מאמר שיטה

תיוג כפול immunofluorescence באמצעות נוגדנים מאותו המין כדי לחקור אינטראקציות מארח-פתוגן

DOI:

10.3791/62219

⸱

10 ביולי 2021

 ,  , 
1Laboratory of Cell and Molecular Biology of Trypanosomatids, Department of Cellular and Molecular Biology and Pathogenic Bioagents, Ribeirao Preto Medical School, University of Sao Paulo, Ribeirao Preto, SP, Brazil

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, הפרוטוקול מתאר כיצד לבצע תיוג כפול immunofluorescence באמצעות נוגדנים ראשוניים שגדלו באותו מין כדי לחקור אינטראקציות מארח-פתוגן. כמו כן, הוא יכול לכלול את הנוגדן השלישי ממארח אחר בפרוטוקול זה. גישה זו יכולה להתבצע בכל סוג תא ופתוגנים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כיום, ניתן למצוא מגוון רחב של כלים מולקולריים הזמינים לחקר אינטראקציות תא טפיל-מארח. עם זאת, קיימות מגבלות מסוימות כדי להשיג נוגדנים חד שבטיים או פוליקלונליים מסחריים המזהים מבני תאים וחלבונים ספציפיים בטפילים. חוץ מזה, יש כמה נוגדנים מסחריים זמינים לתייג טריפנוסומטידים. בדרך כלל, נוגדנים פוליקלונליים נגד טפילים מוכנים בתוך הבית ויכולים להיות מאתגרים יותר לשימוש בשילוב עם נוגדנים אחרים המיוצרים באותו מין. כאן, הפרוטוקול מדגים כיצד להשתמש בנוגדנים פוליקלונליים ומונו-שבטיים שגדלו באותו מין כדי לבצע תיוג כפול immunofluorescence לחקור אינטראקציות תא מארח ופתוגן. כדי להשיג את התיוג הכפול immunofluorescence, זה חיוני כדי לדגור תחילה את הנוגדן הפוליקלונלי עכבר ולאחר מכן בצע את הדגירה עם העכבר המשני IgG נוגדן מצומד לכל פלואורוכרום. לאחר מכן, יש צורך בצעד חסימה נוסף כדי למנוע כל זכר לנוגדן העיקרי להיות מוכר על ידי הנוגדן המשני הבא. לאחר מכן, נוגדן מונוקלונלי של עכבר ונוגדן המשני הספציפי של IgG התת-מחלקה שלו מצומדים לפלורוכרום שונה מתווספים לדגימה בזמנים המתאימים. בנוסף, ניתן לבצע תיוג משולש immunofluorescence באמצעות נוגדן שלישי שגדל במין אחר. כמו כן, מבנים כגון גרעינים ו actin יכול להיות מוכתם לאחר מכן עם תרכובות ספציפיות שלהם או תוויות. לכן, גישות אלה המוצגות כאן ניתן להתאים עבור כל תא שמקורות הנוגדנים העיקריים שלו מוגבלים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לחקור את האינטראקציה של הפתוגן עם התא המארח ברמה התאית מספק מידע חיוני על הגורמים הבסיסיים של המחלה מאז קבוצות שונות, כגון וירוסים, חיידקים, פרוטוזואה, יכול להדביק את רוב סוגי התא המארח1,2,3,4. זה יכול גם לעזור לפתח ולזהות מטרות טיפוליות פוטנציאליות שיכולות להאט או לעכב את הצמיחה של הפתוגן. בתנאים חיים, הנוגדנים המיוצרים אחראים לזיהוי רכיבים עצמיים, אנטיגנים מווירוסים, רכיבים או מוצרים חיידקיים, פטריות, טפילים ואחרים5.

לשם כך, נוגדנים הם כלים בשימוש נרחב, בעיקר להבנת המיקום והתפקוד של מבנים וחלבונים תאיים. מספר מחקרים באמצעות תיוג נוגדנים מרובים מדגימים כי צעדי חסימה נוספים תורמים לספציפיות של האימונולוקליזציה. בנוסף, רוב הפרוטוקולים המתוארים משתמשים בנוגדנים חד שבטיים מסחריים ספציפיים, כולל נוגדנים מאותו מין מארח6,7,8,9,10,10,11,12,13,14.

בדרך כלל, תיוג כפול immunofluorescence משתמש בשני נוגדנים שגדלו במינים שונים כדי להכתים את מבני התא של עניין או את הפתוגנים ואת התאים המארחים כדי לראות את האינטראקציה ביניהם. עם זאת, זו יכולה להיות בעיה כאשר אין נוגדנים חד שבטיים או פוליקלונליים מסחריים ספציפיים עבור פתוגנים מסוימים זמינים לביצוע התיוג הכפול. כמו כן, ישנן ערכות הטיות נוגדנים זמינות מסחרית, וניתן להטות את הנוגדנים העיקריים ישירות לפלואורופור על ידי תגובת אסתר סוצ'ינימידיל15. הבעיה היא כי ערכות אלה הם לעתים קרובות יקרים, ויש צורך מספיק נוגדנים כדי לתייג אותם. בידיעה זו, פיתחנו בהצלחה שיטה אימונופלואורסצנטית כפולה באמצעות שני נוגדנים שונים שגדלו באותו מין כדי לחקור לוקליזציה של חלבון ב- Trypanosoma brucei16. עם זאת, עבור טפילים תאיים, כולל טריפנוסומה קרוזי, גישה זו לא הודגמה. כאן, אנו מראים כיצד לבצע תיוג כפול immunofluoreorescence ללמוד טפילים תאיים T. cruzi ואת התא המארח באמצעות נוגדנים ראשוניים שגדלו באותו המין ללא תגובות צולבות. מלבד שיטה זו, תיוג אימונופלואורסצנטי משולש הוקם עם הוספת הנוגדן השלישי ממין אחר. גישות אלה מסייעות כאשר מקור הנוגדנים מוגבל וניתן להשתמש בהן בכל סוג תא.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. תרביות תאים וטפילים

  1. לגדל LLC-MK2 (רזוס קוף אפיתל הכליות) תאים מאוסף תרבית סוג אמריקאי (CCL-7) בבקבוק תרבית תאים 25 cm2 cm2 המכיל במדיום RPMI בתוספת 10% FBS מושבת בחום (סרום בקר עוברי) ואנטיביוטיקה (100 U / mL פניצילין ו 100 מיקרוגרם / מ"ל סטרפטומיצין) ב 37 °C ב 5% CO2 17.
  2. להדביק תאי LLC-MK2 עם טריפנוסומה קרוזי (זן Y) על פי פרוטוקול קודם 18.
  3. לאסוף את supernatant של LLC-MK2 תאים נגועים (5 מ"ל) בצינור צנטריפוגה צנטריפוגה חרוטית תרבית תא 15 מ"ל וצנטריפוגה ב 500 x גרם במשך 10 דקות ו 22 °C (5 °F) כדי להוריד את פסולת התא. שמור את הצינור במשך 10 דקות ב 37 °C (50 °F) כדי לאפשר trypomastigotes לשחות אל supernatant.
  4. לאסוף את supernatant בצינור חרוטי חדש צנטריפוגה ב 2500 x g במשך 15 דקות ב 22 °C (60 °F). להשליך את supernatant ו resuspend את הכדור המכיל את הטפילים במדיום RPMI מלא כדי לקבוע את צפיפות התאים על ידי ספירת תאים בתא Neubauer.

2. שליטה בפרוטוקול אימונופלואורסצנטיות

הערה: לאחר התיקון, ניתן לאחסן צלחות המכילות כיסויים בטמפרטורה של 4 °C ב- 1x PBS (pH 7.2) למשך שבוע אחד. כדי להיות מאוחסן, חשוב כי התאים לא עברו את שלב חדירות.

  1. ייחוס תאי LLC-MK2 (2 x 104) ב -24 לוחות היטב המכילים כיסויים מעוגלים מעוקרים UV במדיה RPMI במשך 16 שעות.
  2. עבור תאים נגועים, להוסיף supernatant המכיל T. cruzi (פריט 1.4) לכל באר בפרופורציה (MOI 10:1) ולהשאיר עבור 6 שעות של זיהום. לשטוף כיסויים המכילים תאים נגועים ולא נגועים חמש פעמים עם פתרון PBS קבוע עם 2% paraformaldehyde ב 1x PBS (pH 7.2) במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר (RT).
  3. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS (pH 7.2).
  4. חלחלו את כיסויי הכיסוי עם 0.2% IGEPAL CA-630 ב 1x PBS (PH 7.2) במשך 10 דקות ב RT.
  5. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  6. דגירה מכסה במשך 30 דקות ב RT עם פתרון החסימה (2% BSA ב 1x PBS, pH 7.2).
  7. דגירה מכסה במשך 30 דקות ב RT או עם עכבר חד שבטי אנטי-rnPA1 (דילול 1:200) או עם עכבר פוליקלונלי אנטי TcFAZ (דילול 1:100) נוגדנים מדוללים בפתרון חסימה.
  8. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  9. דגירה את כיסויים במשך 30 דקות ב RT עם עז נגד עכבר IgG F (ab')2 (ab')2 (H +L) מצומד לאלכסה פלואור 488 (1:600) יחד עם פאלואידין מצומד לאלקסה 594 (1:300) כדי להכתים חוטי אקטין (F-actin) בתא המארח מדולל בתמיסת החסימה.
  10. לשטוף שלוש פעמים עם 1x PBS (pH 7.2) במשך 5 דקות כל אחד.
  11. החל כמות קטנה של ריאגנט הרכבה Antifade זהב ProLong עם מדיום DAPI על פני השטח של השקופית.
  12. באמצעות מלקחיים, הטה בעדינות את כיסוי הכיסוי במדיום ההרכבה כדי למנוע היווצרות בועות. לאחר הייבוש, לאטום את כיסוי אם תרצה.

3. תיוג כפול פרוטוקול immunofluorescence באמצעות נוגדנים חד שבטיים ופוליקלונליים שגדלו באותו מארח

  1. חזור על שלבים 2.1 עד 2.6 שתוארו לעיל.
  2. Incubate מכסה כתמים המכילים תאים נגועים ולא נגועים עם נוגדן פוליקלונלי נגד TcFAZ עכבר בתוך הבית (1:100) מדולל בתמיסת חסימה במשך 30 דקות ב RT.
  3. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  4. דגירה מכסה סלטות במשך 30 דקות ב RT עם עז נגד עכבר IgG F (ab')2 (ab')2 (H +L) מצומד לאלכסה פלואור 647 (1:600) מדולל בפתרון החסימה.
  5. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  6. בצע את שלב החסימה השני עם ארנב AffiniPure אנטי עכבר IgG (H + L) מדולל (0.12 מ"ג / מ"ל) בתמיסת חסימה במשך 30 דקות ב RT.
  7. לשטוף את כיסוי שלוש פעמים עם 1x PBS (pH 7.2) במשך 5 דקות כל אחד. לאחר מכן לדגור עם עכבר חד שבטי אנטי hnRNP A1 IgG2b נוגדן (1:200) במשך 30 דקות ב RT.
  8. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  9. דגור על כיסויים במשך 30 דקות עם עז אנטי עכבר IgG2b נוגדן מצומד לאלכסה פלואור 488 (1:600) ועם phalloidin מצומד לאלקסה 594 (1:300) מדולל בתמיסת החסימה.
  10. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  11. חזור על שלבים 2.8 עד 2.10 שתוארו לעיל.

4. תיוג משולש פרוטוקול immunofluorescence עם תוספת של הנוגדן הפוליקלונלי השלישי ממינים מארחים שונים

הערה: עבור תיוג נוסף, שים לב למחלקות המשנה של IgG, איזוטיפים נוגדנים, ובצע את סדר הנוגדנים: 1. פוליקלונלי עכבר, 2. פוליקלונלי ארנב, 3. בלוק שני, ו 4. מונוקלונלי עכבר. שקול את סוג הלייזרים הזמינים במיקרוסקופ הקונפוקלי כדי לבחור את הנוגדן המשני המצומד הפלורופור הנכון.

  1. חזור על שלבים 2.1 עד 2.6 שתוארו לעיל.
  2. לאחר שלבים 3.2 עד 3.5 (שלב כביסה), התחל דגירה חדשה עם נוגדן פוליקלונלי ארנב בחסימת פתרון במשך 30 דקות ב RT.
  3. לשטוף את כיסוי שלוש פעמים עם 1x PBS (pH 7.2) במשך 5 דקות כל אחד.
  4. דגירה את כיסויים עם עיזים נגד ארנב נוגדן IgG מצומדים Alexa 647 (1:600) בתמיסת חסימה במשך 30 דקות.
  5. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  6. בצע שלב חסימה עם ארנב AffiniPure אנטי עכבר IgG (H +L) מדולל (0.12 מ"ג / מ"ל) בתמיסת חסימה במשך 30 דקות ב RT.
  7. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים עם 1x PBS (pH 7.2) במשך 5 דקות כל אחד ודגור עם כל עכבר חד שבטי IgG נוגדן מתחת למחלקה מדולל בתמיסת חסימה במשך 30 דקות.
  8. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.
  9. דגירה את כיסויים במשך 30 דקות עם זוג ספציפי של עיזים נגד עכבר IgG תת מחלקה נוגדן מצומד Alexa 594 (1:600) בתמיסת חסימה במשך 30 דקות.
  10. לשטוף את כיסויים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 1x PBS.

5. רכישת הדמיה קונפוקלית

  1. נתח את דגימות האימונופלואורסצנטיות באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי, עם מטרת טבילה בשמן פי 63 וזיהה את הפלואורסצנטיות באמצעות שפופרת פוטומולטיפלייר (PMT) וגלאי היברידי (HyD).
    הערה: השתמשנו בהתקנה מהמעבדה הרב-משתמשת של מיקרוסקופיה קונפוקלית - LMMC, בית הספר לרפואה ריבייראו פרטו, אוניברסיטת סאו פאולו.
  2. השג את כל התמונות הקונפוקליות עם ערוצים מופרדים. בצעו עיבוד תמונה באמצעות Adobe Photoshop.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מראים כיצד לחקור אינטראקציות מארח-טפיל על ידי immunofluorescence כאשר מקור הנוגדנים מוגבל בשל חוסר זמינות של נוגדנים מסחריים המזהים מבנים וחלבונים ספציפיים טריפנוסומטידים.

בין טריפאנוסומטידים, T. cruzi יש אחד ממחזורי החיים המורכבים ביותר מעורבים שלבי התפתחות שונים בין בעלי חוליות ומארחים חסרי חוליות 19. במהלך מחזור החיים T. cruzi, בשלב מוקדם של זיהום יונקים, טריפומפסטיגוטים מטציקלים פולשים לתאים בתהליך הכולל מגוון רחב של מולקולות הנמצאות בטפיל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביצוע חיסונים כפולים בתאים נגועים טריפנוסומה קרוזי באמצעות שני נוגדנים שונים מאותו מין מארח. כדי ללמוד, בפירוט רב יותר, את ההשלכות של הזיהום, מבנים בתא המארח כגון הגרעין או אברונים ציטוטוסוליים ניתן לתייג באמצעות פרוטוקול זה. כמו כן, ניתן להשתמש בו בשיטת התוויות החיסונית של החלק הדק שלאחר ההטבעה. גישה זו מסייעת להתגבר על המכשול שיש מעט נוגדנים זמינים ללמוד trypanosomatids וטפילים אחרים.

בנוסף, הפרוטוקול שלנו הראה טפיל תאי מסומן יחד עם התא המארח, שני eukaryote...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין אינטרסים מתחרים או פיננסיים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP 2010/19547-1; 2018/03677-5) to MMAB, by Fundação de Apoio ao Ensino, Pesquisa e Assistência- FAEPA to MMAB and by Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior- Brasil (CAPES) - קוד פיננסי 001. CG-C קיבל מלגת תואר שני ודוקטורט מ- CAPES ו- LAMT-S קיבל מלגת דוקטורט מ- CNPq. אנו מודים לאליזבטה ר. מילאני על הסיוע במיקרוסקופיה קונפוקלית וד"ר דריו זמבוני על אספקת תאי LLC-MK2 (בית הספר לרפואה ריבייראו פרטו, USP).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Alexa Fluor 488 - נוגדן IgG2bטכנולוגיות חיים, ארה"בA21141עיזים נגד עכבר
AffiniPure Rabbit אנטי-עכבר IgG (H+L)Jackson Immunoresearch, ארה"ב315-005-003נוגדן נגד עכבר
Alexa Fluor 488 - נוגדן IgG F (ab')2 (H+L) טכנולוגיותחיים, ארה"בA11017עיזים נגד עכבר
Alexa Fluor 594 IgG1 נוגדןLife, ארה"בA21125נוגדן עיזים נגד עכבר
Alexa Fluor 647 - נוגדן IgG F (ab')2 (H+L)טכנולוגיות חיים, ארה"בA21237נוגדן עיזים נגד עכבר
אנטי-hnRNPA1 IgG2bסיגמא-אולדריץ', ארה"בR4528נוגדן לעכבר
נגד TcFAZ (חלבון T. cruzi FAZ) נוגדןהמעבדה שלנונוגדן עכברבבית
סרום בקר אלבומין (BSA)סיגמא-אולדריץ', ארה"בA2153-10Gחלבון אלבומין
Igepal CA-630סיגמא-אולדריץ', ארה"בI3021חומר ניקוי לא יוני
סרום בקר עוברי (FBS)Gibco, Thermo fisher scientific, ארה"ב12657-029סרום
פניצילין סטרפטומיציןGibco, תרמו פישר מדעי, ארה"ב15140-122אנטיביוטיקה
פלואידין Alexa Fluor 594Life technologies, ארה"בA12381סמן אקטין
ProLong זהב נוגד דהייה עם טכנולוגיות DAPILife, ארה"בP36935מגיב מדיה הרכבה
RPMI 1640 1X עם L-גלוטמיןקורנינג, ארה"ב10-040-CVמדיה לתרבית תאים
תמיסת טריפסין-EDTAסיגמא-אולדריץ', ארה"בT4049-100MLBioreagent
חומר ניקוי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lloyd, R. E. Nuclear proteins hijacked by mammalian cytoplasmic plus strand RNA viruses. Virology. 479-480, 457-474 (2015).
  2. Casadevall, A., Pirofski, L. A. Host-pathogen interactions: basic concepts of microbial commensalism, colonization, infection, and disease. Infection and Immunity. 68 (12), 6511-6518 (2000).
  3. Sidik, S. M., Salsman, J., Dellaire, G., Rohde, J. R. Shigella infection interferes with SUMOylation and increases PML-NB number. PLoS One. 10 (4), 0122585(2015).
  4. Robert McMaster, W., Morrison, C. J., Kobor, M. S. Epigenetics: A New Model for Intracellular Parasite-Host Cell Regulation. Trends in Parasitology. 32 (7), 515-521 (2016).
  5. Casali, P., Schettino, E. W. Structure and function of natural antibodies. Current Topics in Microbiology and Immunology. 210, 167-179 (1996).
  6. Ansorg, A., Bornkessel, K., Witte, O. W., Urbach, A. Immunohisto-chemistry and multiple labeling with antibodies from the same host species to study adult hippocampal neurogenesis. Journal of Visualized Experiments. (98), e52551(2015).
  7. Tóth, Z. E., Mezey, E. Simultaneous visualization of multi-ple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545(2007).
  8. Ma, B., Winkelbach, S., Lindenmaier, W., Dittmar, K. E. Six-colour fluorescent imaging of lymphoid tissue based on colour addition theory. Acta Histochemica. 108 (4), 243(2006).
  9. Buchwalow, I. B., Minin, E. A., Boecker, W. A multicolor fluorescence immunostaining technique for simultaneous antigen targeting. Acta Histochemica. 107 (2), 143(2005).
