצב זרימה נמוך עם תסיסה תקופתית של דגימה ב-100 סל"ד, וודא שתצהיר הטיפות נמצא במרכז הצינור. לאחר המיון, שמור את הדגימה על קרח.
  6. דגרו את הדגימה למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. צנטריפוגה של הצינור למשך 5 דקות (500 × גרם, 4 מעלות צלזיוס), השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה במדיום הרצוי לבדיקות פונקציונליות או העברה לאימוץ.

4. העברה מאמצת של תאים מיאלואידים מטוהרים של גידול

  1. לחסן עכברים בני 6-8 שבועות, נקבה, C57BL/6 תוך עורית עם 1 × 106 תאי גידול מלנומה B16 מושעים ב-30 מיקרוליטר של PBS.
    הערה: יש לחסן עכברים מראש כך שגידול הגידול לא יעלה על 100 מ"מ3 בזמן ההעברה לאימוץ.
  2. השעו מחדש את התאים המיאלואידים של הגידול הממוינים ב-PBS עם 25 מ"מ HEPES ו-1 מ"מ EDTA בריכוז של 2 ×-106 תאים/מ"ל. מסננים את הדגימה דרך צינור פוליסטירן תחתון עגול של 5 מ"ל עם מכסה מסננת של 40 מיקרומטר. המשיכו על הקרח.
  3. לגרום ולשמור על עכברים בהרדמה עם 3% איזופלורן. יש למרוח משחה עיניים למניעת יובש/פציעה בעין.
  4. טען מזרק 31 גרם עם 50 מיקרוליטר של מתלה תאים. עקור בועות אוויר על ידי לחיצה עדינה על המזרק. נקה את מקום ההזרקה באמצעות ספוגית אלכוהול.
  5. בעזרת מלקחיים סטריליים יש להרים את העור בבסיס הגידול. הכנס את המחט לחלל התת עורי בזווית קלה כלפי מעלה כדי להיכנס לגידול מתחת לעור. השתמש במלקחיים כדי לצבוט את העור המקיף את המחט, והוציא לאט את נפח המזרק. המשך לצבוט את העור עם המלקחיים תוך הסרת המחט לאט, והשתמש בצמר גפן כדי לנקות דליפה פוטנציאלית.
    הערה: המשך עם כל טיפול טיפולי נוסף אם תרצה.
  6. אפשרו לעכברים להתאושש מההרדמה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

התוצאות מדגימות כי שיטה זו מייצרת תפוקה גבוהה של תאים מיאלואידים מגידולי עכברים מוצקים. שימור שלמות הקולטן והכדאיות התאית מאפשר ניתוח פונקציונלי אמין של תת-הקבוצות המיאלואידיות הרצויות. שיפורים אלה בבידוד התאים המיאלואידיים אפשרו להבחין בתפקוד המשתנה של תאים מיאלואידים תוך-גידוליים עם נורמליזציה של ה-TME עם מעכב היסטון דאצטילאז מסוג I (HDACi), MS-275, במהלך טיפול בתאי T מאמצים. פרוטוקולי בידוד TIL בדרך כלל אינם נוקטים בצעדים כדי למקסם את תפוקת התאים המיאלואידיים9. כתוצאה מכך, עיכול אנזימטי הוא בדר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

למרות שתאים מיאלואידים חודרים לגידול קיימים במצבי הפעלה והתמיינות משתנים בתוך הגידול, זוהו מספר תת-קבוצות כולל DCs הקשורים לגידול (TADCs), נויטרופילים הקשורים לגידול (TANs), תאים מדכאים שמקורם במיאלואיד (MDSCs) ומקרופאגים הקשורים לגידול (TAMs)12. למרבה הצער, הביטוי החופף של סמני פני התא המשמשים לזיהוי תת-קבוצות תאים מיאלואידיים אלה הופך את זה לאתגר כיום להבדיל פנוטיפית בין תאים מיאלואידים של גידול לתאים מיאלואידים אחרים13. באופן דומה, שינוי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

לא הוכרז על ניגוד עניינים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מכון אונטריו לחקר הסרטן באמצעות מימון שסופק על ידי ממשלת אונטריו, כמו גם המכונים הקנדיים לחקר הבריאות (FRN 123516 ו-FRN 152954), האגודה הקנדית לסרטן (מענק 705143) ומכון המחקר טרי פוקס (TFRI-1073).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Alexa Fluor 700 עכבר נגד עכבר CD45.2BD Biosciences560693 1:100
APC-CY7 עכבר נגד עכבר NK-1.1BD Biosciences5606181:100
עכבר ביוטין נגד עכבר CD45.2BD Biosciences553771
BV421 אוגר נגד עכבר CD11cBD Biosciences562782 1:100
BV650 עכבר נגד עכבר F4/80BD Biosciences7432821:100
BV711 עכבר נגד עכבר CD8aBD Biosciences5630461:100
קולגנאז, סוג IV, אבקהGibco17104019
DNase IRoche10104159001
EasySep Mouse CD11b ערכת בחירה חיובית IIטכנולוגיות תאי גזע18970
EasySep Mouse CD11c ערכת בחירה חיובית IIטכנולוגיות תאי גזע18780
EasySep שחרור עכבר ביוטין ערכת בחירה חיוביתטכנולוגיות תאי גזע17655
FITC חולדה נגד עכבר Ly-6CBD Biosciences5531041:100
כתם כדאיות ניתן לתיקון 510BD Biosciences5644061:1000
ערכת פתרון קיבוע/חדירה (BD Cytofix/Cytoperm)BD Biosciences
PE Rat Anti-CD11bBD Biosciences557397 1:100
PE-Cy7 Rat Anti-Mouse CD4BD Biosciences552775 1:100
PerCP-CY5.5 Rat Anti-Mouse Ly-6GBD Biosciences5606021:100
סלסול/שטיפה (BD סלסול/שטיפה)BD Biosciences554723
חולדה מטוהרת נגד עכבר CD16/CD32 (בלוק BD Fc של עכבר)BD Biosciences553141
iNOS נוגדן חד שבטי (CXNFT), APCThermo Fisher17-5920-821:100
ארגינאז אדם/עכבר  1/ARG1 נוגדן מצומד פלואורסצאיןR& D SystemsIC5868F1:100
554714

מקורות

  1. Paardekooper, L. M., Vos, W., vanden Bogaart, G. Oxygen in the tumor microenvironment: effects on dendritic cell function. Oncotarget. 10 (8), 883-896 (2019).
  2. Schouppe, E., De Baetselier, P., Van Ginderachter, J. A., Sarukhan, A. Instruction of myeloid cells by the tumor microenvironment: Open questions on the dynamics and plasticity of different tumor-associated myeloid cell populations. Oncoimmunology. 1 (7), 1135-1145 (2012).
  3. Jahchan, N. S., et al. Tuning the tumor myeloid microenvironment to fight cancer. Frontiers in Immunology. 10, 1611(2019).
  4. Srivastava, M. K., et al. Myeloid suppressor cell depletion augments antitumor activity in lung cancer. PLoS One. 7 (7), 40677(2012).
  5. Awad, R. M., De Vlaeminck, Y., Maebe, J., Goyvaerts, C., Breckpot, K. Turn back the TIMe: targeting tumor infiltrating myeloid cells to revert cancer progression. Frontiers in Immunology. 9, 1977(2018).
  6. Strauss, L., et al. Targeted deletion of PD-1 in myeloid cells induces antitumor immunity. Science Immunology. 5 (43), 1863(2020).
  7. Cassetta, L., et al. Deciphering myeloid-derived suppressor cells: isolation and markers in humans, mice and non-human primates. Cancer Immunology, Immunotherapy. 68 (4), 687-697 (2019).
  8. Nguyen, A., et al. HDACi delivery reprograms tumor-infiltrating myeloid cells to eliminate antigen-loss variants. Cell Reports. 24 (3), 642-654 (2018).
  9. Newton, J. M., Hanoteau, A., Sikora, A. G. Enrichment and characterization of the tumor immune and non-immune microenvironments in established subcutaneous murine tumors. Journal of Visual Experiments: JoVE. (136), e57685(2018).
  10. Engfeldt, P., Arner, P., Ostman, J. Nature of the inhibitory effect of collagenase on phosphodiesterase activity. Journal of Lipid Research. 26 (8), 977-981 (1985).
  11. Quah, B. J., Parish, C. R. The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation. Journal of Visual Experiments: JoVE. (44), e2259(2010).
  12. Schupp, J., et al. Targeting myeloid cells in the tumor sustaining microenvironment. Cellular Immunology. 343, 103713(2019).
  13. Gabrilovich, D. I., Ostrand-Rosenberg, S., Bronte, V. Coordinated regulation of myeloid cells by tumours. Nature Reviews Immunology. 12 (4), 253-268 (2012).
  14. Seglen, P. O. Preparation of isolated rat liver cells. Methods in Cell Biology. 13, 29-83 (1976).
  15. Roussel, M., et al. Mass cytometry deep phenotyping of human mononuclear phagocytes and myeloid-derived suppressor cells from human blood and bone marrow. Journal of Leukocyte Biology. 102 (2), 437-447 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים