כאן, אנו מתארים מתודולוגיית ייצור עבור מערכי אלקטרודה סיבי פחמן להתאמה אישית להקלטה ב vivo בעצב ובמוח.
Method Article
כאן, אנו מתארים מתודולוגיית ייצור עבור מערכי אלקטרודה סיבי פחמן להתאמה אישית להקלטה ב vivo בעצב ובמוח.
בדיקות עצבים היקפיות קונבנציונליות מיוצרות בעיקר בחדר נקי, הדורשות שימוש בכלים יקרים ומתמחים מאוד. מאמר זה מציג תהליך ייצור "אור" חדר נקי של מערכי אלקטרודות עצביות סיבי פחמן שניתן ללמוד במהירות על ידי משתמש חדר נקי חסר ניסיון. תהליך ייצור מערך אלקטרודות סיבי פחמן זה דורש רק כלי ניקוי אחד, מכונת תצהיר Parylene C, שניתן ללמוד במהירות או במיקור חוץ למתקן עיבוד מסחרי בעלות שולית. תהליך ייצור זה כולל גם איכון ידני של מעגלים מודפסים, בידוד ואופטימיזציה של טיפים.
שלוש אופטימיזציות הקצה השונות שנחקרו כאן (לייזר Nd:YAG, מבער ולייזר UV) גורמות למגוון גיאומטריות קצה ועוכבה של 1 kHz, עם סיבים מבערים וכתוצאה מכך העכבה הנמוכה ביותר. בעוד ניסויים קודמים הוכיחו יעילות אלקטרודה לייזר מבער, מאמר זה גם מראה כי סיבים לחתוך לייזר UV יכול להקליט אותות עצביים ויוו. מערכי סיבי פחמן קיימים אינם כוללים אלקטרודות מחולקות לטובת חבילות או דורשים מדריכים מפוברקים בחדר נקי לאוכלוסייה ובידוד. המערכים המוצעים משתמשים רק בכלים שניתן להשתמש בהם בספסל לאוכלוסיית הסיבים. תהליך ייצור מערך אלקטרודות סיבי פחמן זה מאפשר התאמה אישית מהירה של ייצור מערך בתפזורת במחיר מופחת בהשוואה לבדיקות זמינות מסחרית.
רוב המחקר במדעי המוח מסתמך על הקלטת אותות עצביים באמצעות אלקטרופיזיולוגיה (ePhys). אותות עצביים אלה חיוניים להבנת הפונקציות של רשתות עצביות וטיפולים רפואיים חדשניים כגון מכונת מוח וממשקי עצב היקפיים1,2,3,4,5,6. מחקר סביב עצבים היקפיים דורש אלקטרודות הקלטה עצביות מותאמות אישית או זמינות מסחרית. הקלטה עצבית אלקטרודות - כלים ייחודיים עם ממדים בקנה מידה מיקרוני וחומרים שבירים - דורשים קבוצה מיוחדת של מיומנויות וציוד כדי לפברק. מגוון בדיקות מיוחדות פותחו לשימושי קצה ספציפיים; עם זאת, זה מרמז כי ניסויים חייבים להיות מתוכננים סביב בדיקות מסחריות זמינות כיום, או מעבדה חייבת להשקיע בפיתוח של בדיקה מיוחדת, שהוא תהליך ממושך. בשל המגוון הרחב של מחקר עצבי בעצבים היקפיים, יש ביקוש גבוה לבדיקת ePhys רב-תכליתית4,7,8. בדיקה ePhys אידיאלית תכלול אתר הקלטה קטן, עכבה נמוכה9, ונקודת מחיר מציאותית מבחינה כלכלית ליישום במערכת3.
אלקטרודות מסחריות נוכחיות נוטות להיות אלקטרודות חיצוניות או חפתים (Neural Cuff10, MicroProbes Nerve Cuff Electrode11), שיושבות מחוץ לעצב, או תוך-פשוליות, החודרות לעצב ויושבות בתוך הפשיזם של העניין. עם זאת, ככל שאלקטרודות חפתים יושבות רחוק יותר מהסיבים, הן קולטות יותר רעש מהשרירים הסמוכים ומפשקים אחרים שאולי אינם המטרה. בדיקות אלה נוטות גם לכווץ את העצב, אשר יכול להוביל biofouling- הצטברות של תאי גליה ורקמת צלקת - בממשק האלקטרודה בזמן הרקמה מרפאת. אלקטרודות תוך-חשמליות (כגון LIFE12, TIME13 ו-Utah Arrays14) מוסיפות את היתרון של סלקטיביות פאשיסטית ובעלות יחסי אות לרעש טובים, החשובים בהפלת אותות למתממשקים במכונה. עם זאת, בדיקות אלה יש בעיות עם תאימות ביולוגית, עם עצבים הופכים מעוותים לאורך זמן 3,15,16. כאשר נרכש מסחרית, שתי בדיקות אלה יש עיצובים סטטיים ללא אפשרות להתאמה אישית ספציפית לניסוי והם יקרים עבור מעבדות חדשות יותר.
בתגובה לבעיות העלות וההתאמה הביולוגית הגבוהות המוצגות על ידי בדיקות אחרות, אלקטרודות סיבי פחמן עשויות להציע שדרה למעבדות מדעי המוח לבנות בדיקות משלהן ללא צורך בציוד מיוחד. סיבי פחמן הם חומר הקלטה חלופי עם גורם צורה קטן המאפשר החדרת נזק נמוך. סיבי פחמן מספקים תאימות ביולוגית טובה יותר ותגובת צלקת נמוכה בהרבה מאשר סיליקון17,18,19 ללא עיבוד חדר ניקוי אינטנסיבי5,13,14. סיבי פחמן גמישים, עמידים, משולבים בקלות עם ביו-חומרים אחרים19, ויכולים לחדור ולתעד מהעצבים 7,20. למרות היתרונות הרבים של סיבי פחמן, מעבדות רבות מוצאות את הייצור הידני של מערכים אלה מפרך. קבוצות מסוימות21 לשלב סיבי פחמן לתוך חבילות כי באופן קולקטיבי לגרום בקוטר גדול יותר (~ 200 מיקרומטר); עם זאת, למיטב ידיעתנו, חבילות אלה לא אומתו בעצב. אחרים המציאו מערכי אלקטרודות של סיבי פחמן, אם כי השיטות שלהם דורשות מדריכי סיבי פחמן מפוברקים בחדר נקי22,23,24 וציוד כדי לאכלס את המערכים שלהם17,23,24. כדי לטפל בכך, אנו מציעים שיטה של ייצור מערך סיבי פחמן שניתן לבצע בספסל המעבדה המאפשר שינויים מאולתרים. המערך המתקבל שומר על טיפים אלקטרודות אינדיווידואליים ללא כלים מיוחדים לאכלוס סיבים. בנוסף, גיאומטריות מרובות מוצגות כדי להתאים לצרכים של הניסוי המחקרי. מאמר זה, שנבנה מעבודה קודמת8,17,22,25, מספק מתודולוגיות מפורטות כדי לבנות ולשנות מספר סגנונות של מערכים באופן ידני עם זמן אימון מינימלי בחדר נקי.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי אוניברסיטת מישיגן מוסדי טיפול בבעלי חיים ושימוש הוועדה.
1. בחירת מערך סיבי פחמן
2. הלחמת המחבר ללוח המעגלים
3. אוכלוסיית הסיבים
4. החלת אפוקסי אולטרה סגול (UV) כדי לבודד את סיבי הפחמן
5. בדיקת חיבורים חשמליים באמצעות סריקות עכבה של 1 קילו-הרץ (איור 5)
6. בידוד פארילן C
הערה: Parylene C נבחר כחומר הבידוד עבור סיבי הפחמן כפי שניתן להפקיד בטמפרטורת החדר על פני קבוצות של מערכים ומספק ציפוי קונפורמי מאוד.
7. שיטות הכנת טיפים
הערה: שתי תכשירי קצה בסעיף זה משתמשים בלייזר כדי לחתוך סיבים. PPE תקין, כגון משקפי מגן עמידים לאורכי הגל המשמשים, תמיד צריך להיות משוחק בעת שימוש בלייזר, ומשתמשי מעבדה אחרים בקרבת הלייזר צריך להיות גם PPE. למרות שאורכי הסיבים המפורטים בשלבים אלה הם אורכים מומלצים, משתמשים עשויים לנסות כל אורך שמתאים לצרכים שלהם. המשתמש חייב לבחור אחת משיטות הכנת הטיפים הבאות כמו חיתוך מספריים לבד לא יספיק כדי לחשוף מחדש את electrode25.
8. פולי (3,4-אתילנדיוקסיתופין) :p-טולואנסולפונט (PEDOT:pTS) ציפוי מוליך עבור עכבה מופחתת
9. חיבור חוטי קרקע והפניה
10. הליך כירורגי
הערה: קליפת המוח חולדה שימשה כדי לבדוק את היעילות של סיבים מוכנים לייזר UV כפי שתואר בעבר 7,20. בדיקות אלה יעבדו בעצב בשל הגיאומטריה הדומה שלהם ורמות עכבה כדי מבער סיבים מוכנים. ניתוח זה בוצע בשפע של זהירות כדי לאמת כי לייזר UV לא שינה את התגובה של אלקטרודות.
11. מיון ספייק
12. סריקת הדמיה מיקרוסקופית אלקטרונית (SEM)
הערה: שלב זה יהפוך מערכים לבלתי שמישים ויש להשתמש בהם רק כדי לבדוק את תוצאות הטיפול בעצות כדי לבדוק שהמערךים מעובדים כראוי. אין צורך לבצע שלב זה כדי לבנות מערך מוצלח. לסיכום להלן חלוקה לרמות כללית של תהליך SEM; עם זאת, משתמשים שלא השתמשו בעבר ב- SEM צריכים לקבל עזרה ממשתמש מיומן.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
אימות עצה: תמונות SEM
עבודה קודמת20 הראתה כי חיתוך מספריים הביא עכבה לא אמינה כמו Parylene C מקופל על פני אתר ההקלטה. חיתוך מספריים משמש כאן רק כדי לחתוך סיבים לאורך הרצוי לפני עיבוד עם שיטת חיתוך גימור נוספת. תמונות SEM של הטיפים שימשו לקביעת אורך הפחמן החשוף וגיאומטריית הקצה (איור 8).
מספריים וסיבים חתוכים בלייזר Nd:YAG נבדקו בעבר17,20. סיבים חתוכים במספריים (<...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
החלפת חומרים
בעוד שכל החומרים המשמשים מסוכמים בטבלת החומרים, מעט מאוד מהחומרים נדרשים להגיע מספקים ספציפיים. לוח מערך Flex חייב להגיע מהספק הרשום מכיוון שהם החברה היחידה שיכולה להדפיס את הלוח הגמיש. יש להזמין גם את מחבר מערך Flex מהספק המפורט מכיוון שהוא מחבר קנייני. פארילן C מומלץ מאוד כחומר הבידוד לסיבים מכיוון שהוא מספק ציפוי קונפורמי בטמפרטורת החדר באופן אמין שיכול לעמוד בסביבת in vivo . לוח הפולימיד והאפוקסי על הלוח לא יכולים לסבול את הטמפרטורות הגבוהות הנדרשות לטכניקות ...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
עבודה זו נתמכה כלכלית על ידי המכונים הלאומיים להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי (UF1NS107659 ו- UF1NS115817) והקרן הלאומית למדע (1707316). המחברים מכירים בתמיכה כספית מהמכללה להנדסה של אוניברסיטת מישיגן ותמיכה טכנית ממרכז מישיגן לאפיון חומרים ומעבדת התואר הראשון של ואן ולאק. המחברים מודים לד"ר ח'ליל נג'אפי על השימוש בלייזר Nd:YAG ובמתקן Nanofabrication Lurie על השימוש במכונת התצהיר פארילן C שלהם. ברצוננו גם להודות למערכות ציפוי מיוחדות (אינדיאנפוליס, IN) על עזרתם במחקר השוואת הציפוי המסחרי.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 3 צדפות שיניים | 05-769-6Q | כמות פישר | 2 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 20 |
| 3,4-ethylenedioxythiophene (25 גרם) (PEDOT) | 96618 | כמות סיגמא-אולדריץ' | : 1 עלות יחידה (USD): 102 |
| 353ND-T אפוקסי (8oz) ++ (ZIF ולוח רחב בלבד) | 353ND-T/8OZ | כמות טכנולוגיית אפוקסי | : 1 עלות יחידה (דולר): 48 |
| Ag/AgCl (3M NaCl) אלקטרודה ייחוס (חבילה של 3) | 50-854-570 | כמות פישר | : 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 100 |
| Autolab | PGSTAT12 | Metrohm | |
| Blowtorch | 1WG61 | Grainger | כמות: 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 36 |
| סיבי פחמן | T-650/35 3K | Cytec Thornel | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| סרט פחמן | NC1784521 | כמות פישר | : 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 27 |
| מוליך כותנה | WOD1002 | MediChoice | כמות: 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 0.57 |
| סט מושהה אפוקסי++ | 1FBG8 | כמות גריינג'ר | : 1 עלות יחידה (USD): 3 |
| DI מים | n/a | n/a כמות | : n/a עלות יחידה (USD): n/a |
| פינצטה Dumont #5 | 50-822-409 | כמות פישר | : 1 עלות יחידה (USD): 73 |
| מערך Flex** | n/a | MicroConnex | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 68 |
