מתואר כאן מודל שבץ פוטוטרומבוטי, שבו שבץ מיוצר דרך הגולגולת שלם על ידי גרימת איסור מיקרווסקולרי קבוע באמצעות תאורת לייזר לאחר מתן צבע רגיש לאור.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שבץ דוגמנות בעכברים: נגעים קליפת המוח מוקד על ידי פוטוטרומבוזיס
במאמר זה
סיכום
תקציר
שבץ מוחי הוא גורם המוות המוביל ונכות בוגרת במדינות מפותחות. למרות חקירה מקיפה לאסטרטגיות טיפוליות חדשניות, נותרו אפשרויות טיפוליות מוגבלות לחולי שבץ. לכן, דרוש מחקר נוסף עבור מסלולים פתופיציולוגיים כגון דלקת לאחר שבץ, אנגיוגנזה, פלסטיות עצבית, והתחדשות. בהתחשב חוסר היכולת של מודלים במבחנה לשחזר את המורכבות של המוח, מודלים שבץ ניסיוני חיוניים לניתוח והערכה מאוחרת יותר של מטרות תרופות חדשניות עבור מנגנונים אלה. בנוסף, מודלים סטנדרטיים מפורטים לכל ההליכים נדרשים בדחיפות כדי להתגבר על מה שמכונה משבר השכפול. כמאמץ בתוך קונסורציום המחקר ImmunoStroke, מודל עכבר פוטותרמיבוטי סטנדרטי באמצעות הזרקה תוך-אישית של רוז בנגל והארת הגולגולת שלם עם לייזר 561 ננומטר מתואר. מודל זה מאפשר את הביצועים של שבץ בעכברים עם הקצאה לכל אזור קליפת המוח של המוח ללא ניתוח פולשני; ובכך, המאפשר את המחקר של שבץ באזורים שונים של המוח. בסרטון זה מודגמות השיטות הכירורגיות של אינדוקציה של שבץ במודל הפוטו-טרומבוטי יחד עם ניתוח היסתולוגי.
מבוא
שבץ איסכמי נותר סיבת המוות העיקרית ורכש נכות בוגרת במדינות המפותחותבמאה ה -21 היוו כ -2.7 מיליון מקרי מוות בשנת 2017 ברחבי העולם1. אפילו עם המאמצים העצומים של הקהילה המדעית, טיפולים מעטים זמינים. יתר על כן, עם קריטריוני הדרה גבוהים כאלה, אפשרויות מוגבלות אלה כבר אינן נגישות לחולים רבים, וכתוצאה מכך צורך דחוף בטיפולים חדשניים כדי לשפר את ההתאוששות התפקודית לאחר שבץ.
בהתחשב ביכולת של מודלים במבחנה לשכפל את האינטראקציות המורכבות של המוח, מודלים של בעלי חיים חיוניים למחקר שבץ פרה-אקליני. עכברים הם המודל החייתי הנפוץ ביותר בתחום חקר השבץ. רוב מודלי העכבר האלה שואפים לגרום אוטמים על ידי חסימת זרימת הדם ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הניסויים שדווחו בסרטון זה נערכו על פי ההנחיות הלאומיות לשימוש בבעלי חיים ניסיוניים, והפרוטוקולים אושרו על ידי הוועדות הממשלתיות הגרמניות (Regierung von Oberbayern, מינכן, גרמניה). העכברים ששימשו במחקר זה היו עכברי C57Bl/6J זכרים, בני 10-12 שבועות, ונשלחו על ידי צ'ארלס ריבר גרמניה. בעלי החיים שוכנו בטמפרטורות מבוקרות (22 °C (22 °C (2 °F) ± 2 °C (50 °F), עם תקופת מחזור 12 שעות בהיר כהה וגישה למזון גלולה ומים ad libitum.
1. הכנת החומר והמכשירים
- להמיס רוז בנגלי 0.9% תמיסת מלח כדי להגיע לריכוז הסופי של 10 מ"ג/מ"ל. חבר את שמיכת החום כדי לשמור על אזור הפעולה חם ולשמור על טמפרטורת גוף העכבר במהלך הרדמה ב 37 °C (50 °F).
- ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
המודל המתואר כאן הוא מודל שבץ פוטותרמי על ידי הזרקת רוז בנגל ותאורה גולגולת שלם במשך 20 דקות, אורך גל קבוע 561 ננומטר וכוח פלט 25 mW בסיבים. למרות הניתוח הפוטו-טרומבוטי המלא נמשך 30 דקות, החיה נשמרת תחת הרדמה נמוכה והנזק המוחי מתון. כעשר דקות לאחר ההעברה לכלובים שלהם, כל בעלי החיים היו ערים, נעו בחופשיות בכלוב ותקשרו עם המלטה.
נפח אוטם בוצע באמצעות קרסיל סגול סגול מוכתם מקטעי מוח קורונל סדרתי 24 שעות לאחר אינדוקציה שבץ (איור 2A). נפח האוטם הממוצע היה 29.3 מ"מ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הפרוטוקול המוצג מתאר את מודל השבץ הניסיוני של פוטותרומבוזיס על ידי הארת הגולגולת שלם בלייזר 561 ננומטר, עם זריקה תוך-אישית קודמת של רוז בנגל. עד לאחרונה, השימוש במודל זה היה נמוך אך גדל בהתמדה.
התמותה במהלך אינדוקציה שבץ במודל זה נעדרת. התמותה הכוללת של פחות מ -5% מתעוררת במהלך הניתוח עקב סיבוכים מרדימים או הקרבה לאחר עמידה בקריטריוני ההדרה. כדי להצדיק את השונות הנמוכה של מודל זה ואת יכולת הרבייה שלו, מוצעים קריטריוני החרגה הבאים: 1) זמן פעולה ארוך מ - 30 דקות; 2) זיהום של התפר; 3) פצע נשיכה; .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין אינטרסים מתחרים לחשוף.
תודות
אנו מודים לכל שותפינו לשיתוף הפעולה של קונסורציום אימונוסטרוק (עבור 2879, מתאי מערכת החיסון ועד להתאוששות שבץ) על הצעות ודיונים. עבודה זו מומנה על ידי דויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG, קרן המחקר הגרמנית) במסגרת אשכול מינכן לנוירולוגיה של מערכות (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) ותחת המענקים LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 ו- LL-112/1-1.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 561 ננומטר wavelenght לייזר | Solna | Cobolt HS-03 | |
| חומצה אצטית | סיגמא | מדעי החיים 695092 | |
| מערכת הרדמה לאיזופלורן | Drager | ||
| ApopTag Peroxidase באתרו ערכת זיהוי אפופטוזיס | Millipore | S7100 | |
| Bepanthen pomade | Bayer | 1578681 | |
| C57Bl/6J עכברים | צ'ארלס ריבר | 000664 | |
| קולימטר | Thorlabs | F240APC-A | |
| קוטון | NOBA Verbondmitel Danz | 974116 | |
| Cresyl violet | Sigma Life Science | C5042-10G | |
| Cryostat | Thermo Scientific CryoStarNX70 | ||
| אתנול 70% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 521005 | |
| אתנול 96% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 522078 | |
| אתנול 99% | CLN Chemikalien Laborbedorf | ETO-5000-99-1 | |
| נייר סינון | Macherey-Nagel | 432018 | |
| מספריים עדינים | FST | 15000-00 | |
| מלקחיים | FST | 11616-15 | |
| שמיכת חימום | בקר טמפרטורה FHC DC | 40-90-8D | |
| Isoflurane | Abbot | B506 | |
| Isopentane | Fluka | 59070 | |
| קטמין | Inresa Arzneimittel GmbH | ||
| כתם לייזר | Perimed | PeriCam PSI HR | |
| Mayor מספריים | FST | 1410-15 | |
| פוספט חוצץ מי מלח PH: 7.4 | מ"מ באוניברסיטת מינכן | P32799 | |
| משקפי מגן | לייזר 2000 | NIR-ZS2-38 | |
| רוז בנגל | סיגמא אולדריץ' | 198250-5G | |
| Roti-Histokit הרכבה בינונית Roth | 6638.1 | ||
| תמיסת מלח | בראון | 131321 | |
| Stereomikroskop | Zeiss | Stemi DV4 | |
| מסגרת | סטריאוטקטיתStoelting | 51500U | |
| Superfrost Plus Slides | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| Xylacine | Albrecht |
מקורות
- GBD 2016 Causes of Death Collaborators. Global, regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).
- Carmichael, S. T.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
