מאמר שיטה

תרבית אדיפוציטים תלת מימדית כמודל לחקר שיפוץ רקמת שומן לבנה המושרה על ידי קאשקסיה

DOI:

10.3791/61853

⸱

18 בינואר 2021

 ,  ,  ,  , 
1Department of Integrated Biotechnology, University of Mogi das Cruzes, 2Department of Biochemistry, Boston University School of Medicine, 3Obesity Research Center, Department of Medicine, Boston University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר מערכת תרבית הדפסה מגנטית תלת מימדית (תלת מימדית) המאפשרת דיסקציה של רקמת שומן לבנה (WAT) המושרה על ידי מדיום מותנה מתאי סרטן. שימוש במערכת תרבית תלת מימדית של אדיפוציטים UCP1+ המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) מאפשר לחקור אדיפוציטים בז' התורמים לעיצוב מחדש של רקמת השומן.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קאשקסיה של סרטן (CC) מציגה את עצמה כתסמונת בעלת ביטויים מרובים, הגורמת לחוסר איזון מטבולי ניכר בין איברים. לאחרונה הוצע לעורר בזבוז מטמון על ידי מספר מתווכים דלקתיים, שעלולים לשבש את הפיזיולוגיה האינטגרטיבית של רקמות השומן ורקמות אחרות כמו המוח והשרירים. בתרחיש זה, הגידול יכול לשרוד על חשבון המארח. במחקר קליני אחרון, עוצמת הדלדול של מרבצי השומן השונים נמצאה בקורלציה שלילית עם תוצאת ההישרדות של המטופל. מחקרים הראו גם שהפרעות מטבוליות שונות יכולות לשנות את שיפוץ רקמת השומן הלבנה (WAT), במיוחד בשלבים המוקדמים של התפתחות קאשקסיה. תפקוד לקוי של WAT כתוצאה מעיצוב מחדש של רקמות תורם לקאשקסיה הכללית, כאשר השינויים העיקריים ב-WAT מורכבים משינויים מורפו-תפקודיים, ליפוליזה מוגברת של שומן, הצטברות תאים חיסוניים, הפחתת אדיפוגנזה, שינויים באוכלוסיית תאי האב והגדלת "נישות" המכילות תאי בז'/בריט.

כדי לחקור את ההיבטים השונים של שיפוץ WAT המושרה על ידי קאשקסיה, במיוחד השינויים בתאי אב ושיפוץ בז', תרבית דו-ממדית (2D) הייתה האפשרות הראשונה למחקרי מבחנה. עם זאת, גישה זו אינה מסכמת כראוי את מורכבות ה-WAT. מבחנים משופרים לשחזור AT ex vivo תפקודי מסייעים להבנת האינטראקציות הפיזיולוגיות בין אוכלוסיות התאים השונות. פרוטוקול זה מתאר מערכת תרבית רקמה יעילה להדפסה תלת מימדית (תלת מימדית) המבוססת על ננו-חלקיקים מגנטיים. הפרוטוקול מותאם לחקירת שיפוץ WAT המושרה על ידי גורמים המושרים על ידי קאשקסיה (CIFs). התוצאות מראות כי תרבית תלת מימדית היא כלי מתאים לחקר מידול WAT ex vivo ועשויה להיות שימושית עבור מסכים פונקציונליים לזיהוי מולקולות ביו-אקטיביות עבור יישומי אוכלוסיות תאי שומן בודדות ולסייע בגילוי טיפול אנטי-מטמון תאי מבוסס WAT.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אורגניזמים חיים מורכבים מתאים במיקרו-סביבות תלת מימדיות עם אינטראקציה בין תא לתא, מטריצת תא ודינמיקת הובלה משוכללת עבור חומרים מזינים ותאים 1,2. עם זאת, רוב הידע הבסיסי שנצבר בביולוגיה של התא נוצר באמצעות תרבית תאים חד-שכבתית (2D). למרות שתרבית דו-ממדית יכולה לענות על חלק מהשאלות המכאניסטיות, גישה זו אינה מסכמת כראוי את הסביבה הטבעית שבתוכה שוכנים התאים ועשויה להיות לא תואמת לחיזוי תגובה מורכבת לתרופה1. יתר על כן, תאים חשים את סביבתם הפיזית באמצעות טרנסדוקציה מכנית. ואכן, כוחות מכניים מתורגמים לאותות ביוכימיים המשפיעים בסופו של דבר על דפוסי ביטוי הגנים ועל גורל התא. בעשורים האחרונים, תרבית רקמות תלת מימדית התגלתה ככלי חדש במבחנה שיכול לחקות את המיקרו-סביבה in vivo בנאמנות רבה יותר. זה יכול למנוע כמה מלכודות מכניסטיות שנוצרו על ידי גישות דו-ממדיות במבחנה3.

קאשקסיה של סרטן (CC) מוגדרת כתסמונת בעלת ביטויים מרובים, הגורמת לחוסר איזון מטבולי ניכר בין איברים. במהלך התפתחות הקאשקסיה, WAT עובר שינויים מורפולוגיים רבים וכתוצאה מכך ליפוליזה מוגברת של אדיפוציטים, הצטברות תאים חיסוניים, ירידה באדיפוגנזה, שינויים באוכלוסיית תאי האב ועלייה ב"נישות" המכילות תאי בז'/בריט (שיפוץ בז')4. עם זאת, סיכום המנגנון שבאמצעותו קאשקסיה משפיעה על שיפוץ WAT באמצעות מודלים במבחנה מהווה אתגר טכני משמעותי. ואכן, כמה מחקרים שניסו לחקור תקשורת בין גידול לרקמה השתמשו בתרבית תאים חד-שכבתית במבחנה (2D), תוך עקיפת המורכבות של המיקרו-סביבה התלת-ממדית של WAT.

למרות שמספר גישות ניסיוניות מייצרות תרבית תלת מימדית, שלוש שיטות הרכבה שונות עדיפות לייצור אדיפוספרואידים: ריחוף מגנטי או הדפסה5, טיפה תלויה6 ומערכות פיגום מטריגל7. למרות היותן מתאימות לאדיפוספרואידים, למערכות אלו יש יתרונות וחסרונות ויש לבחור אותן בהתאם למאפייני כל עיצוב ניסוי. בהתבסס על המגבלות שהוזכרו לעיל, נעשה שימוש בשיטת ההדפסה המגנטית ליצירת תרביות תאים תלת מימדיות5. שיטה זו משתמשת במכלול ננו-חלקיקים מגנטי המורכב מננו-חלקיקי זהב ותחמוצת ברזל, מה שהופך את שיטת ההדפסה למתאימה לרוב סוגי התאים. כאן, תרביות תאים תלת מימדיות שימשו כדי לגרום לאדיפוגנזה, ו-CIFs שימשו לשחזור המצב הסביבתי של CC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. דגירה של תאים דו-ממדיים עם ננו-חלקיקים מגנטיים

  1. גדל תרביות דו-ממדיות דבקות למפגש ~ 70% באמצעות נהלי תרבית תאים סטנדרטיים.
  2. הכן את מכלול הננו-חלקיקים המגנטיים. מוציאים אותו מהמקרר ונותנים לו להתחמם לטמפרטורת החדר (20-25 מעלות צלזיוס) למשך כ-15 דקות1.
  3. מדיום מעורב: הוסף את הננו-חלקיקים המגנטיים ישירות ל-12 מ"ל של מדיום בלוחות תרבית תאים של 100 מ"מ. השעו והשעו את המדיום כמה פעמים כדי לקבל התפלגות הומוגנית של הננו-חלקיקים.
    הערה: המדיום ייראה כהה בגלל הצבע החום של תחמוצת הברזל. מומלץ ריכוז של 2.5 מיקרוליטר/ס"מ2 משטח הגידול.
  4. שטפו את צלחת התרבות הדו-ממדית בגודל 100 מ"מ שלוש פעמים עם מי מלח עם חוצץ פוספט (PBS).
  5. הוסף 12 מ"ל מהמדיום המעורב משלב 1.3 לצלחות תרבית התאים של 100 מ"מ. דגרו את הלוחות למשך הלילה באינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO2) כדי לאפשר חיבור של ננו-חלקיקים מגנטיים לתאים

2. יצירת תרבויות תלת מימד עם הרכבה כדורית בצלחות של 96 בארות

  1. לאחר דגירה של לילה, שטפו את התאים כדי להסיר כל תווך שיורי וננו-חלקיקים מגנטיים לא מחוברים על ידי ערבוב עדין של הצלחות עם 3 x 10 מ"ל PBS.
  2. שאפו את ה-PBS מצלחת הפטרי ונתקו את התאים על ידי דגירה עם תמיסת חומצה טטראצטית (EDTA) של 0.25% טריפסין-אתילנדיאמין למשך 2-5 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
  3. בזמן ההמתנה לניתוק התאים, יש לחטא את הכוננים המגנטיים עם 70% אתנול1.
  4. לאחר ניתוק התאים, הוסף מדיום המכיל סרום בנפח פי 4 מתמיסת הטריפסין-EDTA כדי לנטרל את השפעת הטריפסין, ולאחר מכן העביר את התרחיף לצינור חרוטי.
  5. צנטריפוגה המתלה, בטמפרטורה של 500 × גרם למשך 10 דקות. שאפו את הסופרנטנט, הקפד לא לגעת בכדור.
    הערה: לאחר צנטריפוגה, התאים צריכים להיראות חומים, ותרחיף תאים בבינוני צריך להיראות כהה מהרגיל. תאים צריכים להופיע מפולפלים עם הננו-חלקיקים1.
  6. ספור את התאים בתרחיף וחשב את נפח הנפחים הבינוניים הדרושים ליצירת תרביות תלת מימד. עבור אדיפוספרואידים, השתמש ב-5,000 עד 10,000 תאים ב-150 מיקרוליטר בצלחות של 96 בארות.
  7. בעזרת ערכת הדפסה ביולוגית של 96 בארות, הנח צלחת דוחה תאים של 96 בארות בחלק העליון של כונן הספרואיד.
  8. פיפטה 150 מיקרוליטר של תרחיף תאים לכל באר של צלחת 96 הבארות וסוגר את הצלחת כדי לאפשר לתאים להצטבר בתחתית בצורת מגנט.
  9. השאירו את הצלחת על כונן הכדור בחממה למשך 1-2 שעות כדי להניב ספרואיד מוכשר.
    הערה: תרביות אלה צריכות להיראות צפופות וחומות ויש להדפיס אותן בלוח (איור S1). איור S2 מציג זרימת עבודה מסכמת של השלבים העיקריים של הדפסה מגנטית תלת מימדית של מכלול ספרואידים בלוחות של 96 בארות.

3. אינדוקציה אדיפוגנזה לבנה

  1. הכנת אמצעי תחזוקה ואינדוקציה8; הכן מדיום אינדוקציה לפני כל שימוש.
    1. הכן מצע תחזוקה המכיל 5 מיקרוגרם/מ"ל אינסולין (מלאי 10 מ"ג/מ"ל מאוחסן ב-4 מעלות צלזיוס למשך שבוע אחד) ו-0.5 מיקרומטר רוזיגליטזון (מלאי 10 מ"מ בדימתיל סולפוקסיד (DMSO)).
    2. הכן מדיום אינדוקציה המכיל 125 מיקרומטר אינדומתצין ממלאי 0.125 M באתנול, 2 מיקרוגרם/מ"ל דקסמתזון ממלאי 2 מ"ג/מ"ל באתנול, 0.5 מ"מ איזובוטיל-1-מתילקסנטין (IBMX) ממלאי 0.25 M ב-DMSO, ו-0.5 מיקרומטר רוזיגליטזון ממלאי 10 מ"מ ב-DMSO.
      הערה: מחממים אינדומתצין ל-60 מעלות צלזיוס להמסה.
  2. לאחר 24-48 שעות של הדפסת ספרואידים, החלף את המדיום השלם הרגיל במדיום האינדוקציה (יום 0).
  3. לאחר 48 שעות (יום 2), החלף את מדיום האינדוקציה במדיום התחזוקה.
  4. החלף את המדיום כל 3-5 ימים עד שהתאים מתמיינים במלואם.
    הערה: בדרך כלל, לאחר 7-8 ימים של גירוי עם מדיום האינדוקציה, התאים מתמיינים לתאי שומן בוגרים ומתמלאים בטיפות שמן שניתן לראות בשולי השומן.

4. ייצור מדיום מותנה של קרצינומה של ריאות לואיס (LLC-CM)

  1. תאי קרצינומה של ריאות לואיס (LL/2) בלוחות תרבית תאים של 100 מ"מ במדיום גידול בצפיפות של 6000 תאים/ס"מ2.
    הערה: מצע הגידול מכיל את מדיום הנשר המותאם של Dulbecco (DMEM) עם 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-100 U/mL של פניצילין-סטרפטומיצין.
  2. לאחר יומיים, החלף את המדיום בכל צלחת במדיום גידול טרי.
    הערה: תאי LL/2 מכילים תערובת הטרוגנית של תאים נצמדים (מספר גבוה יותר) ותאים צפים.
  3. לאחר יומיים (יום 4), קצרו את המדיום המותנה, ונקו אותו מתאים ופסולת על ידי צנטריפוגה (500 × גרם, 10 דקות).
  4. הקפיא את כמות המדיום המותנה בחנקן נוזלי לשימוש מאוחר יותר.
    הערה: כדי לטפל בספרואידים עם המדיום המותנה, השתמש בשילוב של 75% מדיום גידול טרי ו-25% מדיום מותנה LLC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אדיפוספרואידים מתרבית תלת מימדית של תאי שבר כלי דם סטרומלי (SVF)
גם תרביות תלת מימד וגם תרביות דו-ממדיות משולבות הוקמו עם אותם מספרים של תאי SVF מאותו תכשיר WAT מפשעתי של עכבר (איור 1A, איור 1B) ועברו אותו פרוטוקול ניסוי להשוואת סמן ביטוי גנים. ספרואידים מגורים עם מדיום אינדוקציה התרחבו עם הזמן. איור 2B מראה עלייה בצפיפות התאים הרב-לוקולריים הדו-ממדיים, מה שמעיד על התמיינות לאדיפו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מקים מערכת תרבית תאים תלת מימדית לחקר התמיינות אדיפוציטים באדיפוספרואידים שמקורם בתאי SVF ראשוניים מ-WAT. בהשוואה לתרבות דבקות דו-ממדית קונבנציונלית, מערכת תלת מימד זו מאפשרת שיפוץ AT, הדומה מאוד לתנאי in vivo. בשנים האחרונות, מחקרים הראו כי תרבית תאים בתלת מימד מניבה מורפולוגיה תאית ואיתות מובהקים בהשוואה למערכת תרבית דו-ממדית3. מורפולוגיה של פיברובלסטים בתלת מימד שונה מזו שנמצאת ב-2D14. בתאי אפיתל חלב, תרבית תלת מימדית יכולה ל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מה-NIH DK117161, DK117163 ל-SRF, ו-P30-DK-046200 ל-Adipose Biology and Nutrient Metabolism Core של מרכז המחקר לתזונה והשמנת יתר בבוסטון, ועל ידי מענקי קרן המחקר של סאו פאולו (FAPESP): 2018/20905-1 ו-CNPq 311319/2018-1 ל-MLBJr.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

Mouse genotyping<

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
3-איזובוטיל-1-מתילקסנטיןסיגמא-אולדריץ' (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)I-5879תרבית תאים
96 בארות,גריינר שחור (מונרו, קרוליינה הצפונית, ארה"ב)655841תרבית תאים
Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab')2 שבר חמור נגד ארנב IgG (H+L)Jackson ImmunoResearch711-606-152צביעה אימונופלואורסצנטית, משנית, 1:400 ב-TBS עם 0.1%
מיקרו-צלחת תרבית תאים Tween-20, 96 WELL, PS, F-BOTTOM ומיקרו; שקוף, שחור, תאים, משטח דוחה תאים, מכסה, סטרילי, 8 יח'/שקיתגריינר (מונרו, קרוליינה הצפונית, ארה"ב)655976תרבית תאים
דקסמתזוןסיגמא-אולדריץ' (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)D-1756תרבית תאים
DMEMקורנינג (מנסס, וירג'יניה, ארה"ב)10-017-CVתאים
סרום בקר עוברי (טובה)ג'מיני ביו (מערב סקרמנטו, קליפורניה)100-500תרבית תאים
אינדומתציןסיגמא-אולדריץ' (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)I-7378תרבית
תאים אינסוליןסיגמא-אולדריץ' (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)I0516תרבית תאים
LL/2 (LLC1) (ATCC CRL-1642)אוסף תרביות מסוג אמריקאי (מנסס, וירג'יניה, ארה"ב)CRL-1642קו תאי קרצינומה של לואיס ריאות
NanoShuttle-PLGreiner (מונרו, קרוליינה הצפונית, ארה"ב)657843תרבית תאים
NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (DAPI)ThermoFisher (וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב)R37606צביעה אימונופלואורסצנטית, בהתאם להוראות היצרן
Pen strepCorning (Manassas, VA, ארה"ב)30-002-CIתרבית תאים
Perilipin-1 (D1D8) XP  טכנולוגיית איתות תאי ארנב mAb (דנברס, מסצ'וסטס, ארה"ב)9349צביעה אימונופלואורסצנטית, ראשונית, 1:1000 ב-TBS עם 0.1% טווין-20
רוזיגליטזוןסיגמא-אולדריץ' (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)R-2408תרבית תאים
טריפסין-EDTA, 0.05%קורנינג (מנסס, וירג'יניה, ארה"ב)25-052-CIתרבית
תאים<חזק>פריימרים PCR עם שעתוק הפוך
<חזק>פריימר<חזק>קדימה<חזק>הפוך
AdipoqGTTCCCAATGTACCACCTCGCTGTTGCAGTAGAACTTGCCAG
em>Col4a1TCCAAGGGCGAAGTGGGTTTACCCTTGCTCGCCTTTGACT
em>ציקלופילין aATGGCACTGGCGGCAGGTCCTTGCCATTCCTGGACCCAAA<
em>Fabp4TGGTGACAAGCTGGTGGTGGAATGTCCAGGCCTCTTCCTTCCTGGCTCA
Fn1GCTTCCCCAACTGGTTACCCTGGGTTGGTGATGAAGGGGGT<
em>Pgc1aGAAAACAGGAACAGCAGCAGAGAGGGGGTCAGAGAAGAGATAAAG
em>Ucp1TCCTAGGGACCATCACCACCCAGCCGGCTGAGATCTTTTCC
/strong>
Primer nameDescriptionSequence
Cre Fגנרי Cre קדימהGCG GTC TGG CAG TAA AAA CTA TC
CreR גנרי Cre הפוךGTG AAA CAG CAT TGC TGT CAC TT
oIMR7318mT / mG קדימהCTC TGC TGC CTC CTG CTG TCT
oIMR7319mT / mG פרא סוג הפוךCGA GGC GGA TCA CAA GCA ata
oIMR7320mT/mG מוטציה הפוכהTCA ATG GGC GGG GGT T
WH336UCP1 מוטציה קדימהCAA TCT GGG CTT AAC GGG TCC TC
WH337UCP1 מוטציה הפוכהGTT GCA TCG ACC GGT TAA TGC AG
WH338UCP1 סוג פרא קדימהGGT CAG CCT AAT TAG CTC TGT
WH339UCP1 סוג פרא הפוךGAT CTC CAG CTC CTC CTC CTC TGT C
ערכת הדפסה ביולוגית של תרבית <<<

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Haisler, W. L., et al. Three-dimensional cell culturing by magnetic levitation. Nature Protocol. 8 (10), 1940-1949 (2013).
  2. Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 8 (10), 839-845 (2007).
  3. Eisenstein, M. Organoids: the body builders. Nature Methods. 15 (1), 19-22 (2018).
  4. Henriques, F., Júnior, M. L. B. Adipose tissue remodeling during cancer-associated cachexia: Translational features from adipose tissue dysfunction. Immunometabolism. 2 (4), 200032(2020).
  5. Tseng, H., et al. A spheroid toxicity assay using magnetic 3D bioprinting and real-time mobile device-based imaging. Scientific Reports. 5 (1), 13987(2015).
  6. Akama, T., Leung, B. M., Labuz, J., Takayama, S., Chun, T. H. Designing 3-D adipospheres for quantitative metabolic study. Methods Molecular Biology. 1566, 177-183 (2017).
  7. Muller, S., et al. Human adipose stromal-vascular fraction self-organizes to form vascularized adipose tissue in 3D cultures. Scientific Reports. 9 (1), 7250(2019).
  8. Aune, U. L., Ruiz, L., Kajimura, S. Isolation and differentiation of stromal vascular cells to beige/brite cells. Journal of Visualized Experiments. (73), e50191(2013).
  9. Henriques, F., et al. Toll-like receptor-4 disruption suppresses adipose tissue remodeling and increases survival in cancer cachexia syndrome. Scientific Reports. 8 (1), 18024(2018).
  10. Kir, S., et al. Tumour-derived PTH-related protein triggers adipose tissue browning and cancer cachexia. Nature. 513 (7516), 100-104 (2014).
  11. Petruzzelli, M., et al. A switch from white to brown fat increases energy expenditure in cancer-associated cachexia. Cell Metabolism. 20 (3), 433-447 (2014).
  12. Lopes, M. A., Oliveira Franco, F., Henriques, F., Peres, S. B., Batista, M. L. LLC tumor cells-derivated factors reduces adipogenesis in co-culture system. Heliyon. 4 (7), 00708(2018).
  13. Wang, H., Liu, L., Lin, J. Z., Aprahamian, T. R., Farmer, S. R. Browning of white adipose tissue with roscovitine induces a distinct population of UCP1(+) adipocytes. Cell Metabolism. 24 (6), 835-847 (2016).
  14. Grinnell, F. Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices. Trends Cell Biology. 13 (5), 264-269 (2003).
  15. Vidi, P. A., Bissell, M. J., Lelievre, S. A. Three-dimensional culture of human breast epithelial cells: the how and the why. Methods Molecular Biology. 945, 193-219 (2013).
  16. Fisher, M. F., Rao, S. S. Three-dimensional culture models to study drug resistance in breast cancer. Biotechnology Bioengineering. 117 (7), 2262-2278 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

WATBeige Brite
הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים