מאמר שיטה

איתור חלבוני וירוס ורוק של וקטור עלה בצמח המארח

DOI:

10.3791/63020

⸱

14 בספטמבר 2021

 ,  ,  , 
1Vector-borne Virus Research Center, Fujian Province Key Laboratory of Plant Virology, Institute of Plant Virology, Fujian Agriculture and Forestry University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מדגים כיצד להשתמש בצמח המארח כדי לזהות חלבוני רוק של חלבונים נגיפיים צמחיים וחלבונים נגיפיים צמחיים המשתחררים על ידי וקטורי עלים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

וקטורי חרקים מעבירים אופקית וירוסים צמחיים רבים בעלי חשיבות חקלאית. יותר ממחצית הנגיפים הצמחיים מועברים על ידי חרקים המיפטרניים שיש להם חלקי פה מוצצים חודרים. במהלך העברה ויראלית, רוק החרק מגשר בין הנגיף-וקטור-מארח מכיוון שווקטורי הרוק נגיפים, וחלבוני החרקים, מעוררים או מדכאים את התגובה החיסונית של צמחים מחרקים לפונדקאים צמחיים. הזיהוי והניתוחים הפונקציונליים של חלבוני רוק הופכים לתחום חדש של התמקדות בתחום המחקר של אינטראקציות ארבו-וירוס-מארח. פרוטוקול זה מספק מערכת לזיהוי חלבונים ברוק של עלעלים באמצעות הצמח המארח. וקטור ההופר Nephotettix cincticeps הנגוע בנגיף ננס האורז (RDV) משמש כדוגמה. ויטלוגנין וחלבון הקפסיד החיצוני העיקרי P8 של RDV וקטור על ידי הרוק של N. cincticeps ניתן לזהות בו זמנית בצמח האורז כי N. cincticeps ניזון ממנו . שיטה זו ישימה לבדיקת חלבוני הרוק הנשמרים באופן זמני בצמח המארח לאחר הזנת חרקים. הוא האמין כי מערכת זו של זיהוי יועיל המחקר של hemipteran-virus-צמח או hemipteran-צמח אינטראקציות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מצב השידור הווקטורי-מארח של ארבו-וירוסים, בעיה בסיסית, נמצא בחזית המדע הביולוגי. וירוסים צמחיים רבים בעלי חשיבות חקלאית מועברים אופקית על ידי וקטורים של חרקים1. יותר ממחצית הנגיפים הצמחיים הם וקטורים על ידי חרקים המיפטרניים, כולל כנימות, זבובים לבנים, עלים, פלנטהופרים ותריפס. לחרקים אלה תכונות ייחודיות המאפשרות להם להעביר ביעילות וירוסים צמחיים1. יש להם חלקי פה מוצצי פירסינג והם ניזונים מהלשד מפלואם ומקסילם, ומפרישים את הרוק שלהם 1,2,3,4. עם הפיתוח והשיפור של טכניקות, הזיהוי והניתוחים הפונקציונליים של מרכיבי הרוק הופכים למוקד חדש של מחקר אינטנסיבי. חלבוני הרוק הידועים ברוק כוללים אנזימים רבים, כגון פקטינאסטראז, צלולאז, פרוקסידאז, פוספטאז אלקליין, פוליפנול אוקסידאז וסוכראז, בין היתר 5,6,7,8,9,10,11,12,13 . החלבונים ברוק כוללים גם אליקטורים המפעילים את תגובת ההגנה של הפונדקאי, ובכך משנים את ביצועי החרקים, ומשפיעים המדכאים את הגנת הפונדקאי, המשפרים את כושר החרקים ורכיבים הגורמים לתגובות פתולוגיות של המארח14,15,16,17. לכן, חלבוני רוק הם חומרים חיוניים לתקשורת בין חרקים לפונדקאים. במהלך העברת הנגיפים, הרוק המופרש על ידי בלוטות הרוק של חרקים אלימים מוצצי פירסינג מכיל גם חלבונים נגיפיים. רכיבים נגיפיים מנצלים את זרימת הרוק כדי לשחרר אותם מהחרק לפונדקאי הצמח. לכן, רוק החרק מגשר על האינטראקציה הטריטרופית וירוס-וקטור-מארח. חקירת התפקוד הביולוגי של חלבוני רוק המופרשים על ידי חרקים אלימים מסייעת להבין את הקשר בין וירוס-וקטור-מארח.