  10. Nakamura, A., Uchihara, T. Dual enhancement of triple immunofluorescence using two antibodies from the same species. Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 67(2004).
  11. McCormick, J., Lim, I., Nichols, R. Neuropeptide precursor pro-cessing detected by triple immunolabeling. Cell and Tissue Research. 297 (2), 197(1999).
  12. Shindler, K. S., Roth, K. A. Double immunofluorescent staining using two unconjugated primary antisera raised in the same species. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 44 (11), 1331(1996).
  13. Wang, B. L., Larsson, L. I. Simultaneous demonstration of multiple anti-gens by indirect immunofluorescence or immunogold staining. Novel light and electron microscopical double and triple staining method employing primary antibodies from the same species. Histochemistry. 83 (1), 47(1985).
  14. Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).
  15. Pranchevicius, M. C., et al. Myosin Va phosphorylated on Ser1650 is found in nuclear speckles and redistributes to nucleoli upon inhibition of transcription. Cell Motility and the Cytoskeleton. 65 (6), 441-456 (2008).
  16. Moreira, B. P., de Castro, C. G., Prado, L. C. dS., da Fonseca, C. K., Baqui, M. M. A. Use of antibodies from the same host species in double labeling immunofluorescence on trypanosome cytoskeleton. Microscopy and Imaging Science: Practical Approaches to Applied Research and Education. Méndez-Vilas, A. 7, 374-378 (2016).
  17. Hull, R. N., Cherry, W. R., Tritch, O. J. Growth characteristics of monkey kidney cell strains LLC-MK1, LLC-MK2, and LLC-MK2 (NCTC-3196) and their utility in virus research. Journal of Experimental Medicine. 115, 903-918 (1962).
  18. Stecconi-Silva, R. B., Andreoli, W. K., Mortara, R. A. Parameters affecting cellular invasion and escape from the parasitophorous vacuole by different infective forms of Trypanosoma cruzi. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 98 (7), 953-958 (2003).
  19. de Souza, W., de Carvalho, T. M., Barrias, E. S. Review on Trypanosoma cruzi: Host Cell Interaction. International Journal of Cell Biology. 2010, 295394(2010).
  20. Burleigh, B. A., Woolsey, A. M. Cell signalling and Trypanosoma cruzi invasion. Cellular Microbiology. 4 (11), 701-711 (2002).
  21. Baqui, M. M. A., Takata, C. S., Milder, R. V., Pudles, J. A giant protein associated with the anterior pole of a trypanosomatid cell body skeleton. European Journal of Cell Biology. 70, 243-249 (1996).
  22. Baqui, M. M., Milder, R., Mortara, R. A., Pudles, J. In vivo and in vitro phosphorylation and subcellular localization of trypanosomatid cytoskeletal giant proteins. Cell Motility and the Cytoskeleton. 47 (1), 25-37 (2000).
  23. Baqui, M. M., De Moraes, N., Milder, R. V., Pudles, J. A giant phosphoprotein localized at the spongiome region of Crithidia luciliae thermophila. Journal of Eukaryotic Microbiology. 47 (6), 532-537 (2000).
  24. Jean-Philippe, J., Paz, S., Caputi, M. hnRNP A1: the Swiss army knife of gene expression. International Journal of Molecular Sciences. 14 (9), 18999-19024 (2013).
  25. Vidarsson, G., Dekkers, G., Rispens, T. IgG subclasses and allotypes: from structure to effector functions. Frontiers in Immunology. 5, 520(2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Trypanosoma cruziDAPI

מאמרים קשורים