מאמר שיטה

הרחבה והעשרה של תאי T של גמא-דלתא (γδ) ממוצר אנושי כדורי

12K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/62622

⸱

22 בספטמבר 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Cell Therapy Facility, Moffitt Cancer Center and Research Institute, 2Department of Immunology, Moffitt Cancer Center and Research Institute

במאמר זה

סיכום

מוצג פרוטוקול להרחבת מוצר התרופה תא גמא-דלתא (γδ) T. לימפוציטים מבודדים על ידי ההבהרה ומועשרים בחומצה זולדרונית ואינטרלוקין-2. תאי אלפא-ביתא T מתרוקנים באמצעות התקן הפרדה מגנטי ברמה קלינית. תאי γδ מתורבתים במשותף עם תאים מלאכותיים שמקורם ב- K562 ומורחבים.

תקציר

למרות שתאי Vγ9Vδ2 T הם תת-קבוצה מינורית של לימפוציטים מסוג T, אוכלוסייה זו מבוקשת על יכולתה לזהות אנטיגנים באופן עצמאי היסטו-תאימות (MHC) ולפתח פונקציית אפקט ציטוליטית חזקה שהופכת אותה למועמדת אידיאלית לאימונותרפיה של סרטן. בשל התדירות הנמוכה של תאי גמא-דלתא (γδ) T בדם ההיקפי, פיתחנו פרוטוקול יעיל להרחבה רבה של מוצר תרופתי תאי γδ T טהור ביותר לשימוש ראשון בבני אדם בתאי T אלוגניים בחולים עם לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML). באמצעות אפרזיס תורם בריא כמקור תא אלוגניים, הלימפוציטים מבודדים באמצעות מכשיר מאומת עבור שיטת צנטריפוגה זרימה נגדית של הפרדת תאים לפי גודל וצפיפות.

השבר העשיר בלימפוציטים מנוצל, ותאי ה- γδ T מופעלים באופן מועדף עם חומצה זולדרונית (שאושרה על ידי ה-FDA) ואינטרלוקין (IL)-2 למשך 7 ימים. בעקבות ההתפשטות המועדפת של תאי γδ T, מכשיר הפרדת תאים מגנטיים ברמה קלינית וחרוזי TCRββ משמשים לרוקן קולטן תאי T מזהמים (TCR)αβ T תאים. תאי ה-γδ T המועשרים ביותר עוברים לאחר מכן הרחבה שנייה באמצעות תאים מהונדסים המציגים אנטיגן מלאכותי (aAPCs) המופקים מתאי K562 שהונדסו גנטית לבטא שבר משתנה בעל שרשרת אחת (scFv) עבור CD3 ו-CD28, 41BBL (CD137L) ו-IL15-RA-יחד עם חומצה זולדרונית ו-IL-2. זריעת כל תאי ה-T המועשרים של היום-7 בתרבית-שיתוף עם ה-aAPCs מאפשרת ייצור של תאי T טהורים ביותר עם התרחבות קיפול ממוצעת של פי 229,000 > מדם תורם בריא.

מבוא

הישנות לוקמיה היא הגורם המוביל לתמותה לאחר השתלת תאים hematopoietic (HCT) בחולים עם AML1,2,3. הישרדות טובה יותר ללא לוקמיה דווחה עם התאוששות מוגברת של תאי γδ T בדם לאחר HCT ללא סיכון מוגבר למחלה שתל נגד מארח (GVHD)4. היכולת של תאי T לזהות אנטיגנים באופן עצמאי MHC ולפתח פונקציות אפקטים חזקים דמויי Th1 להפוך את זה תת-צפיפות קלה של תאי T אידיאלי לטיפול בחולי AML העוברים השתלה אלוגנית בסיכון להפחתה5. בהתחשב בכך שתאי Vγ9Vδ2 T הם תת-קבוצה מינורית של לימפוציטים T הנעים בין 0.5% ל -5% מתאי T בפריפריה6, יצאנו להקים מערכת חזקה להרחבת אוכלוסייה נדירה זו של תאי דם כדי להשיג מינונים טיפוליים פוטנציאליים לניסויים קליניים.

למרות שאחרים הרחיבו בהצלחה תאי γδ T באמצעות חומצה זולדרונית ואפילו AAPCs, פיתחנו תהליך שיכול להרחיב תאי T ב-229,749 פי 229,749. ההתרחבות היא דו-פאזית: ראשית, לימפוציטים מתקבלים על ידי התרוממות יתר באמצעות מכשיר ההפרדה. הציוד מספק מערכת סגורה המאפשרת הפרדה של תאים בהתבסס על גודלם, צורתם וצפיפותם על ידי צנטריפוגה של זרימת נגד. לאחר העשרה ללימפוציטים, הרחבה סלקטיבית של תאי Vγ9Vδ2 T מושגת על ידי טיפול בחומצה זולדרונית ו- IL-2 למשך 7 ימים. מיד לאחר טיפול זה, תאי TCR-αβ T מתרוקנים באמצעות טכנולוגיית microbead, ומאפשרים הרחבה מאוחרת יותר של תאי γδ T עם AAPCs שמקורם ב- K562.

לאימות תהליכים, רק 5 × 106 תאי T המורחבים בחומצה זולדרונית שימשו להרחבת תרבית משותפת שלב 2 עם aAPCs. בשלב השני של ההתרחבות, תאי γδ T מופעלים באמצעות בנק תאי עבודה תואם ייצור תקין (cGMP) התואם הנוכחי (cGMP) של AAPCs (K562VL6(scFv-CD3-41BBL;scFv-CD28-IL15-RA)) המיוצרים ב- Moffitt. הרציונל של הרחבה biphasic זה מבוסס על היכולת של חומצה זולדרונית לעכב פרנסיל דיפוספט סינתאז (FDPS) במונוציטים, מה שמוביל להצטברות של איזופנטניל pyrophosphate, אשר מגרה ישירות את תאי Vγ2Vδ2. בשלב השני של ההתרחבות, ה- aAPCs שמקורם ב- K562 (K562VL6(scFv-CD3-41BBL;scFv-CD28-IL15-RA)) מספקים גירוי חזק לכל תאי ה- T. עם זאת, מוצר התא כבר הועשר עבור תאי γδ T, וכתוצאה מכך התרחבות חזקה של תאי γδ T.

עם השימוש בציוד ספציפי ובקבוקונים, התהליך הוא מערכת סגורה מבחינה תפקודית, ובכך להפחית את הסיכון לזיהום. בנוסף, הביו-ריאקטור של המערכת הסגורה 1 ליטר מאפשר צמיחה והתרחבות מקסימלית של תאים בנפח כולל של 1 ליטר בינוני עם צורך מינימלי בהאכלה. היתרון של שיטת מופיט הוא שהיא מספקת מערכת GMP מהירה, ניתנת לשחזור, וישית מאוד כדי לייצר מוצר תאי γδ T טהור מאוד, שמקורו בתורם לניהול אלוגני. שיטה זו יכולה להיות מיושמת על כל ניסוי קליני שמטרתו להשתמש בתאי γδ T אנושיים המבטאים קולטני תאי VγVδ2 T כאימונותרפיה מאמצת כדי לתווך חסינות מפני חיידקים וגידולים בחולי סרטן עם הפוגה חלקית ומלאה. בנוסף, הוא מספק פלטפורמה חזקה לפיתוח וייצור של תאי T קולטן אנטיגן כימרי (CAR+).

פרוטוקול

הערה: אישור IRB הושג, והושגו הסכמה מדעת מהתורמים.

1. בידוד לימפוציטים

  1. מעבירים את המוצר הספירה לחדר נקי.
    הערה: אימות התהליך בוצע באמצעות אפרזיס תורם רגיל מספק מסחרי חיצוני התואם לתקנות איסוף חומרי גלם סלולריים.
  2. לאסוף דגימות לבדיקות סטריליות, ספירת תאים, פנוטיפינג תאים.
  3. יש לאלוטר את מכשיר צנטריפוגת הזרימה הנגדית באמצעות מדיום ראשוני של תמיסת מלח מאוזנת של Hanks עם 1% אלבומין בסרום אנושי (HSA) ומדיום משני של תמיסת מלח (0.9% הזרקת נתרן כלורי USP) או תמיסת מלח עם אגירה פוספט של Dulbecco (DPBS). הגדר את מהירות צנטריפוגת ההבהה על 900 × g ולאסוף שברים בהתבסס על קצב הזרימה וזמן.
  4. לאסוף דגימות משבר 2 ולבצע את הבדיקות הבאות: 2 מ"ל לבדיקת סטריליות; 0.5 מ"ל לספירת תאים וכדאיות באמצעות אקרידין כתום / פרופידיום יודיד (AO / PI); 5 × 106 תאים עבור פנוטיפינג תאים על ידי ציטומטריית זרימה.
  5. הרחב שבר לימפוציטים טהור (שבר 2) של תאים בתרבית ב 10 × 106 תאים / cm2 ב 1 L סגור מערכת bioreactor עם 5 מיקרומול / ליטר של חומצה זולדרונית ו 300 IU / mL של IL-2.
  6. דגירה במשך שבעה ימים באינקובטור להגדיר על 37 °C (5%)