| Flux | SMD291ST8CC | DigiKey | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 13 |
| נימי זכוכית (חבילה של 350) | 50-821-986 | כמות פישר | : 1 עלות יחידה (USD): 60 |
| צלחת זכוכית | n/a | n/a | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| Hirose Connector (ZIF בלבד) | H3859CT-ND | DigiKey | כמות: 2 עלות יחידה (USD): 2 |
| בקבוקי זכוכית עמידים לאור | n/a | Fisher | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| נימה חימום מיקרופיפטה | FB315B | Sutter Instrument Co | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| Micropipette Puller | P-97 | Sutter Instrument Co | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| כפפות ניטריל (חבילה של 200) | 19-041-171C | כמות פישר | 1 עלות יחידה (דולר): 47 |
| תוכנת מיון לא מקוונת | n/a | כמות פלקסון | : 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| Omnetics Connector* (Flex Array בלבד) | A79025-001 | Omnetics Inc | כמות: 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 35 |
| Omnetics Connector* (Flex Array בלבד) | A79024-001 | Omnetics Inc | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 35 |
| Omnetics to ZIF מחבר | ZCA-OMN16 | Tucker-Davis Technologies | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| מחבר מסוף פינים (לוח רחב בלבד) | ED11523-ND | DigiKey | כמות: 16 עלות יחידה (USD): 10 |
| קופסת אחסון בדיקה | G2085 | Melmat | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 2 |
| סכין גילוח | 4A807 | Grainger | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 2 |
| SEM post | 16327 | lnf | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 3 |
| כסף אפוקסי (1oz) ++ | H20E/1OZ | כמות טכנולוגיית אפוקסי | 1 עלות יחידה (USD): 125 |
| חוטי כסף GND REF | 50-822-122 | כמות פישר | : 1 עלות יחידה (USD): 423.2 |
| נתרן p-toulenesulphonate (pTS) - 100 גרם | 152536 | Sigma-Aldrich | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 59 |
| הלחמה | 24-6337-9703 | DigiKey | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 60 |
| קצה ברזל הלחמה | T0054449899N-ND | Digikey | כמות: 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 13 |
| תחנת הלחמה | WD1002N-ND | Digikey | כמות: 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 374 |
| SpotCure-B UV LED Cure System | n/a | FusionNet LLC | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 895 |
| מוט נירוסטה | n/ | a n/a | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| צלחת ערבוב | n/a | פישר | כמות: 1 עלות יחידה (USD): n/a |
| מספריים כירורגיים | 08-953-1B | כמות פישר | : 1 עלות יחידה (USD): 100 |
| TDT תכריכים (ZIF בלבד) | Z3_ZC16SHRD_RSN | כמות | TDT: 1 עלות יחידה (USD): 3.5 |
| פינצטה טפלון | 50-380-043 | כמות פישר | 1 עלות יחידה (USD): 47 |
| UV & משקפי בטיחות אור גלוי | 92522 | כמות לוקטיט | : 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 45 |
| אפוקסי UV (8oz) ++ (מערך גמיש בלבד) | OG142-87/8OZ | כמות טכנולוגיית אפוקסי | : 1 עלות יחידה (USD): 83 |
| לייזר UV | n/a | WER | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 30 |
| משקל סירה (חבילה של 500) | 08-732-112 | כמות פישר | 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 58 |
| לוח רחב + | n/a | מעגלים מתקדמים | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 3 |
| ZIF Active Headstage | ZC16 | Tucker-Davis Technologies כמות | : 1 עלות יחידה (USD): 925 |
| ZIF Passive Headstage | ZC16-P | Tucker-Davis Technologies | כמות: 1 עלות יחידה (USD): 625 |
| ZIF* | n/a | מעגלי חוף לחוף | כמות: 1 עלות יחידה (דולר ארה"ב): 9 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission