פוטוימונותרפיה כמעט אינפרא אדום (NIR-PIT) היא אסטרטגיה טיפולית מתפתחת לסרטן המשתמשת בנוגדן-פוטואבסורבר (IR700Dye) מצומד ואור NIR כדי להרוס תאים סרטניים. כאן, אנו מציגים שיטה להערכת ההשפעה האנטי-אטומית של NIR-PIT במודל עכבר של סרטן ריאות מופץ pleural ומזותליומה פלורלית ממאירה באמצעות הדמיית ביולומינציה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ליד פוטוימונותרפיה אינפרא אדום עבור מודלים עכבר של הפצת Pleural
במאמר זה
סיכום
תקציר
את היעילות של פוטוימונותרפיה ניתן להעריך בצורה מדויקת יותר עם מודל עכבר אורתופופי מאשר עם אחד תת עורי. מודל הפצת pleural יכול לשמש להערכת שיטות טיפול למחלות תוך-ריאה כגון סרטן ריאות או מזותליומה פלורלית ממאירה.
פוטוימונותרפיה כמעט אינפרא אדום (NIR-PIT) היא אסטרטגיה לטיפול בסרטן שפותחה לאחרונה המשלבת את הספציפיות של נוגדנים ממוקדי גידולים עם רעילות הנגרמת על ידי פוטואבסורבר (IR700Dye) לאחר חשיפה לאור NIR. היעילות של NIR-PIT דווחה באמצעות נוגדנים שונים; עם זאת, רק כמה דיווחים הראו את ההשפעה הטיפולית של אסטרטגיה זו במודל אורטופי. במחקר הנוכחי, אנו מדגימים דוגמה להערכת יעילות של מודל סרטן הריאות המופצה pleural, אשר טופל באמצעות NIR-PIT.
מבוא
סרטן נותר אחד הגורמים המובילים לתמותה למרות עשרות שנים של מחקר. סיבה אחת היא כי הקרנות וכימותרפיה הן טכניקות פולשניות מאוד, אשר עשוי להגביל את היתרונות הטיפוליים שלהם. טיפולים תאיים או מולקולריים ממוקדים, שהם טכניקות פחות פולשניות, מקבלים תשומת לב מוגברת. פוטוימונותרפיה היא שיטת טיפול המשפרת באופן סינרגטי את האפקט הטיפולי על ידי שילוב אימונותרפיה ופוטותרפיה. אימונותרפיה מגבירה את חסינות הגידול על ידי הגדלת האימונוגניות של מיקרו-סביבה של הגידול והפחתת דיכוי חיסוני, וכתוצאה מכך הרס של גידולים בגוף. פוטותרפיה הורסת גידולים ראשוניים עם שילוב של רגישים לאור וקרני אור, ואנטיגנים ספציפיים לגידול המשתחררים מתאי הגידול משפרים את חסינות הגידול. גידולים יכולים להיות מטופלים באופ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים ב-vivo בוצעו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש במשאבי בעלי חיים במעבדה של אוניברסיטת נגויה טיפול ושימוש בבעלי חיים (אישור #2017-29438, #2018-30096, #2019-31234, #2020-20104). עכברי עירום הומוזיגוטה אתימיים בני שישה שבועות נרכשו ומתוחזקים במרכז החיות של אוניברסיטת נגויה. בעת ביצוע ההליך בעכברים, הם היו מרדים עם איזופלוריין (מבוא: 4-5%, תחזוקה 2-3%); כף רגלו נלחצה עם פינצטה כדי לאשר את עומק ההרדמה.
1. הטיות של IR700 עם mAb
- דגירה mAb (1 מ"ג, 6.8 ננומול) עם אסתר IR700 NHS (66.8 מ"ג, 34.2 נמול, 5 mmol / L ב- DMSO) ב 0.1 מול / L Na2HPO4 (pH 8.6) ב 15-25 °C ל 1 שעה.
- לטהר את ה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
נוגדן אנטי פוטופלאנין NZ-1 היה מצומד עם IR700 כדי ליצור NZ-1-IR700. אישרנו את הכריכה של NZ-1 ו- IR700 על SDS-PAGE(איור 8). לוציפראז-מבטא H2373 (H2373-luc) הוכן על ידי transfecting תאי מזותליומה ממאירים (H2373) עם גן לוציפראז10.
אנחנו נודן 8-12 שבועות נקבה הומוזיגוטה אתימי עכברים עירומים והזרקנו 1 × 105 H2373-luc תאים לתוך חלל בית החזה. יום הזרקת תאי הגידול לעכברים צוין היום הראשון.
ביום 4, BLI ו- DLIT .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במחקר זה הדגמנו שיטה למדידת ההשפעה הטיפולית של NIR-PIT על מודל הפצת הפלורל של MPM. הרג תאים סלקטיבי מאוד בוצע עם NIR-PIT; לכן, הרקמה הרגילה כמעט ולא ניזוקה23,24,25. עם סוג זה של הרג תאים סלקטיביים, NIR-PIT הוכח להיות בטוח בדגמים מופצים9,26. עם זאת, שיטות חלופיות אפשריות בשלבים מסוימים. שיטות שונות דווחו עבור מודל הפצת pleural
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.25w/v% Trypsin-1mmol/l תמיסת EDTA 4Na עם פנול אדום | Wako | 209-016941 | לתרבית תאים |
| מזרק 1 מ"ל | TERUMO | SS-01T | לניסוי עכברים |
| מחט 30G | Nipro | 1907613 | לניסוי עכברים |
| BALB/cSlc-nu/nu | יפן SLC | ||
| ערכת צביעה כחולה מתנגשת | Invitrogen | LC6025 | שימוש לצביעת חלבון ג'ל |
| Coomassie (ברדפורד) בתוספת בדיקת חלבון | Thermo Fisher Scientific Inc (וולת'ם, MA, ארה"ב) | PI-23200 | למדידת ריכוז APC |
| דימתיל סולפוקסיד (DMSO) | Wako | 043-07216 | שימוש לצימוד של IR700 |
| D-Luciferin (מלח אשלגן) | Cayman Chemical | 14681 | להדמיית ביולומינסנציה ו- DLIT |
| GraphPad Prism7 | תוכנת | לניתוח סטטיסטי | |
| Image Studio | Li-Cor Biosciences | לניתוח תמונה פלואורסצנטית 700 ננומטר | |
| IRDye 700DX Ester צבע אינפרא אדום | LI-COR Bioscience (לינקולן, NE, ארה"ב) | 929-70011 | |
| isoflurane | Wako | 095-06573 | להרדמת עכברים |
| ספקטרום IVIS CT | PerkinElmer | ללכידה תמונה ביולומינסנט ותמונה חיה DLIT | |
| PerkinElmer | לניתוח תמונה ביולומינסנט ו-DLIT | ||
| Na2HPO4 | SIGMA-ALDRICH (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב) | S9763 | שימוש לצימוד של IR700 |
| NIR לייזר | צ'אנגצ'ון תעשיות חדשות טכנולוגיית אופטואלקטרוניקה | MRL-III-690R | להקרנת NIR |
| Novex WedgeWell 4 עד 20%, Tris-Glycine, 1.0 מ"מ, מיני ג'ל חלבון, 12 באר | ב-Invitrogen | XP04202BOX | עבור מאגר מדגם SDS-PAGE |
| NuPAGE LDS (x4) | שימוש ב-Invitrogen | NP0007 | עבור מד כוח אופטי SDS-PAGE |
| Thorlabs (ניוטון, ניו ג'רזי, ארה"ב) | PM100 | למדידת התפוקה של לייזר NIR | |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | |
| מערכת הדמיה Pearl Trilogy | Li-Cor Biosciences | ללכידת תמונה של 700 ננומטר פלואומיצין | |
| תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין (x100) | Wako | 168-23191 | לתרבית תאים |
| Puromycin Dihydrochloride | ThermoFisher | A1113803 | לטרנספקציה לוציפראז |
| RediFect Red-Fluc-Puromycin Lentiviral Prticles | PerkinElmer | CLS960002 | לטרנספיקציה של לוציפראז |
| RPMI-1640 עם L-גלוטמין ופנול | אדום Wako | 189-02025 | לתרבית תאים |
| עמודה Sephadex G25 (PD-10) | GE Healthcare (פיסקאטאווי, ניו ג'רזי, ארה"ב) | 17-0851-01 | שימוש לצימוד של IR700 |
| UV-1900i | Shimadzu | למדידת ריכוז ה-APC |
מקורות
- Xu, X., Lu, H., Lee, R. Near Infrared Light Triggered Photo/Immuno-Therapy Toward Cancers. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).
- Mitsunaga, M., et al. Cancer cell-selective in vivo near....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