2. אלפא-ביתא (αβ) דלדול תא T

  1. קציר תאים מבקבוק הביו-ריאקטור של המערכת הסגורה 1 ליטר. סטרילי-ריתוך חבילת העברה 1 L לקו האדום של bioreactor המערכת הסגורה, ולהשתמש במשאבה התרופות המתאימה כדי להעביר את התאים לתוך חבילת ההעברה.
  2. קח את הדגימות הבאות: 10 מ"ל עבור סטריליות בינונית בילה; 0.5 מ"ל של תאים לספירת תאים וליכולת הכדאיות באמצעות AO/PI; 5 × 106 תאים לציטומטריית זרימה
  3. Resuspend התאים ב ~ 5 × 108 תאים / מ"ל מלוחים חוצצי פוספט (PBS) או (PBS / אתילנדימינטטראצטטי חומצה (EDTA)) חוצץ + 0.5% HSA ו- TCR ביוטינילציה αβ ספציפי לנוגדן.
  4. מניחים את השייקר במקרר ודגרת התאים ב 2-8 מעלות צלזיוס במשך כ 15 דקות עם רועד.
  5. לשטוף את התאים עם סך של 600 מ"ל של חוצץ PBS / EDTA + 0.5% HSA. צנטריפוגה כדי להסיר את הנוגדן לא מאוגד ב 200-500 × גרם במשך 15 דקות ב 2-8 °C (70 °F). Resuspend ~ 5 × 108 תאים / מ"ל במאגר PBS / EDTA + 0.5% HSA עם חיידקים ספציפיים אנטי ביוטין (7.5 מ"ל / 1 מ"ל / 1 מעין).
  6. מניחים את השייקר במקרר ודגרת התאים ב 2-8 מעלות צלזיוס במשך כ 15 דקות עם רועד. לאחר הדגירה, צנטריפוגה התאים ב 200-500 גרם × במשך 15 דקות ב 2-8 °C (8 °F) כדי להסיר את החיידקים unbound. Resuspend ~ 6 × 107 תאים / מ"ל במאגר PBS / EDTA + 0.5% HSA ולהעביר אותם לתיק חבילת העברה.
  7. התקן את ערכת הצינורות בהתקן הפרדת התא המגנטי ברמה קלינית על-ידי ביצוע הוראות היצרן, מקם את האריזות עם מאגר PBS / EDTA ואת חבילת ההעברה עם מוצר התא במכשיר ותדוקר אותו בהוראת המכשיר.
  8. בחר בפרוטוקול דלדול 1.2 עבור דלדול תאי αβ T המסומנים בתווית.
  9. צנטריפוגה שבר היעד (תאי γδ T מועשר) ו resuspend התאים בינוני בתוספת עם 10% סרום AB אנושי.
  10. קח דגימה של 0.5 מ"ל ובצע ספירת תאים ויכולת ערך עם כתם AO /PI. להביא תאים לריכוז סופי של כ 1 × 106 תאים / מ"ל. קח מדגם של 5 × 106 תאים של המוצר עבור פנוטיפינג ציטומטריה זרימה לאחר דלדול.

3. תרבות משותפת עם AAPCs

  1. הקרנה של 5 × 107 aAPCs/בקבוקון ב-100 ג'י במכשיר יצירת קרני הרנטגן.
  2. השתמש ב- aAPCs בתרבית משותפת ביחס של 10:1 עם תאי ה- γδ T. מניחים את תאי ה- AAPCs המוקרנים (5 × 107 תאים/בקבוקון) ותאי T γδ (5 × 106 תאים/בקבוקון) בבקבוקי ביו-ריאקטור של מערכת סגורה של L עם 1 ליטר של מדיום תרבות בתוספת 10% סרום AB אנושי. זרע עד 10 צלוחיות.
  3. להרחיב את התאים בתרבית במשך 10 ימים באינקובטור ב 37 °C (5%) ו 5% CO2.
  4. יש לעקוב אחר רמות הגלוקוז והלקאט כל 3-4 ימים באמצעות רצועות, גלוקוז ומד לקטט.
  5. אם גלוקוז יורד ל 250 מ"ג / ד"ל, להפחית את הנפח בבקבוקון ל 200 מ"ל באמצעות משאבה פרמצבטית על ידי סטרילי-ריתוך חבילת העברה 1 L לקו האדום של bioreactor המערכת הסגורה.
  6. מערבבים את התאים ב-200 מ"ל הנותרים, ולוקח דגימה של 0.5 מ"ל לספירת תאים ומדידת כדאיות על ידי כתמי AO-PI. אם ספירת התאים היא ≥109, לפצל בקבוקון אחד לשני צלוחיות ולמלא כל בקבוקון עד 1 L עם AIM-V בתוספת 10% סרום AB אנושי. אם ספירת התאים היא <109, להאכיל את התאים עם ליטר טרי של מדיום תרבית בתוספת 10% סרום AB אנושי.
  7. חזור על שלב 3.6 עבור כל הבקבוקונים והחזיר אותם לאינקובטור ב 37 °C (5%) חזור על שלבים 3.4-3.7 כל 3 עד 4 ימים.

4. קציר תאים

  1. בסוף 10 ימים בתרבות משותפת, לקצור את כל בקבוקונים bioreactor. קציר 1 בקבוקון bioreactor בכל פעם, ולאגד את כל התאים לתוך חבילת העברה בגודל מתאים. סטרילי-לרתך את חבילת ההעברה לקו האדום של bioreactor המערכת הסגורה, ולהשתמש במשאבת התרופות כדי להעביר את התאים לתוך חבילת ההעברה.
  2. הסר את דגימות בקרת האיכות הבאות: 1% של מוצר התרופה (DP) עבור סטריליות על ידי תרבות הדם וכתמים גרם; 0.5 מ"ל לספירת תאים וליכולת כובש באמצעות AO/PI; 5-10 × 106 תאים לציטומטריית זרימה (ראה איור 1 לאסטרטגיית גינגינג); 0.5 מ"ל לאנדוטוקסין; 0.5 מ"ל להכתמת גרם; 106 תאים זינקו ל-10 מ"ל של בינוני עבור בדיקת Mycoplasma.
  3. צנטריפוגות התאים ב 200-500 × גרם במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר ולהשליך את supernatant.
  4. לשטוף את התאים בתמיסה של פתרון גבישי מאוזן + 0.5% HSA ב 200-500 × גרם במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. resuspend אותם בנפח יעד של 100-300 מ"ל של פתרון גבישי מאוזן + 0.5% HSA.

5. בדיקת שחרור

  1. בצע בדיקות בקרת איכות של DP תא γδ T עבור הדברים הבאים: טוהר וזהות על ידי cytometry זרימה (חי/מת, CD45, CD3, TCR αβ, TCR γδ, CD20, CD56, CD16); הכדאיות על ידי כתמי AO / PI; אנדוטוקסין; בדיקת מיקופלסמה על ידי תגובת שרשרת פולימראז (PCR); סטריליות על ידי כתמי גרם ותרביות דם אירוביות ואנאירוביות; שאריות K562 לפי ציטומטריית זרימה (CD3-CD16-CD56-CD71+).

תוצאות

תהליך תא γδ T היה מאופיין ואופטימיזציה לייצור של מוצר התרופה התא γδ T. אופטימיזציה תהליך כלל 1) העשרת לימפוציטים באמצעות התרוממות רוח, 2) γδ T חומר לתא (DS) התרחבות ספציפית לתא עם חומצה זולדרונית, 3) γδ T תא DS דלדול של TCRαβ, 4) הרחבה משנית של γδ T תא DS באמצעות K562 נגזר aAPCs, ו 5) קציר DP הסופי ניסוח של המוצר לניהול או cryopreservation. לאחר אופטימיזציה של התהליך, ריצות אישור בוצעו בקנה מידה באמצעות החומר הנגזר משלושה תורמים בריאים כדי לאשר התאמת עיבוד תאים. כל הנתונים נותחו והם מסוכמים בטבלה 1, טבלה 2 וטבלה 3. התאים שהופרדו משבר צנטריפוגה לאחר הזרימה הנגדית 2 (F2) הניבו אוכלוסיית לימפוציטים טהורה עם ממוצע של 99.23% תאי CD45+ (דווח כתדירות של שער חי כולל) ויכולת הכנסה ממוצעת מצוינת של 95.80% (טבלה 1).

γδ T-תא ספציפי הרחבה עם חומצה זולדרונית היה תלוי באחוז הראשוני של תאי הרוצח הטבעי (NK) הנוכחים בשבר הלימפוציטים (F2) לאחר ההבהרה. ההעשרה של DS תא T עם TCRαβ dpletion הייתה עקבית (טבלה 2). DP תא T γδ המיוצר משלושה תורמים בריאים היה בממוצע 0.11% ± 0.05% CD20 + B תאים ו 0.00% ± 0.00% TCR αβ + T תאים, ובכך עומד בקריטריון השחרור של ≤1% של תאי TCR αβ + T. האחוז הממוצע של תאי NK במוצר הסופי הוא 17.06% ± 26.19% ועונה על קריטריון השחרור של <35%. בנוסף, האחוז הממוצע של תאי T ותאי NK שושלת שלילית במוצר הסופי היה 0.48% ± 0.42% (טבלה 3). כתמי פני התא וניתוח ציטומטרי של זרימה נוצלו כדי לאפיין את הזהות, הטוהר והזיהומים של ה- DS וה- DP, כפי שמוצג באיור 2A-D.

ההרחבה המשנית, שהושגה מהתרבות המשותפת של aAPC (K562CL6(CD3-CD137L:CD28-IL-15RA)) WCB ו- γδ T תא DS ביחס של 10:1, יצרה DP של תא γδ T שעמד בכל קריטריוני ההפצה, כפי שמוצג בטבלה 4. בנוסף, התאים היו מוכתמים ומוערכים על ידי ציטומטריית זרימה בתאי F2 של צנטריפוגה של זרימה ביום 0, יום 7-תאי T מורחבים בחומצה זולדרונית, יום 7-TCR αβ T דלדול תא, יום 17-סופי DP עבור סמנים ביולוגיים הבאים אשכול של בידול (CD)3, TCRαβ, TCR γδ, CD45RA, CD45RO, קולטן chemokine CC 7 (CCR7), חלבון מוות תאים מתוכנת-1 (PD-1), חלבון לימפוציטים הקשור ללימפוציטים מסוג T ציטוטוקסי 4 (CTLA4), גן מפעיל לימפוציטים 3 (LAG3), ואימונוגלובולין של תאי T וחלבון המכיל תחום מוצין 3 (TIM3). הנתונים המוצגים באיור 3 הם בממוצע משלוש ריצות עצמאיות וממחישים שהתאים לא הגיעו לתשישות. ה-Moffitt CTF פיתח גם שיורי K562 כדי לקבוע את זיהומי ה-DP הקשורים ל-AAPCs שמקורם ב-K562 (איור 4).

אסטרטגיית הגית הציטומטרית של הזרימה המשמשת לאפיון האחוזים של סוגי התאים הייתה כדלקמן: 1) gating על אוכלוסיית שושלת התאים T ו- NK שלילית (CD3-CD56-CD16-); 2) שער על CD71+ (קולטן העברה לידי ביטוי שושלת אריתרוייד ו- AML המאפשר זיהוי של שאריות תאי K562). אסטרטגיית הגטינג זו אפשרה את ההערכה של תאי CD3-CD16-CD56-CD71+, שהם ה-aAPC (K562CL6(scFv-CD3-CD137;scFv-CD28-IL15-RA)) WCB (המכונה "שאריות K562" באיור 4).

figure-results-1

figure-results-2

figure-results-3

figure-results-4

דיון

המעבדה לטיפול בתאים Moffit פיתחה פרוטוקול עם הרחבה biphasic של תאי γδ T טהורים מאוד לשימוש כ- DP בניסויים קליניים. פרוטוקול זה מספק שיטת ייצור תחת הנחיות cGMP במערכת סגורה המניבה DP תא T טהור מאוד המופעל ומורחב בהצלחה על ידי חומצה זולדרונית ו- AAPCs של WCB. פרוטוקול זה אושר על ידי ה-FDA לייצור DP תא אלוגניים γδ T עבור חולי AML. באמצעות תורמים בריאים, הרחבנו בהצלחה את האוכלוסייה הקטנה של תאי T תורמים תוך 7 ימים בלבד מ-2.06 ± 0.45% ל-54.45 ± 28.34%. לאחר התרחבות של 7 ימים עם חומצה זולדרונית, נצפתה כי תורם 2 היה גידול באוכלוסיית NK.

חומצה זולדרונית מעכבת פרנסיל דיפוספט סינתאז (FDPS) במונוציטים, אשר, בתורו, מוביל הצטברות של איזופנטניל pyrophosphate (IPP), אשר היה בקורלציה עם עלייה משמעותית בשגשוג של תאי T ותאי NK טבעיים7,8,9. אוכלוסיית NK מוגברת זו מעכבת את השלב השני של התרחבות עם aAPCs, כמו aAPCs רק יתרום להתרחבות נוספת של תאי NK. מסיבה זו שונו הקריטריונים לתורם כדי לא לכלול תורמים עם אוכלוסיות NK גבוהות. לאחר דלדול תאי ה- αβ T, תאי ה- γδ T הועשרו עוד יותר ל- 76.61 ± 27.51%. פרוטוקול ייחודי זה כולל הרחבה שנייה המשתמשת ב- aAPCs המיוצרים על-ידי Moffit כדי למקד את קולטני CD8, CD28 ו- CD127L בתאי ה- γδ T. שלב ההרחבה השני עם ה- aAPCs הניב DP עם ≥65% עבור תאי CD3+ TCR γδ+ T, ≤1% TCRαβ T ותאי CD3-CD16+CD56+ NK <35%. בשל השימוש ב- AAPCs שמקורם ב- K562, היה צורך להוכיח כי aAPCs אלה היוו <1% מהמוצר הסופי.

Moffit CTF פיתחה זרימה ציטומטרית המשמשת לקריטריוני השחרור כדי למדוד את אחוז תאי K562 השיוריים ב- DP הסופי. זרימה זו של ציטומטריה מפחיתה את כל הבעיות של שימוש באנטג'נים של פני התא כדי לזהות את תאי K562. מכיוון שתאי T מופעלים יכולים לבטא CD71, הוצאנו אסטרטגיה לא לכלול את כל תאי ה- T ותאי ה- NK על-ידי גינגה באוכלוסיות CD3- CD56 ו- CD16 ולאחר מכן בדיקת תאי CD71+ , שיהיו אך ורק תאי K562. פרוטוקול זה מדגים כי DP תא γδ T מניב 0.48 ± 0.42% מתאי K562 שיורית ועונה על כל קריטריוני השחרור של ≥70% כדאיות, שליליות Mycoplasma על ידי PCR, אין אורגניזמים לראות על ידי כתמי גרם, ≤2 EU / mL של אנדוטוקסין, ואין צמיחה סופית (14 ימים) סטריליות תרבות הדם.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

אנו מודים להזדמנות מימון פנים-אופן של אימונותרפיות-חוקרי תאים המעניקים הזדמנות מימון תוך-ארגונית ממרכז הסרטן של מופיט על מתן המימון לפיתוח פרוטוקול זה. אנו מודים גם לד"ר קלאודיו אנסטי על עזרתו והדרכתו רבת הערך באמצעות פרויקט זה. לבסוף, אנו מודים לד"ר ג'סטין בושה על תובנותיו וסקירת כתב היד.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
הנקס תמיסת מלח מאוזנתR& D285-GMP
אלבומין אנושי 25%Grifolis65483-16-071
פלסמליט Aפישר2B2543Q
חומצה זולדרונית (זומטה)טלפון4215-04--8תרופה מאושרת על ידי ה-FDA
DMSOWAK-CHEMIE MEDICAL GMBHWAK-DMSO-10 CS10
BIOLIFE SOLUTIONS210374
3 מ"ל מזרקBD309657
מזרק BD 10 מ"ל309604
20 מ"ל מזרקBD302830
50 מ"ל מזרקBD309653
100 מ"ל JMS
18 גרם מחטפישר305198
Cryovials 1.8 מ"לפישר375418
פיפטה 5 מ"לפישר1367811D
50 מ"ל פיפטהפישר1367610Q
10 מ"לפיפטה פישר1367811E
100 מ"לפיפטה פישר07-200-620
15 מ"ל חרוטיפישר05-539-12
50 מ"ל חרוטיפישר05-539-7
250 מ"ל חרוטיפישר430776
600 מ"ל חבילת העברהTERUMO BCT INC1BBT060CB71
4 אינץ' סט העברת פלזמהעצמאי MEDICSL ASSOCIATES03-220-90
סט צינורות ElutraTerumoBCT70800
100 MCS GREXWILSON WOLF MFG CORP81100-CS
אשטון סטרילי Pumpmatic נוזל חלוקת מערכתפישר סיינטיפיק22-246660
משאבת שיטה אתחולMPS רפואי ב17789HP3MLL
CliniMACS PBS / EDTA BufferMiltenyi Biotec Inc130-070-525
Dornase AlphaGenentech, Inc50242-100-40/186-0055תרופה מאושרת על ידי ה-FDA
1000 מ"ל 0.22 אום מסנןפישר157-0020
מסנן דם 170umB. סט צינורות BraunV2500
CliniMACsMiltenyi Biotec Inc130-090-719
CliniMACS TCRα/β ערכתMiltenyi Biotec Inc130-021-301
סט דם מסוגY FenwalFWL4C2498H
75 מ"ל בקבוקפישר430641U
IL-2פרומתאוס65483-116-071תרופה מאושרת על ידי ה-FDA
AIM-Vפישר0870112BK
סרום AB אנושיג'מיני ביו-מוצר100H41T
חבילת העברה 3 ליטרIndependent Medical AssociatesT3109
1000  טיפים לפיפטהFisher Scientific5991040
CF-250KOLBioCF-250
ElutraTERUMOBCT
CliniMACSMiltenyi Biotec Inc
GatheRex טיפול נוזלי, משאבת קציר תאיםWILSON WOLF MFG CORP
HERAcell Vios חממת CO2תרמו סיינטיפיק
BD 992861

מקורות

  1. Bejanyan, N., et al. Survival of patients with acute myeloid leukemia relapsing after allogeneic hematopoietic cell transplantation: a center for international blood and marrow transplant research study. Biology of Blood and Marrow Transplantation. 21 (3), 454-459 (2015).
  2. Bejanyan, N., et al. Clinical outcomes of AML patients relapsing after matched-related donor and umbilical cord blood transplantation. Bone Marrow Transplantation. 49 (8), 1029-1035 (2014).
  3. Schmid, C., et al. Treatment, risk factors, and outcome of adults with relapsed AML after reduced intensity conditioning for allogeneic stem cell transplantation. Blood. 119 (6), 1599-1606 (2012).
  4. Siegers, G. M., et al. Anti-leukemia activity of in vitro-expanded human gamma delta T cells in a xenogeneic Ph+ leukemia model. PLoS One. 6 (2), 16700(2011).
  5. Airoldi, I., et al. γδ T-cell reconstitution after HLA-haploidentical hematopoietic transplantation depleted of TCR-αβ+/CD19+ lymphocytes. Blood. 125 (15), 2349-2358 (2015).
  6. Acuto, O., et al. The human T cell receptor: appearance in ontogeny and biochemical relationship of alpha and beta subunits on IL-2 dependent clones and T cell tumors. Cell. 34 (3), 717-726 (1983).
  7. Xiao, L., et al. Large-scale expansion of Vγ9Vδ2 T cells with engineered K562 feeder cells in G-Rex vessels and their use as chimeric antigen receptor-modified effector cells. Cytotherapy. 20 (3), 420-435 (2018).
  8. Peters, C., Kouakanou, L., Oberg, H. H., Wesch, D., Kabelitz, D. In vitro expansion of Vγ9Vδ2 T cells for immunotherapy. Methods in Enzymology. 631, 223-237 (2020).
  9. Xu, Y., et al. Allogeneic Vγ9Vδ2 T-cell immunotherapy exhibits promising clinical safety and prolongs the survival of patients with late-stage lung or liver cancer. Cellular & Molecular Immunology. 18 (2), 427-439 (2021).

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

הרחבת תאי Tתוצר אפרזהלוקמיה מיאלואידית חריפההפרדת תאים מגנטיתציטומטריה של זרימהדילול תאי T מסוג אלפא-בטאתאים מציגי אנטיגן מלאכותייםהפעלה באמצעות חומצה זולדרוניתהעשרת לימפוציטים
הרחבה והעשרה של תאי T של גמא-דלתא (γδ) ממוצר אנושי כדורי
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.