עבור וירוסים של בעלי חיים, מדווח כי רוק של יתושים מתווך את ההעברה והפתוגניות של נגיף הנילוס המערבי (WNV) ונגיף דנגי (DENV). חלבון הרוק AaSG34 מקדם שכפול והעברה של נגיף דנגי-2, ואילו חלבון הרוק AaVA-1 מקדם העברת נגיף DENV וזיקה (ZIKV) על ידי הפעלת אוטופגיה18,19. חלבון הרוק D7 של יתושים יכול לעכב זיהום DENV במבחנה ו-in vivo באמצעות אינטראקציה ישירה עם נגיפים של DENV וחלבון מעטפת DENVרקומביננטי 20. בנגיפים צמחיים, וירוס תלתלי העלים הצהובים של עגבנייה (TYLCV) גורם לחלבון הרוק של הזבוב הלבן Bsp9, המדכא את החסינות בתיווך WRKY33 של מארח הצמח, להגביר את ההעדפה והביצועים של הזבובים הלבנים, ובסופו של דבר מגביר את העברת הנגיפים21. מאחר שמחקרים על התפקיד שממלאים חלבוני רוק של חרקים בפונדקאים של צמחים פיגרו אחרי אלה של פונדקאים של בעלי חיים, נדרשת בדחיפות מערכת יציבה ואמינה לזיהוי חלבוני הרוק בפונדקאים של צמחים.

נגיף הצמח המכונה וירוס ננס אורז (RDV) מועבר על ידי הופר Nephotettix cincticeps (Hemiptera: Cicadellidae) ביעילות גבוהה ובאופן מתפשט מתמשך22,23. RDV דווח לראשונה כמועבר על ידי וקטור חרקים וגורם למחלה קשה של אורז באסיה24,25. הנגיף הוא איקוסהדרלי ודו-שכבתי כדורי, והשכבה החיצונית מכילה את חלבון הקפסיד החיצוני P822. תקופת השידור במחזור הדם של RDV ב N. cincticeps היא 14 ימים 26,27,28,29,30. כאשר RDV מגיע לבלוטות הרוק, נגיפים משתחררים לחללים המאוחסנים ברוק בבלוטות הרוק באמצעות מנגנון דמוי אקסוציטוזה23. ויטלוגנין (Vg) הוא קודמן חלבון החלמון החיוני להתפתחות ביציות בנקבות חרקים31,32,33. לרוב מיני החרקים יש לפחות תעתיק Vg אחד של 6-7 קילובייט, המקודד חלבון מקדים של כ-220 kDa. מבשרי החלבון של Vg יכולים בדרך כלל להיבקע למקטעים גדולים (140 עד 190 kDa) וקטנים (<50 kDa) לפני הכניסה לשחלה18,19. ניתוח פרוטאומי קודם גילה את נוכחותם של הפפטידים שמקורם ב-Vg ברוק המופרש של העלה Recilia dorsalis, אם כי תפקידם אינו ידוע (נתונים שלא פורסמו). לאחרונה דווח כי Vg, המופרש דרך הפה מצמחים, מתפקד כגורם משפיע לפגיעה בהגנות של צמחים34. לא ידוע אם Vg של N. cincticeps יכול גם להשתחרר לצמח המארח עם זרימת רוק, ואז יכול לשחק תפקיד בצמח להפריע להגנה על הצמח. כדי לענות על השאלה האם N. cincticeps מנצל חלבוני רוק, כגון Vg, כדי לעכב או להפעיל את הגנות הצמח, הצעד הראשון הוא זיהוי חלבונים המשתחררים לצמח במהלך ההאכלה. הבנת השיטה לזיהוי חלבוני הרוק הנמצאים בצמח עשויה להיות חיונית כדי להסביר את תפקודם של חלבוני הרוק ואת יחסי הגומלין בין המיפטרה לצמחים.

בפרוטוקול המוצג כאן, N. cincticeps משמש כדוגמה כדי לספק שיטה לבחון את נוכחותם של חלבוני רוק בצמח המארח שהוכנסו באמצעות הזנת חרקים. הפרוטוקול מפרט בעיקר את האיסוף והזיהוי של חלבוני רוק והוא מועיל לחקירה נוספת על רוב ההמיפטרנים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

העלעלים הבוגרים הלא-אלימים הופצו במרכז לחקר וירוסים הנישאים על ידי וקטורים באוניברסיטת פוג'יאן לחקלאות וייעור, סין.

1. גידול חרקים לא אלימים

  1. מגדלים את הבוגרים על שתילי אורז בכלוב קוביות בגודל 40X35X20 ס"מ (אורך X רוחב X גובה). יש לכסות צד אחד של הכלוב ברשת חסינת חרקים לצורך אוורור.
    1. שמור את הכלובים עם עלעלים באינקובטור המכיל בקר לחות מובנה ב 26 ° C עם לחות יחסית של 60-75% תחת תקופת צילום של 16 שעות אור ו 8 שעות כהה.
  2. השתמשו בשאיפה כדי להעביר בעדינות את כל הבוגרים מהכלוב שלהם לכלוב חדש המכיל שתילי אורז טריים מדי שבוע.
    1. תנו ליותר מ-200 מבוגרים להזדווג ולהטיל ביצים באורז.
    2. שמרו את שתילי האורז הישנים כדי שהנימפות יצאו. החזירו את הנימפות הלא-וירוסיות החדשות האלה לשלב ה-2 בכוכב.

2. רכישת וירוסים ואיסוף חרקים אלימים

  1. מעבירים בזהירות את הנימפות הלא וירוסיות 2 אינץ' לצינור תרבית זכוכית (קוטר 2.5 ס"מ על גובה 15 ס"מ) למשך 1-2 שעות לרעב באמצעות השואב.
    1. שחררו את הנימפות לכלוב המכיל צמח אורז נגוע ב-RDV שגדל בעציץ.
    2. אפשר נימפות להאכיל על צמח האורז נגוע במשך 2 ימים.
      הערה: השקו בזהירות את צמח האורז והימנעו משטיפת הנימפות. אורכן של הנימפות הדו-כוכביות הוא כ-1.6-2 מ"מ.
  2. העבירו בזהירות את הנימפות הללו לכלוב חדש המכיל שתילי אורז טריים ללא וירוסים עם לחות יחסית של 60-75% תחת תקופת צילום של 16 שעות אור ו -8 שעות כהות. אפשר לנימפות להאכיל על צמח האורז נגוע במשך 12 ימים כדי להשלים את תקופת העברת הדם של RDV.

3. איסוף חלבוני רוק באמצעות כלוב האכלה

  1. הכינו חמישה כלובי האכלה קטנים דמויי צינור (2.5 ס"מ קוטר על 4 ס"מ גובה) שבהם קצה אחד מכוסה ברשת חסינת חרקים.
  2. כלאו 15-20 עלעלים בכל כלוב האכלה, ולאחר מכן כסו את הקצה השני של הכלוב במחצלת קצף דקה.
    1. מקבעים שתיל אורז אחד (בגובה 5-6 ס"מ) בין קצה הכלוב למחצלת קצף בעזרת סרטי הדבקה. ודאו שהעלעלים בכלוב ההאכלה יוכלו להיזון משתילי האורז החשופים לחלק הפנימי של הכלוב.
  3. לטבול את שורשי השתיל במים, כך צמח האורז יישאר בחיים. אפשר את leafhoppers להאכיל אותם במשך 2 ימים.
  4. הוציאו את העלעלים מכלובי ההאכלה שלהם ואספו את שתילי האורז שמהם ניזונו. חותכים את חלקי השתילים מחוץ לכלוב ומשחזרים את אזורי ההאכלה של שתילים.
    הערה: ניתן לאחסן דגימה זו ב -80 °C למשך 3 חודשים לכל היותר, אם היא אינה משמשת באופן מיידי לזיהוי.

4. הכנת מגיב

  1. יש להמיס 15.1 גרם בסיס טריס, 94 גרם גליצין ו-5 גרם SDS בליטר אחד של מים סטריליים להכנת חיץ 5xTris-גליצין. לדלל 200 מ"ל של חיץ 5xTris-גליצין עם 800 מ"ל של מים סטריליים כדי להכין חיץ 1xTris-גליצין (ראה טבלה 1 להרכב החיץ).
  2. יש להמיס 80 גרם NaCl, 30 גרם בסיס טריס ו-2 גרם KCl ב-1 ליטר מים סטריליים להכנת מאגר מלח חוצץ 10xTris (TBS). Autoclave את התמיסה ב 121 ° C במשך 15 דקות.
  3. יש להמיס 8 גרם SDS, 4 מ"ל של ß-מרקפטואתנול, 0.02 גרם ברומופנול כחול ו-40 מ"ל גליצרול ב-40 מ"ל של 0.1 M Tris-HCl (pH 6.8) להכנת מאגר דגימת חלבון 4x.
  4. ערבבו 800 מ"ל חיץ טריס-גליצין עם מתנול 200 מ"ל להכנת מאגר ההעברה.
  5. הוסף תמיסת 100 מ"ל 10xTBS ו- 3 מ"ל טווין 20 עד 900 מ"ל מים סטריליים כדי להכין את מאגר TBS עם תמיסת Tween 20 (TBST).

5. כתם מערבי לאיתור חלבוני הרוק והויראלי

  1. טוחנים 0.1 גרם של דגימות האורז עם חנקן נוזלי עד הרקמה הופכת אבקה. הוסיפו 200 μL של מאגר דגימת חלבון 4x לדגימה והרתיחו אותו במשך 10 דקות. צנטריפוגה את הדגימות ב 12,000 x גרם במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
    1. מוציאים את הסופרנאטנט ומניחים אותו בבקבוקון חדש. טען 10 μL של הדגימה לתוך ג'ל SDS-PAGE, והפעל אותו במאגר Tris-glycine ב 150 V במשך 45-60 דקות.
      הערה: ניתן להשליך את השאריות לאחר הצנטריפוגה.
  2. שים קרום ניטרוצלולוז 0.45 מיקרומטר וציוד סנדוויץ' אחר במאגר ההעברה למשך 30 דקות.
    הערה: ניתן לבצע שלב זה לפני שהג'ל סיים את ריצתו.
  3. סנדוויץ' את הג'ל ולהעביר אותו במשך 90-120 דקות ב 100 V במאגר ההעברות.
  4. קחו את הממברנה והכניסו אותה לתמיסת חסימת חלב יבש 7% ללא שומן בתמיסת TBST למשך 20 דקות. הוסף את הנוגדן הספציפי נגד RDV P8 או Vg לתמיסה של 7% חלב יבש ללא שומן ב- TBST. לדגור עם הנוגדן להכתמת הממברנה במשך 2 שעות או לילה.
  5. שטפו את הממברנה בתמיסת TBST שלוש פעמים, עם 5 דקות כביסה בכל פעם.
  6. הוסף את IgG נגד ארנב עיזים כנוגדן משני לחלב יבש 7% ללא שומן עם TBST. יש לדגור עם הנוגדן במשך 60-90 דקות בטמפרטורת החדר.
  7. שטפו את הממברנה בתמיסת TBST שלוש פעמים במשך 5 דקות בכל פעם.
  8. השתמש בערכת ECL Western לשיטה הכימילומינסנטית. ערבבו ריאגנטים לזיהוי 1 ו-2 בערכה ביחס של 1:1 בצינור. שים את מגיב מעורב על הממברנה לדגור את הכתם במשך 5 דקות.
  9. מסננים את המגיב העודף ומצלמים תמונה קולורימטרית של התמונה הכימילומינסנטית. שלבו אותם כדי לראות את הסולם עם להקות חלבון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איור 1 מדגים את כל השלבים בפרוטוקול הזה: גידול חרקים, רכישת וירוסים, איסוף חלבוני רוק באמצעות הזנת אורז והכתם המערבי. תוצאות הכתמים המערביים הראו כי רצועות ספציפיות וצפויות של כ -220 kDa נצפו בדגימות של בלוטות אורז ורוק של חרקים על הממברנה מודגרות עם נוגדנים נגד Vg. לעומת זאת, לא נצפתה להקה בדגימת האורז שאינה ניזונה. התוצאה באיור 2 מצביעה על כך ש-Vg שוחרר לצמח המארח כחלבון רוק. על הממברנה המודגרת עם נוגדנים נגד RDV P8, נצפתה רצועה ספציפ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הרוק המופרש ישירות על ידי בלוטות הרוק של החרקים המוצצים ממלא תפקיד מרכזי מכיוון שהוא מעכל מראש ומנקה רעלים מהרקמות המארחות ומהגורמים הביולוגיים חוצי הממלכות של הווקטורים לפונדקאים 1,3,4. הגורמים הביולוגיים חוצי הממלכות, כולל אליציטורים, משפיעים ורנ"א קטן, הם קריטיים לתקשורת בין חרקים למארחים14,15,16. לכן, חשיפת זנים ותפקודים נוספים של מ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (31772124 ו -31972239) ואוניברסיטת פוג'יאן לחקלאות וייעור (מענק KSYLX014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>ריאגנטים
טריס בסיסרושD609K69032במשך 5 פעמים; בופר טריס-גליצין ו 10 פעמים; הכנת בופר TBS
גליציןסיגמא-אולדריץ'WXBD0677Vלמשך 5 פעמים; הכנת חוצץ טריס-גליצין
SDSSigma-AldrichSLCB4394למשך 5 פעמים; הכנת חיץ טריס-גליצין
NaClסינופארם מגיב כימי ושות', בע"מ10019318במשך 10 פעמים; הכנת מאגר TBS
KClסינופארם ריאגנט כימי ושות', בע"מ10016318במשך 10 ופעמים; TBS הכנת מאגר
ß-מרקפטואתנולXiya ReagentB14492עבור 4 & פעמים; הכנת מאגר דגימת חלבון
ברומופנול כחולסיגמא-אולדריץ'SHBL3668עבור 4 & פעמים; הכנת מאגר דגימת חלבון
גליצרולסינופארם מגיב כימי ושות', בע"מ10010618עבור 4 & פעמים; הכנת מאגר דגימת חלבון
מתנולSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10014118להכנת מאגר העברה
Tween 20Coolaber SCIENCE& TeCHNoLoGYCT30111220להכנת TBST
חלב יבש ללא שומןBecton.Dickinso והחברה252038לחסימת ממברנה, דילול נוגדנים
עז אנטי ארנב IgGSangon BiotechD110058-0001הכרה בערכה המערבית הראשונית
והגוף ECLThermoFisher Scientific32209מצע כימילומינסנט
ניטרוצלולוז ממברנהPall Corporation25312915לחלבונים העברה
<חזק>מאגרים ותמיסות
<חזק>בופר<חזק>הרכב<חזק>הערות/תיאור&
nbsp; 5 ופעמים; טריס-גליצין בופר15.1 גרם Tris base
94 גרם גליצין
  5 גרם SDS ב-1 ליטר מים		  פתרון מלאי
1 ופעמים; בופר טריס-גליצין200 מ"ל של 5& פעמים; Tris-glycine buffer
800 מ"ל מים		פתרון עבודה, עבור SDS-PAGE
10& פעמים; חוצץ תמיסת מלח (TBS)80 גרם NaCl
30 גרם Tris base
2 גרם KCl
ב-1 ליטר מים		תמיסת מלאי
TBS עם תמיסת Tween 20 (TBST)100 מ"ל 10& פעמים; תמיסת TBS
3 מ"ל Tween 20
900 מ"ל מים		תמיסת עבודה
4&; מאגר דגימת חלבון8 גרם SDS
4 מ"ל ß-mercaptoethanol
0.02 גרם ברומופנול כחול
40 מ"ל גליצרול
ב-40 מ"ל 0.1 M Tris-HCl (pH 6.8)		למיצוי חלבון
מאגר העברה800 מ"ל מאגר טריס-גליצין
200 מ"ל מתנול		עבור העברת חלבון
<חזק>מכשירים
ברומופנול כחולסיגמא-אולדריץ'SHBL3668להכנת מאגר דגימת חלבון 4x
חממה בטמפרטורה קבועהNingbo Saifu Experimental Instrument Co., Ltd.PRX-1200Bלגידול עלים
ElectrophoresisTanon Science & טכנולוגיה ושות', בע"מTanon EP300עבור SDS-PAGE
מודול ליבת העברה אלקטרופורטיתBIO-RAD1703935עבור SDS-PAGE
גליצרולסינופארם כימי ריאגנט ושות', בע"מ10010618עבור 4x חלבון מאגר מאגר
גליציןסיגמא-אולדריץ'WXBD0677Vעבור 5x Tris-glycine buffer הכנת
עז אנטי ארנב IgGSangon BiotechD110058-0001הכרה במכשיר טחינת הרקמות העיקרי והגוף
הגבוהשנחאי Jingxin פיתוח תעשייתי ושות 'בע"מJXFSIPRP-24לטחינת רקמות צמח
KClסינופארם כימי ריאגנט ושות', בע"מ10016318 עבור 10x TBS מאגר הכנת
מתנולסינופארם כימי ריאגנט ושות', בע"מ10014118להכנת מאגר העברה
מיני רטוב העברת חום שוקתBIO-RAD1703930עבור SDS-PAGE
NaClסינופארם כימי ריאגנט ושות', בע"מ10019318להכנת חיץ ניטרוצלולוזה 10x TBS
קרום ניטרוצלולוזהPall Corporation25312915לחלבונים העברת
חלב יבש ללא שומןBecton.Dickinso והחברה252038לחסימת ממברנה, דילול נוגדנים
Pierce ECL Western kitThermoFisher Scientific32209מצע כימילומינסנט
מכשיר צבע חלבוןGE מדעי הבריאות ABAmersham lmager 600לגילוי חלבונים
SDSSigma-AldrichSLCB4394להכנת מאגר טריס-גליצין 5x
Tris בסיסRocheD609K69032עבור 5x Tris-glycine buffer ו-10× הכנת מאגר TBS
Tween 20Coolaber SCIENCE& TeCHNoLoGYCT30111220להכנת TBST
טנק אלקטרופורזה צלחת אנכיתBIO-RAD1658001לאמבט מים SDS-PAGE
שנחאי Jinghong ציוד ניסיוני ושות', בע"מXMTD-8222להרתיח את דגימות החלבון
&בטא;-מרקפטואתנולXiya ReagentB14492להכנת מאגר דגימת חלבון פי 4
& סטריליים סטריליים סטריליים סטריליים

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hogenhout, S. A., Ammar el, D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).
  2. Cranston, P. S., Gullan, P. J. Phylogeny of insects. Encyclopedia of Insects. Resh, V. H., Carde, R. T. , Academic. Amsterdam. (2003).
  3. Ammar el, D., Tsai, C. W., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G., Hogenhout, S. A. Cellular and molecular aspects of rhabdovirus interactions with insect and plant hosts. Annual Review of Entomology. 54, 447-468 (2009).
  4. Wei, T., Li, Y. Rice reoviruses in insect vectors. Annual Review of Phytopathology. 54, 99-120 (2016).
  5. Hattori, M., Konishi, H., Tamura, Y., Konno, K., Sogawa, K. Laccase-type phenoloxidase in salivary glands and watery saliva of the green rice leafhopper, Nephotettix cincticeps. Journal of Insect Physiology. 51 (12), 1359-1365 (2005).
  6. Ma, R., Reese, J. C., William, I. V., Bramel-Cox, P. Detection of pectinesterase and polygalacturonase from salivary secretions of living greenbugs, schizaphis graminum (Homoptera: aphididae). Journal of Insect Physiology. 36 (7), 507-512 (1990).
  7. Miles, P. W. Dynamic aspects of the chemical relation between the rose aphid and rose buds. Entomologia Experimentalis et Applicata. 37 (2), 129-135 (2011).
  8. Urbanska, A., Tjallingii, W. F., Dixon, A., Leszczynski, B. Phenol oxidising enzymes in the grain aphid's saliva. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (2), 197-203 (1998).
  9. Miles, P. W., Peng, Z. Studies on the salivary physiology of plant bugs: detoxification of phytochemicals by the salivary peroxidase of aphids. Journal of Insect Physiology. 35 (11), 865-872 (1989).
  10. Will, T., van Bel, A. Physical and chemical interactions between aphids and plants. Journal of Experimental Botany. 57 (4), 729-737 (2006).
  11. Ma, R. Z., Reese, J. C., Black, W. C., Bramel-Cox, I. Chlorophyll loss in a greenbug-susceptible sorghum due to pectinases and pectin fragments. Journal of the Kansas Entomological Society. 71 (1), 51-60 (1998).
  12. Madhusudhan, V. V., Miles, P. W. Mobility of salivary components as a possible reason for differences in the responses of alfalfa to the spotted alfalfa aphid and pea aphid. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (1), 25-39 (1998).
  13. Funk, C. J. Alkaline phosphatase activity in whitefly salivary glands and saliva. Archives of Insect Biochemistry & Physiology. 46 (4), 165-174 (2010).
  14. Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant-insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
  15. Tomkins, M., Kliot, A., Maree, A. F., Hogenhout, S. A. A multi-layered mechanistic modelling approach to understand how effector genes extend beyond phytoplasma to modulate plant hosts, insect vectors and the environment. Current Opinion in Plant Biology. 44, 39-48 (2018).
  16. Huang, H. J., Lu, J. B., Li, Q., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. Combined transcriptomic/proteomic analysis of salivary gland and secreted saliva in three planthopper species. Journal of Proteomics. , (2018).
  17. Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant--insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
  18. Sun, P., et al. A mosquito salivary protein promotes flavivirus transmission by activation of autophagy. Nature Communications. 11 (1), 260(2020).
  19. Sri-In, C., et al. A salivary protein of Aedes aegypti promotes dengue-2 virus replication and transmission. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 111, 103181(2019).
  20. Conway, M. J., et al. Aedes aegypti D7 saliva protein inhibits dengue virus infection. Plos Neglected Tropical Diseases. 10 (9), 0004941(2016).
  21. Wang, N., et al. A whitefly effector Bsp9 targets host immunity regulator WRKY33 to promote performance. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 374 (1767), 20180313(2019).
  22. Omura, T., Yan, J. Role of outer capsid proteins in transmission of phytoreovirus by insect vectors. Advances in Virus Research. 54, 15-43 (1999).
  23. Chen, Q., Liu, Y., Long, Z., Yang, H., Wei, T. Viral release threshold in the salivary gland of leafhopper vector mediates the intermittent transmission of rice dwarf virus. Frontiers in Microbiology. 12, 639445(2021).
  24. Fukushi, T. Further studies on the dwarf disease of rice plant. Journal of the Faculty of Agriculture, Hokkaido Imperial University. 45 (3), 83-154 (1940).
  25. Miyazaki, N., et al. The functional organization of the internal components of rice dwarf virus. Journal of Biochemistry. 147, 843-850 (2010).
  26. Wei, T., Shimizu, T., Hagiwara, K., Kikuchi, A., Omura, T. Pns12 protein of rice dwarf virus is essential for formation of viroplasms and nucleation of viral-assembly complexes. Journal of General Virology. 87, 429-438 (2006).
  27. Chen, Q., Zhang, L., Chen, H., Xie, L., Wei, T. Nonstructural protein Pns4 of rice dwarf virus is essential for viral infection in its insect vector. Virology Journal. 12, 211(2015).
  28. Chen, Q., et al. Nonstructural protein Pns12 of rice dwarf virus is a principal regulator for viral replication and infection in its insect vector. Virus Research. 210, 54-61 (2015).
  29. Chen, Q., Zhang, L., Zhang, Y., Mao, Q., Wei, T. Tubules of plant reoviruses exploit tropomodulin to regulate actin-based tubule motility in insect vector. Scientific Reports. 7, 38563(2017).
  30. Wei, T., et al. The spread of Rice dwarf virus among cells of its insect vector exploits virus-induced tubular structures. Journal of Virology. 80 (17), 8593-8602 (2006).
  31. Mao, Q., et al. Insect bacterial symbiont-mediated vitellogenin uptake into oocytes to support egg development. mBio. 11 (6), 01142(2020).
  32. Tufail, M., Takeda, M. Molecular characteristics of insect vitellogenins. Journal of Insect Physiology. 54 (12), 1447-1458 (2008).
  33. Sappington, T. W., Raikhel, A. S. Molecular characteristics of insect vitellogenins and vitellogenin receptors. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 28 (5-6), 277-300 (1998).
  34. Ji, R., et al. Vitellogenin from planthopper oral secretion acts as a novel effector to impair plant defenses. New Phytologist. , (2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Western BlotSDS PAGEHemiptera

מאמרים קשורים