קביעת שיעורי השומנים והשומנים הכוללים בדגימות ימיות

C. C. Parrish; J. S. Wells

doi:10.3791/62315

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

קביעת שיעורי השומנים והשומנים הכוללים בדגימות ימיות

5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/62315

⸱

11 בדצמבר 2021

C. C. Parrish¹ , J. S. Wells¹

¹Department of Ocean Sciences and CREAIT Network, Memorial University of Newfoundland

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה הוא לקביעת שומנים במי ים ודגימות ביולוגיות. שומנים בסינון מופקים עם כלורופורם או תערובות של כלורופורם ומתנול במקרה של מוצקים. מחלקות השומנים נמדדות על ידי כרומטוגרפיה של שכבה דקה עם זיהוי יינון להבה והסכום שלהם נותן את תכולת השומנים הכוללת.

תקציר

שומנים מורכבים במידה רבה מפחמן ומימן, ולכן מספקים אנרגיה ספציפית גדולה יותר מאשר מקרומולקולות אורגניות אחרות בים. בהיותם עשירים בפחמן ומימן הם גם הידרופוביים ויכולים לשמש כנשא ממסים וספיגה למזהמים אורגניים ולכן יכולים להיות מניעים של ביו-קומקולציה מזהמת במערכות אקולוגיות ימיות. טבעם ההידרופובי מאפשר את בידודם ממי ים או מדגימות ביולוגיות: ניתוח שומנים ימיים מתחיל בדגימה ולאחר מכן מיצוי בממסים אורגניים שאינם קוטביים, ומספק שיטה נוחה להפרדה שלהם מחומרים אחרים במטריצה מימית.

אם נדגמו מי ים, הצעד הראשון כרוך בדרך כלל בהפרדה לפלגים 'מומסים' ו'חלקיקיים' המוגדרים מבצעית על ידי סינון. דגימות נאספות ושומנים מבודדים מטריצת המדגם בדרך כלל עם כלורופורם עבור חומר מומס באמת קולואידים, ועם תערובות של כלורופורם ומתנול עבור מוצקים ודגימות ביולוגיות. תמציות כאלה עשוי להכיל מספר סוגים ממקורות ביוגניים ואנתרופוגניים. בשלב זה, שומנים מוחלטים ושיעורי שומנים עשויים להיקבע. ניתן למדוד את השומנים הכוללים על ידי סיכום מחלקות שומנים בנפרד שנקבעו באופן אינדיבידואלי אשר בדרך כלל הופרדו כרומטוגרפית. כרומטוגרפיה בשכבות דקות (TLC) עם זיהוי יינון להבה (FID) משמשת באופן קבוע לניתוח כמותי של שומנים מדגימות ימיות. TLC-FID מספק מידע מחלקת שומנים סינופטיים, ועל ידי סיכום שיעורים, מדידת שומנים מוחלטת.

מידע מחלקת שומנים הוא שימושי במיוחד בשילוב עם מדידות של רכיבים בודדים למשל, חומצות שומן ו/או סטרולים, לאחר שחרורם מתמציות שומנים. המגוון הרחב של מבנים ותפקודים שומנים פירושו שהם משמשים באופן נרחב במחקר אקולוגי וביוגוכימי הערכת בריאות המערכת האקולוגית ואת מידת ההשפעה על ידי השפעות אנתרופוגניות. הם הועסקו כדי למדוד חומרים בעלי ערך תזונתי לחי ימי (למשל, אקווה-פיד ו/או טרף), וכאינדיקטור לאיכות המים (למשל פחמימנים).

מבוא

השיטות המתוארות כאן נוגעות לחומרים המוגדרים מבצעית כשלומנים ימיים. הגדרה זו מבוססת על נוחותם להפקת נוזל נוזלי בממסים אורגניים שאינם קוטביים, והיא מספקת שיטה נוחה להפרדה שלהם מחומרים אחרים במטריצה מימית. טבעם ההידרופובי מאפשר את בידודם ממי ים או מדגימות ביולוגיות, כמו גם את העשרתם, ואת הסרת המלחים והחלבונים.

מדידת תכולת השומנים והרכבה באורגניזמים ימיים מעניינים מאוד באקולוגיה של רשתות מזון, תזונה בחקלאות ימית ובמדעי המזון במשך עשרות שנים. שומנים הם מרכיבים אוניברסליים באורגניזמים חיים, הפועלים כמולקולות חיוניות בקרומי התא, כמקורות עיקריים לאנרגיה ביולוגית, המספקים בידוד תרמי וציפה, ומשמשים כמולקולות איתות. למרות נהלים לקביעת שומנים בדם בתחומ....